ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN VŨ THỊ THÙY LINH NGHIÊN CỨU PHÁT TRIỂN MÔ HÌNH HỆ THỐNG SINH ĐIỆN HÓA NHẰM XỬ LÝ Ô NHIỄM HỮU CƠ TRONG AO NUÔI THỦY SẢN NƯỚC LỢ LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội, 2016 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN VŨ THỊ THÙY LINH NGHIÊN CỨU PHÁT TRIỂN MÔ HÌNH HỆ THỐNG SINH ĐIỆN HÓA NHẰM XỬ LÝ Ô NHIỄM HỮU CƠ TRONG AO NUÔI THỦY SẢN NƯỚC LỢ Chuyên ngành: Vi Sinh Vật Học Mã số: 60420107 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS Phạm Thế Hải Hà Nội, 2016 Lời cảm ơn Để hoàn thành luận văn này, đầu tiên, xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến TS Phạm Thế Hải – Giảng viên Khoa Sinh học, Trường Đại Học Khoa Học Tự Nhiên – Đại Học Quốc Gia Hà Nội, người định hướng, giúp đỡ bảo tận tình cho suốt thời gian nghiên cứu hoàn thành luận văn Đồng thời xin chân thành cảm ơn Ths Nguyễn Thị Thu Thủy, Phòng Vi Sinh Vật môi trường, KTV Đỗ Minh Phương, phòng thí nghiệm môn Vi Sinh Vật Học giúp đỡ nhiều thời gian thực đề tài Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến cán Phòng Thí Nghiệm Sinh Học thực nghiệm Viện Ứng dụng Công nghệ Nacentech hướng dẫn giúp đỡ nhiệt tình trình thực đề tài Thêm vào đó, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến toàn thể Thầy, Cô Khoa Sinh học tạo điều kiện học tập truyền đạt cho tri thức khoa học bổ ích giúp hoàn thiện đề tài hình thành giới quan khoa học Cuối cùng, xin bày tỏ lòng biết ơn trân trọng đến gia đình, bạn bè đồng nghiệp sát cánh bên tôi, ủng hộ, tin tưởng tạo điều kiện cho suốt trình học tập hoàn thành luận văn Nghiên cứu trình bày luận văn tài trợ Quỹ Phát triển khoa học công nghệ Quốc gia (NAFOSTED) đề tài mã số 106-NN.042015.23 Hà nội, tháng 12 năm 2016 Vũ Thị Thùy Linh MỤC LỤC Danh mục từ viết tắt Danh mục hình vẽ Danh mục bảng MỞ ĐẦU CHƯƠNG : TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Thực trạng nguyên nhân gây ô nhiễm ao nuôi thủy sản nước lợ Việt Nam 1.1.1 Thực trạng ngành nuôi trồng thủy sản nước lợ nước ta 1.1.2 Nguyên nhân gây ô nhiễm ao nuôi thủy sản Việt Nam 1.2 Một số số để đánh giá ô nhiễm hữu ao nuôi thủy sản 1.2.1 Nhu cầu oxy sinh hóa (BOD) và nhu cầu oxy hóa học (COD) 1.2.2 Nitơ tổng số (TN) ammonium (NH4+) 1.3 Các giải pháp xử lí ô nhiễm ao nuôi thủy sản nước lợ 10 1.3.1 Bể kị khí kiểu đệm bùn dòng chảy ngược (UASB) 10 1.3.2 Hệ thống “đất ngập nước kiến tạo” (contructed wetlands) 11 1.3.3 Sử dụng ô - zôn (O3) 13 1.3.4 Hệ thống sục khí nhân tạo ao nuôi 13 1.3.5 Ứng dụng mô hình sinh điện hóa 14 1.3.6 Tình hình nghiên cứu giải pháp xử lý ô nhiễm ao nuôi thủy sản Việt Nam 15 1.4 Các mô hình sinh điện hóa 15 1.4.1 Giới thiệu tổng quát mô hình sinh điện hóa 15 1.4.2 Mô hình sinh điện hóa với điện cực đáy (sediment bioelectrochemical system) 18 1.4.3 Vi sinh vật điện cực đáy: Tính đa dạng biến đổi quần xã 19 1.5 Ứng dụng mô hình sinh điện hóa với điện cực đáy (SBES) xử lý ô nhiễm ao nuôi thủy sản 23 1.5.1 Tình hình nghiên cứu ứng dụng SBES 23 1.5.2 Tiềm sử dụng SBES để xử lý ô nhiễm ao nuôi thủy sản nước lợ 25 CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.1 Vật liệu nghiên cứu 26 2.1.1 Hóa chất, thiết bị dụng cụ thí nghiệm 26 2.1.2 Nguồn vi sinh vật sử dụng cho nghiên cứu 28 2.2 Phương pháp nghiên cứu 28 2.2.1 