Đang tải... (xem toàn văn)
Tiêu chuẩn này quy định phương pháp xác định dư lượng của các loại thuốc bảo vệ thực vật phospho hữu cơ (OP), trong thuỷ sản và sản phẩm thuỷ sản bằng hệ thống sắc ký khí (GC). Phương pháp này có thể áp dụng để xác định các hợp chất: dimethoate, chlorfenvinphos, chlorpyrifos, methidathion và phosmet Giới hạn phát hiện của phương pháp: từ 0,2 mgkg đến 1 mgkg. 2. Nguyên tắc Thuốc bảo vệ thực vật OP trong mẫu thủy sản được chiết tách ra bằng hỗn hợp axetonitrilaxeton. Dịch chiết được làm sạch trên cột silicagel, sau đó được chiết tách làm 2 phân đoạn. Hàm lượng các thuốc bảo vệ thực vật OP trong các phân đoạn chiết được xác định trên hệ thống GC với 2 detector: detector bắt giữ electron (ECD) và detector ion hoá nhiệt phát hiện nitơphospho (NPD).
TIÊU CHUẨN VIỆT NAM TCVN 8347:2010 THUỶ SẢN VÀ SẢN PHẨM THUỶ SẢN ( XÁC ĐỊNH DƯ LƯỢNG THUỐC BẢO VỆ THỰC VẬT NHÓM PHOSPHO HỮU CƠ ( PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ KHÍ Fish and fishery products − Determination of organophosphorus pesticides residues − Method using gas chromatography Lời nói đầu TCVN 8347 : 2010 Cục Chế biến, Thương mại nông lâm thuỷ sản nghề muối biên soạn, Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học Công nghệ công bố Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định phương pháp xác định dư lượng loại thuốc bảo vệ thực vật phospho hữu (OP), thuỷ sản sản phẩm thuỷ sản hệ thống sắc ký khí (GC) Phương pháp áp dụng để xác định hợp chất: dimethoate, chlorfenvinphos, chlorpyrifos, methidathion phosmet Giới hạn phát phương pháp: từ 0,2 µg/kg đến µg/kg Nguyên tắc Thuốc bảo vệ thực vật OP mẫu thủy sản chiết tách hỗn hợp axetonitrilaxeton Dịch chiết làm cột silicagel, sau chiết tách làm phân đoạn Hàm lượng thuốc bảo vệ thực vật OP phân đoạn chiết xác định hệ thống GC với detector: detector bắt giữ electron (ECD) detector ion hoá nhiệt phát nitơphospho (NPD) Thuốc thử vật liệu thử Chỉ sử dụng thuốc thử tinh khiết phân tích sử dụng nước cất nước có độ tinh khiết tương đương, trừ có quy định khác 3.1 Natri sulfat, dạng hạt, làm khô cách sấy qua đêm nhiệt độ 350 0C giữ chai thuỷ tinh 3.2 Hexan, loại dùng cho GC 3.3 Etyl axetat, loại dùng cho HPLC 3.4 Khí mang heli, loại dùng cho GC 3.5 Bông thuỷ tinh, SUPELCO, 2-0411 loại tương đương 3.6 Silicagel, cỡ hạt 60 mesh (silica-60), Merck, Darmstadt, Đức loại tương đương 3.7 Silicagel hoạt hoá Cân lượng silicagel (3.6), rửa diclometan cho vào chén sứ để tủ sấy nhiệt độ 120 0C vòng 12 h Sau đó, dùng giấy thiếc bọc kín miệng chén sứ để lại vào tủ sấy nhiệt độ 120 0C trước sử dụng 3.8 Xelit 3.9 Dung dịch rửa giải Hỗn hợp gồm dung dịch axetonitril (loại dùng cho GC) axeton (loại dùng cho GC) theo tỷ lệ thể tích 9:1 pha trước sử dụng 3.10 Các chất chuẩn thuốc bảo vệ thực vật OP (Promochem, Wesel, Đức loại tương đương): dimethoate, chlorfenvinphos (đồng phân E+Z), chlorpyrifos, methidathion phosmet, độ tinh khiết lớn 99 % 3.11 Dung dịch chuẩn thuốc bảo vệ thực vật OP axeton Chuẩn bị dung