BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI - Trần Thị Phƣơng Thảo NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT MẪU CHUẨN VẮC XIN BẠI LIỆT UỐNG SỬ DỤNG TRONG KIỂM ĐỊNH VẮC XIN OPV TẠI VIỆT NAM LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT Chuyên ngành: Công nghệ sinh học NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: GS.TS LÊ THỊ LUÂN PGS TS TRƢƠNG QUỐC PHONG Hà Nội - Năm 2015 Luận văn thạc sĩ Trần Thị Phương Thảo – CB130717 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan: Luận văn “Nghiên cứu sản xuất mẫu chuẩn Vắc xin Bại liệt uống sử dụng kiểm định vắc xin OPV Việt Nam” công trình nghiên cứu nhóm nghiên cứu sản xuất mẫu chuẩn vắc xin OPV thuộc Trung tâm nghiên cứu sản xuất vắc xin sinh phẩm y tế thực dƣới hƣớng dẫn GS.TS Lê Thị Luân TS.Trƣơng Quốc Phong Tôi nhận đƣợc đồng ý trƣởng nhóm tất thành viên nhóm nghiên cứu việc công bố nội dung thực kết thu đƣợc Các nội dung nghiên cứu kết đƣợc trình bày luận văn trung thực rõ ràng Học viên Trần Thị Phƣơng Thảo Xác nhận quan (Trung tâm Nghiên cứu sản xuất Vắc xin Sinh phẩm Y tế) Luận văn thạc sĩ Trần Thị Phương Thảo – CB130717 LỜI CẢM ƠN Em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến GS.TS Lê Thị Luân, phó giám đốc Trung tâm nghiên cứu sản xuất vắc xin sinh phẩm y tế tận tình giúp đỡ em suốt thời gian nghiên cứu để hoàn thành khóa luận Em xin chân thành cảm ơn TS Trƣơng Quốc Phong, Trung tâm Nghiên cứu phát triển Công nghệ sinh học, Viện Công nghệ sinh học Công nghệ thực phẩm, Trƣờng Đại học Bách Khoa Hà Nội, tận tình bảo cho em suốt trình làm luận văn Em xin cảm ơn thầy cô môn Công nghệ Sinh học Công nghệ thực phẩm, trƣờng Đại học Bách Khoa Hà Nội truyền đạt kiến thức cho em trình học tập rèn luyện Trong thời gian học tập nghiên cứu nhận đƣợc dạy tận tình đầy trách nhiệm tập thể cán nghiên cứu thuộc Trung tâm nghiên cứu sản xuất vắc xin sinh phẩm y tế, xin chân thành cảm ơn giúp đỡ quý báu Cuối cùng, cho phép gửi lời cảm ơn chân thành tới gia đình, bạn bè quan tâm, cổ vũ cho vững bƣớc đƣờng học tập nghiên cứu Hà Nội, tháng năm 2015 Học viên Trần Thị Phƣơng Thảo Luận văn thạc sĩ Trần Thị Phương Thảo – CB130717 CÁC CHỮ VIẾT TẮT ARN Axit Ribonucleic CCID50 FBS Cell Culture Infective Dose 50 (liều gây hủy hoại 50% tế bào) Fetal Bovin serum (huyết bê bào thai) GM Growth Medium (Môi trƣờng phát triển) GMP Hep2C Good Manufacture Practice (Thực hành sản xuất tốt) Tế bào ung thƣ quàn ngƣời IgA Imuno globulin A IgG IgM LH Imuno globulin G Imuno globulin M Lactalbumin Hydrolysate LH3E LHE LM MCB MEM MS Lactabumine Hydrolysate 0,5% đệm Earle Lactabumine Hydrolysate 0,5% đệm Hanks Liquid medium Master Cell Bank (ngân hàng tế bào gốc) Minimum Essential Medium (Môi trƣờng cần thiết tối thiểu) Master Seed (chủng giống gốc) PBS Phospate