Thiết kế, xây dựng vận hành SBES 28 2.2.2 Phương pháp truyền thống để phân lập nuôi cấy vi khuẩn 34 2.2.3 Phương pháp nhuộm Gram quan sát kính hiển vi 35 2.2.4 Phương pháp tách DNA tổng số 35 2.2.5 Phương pháp DGGE 36 2.2.6 Phương pháp giải phân tích trình tự gen 16S rARN 39 2.2.7 Phương pháp đo COD với mẫu nước có hàm lượng clo cao mẫu bùn 40 2.2.8 Phương pháp đo TN amoni 42 2.2.9 Phương pháp tính toán xử lí số liệu 44 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 45 3.1 Xây dựng mô hình ao nuôi thủy sản nước lợ có lồng ghép SBES 45 3.2 Kết làm giàu vi khuẩn điện hóa 45 3.2.1 Dòng điện phát sinh giai đoạn làm giàu vi khuẩn điện hóa 45 3.2.2 Các kết phân tích quần xã VSV điện cực đáy - anode 47 3.3 Sơ kết đánh giá hoạt động xử lí ô nhiễm hữu hệ SBES 58 3.3.1 Kết xử lí COD 58 3.3.2 Kết xử lí ammonium (NH4+) 60 3.3.3 Kết xử lí N tổng (TN) 61 3.3.4 Tóm lược kết xử lí ô nhiễm hệ 62 KẾT LUẬN 64 KIẾN NGHỊ 65 TÀI LIỆU THAM KHẢO 66 PHỤ LỤC Danh mục từ viết tắt Từ Tên Tiếng Anh Tên Tiếng Việt BESs Microbial bioelectrochemical Hệ thống sinh điện hóa systems BOD Biochemical Oxygen demand Nhu cầu oxy sinh hóa BTN - Bể thí nghiệm – Mô hình SBES BĐC - Bể đối chứng – Mô hình đối chứng COD Chemical Oxygen Demand Nhu cầu oxy hóa học DGGE Denaturing gradient gel Điện di gradient gel biến tính electrophoresis EBA Electrochemically active Vi khuẩn có hoạt tính điện hóa bacteria INO Inoculum Quần xã bùn tự nhiên MEC Microbial electrolysis cells Tế bào điện phân vi sinh MFC Microbial fuel cell Pin nhiên liệu vi sinh vật PCR Polymerase Chain Reaction Phản ứng chuỗi trùng hợp SBES Sediment bioelectrochemical Hệ thống sinh điện hóa với điện system cực đáy Danh mục hình vẽ Hình 1.1 : Diện tích nuôi trồng thủy sản tỉnh ĐBSCL Hình 1.2: Chu trình Nitơ ao cá Hình1.3: Bể kị khí kiểu đệm bùn dòng chảy ngược (UASB) 11 Hình 1.4: Sơ đồ đất ngập nước kiến tạo chảy ngầm 12 Hình 1.5: Một số hệ thống sục khí cho ao nuôi tôm 14 Hình 1.6: Ví dụ minh họa BESs (i) MFCs tạo điện (ii)MECs tiêu thụ điện tạo Hiđro 16 Hình1.7: Nguyên lý hoạt động MFC 17 Hình1.8: Sơ đồ phản ứng điện cực MFC (A) SBES (B) 18 Hình1.9: Mô hình vận hành hệ thống sinh điện hóa với điện cực đáy 19 Hình 1.10: Tổng quan ứng dụng SMFC 24 Hình 2.1:Các vật liệu cấu tạo điện cực 26 Hình 2.2: Mô hình đề xuất hệ thống sinh điện hóa ứng dụng để xứ lý nước đáy ao nuôi nước lợ 29 Hình 2.3 : Mô hình thiết kế bể thí nghiệm với điện cực đáy 31 Hình 2.4: Tỉ lệ chuyển đổi thức ăn ao nuôi tôm 33 Hình 3.1: Mô hình bể kính làm thí nghiệm 45 Hình 3.2: Dòng điện SBES sau 30 ngày làm giàu 46 Hình 3.3: Dòng điện quần xã bùn TN ĐC SBES ống nghiệm 47 Hình 3.4: Ảnh khuẩn lạc thu LB 1,5% NaCl nồng độ pha loãng 10-3 48 Hình 3.5: Các chủng phân lập từ quần xã vi khuẩn 50 Hình 3.6: Khuẩn lạc hình thái tế bào chủng cần quan tâm 51 Hình 3.7: Tương quan quần xã nghiên cứu 52 Hình 3.8: Kết khuếch đại trình tự gen16S rRNA đơn chủng với cặp mồi P63F P1378R từ sản phẩm tách DNA tổng số 53 Hình 3.9: Kết khuếch đại trình tự gen 16S rRNA mẫu với cặp mồi P63F P1378R từ sản phẩm tách DNA tổng số 56 Hình 3.10: Kết PCR khuếch đại trình tự gen16S rRNA dùng cho phân tích DGGE cặp mồi (P338F & P518R) 56 Hình 3.11: Kết điện di DGGE quần xã anode SBES đơn chủng chiếm ưu 57 Hình 3.12: Kết so sánh tốc độ phân