BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TÀO THỊ GIANG MÃ SINH VIÊN: 1201137 TRIỂN KHAI MÔ HÌNH GÂY XƠ GAN THỰC NGHIỆM BẰNG CARBON TETRACLORID ĐƯỜNG UỐNG VÀ ÁP DỤNG ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CỦA CHẾ PHẨM VƯỢNG CAN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI 2017 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TÀO THỊ GIANG MÃ SINH VIÊN: 1201137 TRIỂN KHAI MÔ HÌNH GÂY XƠ GAN THỰC NGHIỆM BẰNG CARBON TETRACLORID ĐƯỜNG UỐNG VÀ ÁP DỤNG ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CỦA CHẾ PHẨM VƯỢNG CAN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: PGS.TS Đào Thị Vui DS Phạm Đức Vịnh Nơi thực hiện: Bộ môn Dược lực HÀ NỘI 2017 LỜI CẢM ƠN Bằng tất chân thành lòng biết ơn sâu sắc, em xin gửi lời cảm ơn tới PGS.TS Đào Thị Vui, DS Phạm Đức Vịnh Ths Trần Hồng Linh người thầy tận tụy, hết lòng quan tâm, hướng dẫn giúp đỡ em suốt trình thực đề tài Em xin chân thành cảm ơn DS Đinh Đại Độ DS Đinh Thị Kiều Giang anh chị kỹ thuật viên Bộ môn Dược lực trực tiếp tham gia giúp đỡ em thời gian nghiên cứu Em xin gửi lời cảm ơn Đảng ủy, Ban giám hiệu, phòng Đào tạo môn, phòng ban khác Trường đại học Dược Hà Nội tạo điều kiện cho em thời gian học tập nghiên cứu Trong trình thực đề tài, em nhận giúp đỡ, ý kiến đóng góp từ thầy cô anh chị kỹ thuật viên Bộ môn Dược lực Em xin chân thành cảm ơn giúp đỡ quý báu Em xin cảm ơn anh chị, bạn bè nghiên cứu khoa học Bộ môn Dược lực đồng hành, hỗ trợ, động viên em suốt trình thực đề tài Cuối cùng, em xin cảm ơn gia đình, người thân bạn bè bên cạnh, ủng hộ, chia sẻ khó khăn động viên em thực khóa luận Hà Nội, tháng năm 2017 Sinh viên Tào Thị Giang MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ ………………………………………………………………… ….1 CHƯƠNG TỔNG QUAN .3 1.1 Xơ gan 1.1.1 Định nghĩa 1.1.2 Dịch tễ 1.1.3 Nguyên nhân 1.1.4 Cơ chế bệnh sinh 1.1.5 Tiếp cận điều trị chống xơ hóa gan .7 1.2 Các mô hình gây xơ gan động vật thí nghiệm .11 1.2.1 Gây xơ gan tác nhân hóa học .11 1.2.2 Gây xơ gan phương pháp thắt ống dẫn mật .15 1.2.3 Gây xơ gan phương pháp miễn dịch 15 1.2.4 Mô hình động vật biến đổi gen 16 1.3 Chế phẩm Vượng Can 17 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị nghiên cứu 19 2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu 19 2.1.2 Phương tiện nghiên cứu 20 2.2 Nội dung nghiên cứu .21 2.2.1 Sơ đồ thiết kế nghiên cứu 21 2.2.2 Nội dung nghiên cứu 22 2.3 Phương pháp nghiên cứu 22 2.3.1 Triển khai mô hình gây xơ gan thực nghiệm carbon tetraclorid đường uống chuột cống trắng 22 2.3.2 Đánh giá tác dụng chống xơ hóa gan chế phẩm Vượng Can 25 2.3.3 Phương pháp xác định thông số nghiên cứu 26 2.4 Phương pháp xử lý số liệu .28 CHƯƠNG KẾT QUẢ 29 3.1 Kết triển khai mô hình gây xơ gan thực nghiệm carbon tetraclorid đường uống chuột cống trắng 29 3.1.1 Độc tính khả gây xơ gan carbon tetraclorid mức liều khác chuột cống trắng 29 3.1.2 Kết triển khai mô hình gây xơ gan