Sự vận chuyển IAA IBA xác định phương pháp đánh dấu đồng vị trụ hạ diệp Arabidopsis Phạm Thị Phương NỘI DUNG Tổng quan Đối tượng nghiên cứu Mục đích thí nghiệm Kết thí nghiệm Kết luận TỔNG QUAN Fig 1: Structure of IAA and IBA http://pages.wustl.edu/strader/research 3 Fig 2: Possible metabolic pathways of [ H] IBA and [ H] IAA (Woodward and Bartel, 2005) Fig 3: Transport of IAA and IBA Sourse: http://pages.wustl.edu/strader/research Các hợp chất đánh dấu đồng vị [13C8, 15N1] IBA [ 2H4] IAA  [13C1] IBA  [13C6] IAA ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU Giống hoang dại Arabidopsis thaliana Các giống đột biến: ibr1 ibr3 ibr10 nakr1 Môi trường MS Fig 4: Arabidopsis thaliana Sourse: http://www.pnas.org/content/109/1/7/F1.expansion.html MỤC ĐÍCH THÍ NGHIỆM  Đánh giá vận chuyển IAA IBA trụ hạ diệp Arabidopsis 4 KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM 4.1 Định lượng vận chuyển Auxin phương pháp đánh dấu đồng vị Fig 5: Summary of the experimental procedures (Marx and Djerassi, 1968) A: Donor agar blocks containing 10 -5 M[ 13 C6] IAA or [ 13 C1] IBA were placed on top of 6-mm Arabidopsis hypocotyl sections After h, the hypocotyl sections were cut horizontally into halves Samples containing upper half-hypocotyl sections (1) and containing lower half-hypocotyl sections plus receivers (2) were collected and extracted with known amounts of [2H4]IAA and [13C8,15N1]IBA added as internal standards Fig 5: Summary of the experimental procedures (Marx and Djerassi, 1968) B: Chromatographic results of samples labeled by [ 13 C6] IAA From top to bottom: unlabeled endogenous IAA, [ 13 C6] IAA from donor block and [ H4]IAA internal sta Fig 5: Summary of the experimental procedures (Marx and Djerassi, 1968) C: Chromatographic results of samples labeled by [ 13 C1]]IBA From top to bottom: unlabeled 13 13 13 13 15 endogenous IAA, [ C1] IAA derived from [ C1]IBA, [ H4]IAA internal standard, unlabeled endogenous IBA, [ C1]IBA from donor block, and [ C8, N1]IBA intern standard 4 KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM 4.2 Sự vận chuyển [ 13 13 C6] IAA [ C1] IBA tự trụ hạ diệp Arabidopsis Fig 6: Polar auxin transport and quantification of free [ 13C6]IAA, [13C1]IBA, and [13C1]IAA derived from [13C1]IBA in wild-type Arabidopsis hypocotyls after 5-h transport periods Fig 7: Polar auxin transport and quantification of free [ 13C6]IAA, [13C1]IBA, and [13C1]IAA derived from [13C1]IBA in wild-type and nakr1 mutant Arabidopsis hypocotyls after 5-h transport periods 4 KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM 4.3 Sự vận chuyển [ 13 13 C6] IAA [ C1]IBA tự trụ hạ diệp Arabidopsis đột biến ibr1 ibr3 ibr10 Fig 8: Polar auxin transport and quantification of free [ 13C6]IAA, [13C1]IBA, and [13C1]IAA derived from [13C1]IBA in wild-type and ibr1 ibr3 ibr10 mutant Arabidopsis hypocotyls after 5-h transport periods 4 KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM 4.4 Sự vận chuyển trao đổi chất [ Arabidopsis 13 13 C6] IAA [ C1] IBA trụ hạ diệp Fig 9: Quantification of free [13C6]IAA, free [13C1]IBA, and the ester- or amide-linked conjugates they formed in wild-type Arabidopsis hypocotyls after 5-h transport periods 5 KẾT LUẬN Bằng phương pháp đánh dấu đồng vị phân tích GC–MS, ta định lượng IAA IBA nội sinh hay ngoại sinh vận chuyển Sự vận chuyển hữu cực IBA thấp nhiều so với IAA trụ hạ diệp Arabidopsis NPA ức chế vận chuyển IAA không ức chế vận chuyển IBA Sự vận chuyển IBA tự không phụ thuộc vào chuyển IBA thành IAA IAA liên kết amide phức hợp IAA ngoại sinh IAA tự dạng auxin vận chuyển Bên cạnh đó, IBA liên kết ester phức hợp IBA ngoại sinh, IBA liên kết ester hay phần nhỏ IBA tự vận chuyển xuống  Do đó, IAA IBA có chế vận chuyển riêng TÀI LIỆU THAM KHẢO Xing Liu, Lana Barkawi, Gary Gardner, and Jerry D Cohen (2012) Transport of Indole-3-Butyric Acid and Indole-3-Acetic Acid in Arabidopsis Hypocotyls Using Stable Isotope Labeling Plant Physiology, Vol 158, pp 1988–2000 Woodward AW, Bartel B (2005) Auxin: regulation, action, and interaction Ann Bot (Lond) 95: 707–735 Yang T, Davies P (1999) Promotion of stem elongation by indole-3-butyric acid in intact plants of Pisum sativum L Plant Growth Regul 27: 157–160 Bialek K, Cohen JD (1989) Quantitation of indoleacetic acid conjugates in bean seeds by direct tissue hydrolysis Plant Physiol 90: 398–400 http://pages.wustl.edu/strader/research http://www.pnas.org/content/109/1/7/F1.expansion.html CẢM ƠN THẦY VÀ CÁC BẠN ĐÃ LẮNG NGHE! ... 5 KẾT LUẬN Bằng phương pháp đánh dấu đồng vị phân tích GC–MS, ta định lượng IAA IBA nội sinh hay ngoại sinh vận chuyển Sự vận chuyển hữu cực IBA thấp nhiều so với IAA trụ hạ diệp Arabidopsis. .. NPA ức chế vận chuyển IAA không ức chế vận chuyển IBA Sự vận chuyển IBA tự không phụ thuộc vào chuyển IBA thành IAA IAA liên kết amide phức hợp IAA ngoại sinh IAA tự dạng auxin vận chuyển Bên... N1 ]IBA intern standard 4 KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM 4.2 Sự vận chuyển [ 13 13 C6] IAA [ C1] IBA tự trụ hạ diệp Arabidopsis Fig 6: Polar auxin transport and quantification of free [ 13C6 ]IAA, [13C1 ]IBA,