ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC ĐẶNG NGỌC ANH XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG FLURBIPROFEN TRONG DƯỢC PHẨM KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC HÀ NỘI - 2017 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC ĐẶNG NGỌC ANH XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG FLURBIPROFEN TRONG DƯỢC PHẨM KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC KHOÁ: QHY.2012 NGƯỜI HƯỚNG DẪN: TS NGUYỄN THỊ THANH BÌNH HÀ NỘI - 2017 LỜI CẢM ƠN Trước tiên, xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới Tiến sĩ Nguyễn Thị Thanh Bình – Bộ môn Hoá Dược Kiểm nghiệm thuốc, Khoa Y - Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, người tận tình hướng dẫn, bảo giúp đỡ suốt trình thực khóa luận Tôi xin cảm ơn thầy Bộ môn Hoá Dược Kiểm nghiệm thuốc, Khoa Y - Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, tạo điều kiện để thực khóa luận Tôi xin gửi lời cảm ơn tới Ban Chủ nhiệm, Phòng ban Khoa Y - Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội toàn thể thầy cô giáo Khoa cho kiến thức quý báu suốt năm học tập, sinh hoạt rèn luyện Khoa Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình bạn bè bên cạnh, động viên lúc khó khăn trình thực khóa luận Hà Nội, ngày 01 tháng 06 năm 2017 Sinh viên Đặng Ngọc Anh CHỮ VIẾT TẮT LOD Giới hạn phát (Limit of detection) LOQ Giới hạn định lượng (Limit of quantitation) HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao (High - performance liquid chromatography) MS Phương pháp khối phổ (Phương pháp khối phổ) DAD Máy đo quang (Diode Array Detector) ICH Hội nghị quốc tế hài hoà hoá thủ tục đăng ký dược phẩm sử dụng cho người (International conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human use) BP Dược điển Anh Quốc (British Pharmacopoeia) EP Dược điển châu Âu (European pharmacopoeia) USP Dược điển Hoa Kỳ (United States Pharmacopoeia) EMA Cơ quan quản lý thuốc châu Âu (European Medicines Agency) LD50 Liều gây chết trung bình (Lethal dose, 50%) GC Sắc ký khí (Gas Chromatography) RSD Độ lệch chuẩn tương đối (Relative standard deviation) ACN Acetonitril ATC Phân loại thuốc theo hệ thống Giải phẫu – Điều trị – Hoá học (Anatomical – Therapeutic – Chemical Code) NSAIDs Nhóm thuốc chống viêm không steroid MỤC LỤC MỞ ĐẦU…………………………………………………………………… CHƯƠNG - TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu chung flurbiprofen 1.1.1 Cấu trúc, tính chất 1.1.2 Tác dụng dược lý 1.2 Các phương pháp định lượng flurbiprofen 1.2.1 Định lượng flurbiprofen phương pháp chuẩn độ 1.2.2 Định lượng flurbiprofen phương pháp quang phổ phân tử 1.2.3 Định lượng flurbiprofen phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao 1.2.4 Định lương flurbiprofen phương pháp sắc ký khí 11 1.3 Thẩm định quy trình phân tích 11 1.3.1 Tính đặc hiệu 11 1.3.2 Miền giá trị 12 1.3.3 Tính tuyến tính 12 1.3.4 Giới hạn phát 13 1.3.5 Giới hạn định lượng 14 1.3.6 Độ 15 1.3.7 Độ xác 15 CHƯƠNG - NGUYÊN VẬT LIỆU, TRANG THIẾT BỊ VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Nguyên vật liệu, trang thiết bị 17 2.1.1 Dung môi, hoá