với chế độ liều carbon tetraclorid thiết lập 30 3.2 Kết đánh giá tác dụng chống xơ hóa gan chế phẩm Vượng Can 34 3.2.1 Ảnh hưởng chế phẩm Vượng Can đến hình ảnh đại thể gan 34 3.2.2 Ảnh hưởng chế phẩm Vượng Can đến hoạt độ AST, ALT nồng độ bilirubin toàn phần 36 3.2.3 Ảnh hưởng chế phẩm Vượng Can đến hàm lượng collagen gan 37 3.2.4 Ảnh hưởng chế phẩm Vượng Can đến điểm xơ hóa tiêu mô bệnh học gan 38 CHƯƠNG BÀN LUẬN 41 4.1 Về kết triển khai mô hình gây xơ gan thực nghiệm carbon tetraclorid chuột cống trắng 41 4.1.1 Về độc tính khả gây xơ gan CCl4 mức liều khác nhau… 41 4.1.2 Về kết triển khai mô hình gây xơ gan với chế độ liều carbon tetraclorid thiết kế .42 4.2 Về tác dụng chống xơ hóa gan chế phẩm Vượng Can 46 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ………………………………………………… 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT ALT Alanin transaminase AST Aspartat transaminase DEN Diethylnitrosamin DMN Dimethylnitrosamin ECM Extracellular matrix (Chất ngoại bào) EMT Epithelial-mesenchymal transition (Chuyển dạng biểu mô-trung mô) HBV Virus viêm gan B HCV Virus viêm gan C HDV Virus viêm gan D HSC Hepatic stellate cell (Tế bào hình sao) MFB Myofibroblast (Nguyên bào sợi cơ) MMP Matrix metalloproteinase (Metalloproteinase gian bào) NK Natural killer cell (Tế bào diệt tự nhiên) PPARγ Peroxisome proliferator-activated receptor gamma (Thụ thể hoạt hóa yếu tố tăng sinh peroxisome gamma) PDGF Platelet-derived growth factor (Yếu tố tăng trưởng có nguồn gốc tiểu cầu) ROS Gốc oxy hoạt động TAA Thioacetamid TGF- β Transforming growth factor-β (Yếu tố tăng trưởng chuyển dạng beta) TIMP Chất ức chế metalloproteinase TRIAL Tumour necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (Phối tử gây chết tế bào theo chương trình liên quan đến TNF) WHO World Health Organization (Tổ chức Y tế giới) DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 2.2 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 Tên bảng Thành phần viên nén Vượng Can Thang điểm đánh giá mức độ xơ hóa gan tiêu mô bệnh học Ảnh hưởng CCl4 với mức liều khác đến số lượng tỉ lệ chuột có biểu xơ hóa gan sau 10 tuần thí nghiệm Ảnh hưởng CCl4 đến tỷ lệ cá thể có hình thái gan bất thường lô Ảnh hưởng hai chế độ liều CCl4 đến hàm lượng collagen mô gan mức độ xơ hóa gan Ảnh hưởng chế phẩm Vượng Can đến tỷ lệ cá thể có hình thái gan bất thường lô Ảnh hưởng chế phẩm Vượng Can đến mức độ xơ gan chuột thí nghiệm gây xơ hóa CCl4 Trang 19 28 30 31 34 35 38 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình Tên hình Trang 1.1 Một số tác nhân chống xơ hóa hướng tới đích tác dụng cụ thể 2.1 Chế phẩm thử Công ty Cổ phần dược phẩm Thái Minh cung cấp 19 2.2 Sơ đồ thiết kế nghiên cứu 21 Sơ đồ thiết kế nghiên cứu thăm dò độc tính khả gây xơ gan 2.3 carbon tetraclorid với mức liều khác chuột cống 23 trắng 2.4 2.5 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 3.6 3.7 Sơ đồ thiết kế nghiên cứu