Buffer Solution Center for Research and Production of Vaccines and Biologicals POLYVAC TCMR TGC TKTP SCD VLP VP (Trung tâm Nghiên cứu, sản xuất Vắc xin Sinh phẩm Y tế) Tiêm chủng mở rộng Thioglycolate Tế bào thận khỉ tiên phát Soybean Casein Digest Virus like particle Virus protein Vero WHO/ TCYTTG Tế bào thận khỉ Cercopithecus aethiops World Health Organization / Tổ chức y tế giới Luận văn thạc sĩ Trần Thị Phương Thảo – CB130717 Mục lục MỞ ĐẦU Chƣơng TỔNG QUAN 1.1 Các nguyên tắc chung sản xuất vắc xin mẫu chuẩn 1.1.1 Mẫu chuẩn quốc tế 1.1.2 Mẫu chuẩn quốc gia 1.2 Vắc xin mẫu chuẩn Bại liệt 1.2.1 Vi rút Bại liệt 1.2.2 Vắc xin Bại liệt 1.2.3 Tình hình nghiên cứu sản xuất sử dụng vắc xin mẫu chuẩn Bại liệt 11 1.2.4 Tiêu chuẩn sở cho vắc xin mẫu chuẩn bại liệt 13 Chƣơng VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 Vật liệu 15 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 16 2.2.1 Phƣơng pháp sản xuất vắc xin 16 2.2.2 Phƣơng pháp kiểm tra chất lƣợng cho mẫu chuẩn vắc xin Bại liệt 24 2.2.2.1 Quan sát trạng thái 25 2.2.2.2 Kiểm tra vô trùng 26 2.2.2.3 Kiểm tra Mycoplasma 27 2.2.2.4 Chuẩn độ hiệu giá vắc xin thành phẩm OPV 28 2.2.2.5 Thử nghiệm nhận dạng 34 2.2.2.6 Kiểm tra pH 38 2.3 Phƣơng pháp lựa chọn vắc xin Bại liệt mẫu chuẩn nội 38 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 41 3.1 Kết sản xuất ứng cử viên cho lựa chọn vắc xin mẫu chuẩn nội vắc xin OPV đơn typ vắc xin tam liên 41 3.2 Kết qủa lựa chọn vắc xin Bại liệt mẫu chuẩn 42 3.2.1 Kết kiểm tra chất lƣợng ứng cử viên vắc xin Bại liệt đơn typ tam liên 42 3.2.2 Thiết lập phạm vi quản lý hiệu giá cho mẫu chuẩn nội vắc xin Bại liệt 42 KẾT LUẬN 52 KIẾN NGHỊ 53 TÀI LIỆU THAM KHẢO 54 Luận văn thạc sĩ Trần Thị Phương Thảo – CB130717 Danh mục bảng Bảng Tiêu chuẩn chất lƣợng vắc xin OPV 13 Bảng Kết kiểm chất lƣợng ứng cử viên vắc xin Bại liệt đơn typ tam liên 42 Bảng Kết thiết lập giá trị quản lý mẫu chuẩn vắc xin Bại liệt đơn giá typ I 43 Bảng Kết thiết lập giá trị quản lý mẫu chuẩn vắc xin Bại liệt đơn giá typ II 44 Bảng Kết thiết lập giá trị quản lý mẫu chuẩn vắc xin Bại liệt đơn giá typ III 45 Bảng Kết thiết lập giá trị quản lý mẫu chuẩn vắc xin Bại liệt tam liên PR-0113 46 Bảng Kết hiệu giá xác định tính ổn định mẫu chuẩn vi rút bại liệt đơn typ tam liên 49 Danh mục hình Hình Hình thái học Polyovirus Hình Hình ảnh lọ vắc xin Bại liệt uống sản xuất Polyvac 11 Hình Hình ảnh mổ lấy thận thận khỉ sau đƣợc đƣa khỏi thể 18 Hình Hình ảnh tế bào phát triển bình thƣờng, CPE bất thƣờng 21 Hình Hình ảnh tế bào thận khỉ bị hủy hoại vi rút Bại liệt 23 Hình Dây truyền sản xuất vắc xin thành phẩm 24 Hình Mầu môi trƣờng đối chứng (-) 28 Hình Mức độ thay đổi mầu môi trƣờng tƣơng ứng với mức độ (+) 28 Hình Hiệu giá ứng cử viên mẫu chuẩn Bại liệt đơn typ I, II, III