Đang tải... (xem toàn văn)
Tiêu chuẩn này quy định phương pháp xác định hàm lượng các chất kháng sinh nhóm penicillin trong thuỷ sản và sản phẩm thuỷ sản bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao(HPLC). Phương pháp có thể xác định các hợp chất: penicillin G (benzylpenicillin), penicillin V (phenoxymethylpenicillin), amoxicillin, ampicillin, oxacillin, nafcillin, cloxacillin và dicloxacillin. Giới hạn phát hiện của phương pháp: đối với penicillin G: 3 mgkg; penicillin V: 3 mgkg; amoxicillin: 10 mgkg; ampicillin: 4 mgkg; oxacillin: 3 mgkg; nafcillin: 7 mgkg; cloxacillin: 5 mgkg và dicloxacillin: 11 mgkg.
TIÊU CHUẨN VIỆT NAM TCVN 8348:2010 THUỶ SẢN VÀ SẢN PHẨM THUỶ SẢN ( XÁC ĐỊNH DƯ LƯỢNG THUỐC KHÁNG SINH NHÓM PENICILLIN ( PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO Fish and fishery products − Determination of penicillins residues − Method using highperformance liquid chromatography Lời nói đầu TCVN 8348 : 2010 Cục Chế biến, Thương mại nông lâm thuỷ sản nghề muối biên soạn, Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học Công nghệ công bố (Phần 1) Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định phương pháp xác định hàm lượng chất kháng sinh nhóm penicillin thuỷ sản sản phẩm thuỷ sản sắc ký lỏng hiệu cao(HPLC) Phương pháp xác định hợp chất: penicillin G (benzylpenicillin), penicillin V (phenoxymethylpenicillin), amoxicillin, ampicillin, oxacillin, nafcillin, cloxacillin dicloxacillin Giới hạn phát phương pháp: penicillin G: µg/kg; penicillin V: µg/kg; amoxicillin: 10 µg/kg; ampicillin: µg/kg; oxacillin: µg/kg; nafcillin: µg/kg; cloxacillin: µg/kg dicloxacillin: 11 µg/kg Nguyên tắc Các chất thuộc nhóm penicillin chiết khỏi mẫu sản phẩm thủy sản dung dịch đệm phosphat pH = 9, sau làm cô đặc dịch chiết cột chiết pha rắn C18 Tiến hành tạo dẫn xuất chất thuộc nhóm penicillin với anhydrit benzoic nhiệt độ 50 0C, sau với 1,2,4-triazol thuỷ ngân (II) clorua nhiệt độ 65 0C định lượng HPLC với detector UV bước sóng 325 nm theo phương pháp ngoại chuẩn Thuốc thử Chỉ sử dụng thuốc thử tinh khiết phân tích, trừ có quy định khác, sử dụng nước cất loại dùng cho HPLC nước có độ tinh khiết tương đương 3.1 Axetonitril 3.2 Metanol 3.3 Isooctan 3.4 Dung dịch NaOH, mol/l Hoà tan 20,0 g NaOH 100 ml nước 3.5 Dung dịch NaOH, mol/l Hoà tan 4,0 g NaOH (4.2.21) 50 ml nước 3.6 Dung dịch NaCl, % Hoà tan 20,0 g NaCl (4.2.17) nước để có l dung dịch 3.7 Dung dịch đệm phosphat, 0,1 mol/l, pH = 6,0 Hoà tan 9,938 g Na2HPO4; 20,278 g NaH2PO4.2H2O; 7,788 g Na2S2O3.5H2O; 13,582 g C16H37NO4S (tetrabutylamoni hydrosulfat) 800 ml nước định mức đến vạch để có l Sau đó, lọc dung dịch qua màng lọc Milipore 0,45 µm (4.20) Dung dịch bảo quản ngày nhiệt độ từ +2 0C đến +8 0C 3.8 Dung dịch đệm phosphat, 0,1 