giải COD hệ SBES vận hành chế độ cho ăn khác 58 Hình 3.13: Kết NH4+ mẫu nước chế độ cho ăn khác 60 Hình 3.14: Kết NH4+ mẫu bùn chế độ cho ăn khác 60 Hình 3.15: Kết TN mẫu nước chế độ cho ăn khác 61 Hình 3.16: Kết TN mẫu bùn chế độ cho ăn khác 62 Danh mục bảng Bảng 1.1: Giá trị sản xuất thủy sản năm 2014 theo giá so sánh 2010 Bảng 1.2: Hàm lượng cho phép số số cần quan tâm ao nuôi tôm Bảng 1.3: Các vi khuẩn sử dụng MFC 20 Bảng 2.1: Diện tích thể tích mô hình thí nghiệm tương đương ao nuôi thực tế 32 Bảng 2.2: Môi trường LB 1.5% NaCl 35 Bảng 2.3: Thành phần chu trình nhiệt cho phản ứng PCR khuếch đại đoạn 1400 bp gen 16S rRNA 37 Bảng 2.4: Thành phần chu trình nhiệt cho phản ứng PCR khuếch đại đoạn 200bp gen 16S rRNA 38 Bảng 2.5: Thành phần dung dịch chất biến tính 0% 60% 39 Bảng 2.6: Thành phần “Working solutions” 39 Bảng 3.1: Số lượng vi khuẩn thu sau phân lập LB agar 1.5%NaCl 48 Bảng 3.2: Kết phân tích trình tự gen 16S rRNA đơn chủng quan tâm .54 57 Min, B., Kim, J R., Oh, S E., Regan, J M & Logan, B E (2005)," Electricity generation from swine wastewater using microbial fuel cells", Water Res, 39, 4961–4968 58 Minghua Zhou,Hongyu Wang,Daniel J Hassett,Tingyue Gu (2013), "Recent advances in microbial fuel cells (MFCs) and microbial electrolysis cells (MECs) for wastewater treatment, bioenergy and bioproducts", Journal of Chemical Technology and Biotechnology, 88(4), pp 508-518 59 Muyzer et al (1993), "Profiling of complex microbial populations by denaturing gradient gel electrophoresis analysis of polymerase chain reaction-amplified genes coding for 16S rRNA" , Appl Environ Microbiol, 59(3), pp 695-700 60 Muyzer, G (1999), “DGGE/TGGE a method for identifying genes from natural ecosystems”, Current Opinion in Microbiology, 2(3), pp 317-322 61 Natella Mirzoyan , Yossi Tal , Amit Gross (2010), “Anaerobic digestion of sludge from intensive recirculating aquaculture systems: Review”, Aquaculture, 306, pp.1-6 62 Nico Boon et al (2002), “Evaluation of nested PCR-DGGE (denaturing gradient gel electrophoresis) with group-specific 16S rRNA primers for the analysis of bacterial communities from di¡erent wastewater treatment plants”, FEMS Microbiology Ecology, 39, pp.101-112 63 Niessen J, Harnisch F, Rosenbaum M, Schroder U, Scholz F (2006)," Heat treated soil as convenient and versatile source of bacterial communities for microbial electricity generation", Electrochem Commun, 8, pp.869–73 64 Niessen J, Schroderm U, Scholz F (2004b),“ Exploiting complex carbohydrates for microbial electricity generation — a bacterial fuel cell operating on starch”, Electrochem Commun, 6, pp.955-958 65 Oskar Modin, David J I Gustavsson (2014), "Opportunities for microbial electrochemistry in municipal wastewater treatment – an overview", Water Science and Technology, 69(7), pp.1359-1372 66 Pant D et al (2012), "Bioelectrochemical systems (BES) for sustainable energy production and product recovery from organic wastes and industrial wastewaters", RSC Advances , 2(4),pp 1248-63 67 Park DH, Zeikus JG (2000)."Electricity generation in microbial fuel cells using neutral red as an electronophore.", Appl Environ Microb., 66, pp 1292–1297 71 68 Park DH, Zeikus JG (2003), "Improved fuel cell and electrode designs for producing electricity