WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐOÀN HẠNH DUNG XÁC ĐỊNH DƯ LƯỢNG MỘT SỐ HÓA CHẤT BẢO VỆ THỰC VẬT TRONG DƯỢC LIỆU KHÔ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2014 WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐOÀN HẠNH DUNG XÁC ĐỊNH DƯ LƯỢNG MỘT SỐ HÓA CHẤT BẢO VỆ THỰC VẬT TRONG DƯỢC LIỆU KHÔ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: ThS Đặng Thị Ngọc Lan ThS Trần Cao Sơn Nơi thực hiện: Viện Kiểm Nghiêm An Toàn Vệ Sinh Thực Phẩm Quốc Gia HÀ NỘI - 2014 WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM i LỜI CẢM ƠN Sau thời gian làm việc khẩn trương giúp đỡ tận tình củ gi o, gi đìn t ùng bạn bè, oàn t àn K ó luận tốt ng iệp Xác định dư lượng số hóa chất bảo vệ thực vật dược liệu khô” Bản khóa luận nà thực hoàn thành Viện kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm Quốc gi , 48B Tăng Bạt Hổ - Hà Nội với ướng dẫn Th.s Đặng Thị Ngọc Lan Th.S Tr n C o Sơn Với lòng kính trọng biết ơn sâu sắc, em xin trân trọng cảm ơn T s Đặng Thị Ngọc Lan tận tìn ướng dẫn giúp đỡ em hoàn thành khóa luận tốt nghiệp Đặc biệt, em xin chân thành cảm ơn Th.S Tr n C o Sơn gi o đề tài nhiệt tìn giúp đỡ em suốt trình thực khóa luận Em ũng ết sức cảm ơn n ị, người làm việc Viện kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm Quốc gia, n iệt tìn giúp đỡ em thời gian thực khóa luận Cuối cùng, xin gửi lời biết ơn sâu sắ đến gi đìn , đặc biệt bố mẹ lời cảm ơn ân t àn đến bạn bè, nguồn động lực thiếu, bên cạnh giúp đỡ suốt thời gi n ọc suốt trình thực khóa luận Hà Nội, ngà t ng năm 2014 Sinh viên Đoàn Hạnh Dung WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM ii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ viii ĐẶT VẤN ĐỀ C ương 1: TỔNG QUAN NỘI DUNG ĐỀ TÀI 1.1 Giới thiệu hóa chất bảo vệ thực vật 1.1.1 Khái niệm hóa chất bảo vệ thực vật 1.1.2 Nhóm Clo hữu 1.1.3 Nhóm lân hữu 1.1.4 Nhóm carbamat 1.1.5 Nhóm Pyrethroid 1.1.6 Nhóm Neonicotinoid 1.2 Mứ dư lượng tối đ dược liệu 1.3 C p ương p p x 1.3.1 C định hoá chất bảo vệ thực vật p ương p p tru ền thống 1.3.2 P ương p p QuEC ERS 1.4 Kỹ thuật sắc ký lỏng khối phổ 10 1.4.1 Nguyên tắc chung: 11 1.4.2 Sắc ký lỏng 12 1.4.4 Khối phổ 13 C ương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 Đối tượng nghiên cứu 16 2.1.1 Hóa chất bảo vệ thực vật 16 WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON iii WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM 2.1.2 Đối tượng phân tích 19 2.2 Nội dung nghiên cứu 20 2.2.1 Khảo s t p ương p p 20 2.2.2 Thẩm địn p ương p p 20 2.2.3 Ứng dụng p ương p p 20 2.3 P ương p p ng iên ứu 20 2.3.1 P ương p p xử lý mẫu theo QuEChERS 20 2.3.1.1.Nguyên tắc 20 2.3.1.2.Ưu điểm củ p ương p p 21 2.3.2 P ương p p t ẩm định 21 2.3.2.1 Tín tương t í hệ thống 22 2.3.2.2 Giới hạn phát hiện, giới hạn địn lượng 22 2.3.2.3 Khoảng tuyến tín đường chuẩn 23 2.3.2.4 Độ lặp lại độ thu hồi 23 2.3.3 P ương p p xử lý số liệu 24 2.4 P ương tiện nghiên cứu 24 2.4.1 Thiết bị, dụng cụ 24 2.4.2 Dung môi, hóa chất 25 C ương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27 3.1 Khảo sát xây dựng p ương p p p ân tí HCBVTV 27 3.1.1 Khảo s t điều kiện phân tích LC-MS/MS 27 3.1.1.1 Khảo s t điều kiện khối phổ 27 3.1.1.2 Điều kiện sắc ký lỏng 29 3.1.2 Khảo s t điều