mol/l, pH = Dùng dung dịch NaOH mol/l (3.4) để chỉnh 250 ml dung dịch đệm phosphat 0,1 mol/l pH = (3.7) tới pH = Chuẩn bị dung dịch để sử dụng tuần 3.9 Dung dịch đệm phosphat, 0,1 mol/l, pH = Hòa tan 14,196 g Na2HPO4 khan nước định mức để có l dung dịch Chuẩn bị dung dịch chiết để sử dụng tuần giữ nhiệt độ phòng 3.10 Dung dịch anhydrit benzoic, 0,2 mol/l Hoà tan 2,262 g anhydrit benzoic [(C6H5CO)2O] vào 50 ml axetonitril (3.1) định mức tới vạch bình thuỷ tinh màu Bảo quản dung dịch chai màu nâu, tránh ánh sáng 3.11 Dung dịch thuỷ ngân (II) clorua, 0,1 mol/l Hoà tan 0,2715 g thuỷ ngân (II) clorua (HgCl 2) 10 ml nước CẢNH BÁO: Dung dịch HgCl2 độc, tránh để da tiếp xúc trực tiếp với HgCl 3.12 Dung dịch cho phản ứng tạo dẫn xuất Hoà tan 13,78 g 1,2,4-triazol (C2H3N3) với 60 ml nước cốc 100 ml (4.3), thêm 10 ml HgCl2 0,1 mol/l (3.11) Dùng NaOH mol/l (3.4) để chỉnh pH = 9,0 ± 0,5 Sau đó, chuyển toàn sang bình định mức màu nâu (4.5) định mức đến 100 ml nước Dung dịch thu bão hoà HgCl2 có màu trắng đục, để tối ưu trình tạo dẫn xuất dung dịch phải điều chế trước sử dụng 24 h phải khuấy mạnh trước lần sử dụng Bảo quản dung dịch phản ứng tạo dẫn xuất nhiệt độ +4 0C, nơi tránh ánh sáng Dung dịch bền tháng 3.13 Dung dịch rửa giải cột C18, tỷ lệ 50:50 Trộn 50 ml nước 50 ml axetonitril (3.1) Chuẩn bị dung dịch để sử dụng ngày 3.14 Dung dịch để hoà tan chất chuẩn, tỷ lệ 50:50 Trộn 50 ml dung dịch đệm phosphat 0,1 mol/l, pH = (3.8) 50 ml axetonitril (3.1) Chuẩn bị dung dịch để sử dụng ngày 3.15 Dung dịch pha động, tỷ lệ 65:35 Trộn 350 ml axetonitril (3.1) 650 ml dung dịch đệm phosphat 0,1 mol/l pH = 6,0 (3.7) Chuẩn bị pha động để sử dụng ngày phối trộn qua bơm HPLC 3.16 Các chất chuẩn nhóm penicillin 3.16.1 Chất chuẩn penicillin G, dạng axit, 93,4 %, SIGMA Chemical loại tương đương 3.16.2 Chất chuẩn penicillin V, dạng axit, 89,8 %, SIGMA Chemical loại tương đương 3.16.3 Chất chuẩn amoxicillin ngậm ba phân tử nước, dạng axit, 86,3 %, SIGMA Chemical loại tương đương 3.16.4 Chất chuẩn natri ampicillin, 92,2 %, SIGMA Chemical loại tương đương 3.16.5 Chất chuẩn natri oxacillin, 85,5 %, SIGMA Chemical loại tương đương 3.16.6 Chất chuẩn natri nafcillin, 82,8 %, SIGMA Chemical loại tương đương 3.16.7 Chất chuẩn natri cloxacillin, 87,8 %, SIGMA Chemical loại tương đương 3.16.8 Chất chuẩn natri dicloxacillin, 95,3 %, SIGMA Chemical loại tương đương 3.17 Các dung dịch chuẩn gốc nhóm penicillin 3.17.1 Dung dịch chuẩn gốc penicillin G (SM1), 0,5 g/l Cân xác 0,053 g chất chuẩn penicillin G có 93,4 % hoạt tính (3.16.1) vào cốc có mỏ (4.3), hoà tan nước Sau đó, chuyển toàn dung dịch vào bình định mức màu nâu dung tích 100 ml (4.5) định mức nước 3.17.2 Dung dịch chuẩn gốc penicillin V (SM2), 0,5 g/l Cân xác 0,055 g chất chuẩn penicillin