BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ NGÂN NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG MỘT SỐ CHỈ TIÊU KIỂM NGHIỆM NẤM LINH CHI (Ganoderma lucidum P.Karst.) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC HÀ NỘI - 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ NGÂN NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG MỘT SỐ CHỈ TIÊU KIỂM NGHIỆM NẤM LINH CHI (Ganoderma lucidum P.Karst.) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: KIỂM NGHIỆM THUỐC VÀ ĐỘC CHẤT MÃ SỐ: 60720410 Ngƣời hƣớng dẫn : PGS.TS Trần Việt Hùng PGS.TS Đỗ Thị Hà HÀ NỘI - 2017 LỜI CẢM ƠN Lời xin bày tỏ lòng cám ơn sâu sắc tới PGS.TS Trần Việt Hùng, PGS.TS Đỗ Thị Hà, ngƣời thầy quan tâm, bảo tận tình tạo điều kiện giúp đỡ suốt trình thực hoàn thành luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn đến Ban Giám Đốc Viện Kiểm Nghiệm thuốc Trung ƣơng, Ban giám đốc Viện Dƣợc liệu, Khoa Hóa Thực vật 2, Ban giám hiệu, Phòng Quản lý sau đại học thầy cô giáo trƣờng đại học Dƣợc Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi, giúp đỡ hƣớng dẫn suốt trình học tập nhƣ thực đề tài Đặc biệt, xin cảm ơn anh chị Khoa Nghiên cứu Phát triển giúp đỡ, san sẻ công việc đóng góp ý kiến cho hoàn thành luận văn Cuối cùng, xin bày tỏ lòng biết ơn tới gia đình bạn bè động viên, khích lệ suốt trình học tập nhƣ thực luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Học viên Nguyễn Thị Ngân MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT VÀ KÝ HIỆU DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG I: TỔNG QUAN .2 1.1 TỔNG QUAN VỀ NẤM LINH CHI (Ganoderma lucidum P Karst.) 1.1.1 Vị trí phân loại 1.1.2 Đặc điểm thực vật 1.1.3 Phân bố, sinh thái 1.1.4 Thành phần hóa học 1.1.4.1 Polysaccharid 1.1.4.2 Triterpenoid 1.1.4.3 Peptid, protein 1.1.4.4 Khoáng chất 1.1.5 Tác dụng nấm Linh chi .7 1.1.6 Công dụng nấm Linh chi 11 1.2 POLYSACCHARID TRONG NẤM LINH CHI 11 1.2.1 Hàm lƣợng polysaccharid nấm Linh chi 11 1.2.2 Các phƣơng pháp phân tích polysaccharid (PS) nấm Linh chi 12 1.2.1.1 Phƣơng pháp tạo màu đo quang phổ hấp thụ UV – VIS 12 1.2.1.2 Phƣơng pháp sắc kỷ lỏng hiệu cao HPLC 13 1.3 ACID GANODERIC A TRONG NẤM LINH CHI .13 1.3.1 Hàm lƣợng acid ganoderic A (GAA) nấm Linh chi 14 1.3.2 Các phƣơng pháp phân tích acid ganoderic A (GAA) nấm Linh chi 14 1.3.2.1 Phƣơng pháp sắc ký lớp mỏng .15 1.3.2.2 Phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao HPLC 15 1.4 MỘT SỐ CHỈ TIÊU KHÁC TRONG KIỂM NGHIỆM NẤM LINH CHI 16 1.4.1 Mô tả 16 1.4.2 Bột 16 1.4.3 Định tính 17 1.4.4 Độ ẩm 19 1.4.5 Tro toàn phần 19 1.4.6 Tro không tan acid 19 1.4.7 Chất chiết đƣợc dƣợc liệu 19 1.4.8 Tạp chất 19 1.5 MỘT VÀI NÉT VỀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 1.5.1 Phƣơng pháp HPTLC 19 1.5.2 Phƣơng pháp HPLC .21 1.5.3 Phƣơng pháp quang phổ UV – VIS 23 CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 2.1 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU 25 2.2 NGUYÊN VẬT LIỆU, HÓA CHẤT, DUNG MÔI 25 2.3 THIẾT BỊ, DỤNG CỤ THÍ NGHIỆM 26 2.4 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 2.4.1 Định danh thực vật 27 2.4.2 Mô tả dƣợc liệu 27 2.4.3 Mô tả đặc điểm bột dƣợc liệu 27 2.4.4 Xác định độ ẩm 27 2.4.5 Định tính nấm Linh chi phƣơng pháp TLC 28 2.4.6 Xây dựng phƣơng pháp định tính, định lƣợng acid ganoderic A nấm Linh chi HPLC 29 2.4.6.1 Khảo sát phƣơng pháp xử lý mẫu .29 2.4.6.2 Khảo sát điều kiện phân tích hệ thống HPLC .30 2.4.6.3 Thẩm định