from microbial degradation", Biotechnol Bioeng, 81,pp 348–355 69 Pham CA, Jung SJ, Phung NT, Lee J, Chang IS, Kim BH (2003), “A novel electrochemically active and Fe (III)-reducing bacterium phylogenetically related to Aeromonas hydrophila, isolated from a microbial fuel cell”, FEMS Microbiology Letters,223 (1), pp.129 - 34 70 Pham, H., et al (2009), " Enhanced removal of 1,2-dichloroethane by anodophilic microbial consortia", Water Research, 43(11), pp 2936-2946 71 Pham, T.H., et al (2008), "High shear enrichment improve the performance of the anodophillic microbial consortium in a microbial fuel cell", Microbial Biotechnology, 1(6), pp 487-496 72 Phillips M J (1995), "Shrimp culture and the environment", T U.Bagarinao & E E C Flores (Eds.), Towards Sustainable Aquaculture in Southeast Asia and Japan: Proceedings of the Seminar-Workshop on Aquaculture Development in Southeast Asia,Iloilo City, Philippines, pp 37 - 62 73 Phuc Thi Ha, B.T.a.I.S.C (2008)," Performance and Bacterial Consortium of Microbial Fuel Cell Fed with Formate", Energy & Fuels, 22, pp 164–168 74 Pornlerd Chanratchakool and Michael J Phillips (2002), “ Social and economic impacts and management of shrimp among small scale farmers in Thailand and VietNam” , Aquaculture Development FAO Fish Tech Pap, 406, pp 117 - 189 75 R M Allen and H P Bennetto (Spr 1993), "Microbial fuel cells - Electricity production from carbohydrates", Applied Biochemistry and Biotechnology, 39, pp 27-40 76 Rabaey et al (2007), "Microbial ecology meets electrochemistry: electricitydriven and driving communities", The ISME Journal, (1), pp.9-18 77 Rabaey K, Boon N, Siciliano S, Verhaege M, Verstraete W (2004), "iofuel cells select for microbial consortia that self-mediate electron transfer", Appl Environ Microbiol, 70, pp 5373–5382 78 Rabaey K., Clauwaert P., Aelterman P and Verstraete W (2005), "Tubular microbial fuel cells for efficient electricity generation" , Environmental Science & Technology, 39, 8077-8082 72 79 Rabaey, K., and J Keller (2005), "Microbial Fuel Cell Cathodes: From Bottleneck to PrimeOpportunity?", Water Science and Technology, 57( 5), pp 655 - 659 80 Reimers, C.E., Tender, L.M., Fertig, S., and Wang, W (2001), "Harvesting energy from the marine sediment-water interface", Environmental Science & Technology, 35, pp 192-195 81 Ringeisen BR, Henderson E, Wu PK, Pietron J, Ray R, Little B, (2006) "High power density from a miniature microbial fuel cell using Shewanella oneidensis DSP10", Environ Sci Technol., 40,pp 2629– 2634 82 Rivas R, García-Fraile P, Mateos PF, Martínez-Molina E, Velázquez E (2006), “Photobacterium halotolerans sp nov., isolated from Lake Martel in Spain” International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology, 56, pp 1067-1071 83 Romanenko LA1, Uchino M, Falsen E, Lysenko AM, Zhukova NV, Mikhailov VV (2005),"Pseudomonas xanthomarina sp nov., a novel bacterium isolated from marine ascidian", J Gen Appl Microbiol, 51(2), pp.65-71 84 Rozendal R A et al (2008), " Towards practical implementation of bioelectrochemical wastewater treatment ", Trends in Biotechnology, 26(8), pp.450 - 459 85 Rozendal RA, Jeremiasse AW, Hamelers HV, Buisman CJ (2008), "Hydrogen production with a microbial biocathode", Environ Sci Technol, 42, pp 629634 86 S N Chen.(1991), " Environmental problems of aquaculture in Asia and their solutions",Sci tech Off int Epiz,10 (3), pp.609 - 627 87 Sajana, T G (2013)," Effect of pH and distance between electrodes on the performance of a sediment microbial fuel cell", Water Sci Technol , 68,pp 537-543 88 Sajana, T.K., Ghangrekar, M.M., and Mitra, A (2013), “Application of sedimentmicrobial fuel cell for in situ reclamation of aquaculture pond water quality”, Aquacultural Engineering, 57, pp 101-107 89 Sasaki K, Morita M, Sasaki D, Hirano S, Matsumoto N et al (2011), " Methanogenic communities on the electrodes of bioelectrochemical reactors without membranes", J Biosci Bioeng, 111, pp 47-49 73 90 Schroder U, Niessen J, Scholz F (2003), “ A generation of microbial fuel cells with current outputs boosted by more than one order of magnitude” , Angew Chem Int.Ed Engl., 42,pp 2880–2883 91 Soraphat Panakorn, Novozymes (2011), Thailand AQUA Culture Asia Pacific Magazine, 7, pp.10 92 Suman Bajracharya et al (2016), "An overview on emerging bioelectrochemical systems (BESs): Technology for sustainable electricity, waste remediation, resource recovery, chemical production and beyond", Renewable Energy, 98, pp.153 - 170 93 Sumino, T., Isaka, K., Ikuta, H., Saiki, Y., Yokot, T (2006), “Nitrogen removalfrom wastewater using simultaneous nitrate reduction and anaerobic ammonium oxidation in single reactor”, Bioscience and Bioengineering, 102, pp 346–351 94 T.K Sajanaa, M.M Ghangrekarb, A Mitraa (July 2014)," Effect of operating parameters on the performance of sediment microbial fuel cell treating aquaculture water", Aquacultural Engineering, 61, pp 17-26 95 Tender L.M., Reimers C.E., Stecher H.A., Holmes D.E., Bond D.R., Lowy D.A (2002), " Harnessing microbially generated power on the seafloor" , Nat Biotechnol, 20, pp 821–825 96 The Hai Pham et al (2008), "Metabolites produced by Pseudomonas sp enable a Gram positive bacterium to achieve extracellular electron transfer" Appl Microbiol Biotechnol , 77, pp.1119–1129 97 Tilley, Elizabeth et al (2008), "Compendium of Sanitation Systems and Technologies" , Swiss Federal Institute of Aquatic Science and Technology, pp.111-112 98 Timmons, M.B, M.E., James, W.W., Fred, T.S., Steven and J V., Brian (2002), Recirculating Aquaculture Systems (2nd Edition), NRAC Publication 99 Van Rijn, J (1996), “The potential for integrated biological treatment systems inrecirculating fish culture - A review”, Aquaculture ,139, pp.181-201 100 Vega CA, Fernandez I (1987).,"Mediating effect of ferric chelate compounds in microbial fuel cells with Lactobacillus plantarum, Streptococcus lactis, and Erwinia dissolvens", Bioelectrochem Bioenergy, 17, pp 217–222 74 101 X Wang, Y J Feng and H Lee (2008), " Electricity production from beer brewery wastewater", Water Science & Technology—WST, pp: 1117-1121 102 Xiangjuan Ma, Yang Gao (2012), Determination of Chemical Oxygen Demand for Saline Wastewater, School of Environmental Science and Engineering Zhejiang Gongshang University Hangzhou, China 103 Y A Gorby, et al ( 2006), "Electrically conductive bacterial nanowires produced by Shewanella oneidensis strain MR-1 and other microorganisms" Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 