V có 89,8 % hoạt tính (3.16.2), hoà tan nước Sau đó, chuyển toàn dung dịch vào bình định mức màu nâu dung tích 100 ml (4.5) định mức nước 3.17.3 Dung dịch chuẩn gốc amoxicillin (SM3), 0,5 g/l Cân xác 0,057 g chất chuẩn amoxicillin ngậm ba phân tử nước (3.16.3) có 86,3 % hoạt tính vào cốc có mỏ (4.3), hoà tan nước Sau đó, chuyển toàn dung dịch vào bình định mức màu nâu dung tích 100 ml (4.5) định mức nước 3.17.4 Dung dịch chuẩn gốc ampicillin (SM4), 0,5 g/l Cân xác 0,054 g chất chuẩn natri ampicillin có 92,2 % hoạt tính (3.16.4), hoà tan nước Sau đó, chuyển toàn dung dịch vào bình định mức màu nâu dung tích 100 ml (4.5) định mức nước 3.17.5 Dung dịch chuẩn gốc oxacillin (SM5), 0,5 g/l Cân xác 0,058 g chất chuẩn natri oxacillin có 85,5 % hoạt tính (3.16.5), hoà tan nước Sau đó, chuyển toàn dung dịch vào bình định mức màu nâu dung tích 100 ml (4.5) định mức nước 3.17.6 Dung dịch chuẩn gốc nafcillin (SM6), 0,5 g/l Cân xác 0,060 g chất chuẩn natri nafcillin có 82,8 % hoạt tính (3.16.6), hoà tan nước Sau đó, chuyển toàn dung dịch vào bình định mức màu nâu dung tích 100 ml (4.5) định mức nước 3.17.7 Dung dịch chuẩn gốc cloxacillin (SM7), 0,5 g/l Cân xác 0,056 g chất chuẩn natri cloxacillin có 87,8 % hoạt tính (3.16.7), hoà tan nước Sau đó, chuyển toàn dung dịch vào bình định mức màu nâu dung tích 100 ml (4.5) định mức nước 3.17.8 Dung dịch chuẩn gốc dicloxacillin (SM8), 0,5 g/l Cân xác 0,052 g chất chuẩn natri dicloxacillin có 95,3 % hoạt tính (3.16.8), hoà tan nước Sau đó, chuyển toàn dung dịch vào bình định mức màu nâu dung tích 100 ml (4.5) định mức nước 3.18 Dung dịch chuẩn hỗn hợp chất thuộc nhóm penicillin Hút xác 50 µl dung dịch chuẩn gốc từ SM1 đến SM4 300 µl dung dịch chuẩn gốc từ SM5 đến SM8 vào bình định mức màu nâu dung tích 10 ml (4.5) định mức nước 3.19 Các dung dịch chuẩn hỗn hợp làm việc nhóm penicillin 3.19.1 Dung dịch chuẩn hỗn hợp làm việc (ST1) Hút xác 125 µl dung dịch chuẩn gốc từ SM1 đến SM4 375 µl dung dịch chuẩn gốc từ SM5 đến SM8 vào bình định mức màu nâu dung tích 50 ml (4.5) định mức nước 3.19.2 Dung dịch chuẩn hỗn hợp làm việc (ST2) Hút xác 250 µl dung dịch chuẩn gốc từ SM1 đến SM4 750 µl dung dịch chuẩn gốc từ SM5 đến SM8 vào bình định mức màu nâu dung tích 50 ml (4.5) định mức nước 3.19.3 Dung dịch chuẩn hỗn hợp làm việc (ST3) Hút xác 500 µl dung dịch chuẩn gốc từ SM1 đến SM4 1,5 ml dung dịch chuẩn gốc từ SM5 đến SM8 vào bình định mức màu nâu dung tích 50 ml (4.5) định mức nước 3.19.4 Dung dịch chuẩn hỗn hợp làm việc (ST4) Hút xác ml dung dịch chuẩn gốc từ SM1 đến SM4 ml dung dịch chuẩn gốc từ SM5 đến SM8 vào bình định mức màu nâu dung tích 50 ml (4.5) định mức nước CHÚ THÍCH: Các dung dịch từ ST1 đến ST4 chuẩn bị hàng tháng phải bảo quản buồng lạnh (nhiệt độ từ 0C đến 0C) tối