chất 17 2.1.2 Trang thiết bị 17 2.2 Phương pháp nghiên cứu 18 2.2.1 Tối ưu hoá điều kiện sắc ký 18 2.2.2 Thẩm định quy trình phân tích 18 CHƯƠNG - KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 20 3.1 Tối ưu hoá điều kiện sắc ký 20 3.2 Tính đặc hiệu 23 3.2.1 Khả phân tách 23 3.2.2 Thời gian lưu 25 3.3 Tính tuyến tính miền giá trị 27 3.4 Giới hạn phát giới hạn định lượng 29 3.5 Độ 29 3.6 Độ xác 30 3.6.1 Độ lặp lại 30 3.6.2 Độ xác trung gian 30 3.7 Ứng dụng đinh lượng flurbiprofen viên nén 32 3.8 Bàn luận 32 CHƯƠNG - KẾT LUẬN 35 4.1 Kết luận 35 4.2 Kiến nghị……………………………………………………………….35 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Tên bảng Số trang Bảng Điều kiện chạy nguồn hoá ESI 10 Bảng Chương trình pha động gradient 11 Bảng Thời gian lưu hệ số bất đối As tỉ lệ pha động khảo sát 21 Bảng Sự thay đổi diện tích pic chiều cao pic thêm 7,5% AcOH pha động 22 Bảng Thời gian lưu pic sắc ký đồ mẫu phân tích mẫu chuẩn 26 Bảng Kết phân tích hồi quy mối tương quan nồng độ lý thuyết diện tích pic flurbiprofen 27 Bảng Kết xác định tỷ lệ phục hồi phương pháp 29 Bảng Kết xác định độ lặp lại phương pháp 30 Bảng Kết xác định độ xác trung gian phương pháp 31 Bảng 10 So sánh kết độ xác phương pháp định lượng 32 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình Tên hình Số trang Hình Công thức cấu tạo flurbiprofen Hình Minh hoạ thông số sắc ký Hình Khảo sát độ hấp thụ quang theo bước sóng 20 Hình Hiện tượng kéo đuôi pic sắc ký đồ 21 Hình Sắc ký đồ điều kiện tối ưu hoá 23 Hình Sắc ký đồ mẫu xử lý với hydroperoxid 24 Hình Độ trùng phổ hấp thụ theo bước sóng thời gian xuất pic 25 Hình Đổ thị biểu diễn tương quan nồng độ chất phân tích diện tích pic 28 MỞ ĐẦU Flurbiprofen dẫn xuất axit propionic thuộc nhóm thuốc chống viêm không steroid (NSAID) với tác dụng giảm đau, hạ sốt Thuốc nhỏ mắt flurbiprofen sử dụng chỗ trước phẫu thuật nhãn khoa nhằm ngăn ngừa làm giảm co đồng tử lúc mổ Flurbiprofen sử dụng đường uống để điều trị công bệnh viêm gan cấp tính, viêm xương khớp cấp tính, đau thắt lưng Viên nén gel dùng chứa flurbiprofen có tác dụng điều trị triệu chứng bệnh viêm khớp dạng thấp, viêm xương khớp viêm cột sống dính khớp [7,11,17,26,29] Flurbiprofen sử dụng rộng rãi giới, đặc biệt nước thuộc châu Âu Bắc Mỹ nhiều tên thương mại khác Antadys, Flufen, Maprofen, Ocufen, Zentofen,… Tuy nhiên thuốc lại chưa phổ biến Việt Nam, dược điển Việt Nam IV chuyên luận Flurbiprofen Phát triển nghiên cứu Flurbiprofen hướng Việt Nam, tạo điều kiện cho bệnh nhân có thêm lựa chọn thuốc điều trị Một điểm đáng ý flurbiprofen tan nước, việc bào chế hệ thuốc dẫn nano có cấu trúc lipid nanolipid rắn, nhũ tương nano,… hướng nghiên cứu quan tâm giới [4,12,16,24] Xây dựng phương pháp định lượng flurbiprofen theo tiêu chuẩn quốc tế sở ban đầu cho nghiên cứu bào chế thuốc giảm đau, chống viêm chứa flurbiprofen có cấu trúc nano nghiên cứu tương đương sinh học dược động học chúng Trên giới, số phương pháp định lượng flurbiprofen chất chuyển hóa huyết tương, huyết thanh, nước tiểu dịch nước mắt Một số phương pháp định lượng flurbiprofen công bố bao gồm sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) ghép đầu dò UV (DAD), đầu dò huỳnh quang đầu dò khối phổ (MS) USP 35 EP 2010 quy định sử dụng phương pháp HPLC để phân tích flurbiprofen nguyên liệu dùng làm thuốc dạng thuốc viên nén, thuốc nhỏ mắt cao dán [20,22] Mục tiêu đề tài nhằm tiến hành xây dựng thẩm định quy trình định lượng flurbiprofen dược phẩm phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao ghép đầu dò DAD theo hướng dẫn Cơ quan quản lý thuốc châu Âu (European Medicines Agency- EMA) [9] Hội nghị quốc tế hài hoà hoá thủ tục đăng ký dược phẩm sử dụng cho người (International conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human use) [21] Ánh sáng Lấy khoảng 0,5 ml dung dịch 1000 µl vào ống nghiệm, cho tiếp xúc với ánh nắng mặt trời Sau xử lý, mẫu pha loãng đến nồng độ khoảng 20 µg/ml pha động, lọc qua màng 0,45 µm Tiến hành sắc ký xác định xem điều kiện phân tích flurbiprofen có tác hoàn toàn khỏi sản phẩm phân huỷ hay không Kết cho thấy flurbiprofen bị phân huỷ xử lý với hydrogen peroxide Trên sắc ký đồ xuất pic có thời gian lưu 1,68 phút, tách hoàn toàn khỏi pic flurbiprofen Sử dụng chức kiểm tra độ tinh khiết pic (peak purity) cho thấy pic flurbiprofen tinh khiết với độ tương xứng đạt 999 Hình Sắc ký đồ mẫu xử 24 lý với hydroperoxid t = 1,68 phút t = 3,69 phút Hình Độ trùng phổ hấp thụ theo bước sóng thời gian lưu pic 3.2.2 Thời gian lưu Phân tích thống kê thời gian lưu pic flurbiprofen mẫu phân huỷ thời gian lưu flurbiprofen mẫu chuẩn Thời gian lưu 25 flurbiprofen 3,73 phút Các giá trị thời gian lưu pic sắc ký đồ mẫu phân tích mẫu chuẩn liệt kê bảng Bảng Thời gian lưu pic sắc ký đồ mẫu phân tích mẫu chuẩn Yếu tố tác động Acid Base Oxy hoá Nhiệt độ Ánh sáng Thời gian lưu mẫu thử (phút) Thời gian lưu mẫu chuẩn (phút) 3,59 3,71 3,60 3,65 3,68 3,66 3,61 3,67 3,62 3,67 3,69 3,67 3,63 3,68 3,63 3,69 3,69 3,69 3,64 3,70 3,64 3,69 4,00 3,66 3,65 3,66 3,65 3,67 3,70 3,67 26 Qua trắc nghiệm thống kê cho thấy có thời gian lưu pic mẫu thử khác ý nghĩa thống kê với pic chất chuẩn sắc ký đồ mẫu chuẩn (t = 0,23 < t0,05(28) = 2,048) Từ kết cho thấy phương pháp có tính đặc hiệu cao 3.3 Tính tuyến tính miền giá trị Chuẩn bị mẫu có nồng độ 20, 16, 12, 8, 4, µg/ml cách pha loãng từ dung dịch mẹ có nồng độ 1000 µg/ml Tiến hành sắc ký mẫu ba lần với điều kiện chọn Kết trình bày bảng hình Bảng Kết phân tích hồi quy mối tương quan nồng độ lý thuyết diện tích pic flurbiprofen STT Nồng độ lý thuyết (µg/ml) Diện tích pic (mAU.min) 20 13,76 16 10,68 12 8,24 5,53 2,73 1,38 Khoảng định lượng 2-20 µg/ml Độ lệch chuẩn S (se slope) 0,08853 R2 0,9993 27 16.00 y = 0.6804x + 0.0221 R² = 0.9993 Diện tích pic (mAU.min) 14.00 12.00 10.00 8.00 6.00 4.00 2.00 0.00 0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 Nồng độ mẫu phân tích (µg/ml) Hình Đồ thị biểu diễn tương quang nồng độ chất phân tích diện tích pic Từ phân tích thống kê thu phương trình y = 0,68x + 0,022 Trong đó, y (mAU.min) diện tích pic, x (µg/ml) nồng độ mẫu phân tích Qua trắc nghiệm Fischer, phương trình chứng minh có tính tương thích (F = 5907,328 > F0,05 = 10,13) Qua trắc nghiệm Student, hệ số a có ý nghĩa mặt thống kê (t = 76,86 > t0,05 = 2,132), hệ số b ý nghĩa mặt thống kê nên bị loại (t = 0,85 < t0,05 = 2,132) Hệ số R2 > 0,99 đạt yêu cầu Vậy phương trình hồi quy có dạng y = 0,68x Nhận xét: Kết cho thấy khoảng nồng độ khảo sát - 20 µg/ml, có tương quan tuyến tính nồng độ flurbiprofen diện tích pic Hệ số tương quan R2 = 0,999 Mức độ tương quan tốt, độ tuyến tính chặt chẽ Độ lệch giá trị thực nghiêm với giá trị hồi quy gần với chứng tỏ khoảng tin cậy phương trình hồi quy hẹp 28 3.4 Giới hạn phát giới hạn định lượng Giới hạn phát hiện: tiến hành pha loãng mẫu phân tích flurbiprofen đến tín hiệu chất phân tích sắc ký đồ thu có tỷ lệ S/N đạt khoảng 2-3 Tiến hành sắc ký lần Nồng độ xác định giới hạn phát (LOD) phương pháp ứng với chất Giới hạn định lượng: tiến hành pha loãng mẫu phân tích flurbiprofen đến tín hiệu chất phân tích sắc ký đồ thu có tỷ lệ S/N đạt khoảng 10 Tiến hành sắc ký lần Nồng độ xác định giới hạn phát (LOQ) phương pháp ứng với chất Kết phân tích cho thấy giới hạn phát phương pháp LOD = 0,05 µg/ml giới hạn định lượng phương pháp LOQ = 0,15 µg/ml 3.5 Độ Được thẩm định cách đánh giá tỷ lệ phục hồi dãy nồng độ khoảng tuyến tính phân tích Bảng Kết xác định tỷ lệ phục hồi phương pháp Nồng độ lý thuyết STT (µg/ml) Nồng độ thực nghiệm (µg/ml) Tỷ lệ phục hồi (%) 20,00 20,22 101,12 16,00 15,70 98,10 12,00 12,11 100,92 8,00 8,13 101,59 4,00 4,01 100,31 2,00 2,03 101,41 29 Phương pháp đạt yêu cầu độ với giá trị độ phục hồi nằm khoảng 100±2% 3.6 Độ xác 3.6.1 Độ lặp lại - Chuẩn bị dung dịch có nồng độ là: 20, 8, µg/ml pha pha động - Tiến hành sắc ký với điều kiện trên, mẫu ba lần Bảng Kết xác định độ lặp lại phương pháp Nồng độ lý thuyết (µg/ml) Diện tích pic (mAU.min) Diện tích pic trung bình (mAU.min) SD 14,00 0,22 5,53 0,03 RSD (%) 13,78 20,00 14,22 1,57 13,99 5,55 8,00 5,53 0,46 5,50 1,34 2,00 1,40 1,38 3,93 2,34 1,39 Nhận xét: Kết cho thấy giá trị RSD thí nghiệm thẩm định độ lặp lại nhỏ 2,34% 3.6.2 Độ xác trung gian - Chuẩn bị dung dịch có nồng độ là: 20, 8, µg/ml pha dung dịch pha động 30 - Tiến hành sắc ký với điều kiện trên, mẫu ba lần - Lặp lại thí nghiệm ba ngày khác Bảng Kết xác định độ xác trung gian phương pháp Nồng độ lý thuyết (µg/ml) 20,00 8,00 2,00 Ngày Diện tích pic (mAU.min) 14,00 13,72 13,94 5,53 5,46 5,65 1,38 1,34 1,34 Diện tích pic trung bình (mAU.min) SD 13,89 0,15 1,06 5,55 0,10 1,73 1,35 0,02 1,71 RSD (%) Kết cho thấy giá trị RSD thí nghiệm thẩm định độ xác trung gian nhỏ 1,73% Nhận xét: So sánh giá trị RSD phương pháp xây dựng với số phương pháp định lượng flurbiprofen báo cáo 31 Bảng 10 So sánh kết độ xác phương pháp định lượng Tên phương pháp RSD (%) độ lặp lại RSD (%) độ xác trung gian Đo độ hấp thu quang [5] ≤ 3,10 ≤ 3,20 Đo độ phát xạ huỷnh quang [5] ≤ 2,05 ≤ 3,80 LC-MS/MS [8] ≤ 2,20 ≤ 3,40 GC-MS [25] ≤ 2,65 ≤ 3,64 Phương pháp xây dựng ≤ 2,34 ≤ 1,73 RSD độ lặp có giá trị khoảng trung gian so với phương pháp RSD độ lặp lại phương pháp xây dựng nhỏ kết nghiên cứu sử dụng phương pháp đo độ hấp thu quang GC-MS RSD độ xác trung gian phương pháp