kiện tách chiết HCBVTV dược liệu khô 31 3.1.2.1 Khảo sát thời gi n ngâm nước 33 3.1.2.2 Khảo sát ản ưởng pH thông qua so sánh quy trình 34 3.1.2.3 Khảo sát muối chiết 35 WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON iv WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM 3.1.2.5 Đ n gi v i trò nội chuẩn loại trừ ản ưởng 36 3.2 Thẩm địn p ương p p 37 3.2.1 Giới hạn phát giới hạn địn lượng 37 3.2.2 Khoảng tuyến tính 39 3.2.3 Độ lặp lại độ thu hồi 40 3.3 Áp dụng p ương p p x địn dư lượng HCBVTV 30 dược liệu khô 41 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO 45 PHỤ LỤC 49 Phụ lụ 1: Đường chuẩn HCBVTV 49 Phụ lục 2: Một số sắ đồ chuẩn hóa chất bảo vệ thực vật 53 WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM v DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu AOAC Tiếng anh Tiếng việt Association of Official Analytical Hiệp ội ộng đồng phân tích ín t ứ Community Atmospheric Pressure Chemical C ế độ ion ó p suất k í Ionization qu ển CAD Collision Gas Pressure Áp suất k í bắn p CE Collision Energy Năng lượng bắn p CUR Curtain Gas Khí màng CV Coefficient of Variation Hệ số biến thiên CXP Collision Cell Exit Potential T ếđ ur DP Declustering Potential T ế đ u vào d-SPE Dispersive Solid Phase Extraction C iết p ân t n p ESI Electrospray Ionization Ion ó p un điện tử FAO Food and Agriculture Tổ ứ n ng ng iệp lương Organization t ự ủ Liên ợp quố GCB Graphitized Carbon Black C rbon oạt tín GC-MS Gas Chromatography Mass Sắ ký k í k ối p ổ APCI rắn Spectrometry GS1 Ion Source Gas Nguồn k í ion GS2 Ion Source Gas Nguồn k í ion Hó HCBVTV HPLC High Performance Liquid ất bảo vệ t ự vật Sắ ký lỏng iệu o WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM vi Chromatography IS IonSpray Voltage T ế ion ó LC-MS/MS Liquid Chromatography tandem Sắ ký lỏng g ép k ối p ổ Mass Spectrometry l n LLE Liquid liquid extraction Kỹ t uật LOD Limit of Detection Giới ạn p t iện LOQ Limit of Quantification Giới ạn địn lượng MRL Maximum Residue Limit Giới ạn tồn dư tối đ MS Mass Spectrometry K ối p ổ PSA Primary Secondary Amine C ất ấp p ụ bậ 1, bậ R(%) Recovery Hiệu suất t u ồi SD Standard Deviation Độ lệ uẩn SPE Solid Phase Extraction C iết p rắn TEM Ion source Temperature N iệt độ nguồn i iết lỏng lỏng WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON vii WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1: Tóm tắt quy trình chiết xuất theo phiên QuEChERS Bảng 3.1 C điều kiện tối ưu MS 27 Bảng 3.2 C điều kiện phân tích HCBVTV LC-MS/MS 27 Bảng 3.3.Tóm tắt điều kiện gr dient để tách hỗn hợp HCBVTV 30 Bảng 3.4: Độ lặp lại hệ thống thời gi n lưu diện tích peak 30 Bảng 3.5 So s n p ương p p iết pH dịch chiết đo 34 Bảng 3.6: LOD, LOQ hóa chất bảo vệ thực vật 38 Bảng 3.7 Kết p ân tí HCBVTV dược liệu khô 41 WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON viii WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1: Mô hình hệ thống LC-MS/MS 12 Hình 1.2: Mô hình phân tích tứ cực chặp ba 15 Hình 3.1 Sắ đồ HCBVT chuẩn nội TPP 29 Hìn 3.2 Sơ đồ tóm tắt quy trình QuEChERS khảo sát 32 Hình 3.3 Ản ưởng thời gian ngâm mẫu nướ đến hiệu suất chiết 33 Hình 3.4: Số lượng HCBVTV ó độ thu hồi khoảng khác 35 Hình 3.5: Số lượng HCBVTV ó độ thu hồi khoảng khác (>80%; 70-80%