Thiết bị, dụng cụ Sử dụng thiết bị, dụng cụ phòng thử nghiệm thông thường cụ thể sau: 4.1 Cân phân tích, cân xác đến 0,1 mg 4.2 Dụng cụ phân phối dung môi, loại 10 20 ml 4.3 Cốc có mỏ, dung tích 100 ml 4.4 Pipet tự động, 100; 200 µl, trang bị đầu hút pipetman 4.5 Bình nón nút mài 4.6 Ống nghiệm thuỷ tinh, dung tích 50 ml 4.7 Ống ly tâm, có nút, dung tích 50 ml 4.8 Máy lắc ống nghiệm, Vortex loại tương đương 4.9 Máy khuấy từ, NUOVA7 loại tương đương 4.10 Máy khuấy quay, Rheax loại tương đương 4.11 Máy ly tâm 4.12 Dụng cụ đo pH, Accumet 10 loại tương đương 4.13 Máy nghiền, Siemens loại tương đương 4.14 Bể siêu âm, Bransonic 220 loại tương đương 4.15 Bể điều nhiệt, trì nhiệt độ 50 0C 65 0C, Polytest loại tương đương 4.16 Bơm chân không, dùng cho hệ chiết pha rắn, N79KN18 loại tương đương 4.17 Thiết bị lọc, trang bị màng lọc HVLP 0,45 µm loại tương đương 4.18 Cột chiết pha rắn, Bond Elut C18, dung tích ml, 500 mg loại tương đương 4.19 Hệ chiết pha rắn, VAC-ELUT loại tương đương 4.20 Hệ thống HPLC, trang bị sau: – bơm HPLC; – detector UV; – phận tiêm mẫu tự động; – cột pha đảo C8, dài 150 mm, đường kính 3,9 mm, kích thước hạt µm; – tiền cột C8, dài mm, đường kính mm, kích thước hạt µm; – hệ thống xử lý số liệu (Thermo Separation Products) gồm giao diện (loại SN4000), máy tính, phần mềm điều khiển thiết bị xử lý sắc ký (loại PC1000 phiên 3.03) loại tương đương Cách tiến hành 5.1 Chuẩn bị mẫu thử 5.1.1 Nghiền 200 g mẫu sản phẩm thủy sản máy nghiền (4.16) Cân 5,0 g mẫu nghiền, xác đến 0,1 mg, cho vào ống ly tâm 50 ml (4.9) 5.1.2 Dùng thiết bị phân phối dung môi (4.2) cho 30 ml dung dịch đệm phosphat pH = (3.9) vào ống ly tâm 50 ml chứa g mẫu thử nghiền lắc máy lắc ống nghiệm (4.10) 5.1.3 Thêm 20 ml isooctan (3.3) vào ống ly tâm, tiếp tục lắc Sau đó, đồng toàn máy khuấy quay (4.12) 10 5.1.4 Ly tâm dung dịch 10 với gia tốc 200 × g, tốc độ 500 r/min nhiệt độ 10 0C hút bỏ phần dịch isooctan phía Sau đó, chuyển toàn pha nước sang ống nghiệm 50 ml (4.6) chỉnh pH khoảng đến NaOH mol/l (3.4) 5.1.5 Tiến hành làm mẫu theo 5.5 tạo dẫn xuất theo 5.6 5.2 Chuẩn bị mẫu trắng Mẫu trắng mẫu sản phẩm thủy sản xác định penicillin Tiến hành chuẩn bị mẫu trắng, làm tạo dẫn xuât mẫu thử theo 5.1, 5.5 5.6 5.3 Chuẩn bị mẫu xác định độ thu hồi, nồng độ 50 µg/kg 300 µg/kg Thêm xác 100 µl dung dịch chuẩn hỗn hợp chất thuộc nhóm penicillin (3.18) vào 5,0 g mẫu trắng (5.2) Tiến hành chuẩn bị làm mẫu xác định độ thu hồi (50 µg/kg 300 µg/kg) làm tạo dẫn xuất mẫu thử theo 5.1, 5.5 5.6 5.4 Chuẩn bị dung dịch chuẩn hỗn hợp penicillin STD dùng để dựng đường chuẩn 5.4.1 Dung dịch chuẩn chuẩn bị hàng ngày tiến hành phân tích cách pha loãng dung dịch ST1, ST2, ST3, ST4 ống nghiệm với ml dung dịch pha loãng (3.14) Tiến hành sau: – STD0: 100 