xây dựng đạt thấp giá trị bốn nghiên cứu giới thiệu Từ khẳng định phương pháp có độ xác cao 3.7 Ứng dụng đinh lượng flurbiprofen viên nén Áp dụng phương pháp xây dựng thẩm định để định lượng flurbiprofen có viên nén Anadys 100mg Theramex, Pháp Theo USP 35, hàm lượng flurbiprofen phải đạt từ 90 - 110% [22] Kết thu diện tích pic trung bình 5,96 mAU.min Nồng độ dung dịch định lượng 9,31 µg/ml Như vậy, hàm lương flurbiprofen viên nén 93,10% hàm lượng lí thuyết, đạt tiêu chuẩn USP 35 3.8 Bàn luận Hiện nay, phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao ứng dụng dụng rộng rãi quy trình định tính, thử độ tinh khiết định lượng chất HPLC có ưu điểm độ xác cao, ổn định, dễ thực hiện, nhạy với nồng độ nhỏ Phương pháp định lượng flurbiprofen hệ thống HPLC - DAD có ưu điểm bật phương pháp HPLC 32 phương pháp đo độ hấp thụ UV-Vis đem lại: có khả tách chất hoàn toàn nên tính đặc hiệu cao, có khả kiểm tra độ tinh khiết mẫu, độ xác cao nhạy với nồng độ nhỏ Bên cạnh đó, phương pháp có số nhược điểm hệ dung môi đắt tiền, cần hệ thống máy móc đại Trong sắc ký lỏng hiệu cao số đại lượng sau cần lưu ý Thời gian lưu tR thời gian tính từ chất tiêm vào hệ thống sắc ký đến phát nồng độ cực đại Thông thường thời gian sắc ký thường gấp đôi thời gian lưu Hệ số dung lượng k’ cần nằm khoảng tối ưu 1< k’ < vào pha tĩnh, pha động,…Hệ số As cho biết mức độ cân đối pic thường nằm khoảng 0,9 - 2,5 pic cân đối hiệu lực tách cột tốt Phương pháp sử dụng cột sắc ký pha đảo Pha động sử dụng dung môi có độ phân cực cao hỗn hợp acetonitril, acid acetic nước Flurbiprofen tan acetonirtil tốt với nước nên tăng tỷ lệ acetonitril thời gian lưu flurbiprofen giảm dần Khi tỷ lệ nước : acetonitril 35 : 65, diện tích pic chiều cao pic tối ưu hoá Acid acetic thêm có tác dụng chuyển flurbiprofen dạng ion hoá dạng không bị ion hoá nhằm giảm tượng kéo đuôi pic Về thành phần cấu tạo, silicagel C8 có độ phân cực cao silicagel C18 Khi độ phân cực pha tĩnh tăng tương tác với chất phân tích lớn Vì vậy, thay cột C18 cột C8, thời gian lưu flurbiprofen tăng từ 3,14 – 3,73 phút Các thể tích tiêm mẫu khảo sát 20, 15, 10 μl Kết cho thấy thể tích 15 20 μl, pic có tượng kéo đuôi thể tích tiêm lớn nên lượng flurbiprofen qua đầu dò không ổn định theo thời gian Ở thể tích tiêm μl, chiều cao diện tích pic nhỏ nên sai số nồng độ thấp cao LOD, LOQ phương pháp thấp Kết cho thấy, thể tích tiêm mẫu 10 μl, hệ số bất đối, diện tích pic chiều cao pic tối ưu Lựa chọn cài đặt đầu dò DAD bước sóng có độ hấp thụ cực đại 247 nm Tại bước sóng đó, độ hấp thụ có giá trị lớn nhất, đường chuẩn định lượng có độ dốc a cao làm cho phương pháp độ xác cao 33 Kết nghiên cứu cho thấy điều kiện khảo sát, flurbiprofen bền acid, base, nhiệt độ ánh sáng dễ bị phân huỷ tác nhân oxi hoá Vì bảo quản cần tránh để flurbiprofen tiếp xúc với tác nhân oxi hoá làm giảm chất lượng thuốc 34 CHƯƠNG - KẾT LUẬN 4.1 Kết luận Dựa tài liệu thẩm định quy trình phân tích ICH EMA, nghiên cứu xây dựng thẩm định thành công quy trình định lượng flurbiprofen hệ thống HPLC - DAD với thông số: pha tĩnh silicagel C8 cột μm, 4,6×150 mm, pha