tam liên 47 Luận văn thạc sĩ Trần Thị Phương Thảo – CB130717 MỞ ĐẦU Theo thống kê Tổ chức Y tế Thế giới (WHO), năm 1988 toàn cầu có khoảng 350.000 bệnh nhân bị mắc bệnh bại liệt nhƣng đến năm 2013, sau thời gian 25 năm giảm xuống 417 trƣờng hợp Từ đầu năm 2014 giới ghi nhận có 74 bệnh nhân bại liệt, 59 trƣờng hợp phát Pakistan Các chuyên gia cảnh báo bệnh bại liệt quay trở lại có nguy đe dọa sức khỏe cộng đồng chúng xuất mà biện pháp ngăn chặn Năm 2000, Tổ chức Y tế Thế giới (WHO) khu vực Tây Thái Bình Dƣơng tuyên bố toán đƣợc bệnh bại liệt vào thời điểm Việt Nam công bố toán đƣợc bệnh bại liệt Tuy nhiên nhiều nƣớc giới chƣa toán đƣợc bệnh bại liệt nên Tổ chức Y tế Thế giới khuyến cáo việc phòng bệnh vắc xin cho trẻ em cần đƣợc tiếp tục thực Trên thực tế nay, có số bệnh truyền nhiễm tuyên bố toán, công bố loại trừ bệnh khỏi cộng đồng nhƣng sau thời gian vắng bóng chúng quay trở lại lúc miễn dịch cộng đồng giảm xuống mức độ thấp Nguy bùng phát dịch với hậu nghiêm trọng điều lƣờng trƣớc đƣợc [1] Vắc xin Bại liệt nhiều loại vắc xin sống thiết yếu phòng bệnh cho trẻ nhỏ dƣới tuổi Vắc xin bại liệt OPV đƣợc sản xuất Polyvac góp phần vào thành toán bệnh bại liệt Việt Nam năm 2000 Hàng năm Polyvac tiếp tục sản xuất cung cấp khoảng gần 10 triệu liều vắc xin bại liệt OPV cho chƣơng trình TCMR để sử dụng cho trẻ em từ 2-4 tháng tuổi Để kiểm định chất lƣợng vắc xin, việc kiểm tra tính vô khuẩn, an toàn phải xác định nồng độ vi rút vắc xin (hiệu giá vắc xin) Việc xác định hiệu giá vắc xin thử nghiệm cần đƣợc tiến hành song song với vắc xin mẫu chuẩn Do đó, vắc xin mẫu chuẩn sinh phẩm thiếu trình xác định hiệu giá vắc xin Chuẩn độ hiệu giá thử nghiệm đo hàm lƣợng vi rút có liều vắc xin, thử nghiệm đòi hỏi phải có độ xác định Mặt khác vi rút vắc xin sống nhạy cảm với ánh sáng nhiệt độ, trình chuẩn độ không tránh khỏi tác động bên không mong muốn đến kết chuẩn Luận văn thạc sĩ Trần Thị Phương Thảo – CB130717 độ hiệu giá Do việc chuẩn độ hiệu giá cần có mẫu chuẩn để làm đối chứng nhằm xác định kết chuẩn độ hiệu giá có tin cậy đƣợc hay không Mẫu chuẩn phải đảm bảo ổn định hiệu giá suốt thời gian bảo quản, hiệu giá phải nằm khoảng giao động cho phép theo toán thống kê Để đảm bảo vắc xin dùng cho trẻ em Việt Nam đạt yêu cầu hiệu giá theo quy định Dƣợc điển Việt Nam IV theo tiêu chuẩn WHO thiết phải sử dụng mẫu chuẩn thực thử nghiệm Hiện mẫu chuẩn quốc gia vắc xin chƣa có để kiểm tra hiệu giá vắc xin sản xuất Trung tâm phải sử dụng vắc xin mẫu chuẩn từ Nhật Bản, Hoa Kỳ với chi phí cao bị động nên gây trở ngại lớn cho việc sản xuất, kiểm định, thiết lập mẫu chuẩn điều cần thiết cho sở sản xuất vắc xin Xuất phát từ yêu cầu trên, Trung tâm tiến hành thực đề tài “Nghiên cứu sản xuất mẫu chuẩn Vắc xin Bại liệt uống sử dụng kiểm định vắc xin OPV Việt