BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐỖ MINH HẬU Mã sinh viên: 1201183 XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG VITAMIN B5 TRONG VIÊN NANG MỀM CARMANUS KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2017 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐỖ MINH HẬU Mã sinh viên: 1201183 XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG VITAMIN B5 TRONG VIÊN NANG MỀM CARMANUS KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS NGUYỄN THỊ KIỀU ANH ThS NGÔ MINH THÚY Nơi thực hiện: Bộ môn Hóa phân tích-Độc chất 2.Viện Công nghệ Dược phẩm quốc gia HÀ NỘI - 2017 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc đến PGS.TS Nguyễn Thị Kiều Anh – Phó viện trưởng Viện Công nghệ Dược phẩm Quốc gia, Ths Ngô Minh Thúy – Giảng viên môn Hóa phân tích – Độc chất tận tình bảo, hướng dẫn em thực khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới Viện Công nghệ Dược phẩm Quốc gia, môn Hóa phân tích – Độc chất môn Vật lý – Hóa lý trường Đại học Dược Hà Nội, thầy cô anh chị tạo điều kiện giúp đỡ em suốt thời gian thực khóa luận Em xin bày tỏ lòng biết ơn đến thầy cô, cán Trường Đại học Dược Hà Nội, người trang bị cho em nhiều kiến thức suốt trình học tập để em có thành hôm Em xin cảm ơn gia đình, bạn bè – người bên giúp đỡ em sống Em xin chân thành cảm ơn Hà Nội, tháng năm 2017 Sinh viên Đỗ Minh Hậu MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ, KÝ HIỆU VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan vitamin B5 1.1.1 Công thức hóa học 1.1.2 Nguồn gốc 1.1.3 Tính chất lý hóa 1.1.4 Tác dụng chế tác dụng 1.1.5 Một số phương pháp định lượng vitamin B5 1.1.6 Một số chế phẩm chứa vitamin B5lưu hành thị trường 1.2 Vài nét viên nang mềm Carmanus 1.3 Tổng quan phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao 1.3.1 Khái niệm sắc ký lỏng hiệu cao 1.3.2 Cấu tạo hệ thống HPLC 1.3.3 Các thông số đặc trưng HPLC 11 1.3.4 Pha tĩnh HPLC 13 1.3.5 Pha động HPLC 14 1.3.6 Một số phương pháp định lượng HPLC 15 CHƯƠNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Điều kiện thực nghiệm 17 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 17 2.1.2 Hóa chất, dung môi 17 2.1.3 Dụng cụ thiết bị 17 2.2 Nội dung nghiên cứu 18 2.3 Phương pháp nghiên cứu 18 2.3.1 Chuẩn bị dung dịch pha mẫu dung dịch chuẩn 18 2.3.2 Xây dựng phương pháp phân tích 18 2.3.3 Thẩm định phương pháp phân tích 19 2.3.4 Ứng dụng định lượng vitamin B5 viên nang mềm Carmanus 20 2.4 Phương pháp xử lí kết 21 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 23 3.1 Kết xây dựng phương pháp phân tích 23 3.1.1 Xác định điều kiện sắc ký 23 3.1.2 Xây dựng qui trình xử lí mẫu 26 3.2 Kết thẩm định phương pháp phân tích 27 3.2.1 Độ phù hợp hệ thống 27 3.2.2 Độchọn lọc 28 3.2.3 Khoảng tuyến tính 30 3.2.4 Độ 32 3.2.5 Độ lặp lại 33 3.2.6 Độ xác trung gian 34 3.3 Kết định lượng vitamin B5 viên nang mềm Carmanus 35 3.4 Bàn luận 37 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ, KÝ KIỆU VIẾT TẮT Ký hiệu Chú thích AOAC Hiệp hội nhà hóa phân tích thống CV Hệ số biến thiên C18 Cột Octadecylsilan HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao HL Hàm lượng MeCN Acetonitril MeOH Methanol RP Pha đảo RSD Độ lệch chuẩn tương đối SD Độ lệch chuẩn SKĐ Sắc ký đồ STT Số thứ tự Spic Diện tích pic tR Thời gian lưu TB Trung bình USP – NF Dược điển Mỹ UV Tử ngoại DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Một số chế phẩm chứa vitamin B5 lưu hành thị trường Bảng 3.1 Kết độ phù hợp hệ thống 28 Bảng 3.2 Cách pha dãy dung