phƣơng pháp phân tích .30 2.4.7 Ứng dụng quy trình xây dựng định lƣợng hàm lƣợng acid ganoderic A mẫu nấm Linh chi 33 2.4.8 Xây dựng phƣơng pháp định lƣợng polysaccharid (PS) nấm Linh chi phƣơng pháp đo quang .33 2.4.8.1 Lựa chọn nhiệt độ chiết tối ƣu 34 2.4.8.2 Khảo sát thời gian chiết 34 2.4.8.3 Khảo sát thời gian điều kiện phản ứng 34 2.4.8.4 Khảo sát thể tích ethanol 96% thêm vào để kết tủa polysaccharid 34 2.4.8.5 Thẩm định phƣơng pháp 35 2.4.9 Ứng dụng quy trình xây dựng định lƣợng hàm lƣợng polysaccharid mẫu nấm Linh chi 36 2.4.10 Xử lý số liệu 36 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 38 3.1 ĐỊNH DANH THỰC VẬT .38 3.2 MÔ TẢ HÌNH THỂ 38 3.3 MÔ TẢ BỘT DƢỢC LIỆU 42 3.4 XÁC ĐỊNH ĐỘ ẨM .46 3.5 ĐỊNH TÍNH NẤM LINH CHI BẰNG PHƢƠNG PHÁP HPTLC 48 3.6 XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƢỢNG ACID GANODERIC A TRONG NẤM LINH CHI BẰNG PHƢƠNG PHÁP HPLC 52 3.6.1 Tối ƣu trình chiết acid ganoderic A (GAA) .52 3.6.2 Khảo sát điều kiện phân tích hệ thống HPLC 52 3.6.2.1 Lựa chọn thành phần pha động 52 3.6.2.3 Lựa chọn nhiệt độ cột 53 3.6.3 Quy trình định tính, định lƣợng acid ganoderic A phƣơng pháp HPLC .53 3.6.4 Thẩm định phƣơng pháp 54 3.6.4.1 Độ đặc hiệu 54 3.6.4.2 Tính thích hợp hệ thống 55 3.6.4.3 Độ tuyến tính 56 3.6.4.4 Độ lặp lại độ xác trung gian 57 3.6.4.5 Độ 58 3.6.4.6 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lƣợng (LOQ) 59 3.7 ĐỊNH LƢỢNG ACID GANODERIC A TRONG MỘT SỐ MẪU NẤM LINH CHI VIỆT NAM 59 3.8 XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH LƢỢNG POLYSACCHARID TRONG NẤM LINH CHI BẰNG PHƢƠNG PHÁP QUANG PHỔ UV – VIS 60 3.8.1 Lựa chọn thời gian chiết 60 3.8.2 Lựa chọn thể tích EtOH 96% thêm vào để kết tủa polysaccharid 60 3.8.3 Lựa chọn thời gian điều kiện phản ứng 61 3.8.4 Quy trình định lƣợng polysaccharid nấm Linh chi 61 3.8.5 Thẩm định phƣơng pháp 62 3.8.5.1 Độ đặc hiệu 62 3.8.5.2 Tính thích hợp hệ thống 62 3.8.5.3 Độ tuyến tính 62 3.8.5.4 Độ lặp lại độ xác trung gian 63 3.8.5.5 Độ 64 3.9 ĐỊNH LƢỢNG POLYSACCHARID TRONG MỘT SỐ MẪU NẤM LINH CHI VIỆT NAM 65 CHƢƠNG 4: BÀN LUẬN 68 4.1 VỀ ĐẶC ĐIỂM THỂ QUẢ, BỘT NẤM LINH CHI .68 4.2 VỀ PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH TÍNH NẤM LINH CHI BẰNG SẮC KÝ LỚP MỎNG HIỆU NĂNG CAO HPTLC 68 4.3 VỀ PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƢỢNG ACID GANODERIC A BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO HPLC 69 4.3 HÀM LƢỢNG ACID GANODERIC A TRONG CÁC MẪU NẤM LINH CHI NGHIÊN CỨU 69 4.4 VỀ PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH LƢỢNG POLYSACCHARID BẰNG PHƢƠNG PHÁP ĐO QUANG 70 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 72 KẾT LUẬN 72 KIẾN NGHỊ 73 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT VÀ KÝ HIỆU G.lucidum Ganoderma lucidum EtOH Ethanol LOD Limit of detection (giới hạn phát hiện) LOQ Limit of quantitation (giới hạn định lƣợng) TLC Thin layer chromatography (sắc ký lớp mỏng) HPTLC High performance thin layer chromatography (sắc ký lớp mỏng hiệu cao) HPLC High-performance liquid chromatography (sắc ký lỏng hiệu cao) UV – VIS Ultraviolet – visible PS Polysaccharid GAA Acid ganoderic A LDL – C Low-density lipoprotein - cholesterol HDL – C High-density lipoprotein - cholesterol ALT Alanin Amino Transferase MeOH Methanol AHP American Herbal Pharmacopoeia RSD Relative standard deviation (độ lệch chuẩn tƣơng đối) RT Rentention time (thời gian lƣu) V Thể tích T, T’ Nhiệt độ t Thời gian DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1: Phân tích TLC bổ sung Dƣợc điển Việt Nam dƣợc điển Trung Quốc Bảng 2: Phân tích TLC Dƣợc điển dƣợc liệu Mỹ (AHP) Dƣợc điển Mỹ 17 18 Bảng 2.1: Các mẫu nấm Linh chi nghiên cứu 25 Bảng 1: Mô tả hình thể 38 Bảng 2: Độ ẩm 12 mẫu nấm Linh chi 47 Bảng 3: Kết khảo sát tính thích hợp hệ thống 55 Bảng 4: Cách pha dãy dung dịch chuẩn 56 Bảng 5: Kết khảo sát độ tuyến tính 56 Bảng 6: Kết khảo sát độ lặp lại độ xác trung gian 57 Bảng 7: Kết độ thu hồi 58 Bảng 8: Hàm lƣợng acid ganoderic A nấm Linh chi 59 Bảng 9: Kết khảo sát tính thích hợp hệ thống 62 Bảng 10: Kết khảo sát độ tuyến tính 63 Bảng 3.11: Kết khảo sát độ lặp lại độ xác trung gian 64 Bảng 12: Kết độ thu hồi 65 Bảng 3.13: Kết định lƣợng polysaccharid nấm Linh chi 65 4.3 VỀ PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƢỢNG ACID GANODERIC A BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO HPLC Phƣơng pháp chiết có dƣới hỗ trợ thiết bị siêu âm có tần số cƣờng độ cao để truyền qua chất lỏng hay chất khí giúp phá vỡ thành tế bào sinh học, tạo thuận lợi cho việc giải phóng dịch cần chiết Do đó, phƣơng pháp cho hiệu cao tiết kiệm thời gian so với phƣơng pháp ngâm thông thƣờng Phƣơng pháp định lƣợng acid ganoderic A nấm Linh chi HPLC – DAD với cột sắc ký Gemini C18 (250 x 4,6 mm, µm) pha động gồm hỗn hợp acid acetic 1% acetonitril có tính đặc hiệu, độ độ xác cao Loại cột đƣợc sử dụng cột có kích cỡ hạt µm loại cột đƣợc sử dụng phổ biến điều kiện phòng thí nghiệm loại cột có kích cỡ hạt µm, cho thời gian phân tích hợp lý (40 phút), rút ngắn so với rửa giải gradient công trình công bố pic tách rõ ràng Nghiên cứu sử dụng phƣơng pháp siêu âm mà không dùng phƣơng pháp ngâm nhƣ tài liệu tham khảo số 16 Phƣơng pháp siêu âm cho hàm lƣợng acid ganoderic A cao rõ rệt so với phƣơng pháp ngâm 4.3 HÀM LƢỢNG ACID GANODERIC A TRONG CÁC MẪU NẤM LINH CHI NGHIÊN CỨU Hàm lƣợng acid ganoderic A không đồng mẫu nấm thu hái tỉnh khác tỉnh Các mẫu nấm Linh chi nghiên cứu có hàm lƣợng acid ganoderic A từ 0,08 – 0,3 % so với dƣợc liệu khô Một số mẫu Nấm Linh chi trồng mẫu Nấm Linh chi tự nhiên không phát chứa acid ganoderic A Năm mẫu nấm Linh chi GLT – 1, GLT – 2, GLT – 3, GLT – GLT – thu hái Quảng Nam nhƣng có hàm lƣợng acid ganoderic A khác nhau, lần lƣợt 0,16 %, 0,15 %, 0,29 %, 0,32 % 0,30 % Nhƣ vậy, chất lƣợng nấm Linh chi không phụ thuộc vào điều kiện khí hậu, thổ nhƣỡng Các mẫu Nấm Linh chi trồng cho hàm lƣợng acid ganoderic A cao mẫu nấm tự nhiên Mẫu nấm GLT – cho hàm lƣợng acid ganoderic A cao Nhƣ cần khảo sát thêm hàm lƣợng có mặt triterpenoid khác nấm 69 Linh chi để xây dựng đƣợc tiêu định lƣợng thành phần triterpenoid nấm Linh chi 4.4 VỀ PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH LƢỢNG POLYSACCHARID BẰNG PHƢƠNG PHÁP ĐO QUANG Nghiên cứu sử dụng dung môi nƣớc để chiết polysaccharid nấm Linh chi Một số tài liệu tham khảo sử dụng dung môi kiềm, nhiên số tài liệu tham khảo chứng minh chiết dung dịch kiềm lƣợng polysaccharid thô thu đƣợc có lẫn nhiều tạp Mặt khác, tính chất polysaccharid tan tốt nƣớc, lựa chọn dung môi chiết nƣớc, vừa an toản, rẻ tiền hiệu Polysaccharid cho màu vàng cam đƣợc phản ứng với phenol acid sulfuric đậm đặc Phản ứng nhạy màu sắc ổn định nhiều giờ, đƣợc xác định bƣớc sóng 490 nm Phản ứng đƣợc sử dụng để xác định tổng lƣợng polysaccharid thu đƣợc từ Ganoderma lucidum P.Karst tính theo D-glucose Phƣơng pháp có tính đặc hiệu, độ độ xác cao sử dụng bổ sung cho phƣơng pháp sử dụng thuốc thử anthron nêu dƣợc điển Trung Quốc Tuy nhiên phƣơng pháp tạo màu với thuốc thử phenol – acid sulfuric có nhiều yếu tố ảnh hƣởng đến phản ứng tạo màu nhƣ: thứ tự cho phenol, acid sulfuric mẫu thử; thể tích phenol 5% acid sulfuric đậm đặc nhƣ thời gian ủ hỗn hợp phản ứng Theo nhiều tài liệu tham khảo thứ tự mẫu thử - phenol – acid sulfuric cho độ hấp thụ tối đa, đƣợc giải thích có mặt sẵn phenol dung dịch đƣờng furfural đƣợc tạo thành phản ứng tạo màu phenol đƣờng furfural xảy nhanh chóng trƣớc cạnh tranh trƣớc đƣờng furfural phân hủy Nhiệt độ ảnh hƣởng đến phản ứng tạo màu Khi lắc hỗn hợp phản ứng nhiệt độ phòng cho độ hấp thụ không ổn định Tuy nhiên, sau lắc, đun hỗn hợp phản ứng bể cách thủy 70°C 10 phút độ hấp thụ thu đƣợc ổn định đạt tối đa 70 Phƣơng pháp đo quang phổ hấp thụ UV – VIS phƣơng pháp phân tích đại đƣợc áp dụng rộng rãi nhiều phòng thí nghiệm Phƣơng pháp cho kết phân tích nhanh với độ xác cao 71 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Đã nghiên cứu đƣợc đặc điểm thế, đặc điểm bột nấm Linh chi, giới hạn độ ẩm nấm Linh chi Đã nghiên cứu xây dựng đƣợc phƣơng pháp định tính nấm Linh chi sắc ký lớp mỏng hiệu cao HPTLC Đã nghiên cứu xây dựng đƣợc phƣơng pháp định tính, định lƣợng acid ganoderic A nấm Linh chi kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu cao HPLC: - Khảo sát lựa chọn đƣợc phƣơng pháp chiết acid ganoderic A - Khảo sát lựa chọn đƣợc thông số tối ƣu cho trình sắc ký: Cột sắc ký Gemini C18 (250 x 4,6 mm, µm) Bƣớc sóng phát hiện: 254 nm Nhiệt độ cột: 30°C Tốc độ dòng: 1,3 ml/phút Thể tích tiêm: 20 µl Thời gian phân tích: 40 phút Pha động: acetonitril – acid acetic 1% (30:70) Chế độ chạy đẳng dòng - Phƣơng pháp đƣợc thầm định điều kiện thiết bị có cho kết đáng tin cậy với thông số sau: Khoảng tuyến tính: 120 µg/ml đến 400 µg/ml Giới hạn phát hiện: 2,5 µg/ml Giới hạn định lƣợng: 8,13 µg/ml Độ xác (RSD %): < 2% Độ (%): 98% - 102% Đã định lƣợng đƣợc hàm lƣợng acid ganoderic A 12 mẫu nấm Linh chi Việt Nam, kết cho thấy có 5/12 mẫu acid ganoderic A có 7/12 mẫu có acid ganoderic A với hàm lƣợng từ 0,02 – 0,32% 72 Đã nghiên cứu xây dựng đƣợc phƣơng pháp định lƣợng polysaccharid nấm Linh chi phƣơng pháp đo quang phổ hấp thụ UV – VIS định lƣợng đƣợc hàm lƣợng polysaccharid 12 mẫu nấm Linh chi Việt Nam KIẾN NGHỊ Khảo sát thêm hàm lƣợng thành phần triterpenoid khác nấm Linh chi Việt Nam để có sở xây dựng hàm lƣợng triterpenoid phù hợp 73 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Nguyễn Thị Mai Anh, Đào Văn Phan, Phạm Thị Vân Anh (2005), "Nghiên cứu tác dụng nấm Linh chi Việt Nam (Ganoderma lucidum) qua số số lipid máu chuột cống", Tạp chí Nghiên cứu Y học, 38(5) Bản bổ sung Dƣợc điển Việt Nam IV (2015) Bộ Y tế (2013), Dược liệu học, Tập 1, Nhà xuất Y học Hà Nội, tr 135 - 139 Bộ Y tế (2013), Hóa phân tích, Tập 2, Nhà xuất Y học Hà Nội, Mai Thành Chung, Nguyễn Thị Thu Hƣơng (2012), "Khảo sát hoạt tính khử gốc tự superoxid tác dụng glutathion peroxidase gan nấm Linh chi đỏ nấm Linh chi Vàng", Tạp chí Dược liệu, 17(5), tr 275 – 281 Nguyễn Thƣợng Dong, Bùi Thị Bằng, Nguyễn Thị Thu Hƣơng, Trần Mỹ Tiên, Lƣơng Kim Bích, Nguyễn Kim Phƣợng, Đỗ Thị Phƣơng, Nguyễn Thị Phƣơng, Đinh Thị Mai Hƣơng (2006),”Nghiên cứu tác dụng trí nhớ loài nấm linh chi mô hình gây suy giảm trí nhớ scopotamin”, Tạp chí Dược liệu, 11(1), tr 35-40 Nguyễn Thƣợng Dong, Bùi Thị Bằng, Nguyễn Kim Phƣợng, Đỗ Thị Phƣơng, Nguyễn Thị