triển khai mô hình gây xơ gan carbon tetraclorid Sơ đồ thiết kế nghiên cứu đánh giá tác dụng chế phẩm Vượng Can mô hình gây xơ gan thực nghiệm carbon tetraclorid Hình ảnh minh họa đại thể gan chuột lô động vật thí nghiệm Tỷ lệ phần trăm khối lượng gan so với khối lượng thể lô động vật thí nghiệm Ảnh hưởng hai chế độ liều CCl4 đến hoạt độ ALT AST huyết chuột thí nghiệm Hình ảnh gan đặc trưng lô chuột thí nghiệm Ảnh hưởng chế phẩm Vượng Can đến hoạt độ AST, ALT huyết chuột gây xơ gan CCl4 Ảnh hưởng chế phẩm Vượng Can đến nồng độ bilirubin toàn phần huyết chuột gây xơ gan CCl4 Ảnh hưởng chế phẩm Vượng Can đến hàm lượng collagen ước tính gan chuột thí nghiệm gây xơ gan CCl4 24 25 31 32 33 35 36 36 37 3.8 3.9 Hình ảnh minh họa cấu trúc vi thể gan đặc trưng lô động vật thí nghiệm, HE × 400 Hình ảnh minh họa cấu trúc vi thể gan đặc trưng lô động vật thí nghiệm, Masson × 100 40 40 ĐẶT VẤN ĐỀ Xơ gan bệnh lý mạn tính gây tổn thương lan toả tiểu thuỳ gan, đặc trưng trình xơ hóa, đảo lộn cấu trúc tiểu thùy mạch máu gan [26] Với triệu ca tử vong, xơ gan xếp vào nguyên nhân gây tử vong đứng hàng thứ 11 giới [54] Mặc dù nghiên cứu gần giúp làm sáng tỏ phần chế bệnh sinh bệnh lý này, chưa có thuốc phê duyệt cho mục đích dự phòng điều trị xơ hóa tiến triển [56] Điều đặt nhu cầu cấp thiết việc tìm kiếm phát triển tác nhân chống xơ hóa có tiềm áp dụng lâm sàng Trong bối cảnh đó, nhiều mô hình gây xơ hóa gan động vật xây dựng trở thành công cụ quan trọng nghiên cứu bệnh sinh phát hiện, đánh giá thuốc tiềm điều trị xơ hóa Trong mô hình đề xuất, gây xơ hóa carbon tetraclorid (CCl4) chuột thí nghiệm mô hình sử dụng phổ biến [16] Tuy nhiên, mô hình tồn nhiều khác biệt nghiên cứu khác liên quan đến đường dùng, thời gian dùng chế độ liều tác nhân gây xơ hóa Ngoài ra, chủng động vật thí nghiệm thường khác đặc tính miễn dịch, dẫn đến biến thiên đáp ứng chủng khác với chế độ liều carbon tetraclorid [18] Mặt khác, đa số nghiên cứu thường sử dụng carbon tetraclorid theo đường tiêm phúc mạc Đường dùng có số hạn chế xâm lấn, gây viêm phúc mạc mạn tính ảnh hưởng đến thể trạng động vật thí nghiệm [40] Trong đó, nghiên cứu sử dụng CCl4 theo đường uống tương đối hạn chế áp dụng Việt Nam Hơn nữa, áp dụng mô hình gây xơ gan CCl4, phần lớn nghiên cứu nước tập trung vào tiêu chí gợi ý mức độ tổn thương gan xơ hóa hoạt độ enzym gan số sinh hóa khác [2], [3], [7], [8], [9] Tuy nhiên, xơ gan bệnh lý đặc trưng biến đổi hình thái cấu trúc gan lắng đọng tổ chức xơ nhu mô gan thay đổi đánh giá chính xác thông qua tiêu mô bệnh học gan [42] Do vậy, CCl4 từ 0,25-1,0 ml/kg với mức liều: 0,25 ml/kg, 0,5 ml/kg 1,0 ml/kg sử dụng lần/tuần thời gian 10 tuần để thăm dò khả gây xơ hóa độc tính CCl4, tạo sở để lựa chọn chế độ liều thích hợp cho thí nghiệm triển khai mô hình Kết thử nghiệm thăm dò cho thấy độc tính khả gây xơ gan CCl4 phụ thuộc liều Sau 10 tuần thử nghiệm, tỉ lệ động vật xơ gan mức liều 0,25 