07/06/13 Ứng dụng KTDT trong thủ y sản 1 07/06/13 Ứng dụng KTDT trong thủ y sản 2 Kỹ thuật di truyền Kỹ thuật di truyền bao gồm các kỹ thuật hiện đại được thực hiện trên acid nucleic nhằm nghiên cứu cấu trúc gen, điều chỉnh và biến đổi gen, nhằm tách, tổng hợp và chuyển các gen mong muốn vào các tế bào vật chủ mới để tạo ra cơ thể sinh vật mới mang những đặc tính mới, cũng như tạo ra sản phẩm mới. Các kỹ thuật chủ yếu gồm: 1. Tách chiết gen. 2. Nhân dòng gen. 3. Xác định trình tự gen. 4. Thiết kế các vector chuyển gen. 5. Biến nạp gen. 6. Biểu hiện gen lạ vào tế bào hoặc cơ thể chủ nhận. 07/06/13 Ứng dụng KTDT trong thủ y sản 4 Để thực hiện được các kỹ thuật di truyền, các thực nghiệm đều cần phải sử dụng DNA tái tổ hợp. DNA tái tổ hợp (recombinant DNA) là DNA được tạo ra từ hai hay nhiều nguồn vật liệu di truyền khác nhau. Phân tử DNA tái tổ hợp được tạo nhờ kỹ thuật ghép nối các đoạn DNA của các thể khác nhau trong cùng một loài, hoặc các cá thể khác nhau. 07/06/13 Ứng dụng KTDT trong thủ y sản 5 Tách ADN NST của “tế bào cho” Enzim cắtEnzim cắt Đoạn ADN bị cắt ra Gắn đoạn bị cắt vào plasmid nhờ enzim nối ADN tái tổ hợp Chuyển ADN tái tổ hợp vào tế bào nhận E.coli 07/06/13 Ứng dụng KTDT trong thủ y sản 6 07/06/13 Ứng dụng KTDT trong thủ y sản 7 Những ứng dụng của kỹ thuật di truyền Công nghệ hay kỹ thuật di truyền cho phép các nhà sinh học lấy gen từ tế bào này và ghép vào tế bào khác. Khi được ghép vào tế bào mới, gen có thể biến đổi chức năng cuả tế bào đó, để tạo ra các giống vật nuôi cây trồng có lợi. Hơn thế nữa, công nghệ di truyền còn được ứng dụng trong điều trị gen và chuẩn đoán gen các bệnh trong y học và nhiều những ứng dụng to lớn trong cuộc sống. Ứng dụng KTDT trong thủy sản 8 07/06/13 Trong thủy sản: 1. Kỹ thuật di truyền đã được áp dụng vào chọn giống, cải tạo, tạo giống mới có năng suất và phẩm chất tốt hơn. 2. Áp dụng các kỹ thuật di truyền để phát hiện sớm các bệnh gây hại trên các con giống nhằm sớm có các biện pháp khắc phục. 07/06/13 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 9 I, Áp dụng kỹ thuật di truyền vào chọn và cải tạo giống thủy sản  Hiện nay kỹ thuật phổ biến và đem lại lợi ích lớn nhất trong việc ứng dụng kỹ thuật di truyền vào thủy sản đó là chuyển gen vào cá để tạo ra những giống cá mới có năng suất cao, khả năng chống chịu với môi trường tốt.  Nhờ kỹ thuật chuyển gen ta có thể đưa những gen tôt, gen mong muốn vào cá để tạo ra giống cá mong muốn. 07/06/13 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 10 Kỹ thuật chuyển gen vào cá 1. Lựa chọn và tạo dòng 2. Chuyển gen vào cá 3. Kiểm tra kết quả chuyển gen CÁC BƯỚC [...]... 07/06/13 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 23 2.5 Phương pháp khác Sử dụng súng bắn gen 07/06/13 Sử dụng tế bào gốc phôi Ứng dụng KTDT trong thủy sản Đóng gói DNA ngoại lai trong liposome 24 Sử dụng súng bắn gen 07/06/13 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 25 Sử dụng tế bào gốc phôi 07/06/13 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 26 Đóng gói DNA ngoại lai trong liposome chuyển vào tế bào trứng hay phôi 07/06/13 Ứng dụng KTDT... chuyển vào cá II, Áp dụng kỹ thuật di truyền để phát hiện bệnh trên con giống  Hiện nay mầm gây bệnh chủ yếu cho các giống tôm cá là do virus Các phương pháp xác định bệnh trên con giống đều dựa vào các bộ kít đặc trưng cho từng loại bệnh Dựa trên kỹ thuật RT PCR, các kít được thiết kế đặc trưng cho từng loại bệnh để nhằm phát hiện nhanh các bệnh trên con giống 07/06/13 Ứng dụng KTDT trong thủy sản... trứng tiền nhân Khi thấy trứng tiền nhân hơi phồng to và trở nên sáng hơn thì dừng lại và kéo nhanh kim tiêm ra 07/06/13 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 18 Mỗi