Phƣơng, Đinh Thị Mai Hƣơng (2005), "Nghiên cứu tác dụng chống oxy hóa loài nấm Linh chi mô hình gây viêm gan cấp tetraclorur carbon (CCL4)", Tạp chí Dược liệu, 10(6), tr 192 - 196 Trần Đình Duy, Hà Đức Cƣờng, Nguyễn Đăng Thoại, Trần Mạnh Hùng (2013), "Nghiên cứu tác dụng dự phòng điều trị suy giảm bạch cầu cao Linh chi (Ganoderma lucidum) chế phẩm Linh chi mô hình gây suy giảm bạch cầu pactitaxel carboplatin", Tạp chí Dược học, 53(450), tr.15 - 19 Nguyễn Anh Dũng (1995), "Góp phần vào nghiên cứu thành tố hóa học Ganoderma lucidum (Leyss ex Fr.) Karst.", Tạp chí Dược học, 229, tr 14 – 16 10 Dƣợc điển Việt Nam IV 11 Nguyễn Thị Thu Hƣơng, Trịnh Văn Tấn (2011), "Nghiên cứu tác dụng tăng cƣờng miễn dịch nấm Linh chi đỏ thực nghiệm gây suy giảm miễn dịch cyclophosphamid", Tạp chí Dược liệu, 16(1+2), tr 69 - 74 12 Trịnh Tam Kiệt (2011), Nấm lớn Việt Nam, Tập (Tái lần thứ 2), NXB Khoa học tự nhiên Công nghệ, tr 41, 135 - 157 13 Đỗ Tất Lợi (2005), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học, Hà Nội 14 Nguyễn Phƣơng Đại Nguyên (2013), Nấm Linh chi Tây Nguyên, Nhà xuất giáo dục Việt Nam 15 Trần Thị Văn Thi, Nguyễn Thị Hoài, Lê Trung Hiếu (2012), “Chiết xuất, xác định hàm lƣợng khảo sát tác dụng dƣợc lý phân đoạn polysaccharid từ nấm linh chi nuôi trồng Thừa Thiên Huế”, Tạp chí Dƣợc học, 52 (433), 18-22 16 Trần Thị Văn Thi, Nguyễn Thị Hoài, Nguyễn Thị Phƣợng, Lê Trung Hiếu, Lê Lâm Sơn (2012), "Khảo sát số tác dụng dƣợc lý phân đoạn triterpenoid từ nấm Linh chi trồng Thừa Thiên Huế", Tạp chí Dược liệu, 17(3), tr 154 - 158 17 Phạm Bảo Trƣơng Nguyễn Minh Thủy (2015), “Tối ƣu hóa trình trích ly polysaccharide tannin nấm linh chi đỏ (Ganoderma lucidum)”, Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ, 36 (2015): 21-28 18 Nguyễn Ngọc Vinh, Lê Thị Thu Cúc, Phan Nhƣ Trúc, Trần Việt Hùng (2016) "Xây dựng quy trình định tính, định lƣợng acid ganoderic A phƣơng pháp HPLC nấm Linh chi - Ganoderma lucidum (Leyss ex Fr.) Karst" Tạp chí Dược học, 56, 48-51 19 Kiểm nghiệm 116 dược liệu phương pháp sắc ký lớp mỏng (2016), Nhà xuất y học, 224-226 Tài liệu tiếng Anh 20 American Herbal Pharmacopoeia and Therapeutic Compendium 21 Bao X., Liu C., Fang J., Li X (2001), "Structural and immunological studies of a major polysaccharide from spores of Ganoderma lucidum (Fr.) Karst.”, Carbohydrat Research, 332, 67-74 22 Bao X., Fang J., Li X (2001), “Structural characterization and immunomodulating activity of a complex glucan from spores of Ganoderma lucidum”, Biosci Biotechnol Biochem., 65 (11), pp 2384-2391 23 Boh B., Berovic M., Zhang J., Zhi-Bin L (2007), “Ganoderma lucidum and its pharmaceutically active compounds”, Biotechnology Annual Review, 13, pp 265-301 24 Chen N H., Liu J.W., Zhong J.J (2010), “Ganoderic acid T inhibits tumor invasion in vitro and in vivo through inhibition of MMP expression”, Pharmacological Reports, 62(1), pp.150-63 25 Cheng C R., Yue Q X., Wu Z Y., Song X Y., Tao S J., Wu X H., Xu P P., Liu X., Guan S H., Guo D A (2010), “Cytotoxic triterpenoids from Ganoderma lucidum”, Phytochemistry, 71, pp 1579–1585 26 Cheng P., Chia-Wei Phan, Vikineswary Sabaratnam, Noorlidah Abdullah, Mahmood Ameen Abdulla, Umah Rani Kuppusamy (2013), “Polysaccharides rich extract of Ganoderma lucidum (M.A Curtis:Fr.) P Karst accelerates wound healing in streptozotocin-induced diabetic rats”, Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, 2013, pp.9 27 Chen Y., Yan Y., Xie