động acetonitril : nước : acid acetic băng tỷ lệ 65 : 27,5 : 7,5, thể tích tiêm mẫu 10 µl, thời gian sắc ký phút, tốc độ dòng ml/phút, đầu dò DAD bước sóng 247 nm Bằng trình thực nghiệm chứng tỏ quy trình định lượng flurbiprofen đạt yêu cầu tính đặc hiệu, tính tuyến tính, độ độ xác theo hướng dẫn chung ICH EMA Kết cho thấy phương pháp có đặc hiệu với flubiprofen Có tương quan tuyến tính chặt chẽ đáp ứng phân tích nồng độ flurbiprofen khoảng nồng độ – 20 μg/ml với hệ số tương quan R2 = 0,999 Phương pháp có độ tốt (100±2%), độ lặp lại đảm bảo (RSD ≤ 2,34%) Phương pháp ứng dụng để định lượng dược phẩm chứa flurbiprofen dạng viên nén 4.2 Kiến nghị Ứng dụng phương pháp để định lượng flurbiprofen dạng bào chế khác thuốc nhỏ mắt, viên nang, cao dán Phương pháp sở cho nghiên cứu bào chế thuốc giảm đau, chống viêm chứa flurbiprofen có cấu trúc nano nghiên cứu tương đương sinh học dược động học chúng 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng việt [1] Bộ Y tế (2012), Kiểm nghiệm thuốc (dùng cho đào tạo dược sĩ đai học), Nhà xuất giáo dục Việt Nam, pp.135-184 [2] Viện kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm (2010), Thẩm định phương pháp phân tích hoá học vi sinh vật, NXB Khoa học Kỹ thuật,pp.10-59 [3] Vụ khoa học đào tạo – Bộ Y tế (2005), Kiểm nghiệm dược phẩm, NXB Y học, pp.68-84 Tiếng anh [4] Bhaskar, Kesavan, et al (2009), “Lipid nanoparticles for transdermal delivery of flurbiprofen: formulation, in vitro, ex vivo and in vivo studies”, Lipids in health and disease, 8(1), [5] Bilal Yilmaz, Emrah Alkan (2015), “Spectrofluorometric and Spectrofluorometric and UV Spectrofluorometric Methods for the Determination of Flurbiprofen in Pharmaceutical Preparations”, Journal of Pharmaceutical Analysis, 4(4) [6] Brittain, H G (Ed.) (2013), Profiles of drug substances, excipients and related methodology (Vol 38), Academic Press, pp.115-154 [7] Calapai, G., et al (2013), "Fatal hypersensitivity reaction to an oral spray of flurbiprofen: a case report" Journal of clinical pharmacy and therapeutics, 38(4), 337-338 [8] Chenghan Mei, Bin Li, et al (2015), "Liquid chromatography-tandem mass spectrometry for the quantification of flurbiprofen in human plasma and its application in a study of bioequivalence", Journal of Chromatography B, 993-994, pp.69-74 [9] European Medicines Agency (2011), Guideline on bioanalytical method validation, pp.9-10 [10] FDA (2013), “Guidance for industry: bioanalytical method validation” ,US Food and Drug Administration, pp.4-9 [11] Geerts H: Drug evaluation (2007), “(R)-flurbiprofen-an enantiomer of flurbiprofen for the treatment of Alzheimer's disease”, Idrugs,10(2), pp.121-33 [12] Gonzalez-Mira, E., et al (2010), “Optimizing flurbiprofen-loaded NLC by central composite factorial design for ocular delivery”, Nanotechnology, 22(4), 045101 [13] Kokane Vikrant , Naik Sonali (2014), “Formulation and evaluation of topical flurbiprofen gel using different gelling agents”, World Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, 3(9),pp 654-663 [14] Lee, Hye-In, et al (2014), "Simultaneous determination