ml/kg thấp (20%), trái lại, với mức liều 0,5 ml/kg 1,0 ml/kg, toàn số chuột sống phát triển xơ gan Như vậy, khả gây xơ gan CCl4 thể rõ rệt 10 tuần với mức liều ≥ 0,5 ml/kg Tuy nhiên, mức liều này, có tỷ lệ đáng kể chuột bị chết thời gian thí nghiệm, đặc biệt, với liều 1,0 ml/kg (80%) Điều gợi ý mức liều ≥ 1,0 ml/kg đường uống, hai lần/tuần không thích hợp để gây xơ gan chuột cống trắng, mặc dù nhiều nghiên cứu trước sử dụng mức liều lên tới 1-2 ml/kg, 2-3 lần/tuần [14], [22] Dựa kết thử nghiệm thăm dò, chưa có chế độ liều thỏa mãn đồng thời tiêu chí khả gây xơ gan độc tính toàn thân Do đó, để cân độc tính mức khả gây xơ gan CCl4, tiếp cận triển khai mô hình theo hướng: (1) kéo dài thời gian sử dụng CCl4 mức liều thấp chưa thể khả gây xơ hóa rõ rệt động vật thí nghiệm; (2) sử dụng chế độ liều thay đổi sử dụng kết hợp mức liều cao khoảng thời gian mức liều chưa thể độc tính toàn thân rõ rệt thử nghiệm thăm dò mức liều thấp khoảng thời gian lại Trên thực tế, bên cạnh chế độ liều CCl4 cố định, số tác giả sử dụng chế độ liều thay đổi để gây xơ gan chuột thí nghiệm, bao gồm giảm liều CCl4 dùng nửa sau nghiên cứu hoặc giữ nguyên liều dùng giảm tần suất dùng hóa chất (từ hoặc lần/tuần xuồng hoặc lần/ tuần) [29], [47], [51] 4.1.2 Về kết triển khai mô hình gây xơ gan với chế độ liều carbon tetraclorid thiết kế Xuất phát từ hướng tiếp cận dựa thử nghiệm thăm dò, mô hình gây xơ gan chuột cống trắng triển khai với chế độ liều CCl4: chế độ liều thay 42 đổi: bao gồm tuần đầu cho uống CCl4 0,5 ml/kg, lần/tuần tuần cho uống CCl4 0,25 ml/kg, lần/tuần; chế độ liều cố định: bao gồm 15 tuần cho uống CCl4 0,25 ml/kg, lần/tuần Cho đến thời điểm tại, chưa có thuốc phê duyệt cho mục đích dự phòng điều trị đặc hiệu xơ hóa gan tiến triển [56], chưa tìm thuốc đủ tin cậy để sử dụng làm chứng dương cho mô hình gây xơ gan CCl4 Trên thực tế, theo tổng quan y văn chúng tôi, hầu hết nghiên cứu gây xơ gan thực nghiệm không sử dụng chứng dương Do vậy, nghiên cứu này, tiến hành khảo sát ảnh hưởng chế độ liều thiết lập thông số phản ánh chức gan tình trạng xơ hóa gan Kết cho thấy chế độ liều CCl4 làm tăng hoạt độ enzym gan huyết thanh, tăng lắng đọng collagen, thay đổi hình ảnh đại thể vi thể gan Tuy nhiên, ngoại trừ nồng độ ALT tỉ lệ khối lượng gan so với khối lượng thể, không nhận thấy khác biệt chế độ liều Hoạt độ enzym gan bao gồm AST ALT định lượng thời điểm 72 sau cho chuột uống CCl4 liều cuối Đây enzym nhạy cảm với tổn thương tế bào gan, việc giải phóng lượng lớn enzym vào máu có liên quan đến hoại tử trung tâm, thoái hóa tình trạng suy giảm chức gan [39] Trong nghiên cứu chúng tôi, hai chế độ liều gây tổn thương tế bào gan, giải phóng enzym AST, ALT vào máu làm tăng rõ rệt thông số so với lô chứng sinh lý Hoạt độ AST hai chế độ liều khác biệt đáng kể, hoạt độ ALT lô gây xơ chế độ liều cố định cao so với lô gây xơ chế độ liều thay đổi Tuy nhiên, cần lưu ý rằng, mặc dù hoạt độ AST, ALT