M.Y., Nie S.P., Liu W., Gong X.F., Wang Y.X (2008), “Development of a chromatographic fingerprint for the chloroform extracts of Ganoderma lucidum by HPLC and LC-MS.”, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 47(3), pp 469-77 28 Da J (2015), “A reproducible analytical system based on the multi-component analysis of triterpene acids in Ganoderma lucidum”, Phytochemistry, 114, pp 146-54 29 el-Mekkawy S , Meselhy R Meselhy, Norio Nakamura, Yasuhiro Tezuka, Masao Hattori, Nobuko Kakiuchi, Kunitada Shimotohno, Takuya Kawahata, Toru otake (1998), “Anti-HIV-1 and anti-HIV-1-protease substances from Ganoderma lucidum”, Phytochemistry, 49(6), pp.1651-7 30 Falandysz J (2008) "Selenium in edible mushrooms." J Environ Sci Health C Environ Carcinog Ecotoxicol Rev., 26 (3), 256-299 31 Gao Y., Tang W., Gao H., Chan E., Lan J., Zhou S (2004), "Ganoderma lucidum polysaccharide fractions accelerate healing of acetic acid-induced ulcers in rats." Journal of Medicinal Food, (4), 417-421 32 Gau J P., et al (1990), “The lack of antiplatelet effect of crude extracts from Ganoderma lucidum on HIV-positive hemophiliacs”, The American Journal of Chinese Medicine, 18, pp 175 – 179 33 GoW T Robert, Dan Li, George W Sypert, Randall S Alberte, (2008), “Extracts and methods comprising Ganoderma species”, United States, Patent Application Publication, Pub No.: US 2008/0112966 A1 34 Ha Do T., Oh J., Khoi N M., Dao T T., Dung le V., Do T N., Lee S M., Jang T S., Jeong G S., Na M (2013), “In vitro and in vivo hepatoprotective effect of ganodermanontriol against t-BHP-induced oxidative stress”, Journal of Ethnopharmacology, 150(3), pp 875-855 35 Ha D T., Loan L.T., Hung T.M., Han L.V.N, Nguyen Minh Khoi, Dung L.V., Byung Sun Min, Nguyen N.P.D (2015), “An improved HPLC-DAD method for quantitative comparisons of triterpenes in Ganoderma lucidum and its five related species originating from Vietnam”, Molecules, 1059-1077 36 Hajjaj H., et al (2005), “Effect of 26-oxygenosterols from Ganoderma lucidum and their activity as cholesterol synthesis inhibitors”, Applied and Environmental Microbiology, 71(7), pp 3653-3658 37 Hedge, J.E and Hofreiter, B.T (1962) In: Carbohydrate Chemistry, 17 (Eds Whistler R.L and Be Miller, J.N.), Academic Press, New York 38 Huang S Q (2010), “Optimization of Alkaline Extraction of Polysaccharides from Ganoderma lucidum and Their Effect on Immune Function in Mice”, Molecules, 15, pp 3694-3708 39 Huie C W., Di X (2004), “Chromatographic and electrophoretic methods for Lingzhi pharmacologically active components”, Journal of Chromatography B, 812, pp 241-257 40 Iris F F Benzie and Sissi Wachtel-Galor (2011), Herbal Medicine: Biomolecular and Clinical Aspects 2nd edition 41 Jia J, Zhang X, Hu Y S, et al (2009), "Evaluation of in vivo antioxidant activities of Ganoderma lucidum polysaccharides in STZ-diabetic rats" Food Chemistry, 115, 32-36 42 Jiang J., Slivova V., Harvey K., Valachovicova T., Sliva D (2004), “Ganoderma lucidum suppresses growth of breast cancer cells through the inhibition of Akt/NF-kappaB signaling”, Nutrition and Cancer, 49(2), pp 209-216 43 Jiang J., Slivova V., Valachovicova T., Harvey K., Sliva D (2004), "Ganoderma lucidum inhibits proliferation and induces apoptosis in human prostate cancer cells PC-3" International Journal of Oncology, 24 (5), 10931099 50T 44 Jong S.C, Birmingham J M (1992), “Medicinal benefits of the mushroom Ganoderma”, Advances