dịch chuẩn thuốc bảo vệ thực vật OP axeton từ chất chuẩn (3.10) Tuỳ theo nồng độ thuốc bảo vệ thực vật có ống chuẩn, dùng bình định mức lượng axeton (loại dùng cho GC) thích hợp CHÚ THÍCH: Các chuẩn phải bảo quản nhiệt độ – 20 0C 3.12 Dung dịch chuẩn thu hồi Pha chuẩn OP axeton để có hàm lượng khoảng 0,005 µg/ml đến 50 µg/ml 3.13 Dung dịch chuẩn trung gian Pha loãng chuẩn ban đầu (3.11) axeton dung dịch chuẩn trung gian 3.14 Dung dịch chuẩn làm việc Pha loãng chuẩn trung gian (3.13) hexan (3.2) chuẩn làm việc Các chuẩn làm việc dùng để bơm vào GC Thiết bị, dụng cụ Sử dụng thiết bị, dụng cụ phòng thử nghiệm thông thường cụ thể sau: 4.1 Cân phân tích, cân xác đến 0,1 mg 4.2 Cốc thủy tinh có mỏ 4.5 Máy nghiền 4.6 Máy trộn cao tốc 4.7 Máy cô quay chân không 4.8 Tủ sấy 4.9 Lò nung 4.10 Máy sắc ký khí, trang bị detector ECD NPD 4.11 Cột sắc ký thủy tinh, có van khoá, chiều dài 150 mm, đường kính mm chiều dài 50 mm, đường kính 20 mm 4.12 Cột mao quản (cho máy GC), loại HP Ultra 2, chất nhồi cột chứa % metylsilicol, chiều dài 25 m, đường kính 0,2 mm, độ dày lớp pha tĩnh 0,33 µm tương đương Cách tiến hành 5.1 Chuẩn bị mẫu thử 5.1.1 Cân g mẫu nghiền máy nghiền (4.5), xác đến 0,1 mg, cho vào cốc thuỷ tinh có mỏ (4.2) Thêm g xelit (3.8), 30 g natri sulfat khan (3.1) nghiền Tiếp tục thêm vào 150 ml dung dịch rửa giải (3.9) trộn hỗn hợp trong máy trộn cao tốc (4.6) để chiết lấy thuốc bảo vệ thực vật từ mẫu Sau đó, lọc dung dịch giấy lọc 5.1.2 Sản phẩm chiết cô đặc máy cô quay đến khoảng ml, sau cô tiếp khô máy cô quay (4.7) chế độ chân không nhiệt độ 40 0C Hoà cặn thu ml hexan (3.2) làm dịch chiết theo 5.4 5.2 Chuẩn bị mẫu trắng Mẫu trắng định nghĩa mẫu thủy sản xác định chứa thuốc bảo vệ thực vật gốc OP Tiến hành chuẩn bị mẫu trắng giống chuẩn bị mẫu thử theo quy định 5.1 5.3 Chuẩn bị mẫu để xác định độ thu hồi Thêm ml dung dịch chuẩn thu hồi (3.12) có hàm lượng từ 0,005 µg/ml đến 50 µg/ml vào g mẫu trắng, trộn mẫu máy nghiền (4.5) Tiến hành chuẩn bị mẫu giống chuẩn bị mẫu thử theo quy định 5.1 5.4 Làm dịch chiết 5.4.1 Chuẩn bị cột Chuẩn bị cột, gồm thuỷ tinh (3.5), 1,3 g silicagel hoạt hoá (3.7), g natri sulfat khan (3.1) Trước tiến hành phân tích, cho vào cột ml etyl axetat (3.3) sau ml hexan (3.2) 5.4.2 Làm dịch chiết 5.4.2.1 Chuyển dịch thu theo 5.1.2, 5.2 5.3 vào cột sắc ký chuẩn bị (5.4.1) 5.3.3 Rửa dung dịch cột với ml hexan (3.2), sau với ml hỗn hợp hexan-etyl axetat theo tỷ lệ thể tích 95:5 Tiếp theo, rửa giải với ml hỗn hợp hexan-etyl axetat theo tỷ lệ thể tích 50:50 tách lấy phân đoạn Sau đó, tiếp tục rửa giải với ml etyl axetat tách lấy phân đoạn Tốc độ rửa giải phải điều chỉnh đạt 10 giọt/min 5.3.1 Thu phân đoạn chiết vào bình thuỷ tinh đáy tròn máy cô quay chân không (4.7) Tiến hành cô máy cô quay khô Sau đó, thêm xác ml hexan vào bình, lắc cho tan hút để bơm vào máy GC theo 5.5 5.5 Tiến hành phân tích GC 5.5.1 Điều kiện phân tích a) Máy sắc ký khí sử dụng detector ECD NPD, chọn chế độ bơm tự động, lần lượng µl theo chế độ tiêm