thường sử dụng để đánh giá mức độ tổn thương tế bào gan tăng hoạt độ hai enzym thường không phản ánh chính xác mức độ xơ hóa gan Thực tế, nồng độ enzym gan tăng cao gấp nhiều lần so với lô chứng sinh lý (lên đến hàng nghìn lần) ghi nhận tổn thương gan cấp tính CCl4 thay tổn thương mạn tính xơ hóa gan [47], [38] Bên cạnh thay đổi thông số sinh hóa, bất thường hình ảnh đại thể gan thông số gợi ý mức độ tổn thương gan, mặc dù thông số 43 ghi nhận mức độ quan sát Bình thường, gan có màu đỏ nâu, bề mặt nhẵn bóng; nhiên, trải qua trình tổn thương mạn tính, gan thường nhạt màu, bề mặt nhẵn bóng (thay đổi từ lần sần đến u cục) phản ánh trình tái cấu trúc tế bào gan [5] Do đó, biến đổi màu sắc bề mặt gan thông số gợi ý mức độ tổn thương gan Trong nghiên cứu này, chế độ liều gây thay đổi rõ rệt hình ảnh đại thể gan, thể thông qua việc làm tăng tỉ lệ cá thể có gan bạc màu tỉ lệ cá thể có bề mặt gan không nhẵn bóng so với lô chứng sinh lý Thực tế, nghiên cứu, sau tổn thương gan cấp tính (đặc trưng sung huyết viêm), màu sắc gan có xu hướng chuyển từ đỏ nâu sang nâu đen [38], [47] Tuy nhiên, đáp ứng với tổn thương mạn tính, gan có xu hướng nhạt màu dần Bên cạnh đó, tiến hành đánh giá tỉ lệ khối lượng gan so với khối lượng thể chuột thời điểm kết thúc thí nghiệm Kết cho thấy, chế độ liều 15 tuần làm tăng tỉ lệ khối lượng gan so với khối lượng thể so với chứng sinh lý, nhiên, không nhận thấy khác biệt chế độ liều 12 tuần chứng sinh lý Điều phụ thuộc vào trình bệnh lý xơ gan, tùy vào giai đoạn tổn thương khác nhau, khối lượng gan tăng, giảm hoặc không thay đổi [5], [45] Do collagen thành phần chính chất ngoại bào, tăng nồng độ collagen phản ánh tăng sinh chất ngoại bào (thay đổi bệnh học quan trọng xơ gan) Trong nghiên cứu triển khai mô hình, tiến hành xác định hàm lượng collagen gan thông qua định lượng 4-hydroxyprolin Đây loại acid amin đặc biệt, chủ yếu tồn collagen mô liên kết xuất protein khác [19] Do vậy, xác định hàm lượng 4-hydroxyprolin mô gan sau thủy phân phản ánh gián tiếp mức độ hình thành collagen gan Kết nghiên cứu cho thấy hai chế độ liều CCl4 làm tăng rõ rệt hàm lượng collagen gan so với chứng sinh lý, phản ánh tăng sinh lượng chất ngoại bào mô gan tổn thương Các nghiên cứu trước ghi nhận hàm lượng collagen gan thường tăng từ 1,5 đến lần sau thời gian phơi nhiễm với CCl4 [30] Thí nghiệm cho kết tương đồng (hàm lượng collagen tăng 5,4 lần với chế độ liều thay đổi 5,2 lần với chế độ liều cố định) 44 Xơ gan bệnh lý đặc trưng trạng thái xơ hóa kèm theo đảo lộn cấu trúc tiều thùy gan Trong đó, tăng sinh xơ mặt định lượng đánh giá gián tiếp thông qua hàm lượng collagen gan Tuy nhiên, thông số không giúp đánh giá phân bố xơ hậu lắng đọng mô xơ với cấu trúc gan Do đó, để đánh giá chính xác ảnh hưởng tổ chức xơ đến cấu trúc vi thể gan, cần tiến hành đánh giá tiêu mô bệnh học Khác với nghiên cứu trước Việt Nam, đó, tiêu mô bệnh học gan đánh giá theo phương pháp