µl dung dịch hoà loãng chất chuẩn (3.14); – STD1: 100 µl ST1 thêm 900 µl dung dịch hoà tan chất chuẩn (3.14); – STD2: 100 µl ST2 thêm 900 µl dung dịch hoà tan chất chuẩn (3.14); – STD3: 100 µl ST3 thêm 900 µl dung dịch hoà tan chất chuẩn (3.14); – STD4: 100 µl ST4 thêm 900 µl dung dịch hòa tan chất chuẩn (3.14) 5.4.2 Tiếp tục thực bước tạo dẫn xuất theo 5.6 5.5 Làm mẫu 5.5.1 Hoạt hoá cột Gắn cột chiết pha rắn (4.18) lên giá đỡ, sau gắn bình chứa 50 ml lên cột Thêm 10 ml metanol (3.2), 10 ml nước, ml dung dịch NaCl % (3.6) ml dung dịch đệm chiết pH = (3.9) Cho dịch chiết thu (5.1.4) lên bình chiết cột hoạt hoá CHÚ THÍCH: Không để cột bị khô trình hoạt hoá cột Thêm dung dịch cần làm hết dung dịch đệm chiết chút dung dịch đệm chiết 5.5.2 Hút hỗn hợp với lưu lượng ml/min thêm ml dung dịch NaCl % (3.6) ml nước Tiến hành hút kiệt vòng min, ngừng hút chân không 5.5.3 Đặt ống ly tâm ml (4.7) cột rót ml dung dịch rửa giải (3.13) lên cột Để ngấm pha rắn khoảng trước hút chân không dịch rửa giải với tốc độ ml/min 5.5.4 Sau rửa giải xong, thể tích dịch rửa giải khoảng 900 µl, chỉnh đến ml dung dịch rửa giải (3.13) bình nón nút mài (4.5) 5.6 Tạo dẫn xuất 5.6.1 Điều chỉnh pH dịch rửa giải khoảng đến dung dịch NaOH mol/l (3.5) Thêm cẩn thận vào dung dịch rửa giải thu (5.5.4) 50 µl dung dịch anhydit benzoic 0,2 mol/l (3.10), lắc 10 s máy lắc ống nghiệm (4.8) 5.6.2 Để phản ứng trong bể điều nhiệt (4.15) nhiệt độ 50 0C thêm 500 µl dung dịch cho phản ứng tạo dẫn xuất (3.12) Khuấy mạnh bình chứa dung dịch cho phản ứng tạo dẫn xuất đặt bể siêu âm (4.14) Đậy nút lắc hỗn hợp thu máy lắc ống nghiệm (4.8) 10 s 5.6.3 Để phản ứng xảy 10 bể điều nhiệt (4.15) nhiệt độ 65 0C Sau đó, làm lạnh vòi nước đến nhiệt độ bình thường, tránh ánh sáng ly tâm 10 000 × g 5.7 Tiến hành phân tích HPLC 5.7.1 Điều kiện phân tích a) Pha động: dung dịch pha động (3.15); b) Lưu tốc: 1,0 ml/min; c) Bước sóng phát hiện: 325 nm; d) Thể tích tiêm mẫu: 200 µl; e) Nhiệt độ cột: 20 0C; f) Thời gian lưu: theo Bảng Bảng − Thời gian lưu chất thuộc nhóm penicillin Tên chất Thời gian lưu, Tên chất Thời gian lưu, Amoxiciin 5,5 ± 0,2 Oxacillin 14,2 ± 0,5 Penicillin G 7,6 ± 0,2 Nafcillin 16,9 ± 0,6 Penicillin V 9,0 ± 0,3 Cloxacillin 17,9 ± 0,7 Ampicillin 11,5 ± 0,4 Dicloxacillin 27,5 ± 1,0 5.7.2 Tiêm dung dịch tạo dẫn xuất Tiêm dung dịch tạo dẫn xuất theo thứ tự: − dung dịch chuẩn tạo dẫn xuất với mức nồng độ khác (xem 5.4) Dựng đường chuẩn y= ax + b theo quan hệ tuyến tính diện tích pic chuẩn penicillin nồng độ tương ứng (tính theo microgam lit); − dung dịch mẫu trắng (xem 5.2) tạo dẫn xuất; − dung dịch mẫu xác định độ thu hồi 50 µg/kg 300 µg/kg (xem 5.3) tạo dẫn xuất; − dung dịch mẫu thử tạo dẫn xuất (xem 5.6.3) Quy trình lặp lại cần thiết CHÚ THÍCH 1: Tiêm 200 