Nam” nhằm giải mục tiêu sau:  Nghiên cứu qui trình sản xuất vắc xin mẫu chuẩn, sản xuất loạt vắc xin Bại liệt liên tiếp tế bào thận khỉ tiên phát để tuyển chọn mẫu chuẩn Chia lọ bảo quản ứng cử viên mẫu chuẩn vắc xin nhiệt độ - 700C;  Kiểm tra chất lƣợng loạt vắc xin dự tuyển mẫu chuẩn nội sau sản xuất năm 2013 (theo qui chuẩn Tổ chức Y tế Thế giới);  Thiết lập phạm vi quản lý hiệu giá cho vắc xin mẫu chuẩn vắc xin OPV nội bộ: chuẩn độ hiệu giá ứng cử viên mẫu chuẩn đƣa phạm vi quản lý giá trị hiệu giá cho loạt vắc xin đƣợc lựa chọn làm mẫu chuẩn  Kiểm tra tính ổn định hiệu giá lô vắc xin đƣợc lựa chọn làm mẫu chuẩn sau năm bảo quản - 700C Luận văn thạc sĩ Trần Thị Phương Thảo – CB130717 Chƣơng TỔNG QUAN 1.1 Các nguyên tắc chung sản xuất vắc xin mẫu chuẩn Để sản xuất vắc xin mẫu chuẩn, Tổ chức Y tế Thế giới có nhiều hƣớng dẫn, từ việc định nghĩa sinh vật phẩm chuẩn, cách chọn, điều chế sinh vật phẩm chuẩn, tính đồng nhất, tính ổn định đến cách đóng ống, lọ, bảo quản, dán nhãn cuối cách xác định đơn vị công hiệu chúng 1.1.1 Mẫu chuẩn quốc tế Theo hƣớng dẫn Tổ chức Y tế Thế giới xây dựng sinh phẩm chuẩn, mẫu chuẩn quốc tế mẫu chuẩn có hoạt tính đƣợc biểu thị đơn vị quốc tế đơn vị hoạt tính phù hợp dựa số liệu có đƣợc nghiên cứu hợp tác quốc tế đƣợc sử dụng khắp giới Mẫu chuẩn quốc tế đƣợc cấp cho Kiểm định quốc gia nƣớc với mục đích xây dựng mẫu chuẩn quốc gia mẫu chuẩn địa phƣơng Xây dựng mẫu chuẩn quốc tế chế phẩm đƣợc Tổ chức Y tế Thế giới xác nhận sau hàng loạt nghiên cứu hợp tác quốc tế thƣờng đƣợc biểu thị đơn vị quốc tế Tuy nhiên chế phẩm chuẩn, ví dụ: mẫu chuẩn để chuẩn độ vắc xin Bại liệt, vắc xin rota, việc dùng đơn vị quốc tế không phù hợp, trƣờng hợp đó, đơn vị hoạt tính mẫu chuẩn biểu thị đơn vị phù hợp khác Mẫu chuẩn sinh học không thiết phải có độ tinh khiết cao Hiện giới có trung tâm đƣợc Tổ chức Y tế Thế giới định phòng thí nghiệm chế phẩm sinh học quốc tế Các phòng thí nghiệm xây dựng, lƣu giữ cung cấp mẫu chuẩn quốc tế cho kiểm định quốc gia nƣớc Trong cấu Tổ chức Y tế Thế giới có Uỷ ban tiêu chuẩn hoá sinh phẩm chịu trách nhiệm vấn đề tiêu chuẩn hoá có mẫu chuẩn quốc tế Chức mẫu chuẩn quốc tế dùng để: Kiểm tra sản phẩm sinh học thực tiễn Y học thú y lƣu hành phạm vi quốc gia Mẫu chuẩn quốc tế kiểm tra sản phẩm sinh học đƣa vào sử dụng phạm vi quốc gia Mẫu chuẩn quốc tế sử dụng để hiệu chỉnh mẫu Luận văn thạc sĩ Trần Thị Phương Thảo – CB130717 chuẩn quốc gia so sánh kết nghiên cứu liên quan đến vật liệu sinh học lĩnh vực dự phòng, chuẩn đoán, điều trị bệnh Bản chất, nguồn gốc bảo quản mẫu chuẩn quốc tế: Thành phần vật liệu sử dụng làm mẫu chuẩn quốc tế phải giống thành phần mẫu thử Mẫu chuẩn phải có độ ổn định cao, có hoạt tính đặc hiệu phù hợp tính đồng Nói chung, lƣợng mẫu chuẩn đủ sử dụng nhiều năm Vật