dịch chuẩn 30 Bảng 3.3 Kết xác định khoảng tuyến tính 31 Bảng 3.4 Kết thẩm định độ phương pháp 32 Bảng 3.5 Kết đánh giá độ lặp lại phương pháp 34 Bảng 3.6 Kết đánh giá độ xác trung gian 35 Bảng 3.7 Kết định lượng 36 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Công thức cấu tạo vitamin B5 (Calci pantothenat) Hình 1.2 Sơ đồhệ thống HPLC Hình 3.1.SKĐ vitamin B5 chuẩn khảo sát tỉ lệ thành phần pha động 25 Hình 3.2 SKĐ phân tích viên nang mềm Carmanus với hệ pha động MeOH dung dịch KH2PO4 0,05M pH 2,5 (10 : 90) 25 Hình 3.3 Kết quảđánh giá độchọn lọc phương pháp 29 Hình 3.4 Đồ thị biểu diễn quan hệ tuyến tính diện tích pic nồng độ vitamin B5 31 ĐẶT VẤN ĐỀ Vitamin chất thiếu sống hàng ngày người Vitamin đóng vai trò chất xúc tác phản ứng sinh hóa, từ trình trao đổi chất đến xây dựng hệ thống miễn dịch thể.Vitamin có vai trò đặc biệt quan trọng việc sản sinh lượng, trì hoạt động sống thể.Chính vậy, từ lâu vitamin có mặt nhiều chế phẩm đa sinh tố, sản phẩm dinh dưỡng[3].Hiện nay, có mặt vitamin sản phẩm thuốc chữa bệnh ngày nhiều nhằm tác dụng hỗ trợ điều trị phối hợp với hoạt chất để tạo tác dụng hiệp đồng.Carmanus - viên nang mềm công ty cổ phần Traphaco sản phẩm Carmanus có thành phần hoạt chất chiết từ Carduus marianuskết hợp với vitamin nhóm B (B1, B2, B3, B5, B6) bào chế dạng viên nang mềm giúp cho việc điều trị dự phòng gan nhiễm mỡ đạt hiệu cao.Các vitamin nhóm B đóng vai trò quan trọng chuyển hóa trung gian, phục hồi nhu mô gan tổn thương, hiệp đồng tác dụng với hoạt chất có Carduus marianus[21] Hiện nay, số kết phân tích cho thấy có sụt giảm hàm lượng vitamin B5 số sản phẩm thuốc nang mềm có Carmanus sản xuất tháng.Vì vậy, cần có phương pháp định lượng vitamin B5một cách khách quan hơn.Một phương pháp phổ biến, có độ xác cao nhà sản xuất ứng dụng nhiều phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao.Tuy dạng bào chế khác chứa vitamin B5 cần có cách xử lí mẫu khác trước tiến hành định lượng mà dạng bào chế viên nang mềm.Trong đó,các nghiên cứu công bố định lượng vitamin B5 sản phẩm thuốc dạng bào chế viên nang mềm HPLC ít.Dược điển Mỹ[18] đưa số phương pháp định lượng vitamin B5 viên nang mềm HPLC chế phẩm đa vitamin khoáng chất, chưa có thành phần dược liệu.Thông thường cách định lượng hoạt chất chế phẩm thuốc nang mềm trải qua giai đoạn: lấy thuốc nang, làm đồng nhất, cân thuốc, sau xử lí với qui trình thích hợp tiến hành định lượng Tuy nhiên với viên nang mềm Carmanus dự đoán vitamin B5 đọng vào thành vỏ nang cần có cách xử lí phù hợp để chiết hoàn toàn vitamin B5 Xuất phát từ thực tế đó, tiến hành thực đề tài “Xây dựng phương pháp định lượngvitamin B5 viên nang mềm Carmanus” sắc ký lỏng hiệu caovới mục tiêu chính: Xây dựng phương pháp định lượng vitamin B5 viên nang mềm Carmanus Ứng dụng định lượng vitamin B5 viên nang mềm Carmanus phương pháp xây dựng Phụ lục 1: SKĐ thẩm định khoảng tuyến tính Phụ lục 2: SKĐ định lượng 10 viên (lần 1) ... mềm Carmanus sắc ký lỏng hiệu caovới mục tiêu chính: Xây dựng phương pháp định lượng vitamin B5 viên nang mềm Carmanus Ứng dụng định lượng vitamin B5 viên nang mềm Carmanus phương pháp xây dựng. .. dụng định lượng vitamin B5 viên nang mềm Carmanus Tiến hành định lượng vitamin B5 viên nang mềm Carmanus theo qui trình xây dựng Làm lặp lại lần.Tính kết trung bình hàm lượng vitamin B5 viên. .. cứu công bố định lượng vitamin B5 sản phẩm thuốc dạng bào chế viên nang mềm HPLC ít.Dược điển Mỹ[18] đưa số phương pháp định lượng vitamin B5 viên nang mềm HPLC chế phẩm đa vitamin khoáng chất,