µl nước trước lần phân tích mẫu CHÚ THÍCH 2: Thay đổi tiền cột sau khoảng 30 mẫu đến 40 mẫu CHÚ THÍCH 3: Sau phân tích xong, dùng hỗn hợp axetonitril (3.1) nước theo tỷ lệ 50:50 để làm vệ sinh bơm tiêm mẫu Rửa cột với hỗn hợp với tỷ lệ 90:10 60 Nếu ngừng chạy thời gian dài, nên rửa cột với hỗn hợp trên, sau với metanol (3.2) khoảng 30 min, tiếp đến với axetonitril (3.1) 30 Sau đó, lặp lại với metanol (3.2) 30 cuối nước 60 Tính kết 6.1 Tính hàm lượng chất thuộc nhóm penicillin Hàm lượng hợp chất nhóm penicillin mẫu thử, C, biểu thị microgam kilogam (µg/kg) tính theo công thức sau: Y diện tích pic chất thuộc nhóm penicillin có mẫu thử; b tung độ góc đường chuẩn; a hệ số góc đường chuẩn; V thể tích dịch chiết tạo dẫn xuất (xem 5.6.3), tính milinit (ml); m (g); khối lượng mẫu thử nghiền lấy để đem ly (xem 5.1.1), tính gam hiệu suất thu hồi trung bình tính từ mẫu xác định độ thu hồi 6.2 Tính hiệu suất thu hồi Hiệu suất thu hồi, R, tính từ kết mẫu xác định độ thu hồi theo công thức sau: Ysup diện tích pic mẫu xác định độ thu hồi; Ystd diện tích pic chất chuẩn với nồng độ tương ứng Hiệu suất thu hồi trung bình mẫu xác định độ thu hồi, , tính theo công thức sau: R1 R2 hiệu suất thu hồi mẫu xác định độ thu hồi (nồng độ kháng sinh tương ứng 50 µg/kg 300 µg/kg Độ thu hồi độ lặp lại Độ thu hồi (R) độ lệch chuẩn lặp lại hai lần tiêm (CV) loạt mẫu phân tích quy định Bảng Bảng − Yêu cầu độ tin cậy phép phân tích Tên chất Hiệu suất thu hồi % Độ lệch chuẩn lặp lại % Amoxicillin 75 ± 18 Penicillin G 74 ± 17 Penicillin V 75 ± 30 13 Ampicillin 74 ± 13 Oxacillin 65 ± 18 Nafcillin 64 ± 22 12 Cloxacillin 60 ± 16 Dicloxacillin 48 ± 17 11 Mẫu có bổ sung 50 µg/kg Mẫu có bổ sung 300 µg/kg Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ: a) thông tin cần thiết việc nhận biết đầy đủ mẫu thử; b) phương pháp lấy mẫu sử dụng, biết; c) phương pháp thử sử dụng viện dẫn tiêu chuẩn này; d) thao tác không quy định tiêu chuẩn này, điều coi tự chọn chi tiết có ảnh hưởng tới kết quả; e) kết thử nghiệm thu THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Phương pháp xác định hàm lượng chất thuộc nhóm penicillin sản phẩm thuỷ sản, Phòng Kiểm nghiệm AFSSA (Pháp) ... thử nghiệm thu THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Phương pháp xác định hàm lượng chất thuộc nhóm penicillin sản phẩm thuỷ sản, Phòng Kiểm nghiệm AFSSA (Pháp) ... 5.3 Chuẩn bị mẫu xác định độ thu hồi, nồng độ 50 µg/kg 300 µg/kg Thêm xác 100 µl dung dịch chuẩn hỗn hợp chất thuộc nhóm penicillin (3 .18) vào 5,0 g mẫu trắng (5 .2) Tiến hành chuẩn bị làm mẫu xác. .. SM5 đến SM8 vào bình định mức màu nâu dung tích 10 ml (4 .5) định mức nước 3.19 Các dung dịch chuẩn hỗn hợp làm việc nhóm penicillin 3.19.1 Dung dịch chuẩn hỗn hợp làm việc (ST1) Hút xác 125 µl