in Applied Microbiology, 37, pp 101-34 45 Kim H W (1997), “Inhibition of cytopathic effect of human immunodeficiency virus-1 by water-soluble extract of Ganoderma lucidum”, Archives of Pharmacal Research, 20, pp 425-431 46 Kim K C., Kim J S., Son J K., Kim I G (2007), "Enhanced induction of mitochondrial damage and apoptosis in human leukemia HL-60 cells by the Ganoderma lucidum and Duchesnea chrysantha extracts" Cancer Lett., 246 (1-2), 210-217 47 Koyama K., Imaizumi T., Akiba M., Kinoshita K., Takahashi K., Suzuki A., Yano S., Horie S., Watanabe K., Naoi Y (1997), “Antinociceptive components of Ganoderma lucidum”, Planta Medica, 63(3), pp 224-227 48 Kubota T (1982), “Structures of Ganoderic Acid A and B, two new lanostane type bitter triterpenes from Ganoderma lucidum (FR.) Karst.”, Helvetica Chimicacta, 65, (1982), 62 49 Li B M., Gu H F., Li Y., Liu C., Wang H Q., Kang J., Wu C H., Chen R Y.(2012), “Determination of nine triterpenoid acids from Ganoderma lucidum of different producting areas by HPLC”, Zhongguo Zhong Yao Za Zhi, 37(23), pp 3599-3603 50 Li J (2014), “Study on variation of main ingredients from spores and fruiting bodies of Ganoderma lucidum”, Zhongguo Zhong Yao Za Zhi, 39(21), pp 4246-4251 51 Liu C., Dunkin D., Lai J., Song Y., Ceballos C., Benkov K., Li X M (2015), “Anti-inflammatory effects of Ganoderma lucidum triterpenoid in human Crohn's disease associated with downregulation of NF-κB signaling”, Inflamm Bowel Disease, 21(8), pp 1918-1925 52 Liu J., Kurashiki K., Fukuta A., Kaneko S., Suimi Y., Shimizu K., Kondo R.(2012), “Quantitative determination of the representative triterpenoids in the extracts of Ganoderma lucidum with different growth stages using highperformance liquid chromatography for evaluation of their 5a-reductase inhibitory properties”, Food Chemistry, 133(3) (***) 53 Liu Y (2011), “Sensitive and selective liquid chromatography-tandem mass spectrometry method for the determination of five ganoderic acids in Ganoderma lucidum and its related species”, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 54(4), pp 717–721 54 Lu J (2012), “Quality difference study of six varieties of Ganoderma lucidum with different origins”, Front Pharmacol, 3, pp 57 55 Ma B., Wei Ren, Zhou Y., Ma J., Ruan Y., Wen C N (2011), “Triterpenoids from the spores of Ganoderma lucidum”, North American Journal of Medical Sciences, 11(3) 56 Masuko T., Akio Minamib, Norimasa Iwasakib, Tokifumi Majimab, Shin-Ichiro Nishimurac, Yuan C Leea (2005), “Carbohydrate analysis by a phenol– sulfuric acid method in microplate format”, Analytical Biochemistry, 339 (1), pp 69–72 57 Paterson R R M (2006), “Ganoderma – a therapeutic fungal biofactory”, Phytochemistry, 67, pp 1985 – 2001 58 Pharmacopoeia of the people's republic of China (2005) 59 Pillai T G., Nair C K., Janardhanan K K (2007), “Polysaccharides isolated from Ganoderma lucidum occurring in Southern parts of India, protects radiation induced damages both in vitro and in vivo”, Environmental Toxicology and Pharmacology, 26 (2008), pp 80–85 60 Radwan F F., Perez J M., Haque A., “Apoptotic and immune restoration effects of Ganoderic Acids define a new prospective for complementary treatment of cancer”, Journal of Clinical & Cellular Immunology, 61 Sakamoto S., Kikkawa N (2016), “.Immunochromatographic strip assay for detection of bioactive Ganoderma triterpenoid, ganoderic acid A in Ganoderma lingzhi”, Fitoterapia, 