mô tả đại diện giá trị mặt thống kê [2], [3], [7], [8], [9], nghiên cứu áp dụng thang điểm đánh giá mức độ xơ hóa gan đáng tin cậy số lượng đủ lớn động vật, tạo sở cho phép đánh giá định lượng bất thường hình ảnh vi thể gan Kết đánh giá tiêu mô bệnh học cho thấy điểm xơ hóa gan của hai lô dùng CCl4 tăng có ý nghĩa thống kê so với lô chứng sinh lý (trung vị điểm xơ hóa gan chế độ liều chế độ liều 2,5 3) Mặc dù khác biệt điểm xơ hóa hai chế độ liều, mức độ xơ hóa gan có xu hướng dao động cá thể lô lô Sau 12 tuần cho chuột sử dụng CCl4 với chế độ liều thay đổi, đa số chuột thí nghiệm thuộc lô phát triển xơ gan với điểm xơ hóa hoặc Tương tự, với chế độ liều cố định, 50% số chuột phát sinh xơ gan với điểm xơ hóa Bên cạnh đó, tỷ lệ chuột phát triển xơ hóa kèm biến đổi cấu trúc tiểu thùy gan (điểm xơ hóa ≥ 2) lô sử dụng chế độ liều 12 tuần có xu hướng cao so với lô dùng chế độ liều 15 tuần (88% so với 67%) Kết mô bệnh học gan cho thấy chế độ liều CCl4 gây thay đổi rõ rệt cấu trúc vi thể gan, thay đổi phát thông qua đánh giá tiêu mô bệnh học gan mà phát thông qua việc đánh giá thông số trung gian hoạt độ AST, ALT hàm lượng collagen Do vậy, so với phương pháp mô tả đại diện, đánh giá tiêu mô bệnh học thông qua phân tích định lượng nghiên cứu phản ánh chính xác toàn diện mức độ xơ hóa gan Ngoài thông số kể trên, triển khai mô hình gây xơ gan với chế độ liều thiết kế cải thiện rõ rệt khả dung nạp chuột với độc tính toàn thân 45 CCl4, thể việc không phát chuột chết toàn thí nghiệm Từ nghiên cứu trước đây, số tác giả cho gây xơ hóa gan CCl4 theo đường uống dẫn đến tỷ lệ chuột bị chết cao dao động cá thể mức độ tổn thương gan lớn so với đường dùng khác, đặc biệt đường tiêm phúc mạc [40] Trái lại, nghiên cứu cho thấy hai trở ngại khắc phục cách lựa chọn mức liều thời gian dùng tác nhân gây xơ hóa cách phù hợp, đồng thời đường uống thuận tiện dùng thời gian dài không gây đáp ứng viêm chỗ đường tiêm phúc mạc Như vậy, chế độ liều CCl4 sử dụng gây xơ gan rõ rệt chuột cống trắng, thể thông qua thay đổi số sinh hóa hình ảnh đại thể vi thể gan Tuy nhiên phạm vi nghiên cứu, không nhận thấy khác biệt chế độ liều khả gây xơ gan 4.2 Về tác dụng chống xơ hóa gan chế phẩm Vượng Can Xơ gan nguyên nhân gây tử vong đứng hàng thứ 11 giới, ước tính gây triệu ca tử vong (năm 2015) [54] Cho đến thời điểm tại, nhà khoa học tìm nhiều hướng tiếp cận điều trị xơ hóa gan, nhiên, chưa có thuốc phê duyệt cho mục đích điều trị dự phòng bệnh lý [56] Do vậy, việc tìm kiếm tác nhân chống xơ hóa nhu cầu cấp thiết Vượng Can chế phẩm kết hợp từ số cao dược liệu hợp chất thiên nhiên biết đến với tác dụng bảo vệ tế bào gan như: cỏ nhọ nồi, bại tượng thảo, hoàng bá, methionin … [1], [6] Để cung cấp thêm chứng tác dụng chế phẩm này, tiến hành thí nghiệm đánh giá tác dụng chế phẩm Vượng Can mô hình xơ gan triển khai Căn vào hiệu gây xơ gan hai chế độ liều để rút ngắn thời gian thí nghiệm, chế độ liều 12 