không chia; b) Chế độ nhiệt hệ thống GC: − nhiệt độ buồng tiêm: 270 0C; − nhiệt độ detector ECD: 300 0C, tốc độ dòng N2: 60 ml/min; − nhiệt độ detector NPD: 270 0C, tốc độ dòng He: 30 ml/min, tốc độ dòng H 2: ml/min, tốc độ dòng không khí: 100 ml/min; − chương trình nhiệt độ cột (mô tả chi tiết Hình 1): trì 90 0C min; tăng 30 C/min, lên tới 180 0C; tăng 0C/min, lên tới 270 0C trì 270 0C 20 min; c) Cột sắc ký: cột mao quản (4.12); d) Khí mang: heli, tốc độ 0,5 ml/min Hình – Chương trình nhiệt độ cột hệ thống GC 5.5.2 Dựng đường chuẩn Tiêm dung dịch chuẩn làm việc (3.14) vào máy GC theo thứ tự từ nồng độ thấp đến cao Mỗi dung dịch tiêm lần, tính diện tích pic trung bình Dựng đường chuẩn biểu thị mối quan hệ diện tích pic thu nồng độ loại thuốc bảo vệ thực vật theo quan hệ tuyến tính Đường chuẩn cấu tử phải có độ tuyến tính tốt, hệ số tương quan hồi quy tuyến tính (R 2) phải lớn 0,99 5.5.3 Tiến hành phân tích Tiêm dung dịch mẫu thử, dung dịch mẫu trắng, dung dịch xác định độ thu hồi làm (5.3.1) vào hệ thống GC Mỗi dung dịch mẫu tiêm lần Tính giá trị trung bình Tính kết Hàm lượng loại thuốc bảo vệ thực vật có mẫu, C, biểu thị microgam kilogam (µg/kg) theo công thức sau: Y hiệu số diện tích pic dịch chiết diện tích pic có mẫu trắng tiêm vào GC, tính theo đơn vị diện tích; a, b thông số đường chuẩn y = ax + b, xác định theo 5.5.2; V thể tích phân đoạn dịch chiết thu sau làm (xem 5.4.2.3), tính mililit (ml) M khối lượng mẫu thủ (xem 5.1.1), tính gam (g) Độ lặp lại độ thu hồi 7.1 Độ lặp lại Độ lệch chuẩn lặp lại, CVS, tính theo diện tích píc sắc ký lần tiêm dung dịch chuẩn phải nhỏ 0,5 % 7.2 Độ thu hồi Độ thu hồi, R, xác định cách sử dụng 10 mẫu trắng bổ sung lượng dung dịch chuẩn để tính đuợc hàm lượng xác Độ thu hồi tính phải nằm khoảng từ 70 % đến 110 % (tuỳ theo hàm lượng OP có mẫu) Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ: a) thông tin cần thiết việc nhận biết đầy đủ mẫu thử; b) phương pháp lấy mẫu sử dụng, biết; c) phương pháp thử sử dụng viện dẫn tiêu chuẩn này; d) thao tác không quy định tiêu chuẩn này, điều coi tự chọn, chi tiết có ảnh hưởng tới kết quả; e) kết thử nghiệm thu THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] F Hernandez, R Serrano, J, Beitran, F J Lopez, Comparison of Cleanup Techniques for Simple Method for Analysis of Selected Organophosphorus Pesticide Residues in Molluscs, J.AOAC, Vol 79(1996): 124-131 ... dịch chuẩn thuốc bảo vệ thực vật OP axeton Chuẩn bị dung dịch chuẩn thuốc bảo vệ thực vật OP axeton từ chất chuẩn (3 .10) Tuỳ theo nồng độ thuốc bảo vệ thực vật có ống chuẩn, dùng bình định mức lượng. .. cô quay (4 .7) chế độ chân không nhiệt độ 40 0C Hoà cặn thu ml hexan (3 .2) làm dịch chiết theo 5.4 5.2 Chuẩn bị mẫu trắng Mẫu trắng định nghĩa mẫu thủy sản xác định chứa thuốc bảo vệ thực vật gốc... dịch xác định độ thu hồi làm (5 .3.1) vào hệ thống GC Mỗi dung dịch mẫu tiêm lần Tính giá trị trung bình Tính kết Hàm lượng loại thuốc bảo vệ thực vật có mẫu, C, biểu thị microgam kilogam ( g/kg)