103, pp 11358-11363 104 Yibrah Tekle and Addisu Demeke (2015)," Review on microbial fuel cell", Basic Research Journal of Microbiology ISSN 2354-4082, 2(1), pp 5-17 Tài liệu internet 105 http://www.congnghemoitruongxanh.com/be-uasb-xu-ly-nuoc-thai 106.http://freshwaterhabitats.org.uk/wp-content/uploads/2013/09/Assessingwhether-a-pond-is-polluted1.pdf (n.d.) 75 PHỤ LỤC I4: 16S rDNA (1400 bp) Pseudomonas sp (99%) GGTTCGTTAAGTTGGATGTGAAAGCCCCGGGCTCAACCTGGGAA CTGCATCCAAAACTGGCGAGCTAGAGTACGGTAGAGGGTGGTGGAAT TTCCTGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATAGGAAGGAACACCAGTG GCGAAGGCGACCACCTGGACTGATACTGACACTGAGGTGCGAAAGCG TGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACG ATGTCAACTAGCCGTTGGAATCCTTGAGATTTTAGTGGCGCAGCTAAC GCATTAAGTTGACCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGTTAAAACTCA AATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAAT TCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCTGGCCTTGACATGCTGAGAACT TTCCAGAGATGGATTGGTGCCTTCGGGAACTCAGACACAGGTGCTGC ATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGTAA CGAGCGCAACCCTTGTCCTTAGTTACCAGCGGGTTATGCCGGGAACTC TAAGGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTC AAGTCATCATGGCCCTTACGGCCAGGGCTACACACGTGCTACAATGG TCGGTACAAAGGGTTGCCAAGCCGCGAGGTGGAGCTAATCCCATAAA ACCGATCGTAGTCCGGATCGCAGTCTGC I5: 16S rDNA (1400 bp) Vibrio sp (99%) CGTTAAGTAGACCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGATTAAAACT CAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTA ATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCTACTCTTGACATCCAGAGAA CTTTCCAGAGATGGATTGGTGCCTTCGGGAACTCTGAGACAGGTGCTG CATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTTGTGAAATGTTGGGTTAAGTCCCGGA ACGAGCGCAACCCTTATCCTTGTTTGCCAGCGAGTAATGTCGGGAACT CCAGGGAGACTGCCGGTGATAAACCGGAGGAAGGTGGGGACGACGT CAAGTCATCATGGCCCTTACGAGTAGGGCTACACACGTGCTACAATG GCGCATACAGAGGGCGGCCAACTTGCGAAAGTGAGCGAATCCCAAA AA 76 T4: 16S rDNA (1400 bp) Vibrio sp (100%) TTGCCCTGATGTGGGGGATAACCATTGGAAACGATGGCTAATAC CGCATGATGCCTACGGGCCAAAGAGGGGGACCTTCGGGCCTCTCGCG TCAGGATATGCCTAGGTGGGATTAGCTAGTTGGTGAGGTAAGGGCTC ACCAAGGCGACGATCCCTAGCTGGTCTGAGAGGATGATCAGCCACAC TGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGA ATATTGCACAATGGGCGCAAGCCTGATGCAGCCATGCCGCGTGTGTG AAGAAGGCCTTCGGGTTGTAAAGCACTTTCAGTCGTGAGGAAGGTAG TGTAGTTAATAGCTGCATTATTTGACGTTAGCGACAGAAGAAGCACC GGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGTGCGAGCGT TAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCATGCAGGTGGTTTGTTAAGT CAGATGTGAAAGCCCGGGGCTCAACCTCGGAATAGCATTTGAAACTG GCAGACTAGAGTACTGTAGAGGGGGGTAGAATTTCAGGTGTAGCGGT GAAATGCGTAGAGATCTGAAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCC TGGACAGATACTGACACTCAGATGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAG GATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCTACTTGGAG GTTGTGGCCTTGAGCCGTGGCTTTCGGAGCTAACGCGTTAAGTAGACC GCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGATTAAAACTCAAATGAATTGACGGG GGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGATGCAACGCGA AGAACCTTACCTACTCTTGACATCCAGAGAACTTTCCAGAGATGGATT GGTGCCTTCGGGAACTCTGAGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCT CGTGTTGTGAAATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTAT CCTTGTTTGCCAGCGAGTAATGTCGGGAACTCCAGGGAGACTGCCGG TGATAAACCGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCAAGTCATCATGGCCCTT ACGAGTAGGGCTACACACGTGCTACAATGGCGCATACAGAGGGCGGCC AACTTGCGAAAGTGAGCGAATCCCAAAAAGTGCGTCGTAGTCCGGA 77 T10: 16S rDNA (1400 bp) Pseudomonas sp (99%) GGGGGACAACGTTTCGAAAGGAACGCTAATACCGCATACGTCCT ACGGGAGAAAGCAGGGGACCTTCGGGCCTTGCGCTATCAGATGAGCC TAGGTCGGATTAGCTGGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACG ATCCGTAACTGGTCTGAGAGGATGATCAGTCACACTGGAACTGAGAC ACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAAT GGGCGAAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGTCTTC GGATTGTAAAGCACTTTAAGTTGGGAGGAAGGGCATTAACCTAATAC GTTAGTGTTTTGACGTTACCGACAGAATAAGCACCGGCTAACTTCGTG CCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTAC TGGGCGTAAAGCGCGCGTAGGTGGTTTGTTAAGTTGAATGTGAAAGC CCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATCCAAAACTGGCAAGCTAGAGTA TGGCAGAGGGTGGTGGAATTTCCTGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAT ATAGGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACCACCTGGGCTAATACTG ACACTGAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTG GTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGCCGTTGGGATCCTTGAG ATCTTAGTGGCGCAGCTAACGCATTAAGTCGACCGCCTGGGGAGTAC GGCCGCAAGGTTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGC GGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAG GCCTTGACATGCAGAGAACTTTCCAGAGATGGATTGGTGCCTTCGGG AGCTCTGACACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGA TGTTGGGTTAAGTCCCGTAACGAGCGCAACCCTTGTCCTTAGTTACCA GCACGTTAAGGTGGGCACTCTAAGGAGACTGCCGGTGACAAACCGGA GGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTACGGCCTGGGC TACACACGTGCTACAATGGTCGGTACAAAGGGTTGCCAAGCCGCGAG GTGGAGCTAATCCCATAAAACCG 78 Đ1: 16S rDNA (1400 bp) Photobacterium halotolerans (99%) CGATGGCTAATACCGCATAATCTCTACGGAGCAAAGCGGGGGAC CTTCGGGCCTCGCGCGCTAAGATTGGCCCAGGTGGGATTAGCTAGTA GGTGGGGTAACGGCTCACCTAGGCGACGATCCCTAGCTGGTCTGAGA GGATGATCAGCCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGG GAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGGGAAACCCTGATGCA GCCATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGCCTTCGGGTTGTAAAGCACTTTC AGCAGTGAGGAAGAGGTGATGATTAATAGTGGTCATCTTTGACGTTA GCTGCAGAAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAAT ACGGAGGGTGCGAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCATG CAGGCGGCGTGTTAAGCCAGATGTGAAAGCCCGGGGCTCAACCTCGG AATCGCATTTGGAACTGGCATGCTAGAGTCTTGTAGAGGGGGGTAGA ATTTCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATCTGAAGGAATACCGG TGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACAAAGACTGACGCTCAGATGCGAAAG CGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAA CGATGTCTACTTGGAGGTTGGTGTCTTGAACACTGGCTTTCGGAGCTA ACGCGTTAAGTAGACCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGATTAAAACT CAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTA ATTCGATT Đ14: 16S rDNA (1400 bp) Microbulbifer pacificus (99%) GGTTGCTAATACCGCATACGCCCTACGGGGGAAAGCGGGGGATC TTCGGACCTCGTGCTATTGGATATGCCCGCGTCGGATTAGCTAGTTGG TAGGGTAAAGGCCTACCAAGGCGACGATCCGTAGCTGGTCTGAGAGG ATGATCAGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGA GGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGGGCGCAAGCCTGATCCAGCC ATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGCCTTCGGGTTGTAAAGCACTTTCAGT AGGGAGGAAGGCCTGTAGATTAATACTCTGCAGGATTGACGTTACCT ACAGAAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACG 79 GAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCGCGTAG GCGGTTAGTTAAGCTGGATGTGAAAGCCCCGGGCTCAACCTGGGAAC TGCATTCAGAACTGGCTGGCTAGAGTACGAGAGAGGGTAGTGGAATT TCCTGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATAGGAAGGAACATCAGTGG CGAAGGCGACTGCCTGGCTCGATACTGACGCTGAGGTGCGAAAGCGT GGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGA TGTCTACTAGTTGTAGGGTCCCTTGAGGACTTTGTAACGCAGCTAACG CAATAAGTAGACCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGTTAAAACTCAA ATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATT CGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCAGAGAACTT TCCAGAGATGGATTGGTGCCTTCGGGAACTCTGAGACAGGTGCTGCA TGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGTAAC GAGCGCAACCCTTGTCCCTAGTTGCTAGCAGGTAATGCTGAGAACTCT AGGGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGACGACGTT 80 PHỤ LỤC Khuẩn lạc hình thái tế bào chủng ưu quần xã bùn tự nhiên Khuẩn lạc: hình tròn, bề I4 mặt nhăn, màu trắng đục Tế bào: dạng que Gram: âm Khuẩn lạc: tròn, trắng I5 đục, mặt nổi, có nhân Tế bào: dạng cầu Gram: âm Khuẩn lạc: tròn, màu vàng I7 nhạt Tế bào: dạng que Gram: dương Khuẩn lạc: tròn, mặt nổi, I15 hồng nhạt Tế bào: dạng que Gram: âm Khuẩn lạc: tròn, mặt nổi, I18 khô, ăn sâu vào thạch, trắng sữa Tế bào: dạng que Gram: âm 81 Khuẩn lạc hình thái tế bào chủng ưu quần xã anode SBES Khuẩn lạc: Tròn, mặt T4 khô, phẳng, màu trắng Tế bào hình cầu Gram âm Khuẩn lạc: tròn, mặt T9 bóng, màu vàng sáng Tế bào hình que Gram âm Khuẩn lạc: hình tròn, bề T10 mặt nhăn, màu trắng đục Tế bào hình que Gram âm Khuẩn lạc: dạng chấm T16 tròn, trắng mờ Tế bào hình que Gram âm Khuẩn lạc dạng tròn, mặt T17 phẳng, màu nâu nhạt Tế bào dạng cuống, kích thước lớn Gram âm 82 Khuẩn lạc hình thái tế bào chủng ưu quần xã bùn đáy bể đối chứng Khuẩn lạc: bề mặt phẳng, Đ1 nhầy, màu trắng sáng Tế bào hình que Gram âm Colonies: bề mặt khô, Đ6 phẳng, màu trắng đục Tế bào hình que Gram âm Khuẩn lạc: Hình tròn, mặt Đ12 lồi, màu vàng sáng Tế bào hình que Gram âm Khuẩn lạc hình tròn, dạng Đ14 gối, trắng sáng Tế bào hình que Gram âm Khuẩn lạc: Tròn, mặt Đ16 lồi, màu trắng đục Tế bào hình que Gram dương 83 PHỤ LỤC Bảng tính p phép thử Tên mẫu p COD mẫu bùn chế độ cho ăn 0,051g/ ngày 0,004 COD mẫu bùn chế độ cho ăn0,11g/ ngày 0,19 NH4 mẫu nước chế độ cho ăn 0,051g/ ngày 0,54 NH4 mẫu nước chế độ cho ăn 0,11g/ ngày 0,96 NH4 mẫu bùn chế độ cho ăn 0,051g/ ngày 0,0024 NH4 mẫu bùn chế độ cho ăn 0,11g/ ngày 0,29 TN mẫu nước chế độ cho ăn 0,051g/ ngày 0,51 TN mẫu nước chế độ cho ăn 0,11g/ ngày 0,23 TN mẫu bùn chế độ cho ăn 0,051g/ ngày 0,27 TN mẫu bùn chế độ cho ăn 0,11g/ ngày 0,75 84 PHỤ LỤC Mô hình SBES ống nghiệm 85 ... pháp xử lí ô nhiễm ao nuôi thủy sản nước lợ Trên giới, có nhiều công trình nghiên cứu giải pháp xử lí ô nhiễm môi trường ao nuôi thủy sản nhiên ao nuôi thủy sản nước lợ công trình nghiên cứu hạn... để xử lý chỗ ô nhiễm ao nuôi thủy sản Đã có công trình nghiên cứu khẳng định hiệu cách tiếp cận hệ thống ao nuôi thủy sản nước ngọt, chưa có nghiên cứu tương tự với hệ thống ao nuôi thủy sản nước. .. muối cao Hiện nay, chưa có nghiên cứu ứng dụng công nghệ sinh điện hóa để cải tạo nước ao nuôi thủy sản nước lợ công bố 1.3.6 Tình hình nghiên cứu giải pháp xử lý ô nhiễm ao nuôi thủy sản Việt