một nhóm trứng tiền nhân đã hoàn thành được chuyển sang một đĩa môi trường khác để ấp và đánh giá bằng mắt trong một vài tiếng Sau đó tất cả các trứng tiền nhân được nhìn thấy rõ ràng và được chuyển vào ống dẫn trứng của con cái nhận 07/06/13 Ứng. .. tác dưới kính lúp  07/06/13 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 15  Khó khăn cần khắc phục trong chuyển gen ở nhiều loài cá bằng vi tiêm đó là phải loại bỏ màng chorion Có thể loại bỏ màng này bằng cách dùng enzyme, có thể là trypsin hay proteinase Hoặc dùng thủ công bằng tay, tức là sử dụng một mũi kim sắc nhọn xé rách màng 07/06/13 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 16 Dụng cụ Dụng cụ Máy vi thao tác gồm 2... vào DNA vật chủ (456) 07/06/13 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 30 07/06/13 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 31 3.2 Phương pháp PCR Tiến hành - Tách DNA của nhân tế bào ở cá đã được chuyển gen - Chế phẩm DNA này cùng với cặp mồi đặc hiệu cho đoạn gen đã chuyển trong phản ứng PCR, nếu kết quả PCR dương tính thì chứng tỏ gen ngoại lai đã được xen vào vật chủ  07/06/13 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 32  Bước... ADN Plasmit tái tổ hợp dạng vòng 07/06/13 ADN của tế bào nhận E.coli Ứng dụng KTDT trong thủy sản 12 1.2 Tạo dòng nhờ phương pháp phân tử PCR 07/06/13 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 13 2 Chuyển gen vào cá Vi tiêm Xung điện Tiêm trực tiếp Lây nhiễm Phương pháp khác 07/06/13 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 14 2.1 Phương pháp vi tiêm  Trứng cá là đối tượng lý tưởng về mọi khía cạnh để thực hiện công việc... 07/06/13 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 29 Tiến hành   Sử dụng enzyme giới hạn để cắt DNA này và chế phẩm được tách bằng điện di trên gel agarose rồi chuyển lên màng lai (12 3) Bổ sung mẫu dò (đoạn oligonucleotit mạch đơn) Sau khi rửa sạch mẫu dò không bám, bằng phóng xạ tự chụp có thể phát hiện được mẫu dò đã bám vào gen được chuyển chứng minh cho gen ngoại lai đã xen được vào DNA vật chủ (456) 07/06/13 Ứng. .. 07/06/13 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 33 4 Các hướng tạo cá chuyển gen Tạo cá có tốc độ sinh trưởng nhanh Tạo cá có khả năng chịu lạnh Tạo cá có khả năng kháng bệnh Tạo cá có màu sắc đẹp, ngoại hình đa dạng Chuyển gen GH nhằm tạo cá có tốc độ lớn nhanh, hiệu07/06/13 sử suất dụng t/ăn cao Công nghệ Chuyển gen mã antisene RNA hóa protein tạo sane phẩm AFP(antifreeze bổ sung với pr)_pr chống Ứng dụng KTDT... plasmid chứa DNA ngoại lai đi qua các lỗ tạm thời trên màng bào chất 07/06/13 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 21 2.3 Phương pháp tiêm trực tiếp Chuyển gen bằng tiêm trực tiếp DNA ngoại lai vào tế bào sinh dưỡng  Bằng phương pháp này việc chuyển gen cũng đã thành công ở nhiều loài như cá mú vằn, cá vược, tôm sú…  07/06/13 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 22 2.4 Phương pháp lây nhiễm retrovirus  Retrovirus... Kiểm tra kết quả chuyển gen  Sau khi đưa gen vào trứng đã thụ tinh hay một giai đoạn nào khác, sau đó trứng được ấp nở và nuôi tới một giai đoạn nhất định thì kiểm tra để xác định xem gen chuyển có xen được vào genom cá hay chưa Công việc này được thực hiện theo 2 phương pháp: phương pháp thấm tách DNA (southern blot) và phương pháp PCR 07/06/13 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 28 3.1 Phương pháp thấm tách . 07/06/13 Ứng dụng KTDT trong thủ y sản 1 07/06/13 Ứng dụng KTDT trong thủ y sản 2 Kỹ thuật di truyền Kỹ thuật di truyền bao gồm các kỹ thuật hiện đại. 07/06/13 Ứng dụng KTDT trong thủ y sản 6 07/06/13 Ứng dụng KTDT trong thủ y sản 7 Những ứng dụng của kỹ thuật di truyền Công nghệ hay kỹ thuật di truyền