114, pp 51-55 62 Sanat K Saha, Curtis F Brewer (1993), “Determination of the concentrations of oligosaccharides, complex type carbohydrates, and glycoproteins using the phenol-sulfuric acid method”, Carbohydrate Research, 254 (1994), pp 157-167 63 Skalicka-Woźniak K., Janusz Szypowski, Renata Łoś, Marek Siwulski, Krzysztof Sobieralski, Kazimierz Głowniak, Anna Malm (2011), “Evaluation of polysaccharides content in fruit bodies and their antimicrobial activity of four Ganoderma lucidum (W Curt.: Fr.) P Karst strains cultivated on different wood type substrates”, Acta Societatis Botanicorum Poloniae, 81(1), pp.17-21 64 Tanaka S., Ko K., Kiko K., Tsuchiya K., Yamashita A., Murasugi A., Sakuma S., Tsunoo H (1989), “Complete amino acid sequence of an immunomodulatory protein, ling zhi-8 (LZ-8) An immunomodulator from a fungus, Ganoderma lucidium, having similarity to immunoglobulin variable regions”, The Journal of Biological Chemistry, 264, pp 16372-16377 65 Tomasi S., Lohézic-Le Dévéhat F., Sauleau P., Bézivin C., Boustie J (2004), "Cytotoxic activity of methanol extracts from Basidiomycete mushrooms on murine cancer cell lines" Pharmazie., 59 (4), 290-293 66 Trigos A., Medellín J S (2011), “Bogically active metabolites of the genus Ganoderma: Three decades of myco-chemistry research”, Revista Mexicana de Micología, 34, pp 63 – 83 67 United States Pharmacopeia Convention 2014 68 Xu Z., Xiuping Chen, Zhangfeng Zhong, Lidian Cheny and Yitao Wang, Zengtao X., (2011), “Ganoderma lucidum Polysaccharides: Immunomodulation and Potential Anti-Tumor Activities’, The American Journal of Chinese Medicine, 39(1), pp 15–27 69 Yu-Hong Y., Zhi-Bin L (2002), “Protective effects of Ganoderma lucidum polysaccharides peptide on injury of macrophages induced by reactive oxygen species”, Acta Pharmacologica Sinica, 23 (9), pp 787-791 70 Yuanfeng W., et al (2010), “Determination of tea polysaccharides in Camellia sinensis by a modified phenol-sulfuric acid method”, Archives of Biological Sciences, 62 (2), 669-676 71 Yurkiv B (2015), “Antioxidant Effects of Medicinal Mushrooms Agaricus brasiliensis and Ganoderma lucidum (Higher Basidiomycetes): Evidence from Animal Studies”, International Journal of Medicinal Mushrooms, 17(10), pp 943-55 72 Zhao J., Zhang X Q., Li S P., Yang F Q., Wang Y T., Ye W C (2006), “Quality evaluation of Ganoderma through simultaneous determination of nine triterpenes and sterols using pressurized liquid extraction and high performance liquid chromatography”, Journal of Separation Science, 29(17), pp 2609-15 73 Zhu X L, Chen A F, Lin Z B (2007), "Ganoderma lucidum polysaccharides enhance the function of immunological effector cells in immunosuppressed mice", Journal Ethnopharmacol, 111, 219–226 PHỤ LỤC Mẫu nấm Linh chi Hàn Quốc ... xây dựng số tiêu kiểm nghiệm nấm Linh chi (Ganoderma lucidum P Karst.)” với mục tiêu sau: Xây dựng số tiêu kiểm nghiệm nấm Linh chi (Ganoderma lucidum P Karst.) Ứng dụng phƣơng pháp xây dựng để... NGUYỄN THỊ NGÂN NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG MỘT SỐ CHỈ TIÊU KIỂM NGHIỆM NẤM LINH CHI (Ganoderma lucidum P.Karst.) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: KIỂM NGHIỆM THUỐC VÀ ĐỘC CHẤT MÃ SỐ: 60720410 Ngƣời... 1: Một số thiết bị dùng nghiên cứu 26 Hình 1: Bột nấm Linh chi GLT – 42 Hình 2: Bột nấm Linh chi GLT – 43 Hình 3: Bột nấm Linh chi GLT – 43 Hình 4: Bột nấm Linh chi GLT – 43 Hình 5: Bột nấm Linh