of flurbiprofen and its hydroxy metabolite in human plasma by liquid chromatographytandem mass spectrometry for clinical application", Journal of chromatography B, 971, pp 58-63 [15] Mano N, Narui T, Nikaido A, Goto J (2002), “Separation and determination of diastereomeric flurbiprofen acyl glucuronides in human urine by LC/ESI-MS with a simple column-switching technique”, Drug Metabol Pharmacokin, 17, pp.142-149 [16] Meister, Sabrina, et al (2013), “Nanoparticulate flurbiprofen reduces amyloid-β 42 generation in an in vitro blood–brain barrier model”, Alzheimer's research & therapy, 5(6), 51 [17] Mironov, Gleb G., et al (2012), “Comparative study of three methods for affinity measurements: capillary electrophoresis coupled with UV detection and mass spectrometry, and direct infusion mass spectrometry”, J Am Soc Mass Spectrom, 23(7), pp.1232-40 [18] Murray, Kermit K., et al (2013), "Definitions of terms relating to mass spectrometry (IUPAC Recommendations 2013)", Pure and Applied Chemistry, 85(7),1515-1609 [19] Pradhan PK, Rajput PN (2014), “Simultaneous Estimation of Flurbiprofen and Gatifloxacin by Dual Wavelength UV Spectroscopy Method in an Eye Drops”, International Journal of Pharmaceutical Sciences Review and Research, 27(2),pp.96-99 [20] The Europaean Pharmacopieal Commission (2010), Pharmacopoeia Europaea 7th Edition vol 2, pp.2056-2057 [21] The International Council for Harmonisation of Technical Requirements for Pharmaceuticals for Human Use (2005), Validation of analytical procedures: text and methodology Q2(R1), pp.6-13 [22] United States Pharmacopoeial Convention (2010), United States Pharmacopoeia 35th Edition, pp.3258 [23] Vega, E , et al (2006), “Flurbiprofen loaded biodegradable nanoparticles for ophtalmic administration”, Journal of pharmaceutical sciences, 95(11), 2393-2405 [24] Wang, G J., et al (2003), "European journal of drug metabolism and pharmacokinetics", Eur J Drug Metab Pharmacokinet, 28(4), pp.265-272 [25] Yilmaz, Bilal, Emrah Alkan (2015), "Determination of flurbiprofen in pharmaceutical preparations by GC–MS", Arabian Journal of Chemistry [26] Zhou, S-F., et al (2009),”Substrates, inducers, inhibitors and structure-activity relationships of human Cytochrome P4502C9 and implications in drug development”, Curr Med Chem, 16(27), pp.3480675 Trang web [27] Pubchem https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov [28] WHO http://www.whocc.no [29] Drugbank http://www.drugbank.ca ... 1.2.2 Định lượng flurbiprofen phương pháp quang phổ phân tử 1.2.3 Định lượng flurbiprofen phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao 1.2.4 Định lương flurbiprofen phương pháp sắc ký khí 11 1.3 Thẩm định. .. flurbiprofen phương pháp quang phổ phân tử Phương pháp hành xây dựng thẩm định theo hướng ICH EMA [5] Quy trình định lượng flurbiprofen phương pháp đo độ hấp thụ quang thẩm định Trong đó, hệ... tối ưu RS = 1,5 Các phương pháp định lượng sắc ký lỏng hiệu cao thường dùng Có phương pháp định lượng HPLC thường dùng [3,5,13,18] - Phương pháp chuẩn ngoại: phương pháp định lượng bản, mẫu chuẩn