tuần bao gồm tuần đầu cho uống CCl4 0,5 ml/kg tuần cho uống CCl4 0,25 ml/kg sử dụng để đánh giá tác dụng chống xơ hóa chế phẩm Vượng Can Trong nghiên cứu này, tiến hành khảo sát ảnh hưởng chế phẩm Vượng Can thông số sinh hóa, hàm lượng collagen gan, hình ảnh đại thể vi thể gan Kết cho thấy 46 Vượng Can mức liều 1,13 g/kg 2,26 g/kg thể tác dụng ức chế tăng hoạt độ AST, ALT nồng độ bilirubin huyết thanh, giảm lắng đọng collagen, giảm mức độ tổn thương hình ảnh đại thể vi thể gan so với lô chứng bệnh Sau 12 tuần cho chuột uống CCl4, lô chuột điều trị với Vượng Can mức liều thể tác dụng bảo vệ gan thông qua ức chế tăng hoạt độ AST, ALT nồng độ bilirubin toàn phần so với chứng bệnh Bên cạnh đó, quan sát hình ảnh đại thể gan lô chuột cho thấy Chế phẩm Vượng Can hai mức liều có xu hướng làm hình thái gan trở bình thường, thể việc làm giảm có ý nghĩa tỷ lệ cá thể có gan bị nhạt màu hoặc bề mặt không nhẵn bóng so với chứng bệnh Đặc biệt, Vượng Can mức liều thể tác dụng chống xơ hóa gan, thể thông qua việc làm giảm hàm lượng collagen điểm xơ hóa gan tiêu mô bệnh học so với chứng sinh lý Sử dụng Vượng Can mức liều 1,13 g/kg làm giảm 53,1% lượng collagen ước tính gan so sánh với lô chứng bệnh, mức giảm tương ứng với liều 2,26 mg/kg 30,7% Tương tự, điểm xơ hóa gan lô chuột sử dụng Vượng Can mức liều giảm có ý nghĩa thống kê so với chứng bệnh (trung vị điểm xơ hóa 0) Hình ảnh tiêu mô bệnh học gan cho thấy sử dụng chế phẩm Vượng Can mức liều giúp ngăn chặn đáng kể thay đối cấu trúc gan làm giảm phát triển mô liên kết xơ nhu mô gan Trên mô hình xơ gan xây dựng, Vượng Can mức liều có tác dụng bảo vệ chống xơ hóa gan, tác dụng liên quan đến khả ức chế phản ứng viêm hoại tử tế bào gan, thể qua việc làm giảm hoạt độ AST ALT huyết Ức chế trình viêm hoại tử tế bào gan giúp cắt đứt vòng lặp chế bệnh sinh xơ gan (hoại tử tế bào gan - đáp ứng viêm - hình thành tổ chức xơ phức hợp ngại bào thay tế bào hoại tử), từ hạn chế trình xơ hóa biến đổi cấu trúc tế bào gan Thực tế, nghiên cứu gần đây, nhóm 47 nghiên cứu ghi nhận tác dụng chống viêm hoại tử gan cấp chế phẩm Vượng Can mô hình gây độc gan CCl4 Kết từ nghiên cứu cung cấp chứng tiền lâm sàng ban đầu liên quan đến tác dụng chống xơ hóa chế phẩm Vượng Can Để đánh giá vai trò Vượng Can điều trị, cần có thêm nghiên cứu dược lý chuyên sâu chứng lâm sàng hiệu độ an toàn người Mặt khác, việc áp dụng thành công mô hình triển khai đánh giá tác dụng chế phẩm Vượng Can cho thấy mô hình có giá trị thực tiễn nghiên cứu tác dụng thuốc chống xơ hóa gan 48 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Đã triển khai mô hình gây xơ gan chuột cống trắng CCl4 với chế độ liều: chế độ liều (bao gồm tuần đầu uống CCl4 0,5 ml/kg, lần/tuần tuần uống CCl4 0,25 ml/kg, lần/tuần) hoặc chế độ liều (bao gồm 15 tuần uống CCl4 0,25 ml/kg, lần/tuần) - Với chế độ liều 1, hoạt độ AST, ALT hàm lượng collagen tăng 10,7 (p=0,005); 7,6 (p=0,003) 5,4 lần (p