liệu dùng làm mẫu chuẩn không thiết phải có độ tinh khiết cao, miễn đạt đƣợc tiêu chuẩn phù hợp cho mẫu chuẩn Để xây dựng mẫu chuẩn lấy phần hoặc toàn mẻ bán thành phẩm (hoặc thành phẩm) Cũng lấy hộn từ vài mẻ bán thành phẩm (hoặc thành phẩm) trƣờng hợp phải hộn thật kỹ để chắn đạt đƣợc tính đồng Lƣợng mẫu chuẩn lọ khác phụ thuộc vào loại mẫu chuẩn Thông thƣờng lọ mẫu chuẩn chứa lƣợng đủ cho vài thử nghiệm Mẫu chuẩn phải đƣợc bảo quản điều kiện thích hợp Trong trƣờng hợp lọ đựng mẫu phải có độ bền vững để chịu đƣợc điều kiện bảo quản nhƣ nhƣ đông đá, tan đá, đóng mở… Các tiêu chuẩn chất lượng: vắc xin mẫu chuẩn phải đƣợc kiểm tra nhận dạng, công hiệu, tính ổn định, tính vô khuẩn Công hiệu: để biết vắc xin mẫu chuẩn có công hiệu không bị trình xử lý, sử dụng Công hiệu cần phải đƣợc xác định nhiều thời điểm nhiệt độ bảo quản khác Tính vô khuẩn: tính vô khuẩn điều kiện tối cần thiết cho tính ổn định lâu dài chất lƣợng sản phẩm Tính ổn định: thử nghiệm tính ổn định yêu cầu cần thiết Qua tính ổn định ta ƣớc tính đƣợc thời gian sử dụng, lƣu trữ phân phát Hồ sơ: Toàn hồ sơ trình sản xuất kiểm định phải đƣợc lƣu trữ Phải kiểm tra thƣờng xuyên số sản phẩm còn, số sản phẩm lƣu hành báo cáo hàng năm cho Tổ chức Y tế giới Đối với vắc xin mẫu chuẩn Quốc tế, khuyến cáo Tổ chức Y tế giới khuyến cáo việc hợp tác quốc tế để nghiên cứu, tổ chức đánh giá vắc xin mẫu chuẩn, xin lập chuẩn quốc tế Luận văn thạc sĩ Trần Thị Phương Thảo – CB130717 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Vắc xin mẫu chuẩn sinh phẩm thiếu trình kiểm định vắc xin, việc xây dựng mẫu chuẩn nội cần thiết nhà sản xuất vắc xin Mẫu chuẩn phải đảm bảo tính đồng ổn định hiệu giá suốt thời gian dài bảo quản 10 năm -700C Chúng tiến hành xây dựng mẫu chuẩn nội vắc xin Bại liệt dựa loạt vắc xin đơn typ (I, II, III) loạt PR-0113, PR-0213, PR-0313 loạt vắc xin tam liên PR-0113 đƣợc sản xuất năm 2013 Đánh giá chất lƣợng loạt vắc xin dự tuyển mẫu chuẩn nội thời điểm sau sản xuất, thiết lập giá trị quản lý mẫu chuẩn nội vắc xin Bại liệt sau năm bảo quản -700C Kết cho thấy loạt vắc xin đơn typ loạt vắc xin tam liên dự tuyển mẫu chuẩn nội đạt yêu cầu Từ đó, tính toán thống kê lựa chọn loạt vắc xin làm mẫu chuẩn nội với hiệu giá nằm phạm vi quản lý, tính đồng ổn định cao, tƣơng ứng với mẫu chuẩn Nhật Bản Thời gian nghiên cứu sản xuất mẫu chuẩn vắc xin dài, diễn theo giai đoạn trình sản xuất vắc xin thực thụ Nên khuôn khổ luận văn để nội dung trình nghiên cứu đƣợc liền mạch, xin phép đƣợc trinh bày kết sản xuất loạt vắc xin kết kiểm tra chất lƣợng sau sản xuất 3.1 Kết sản xuất ứng cử viên cho lựa chọn vắc xin mẫu chuẩn nội vắc xin OPV đơn typ vắc xin tam liên POLYVAC sản xuất được: Ba loạt vắc xin Bại liệt đơn typ, với số lƣợng 1215 ampul (1ml/ ampul) cho loạt vắc xin: Typ I-PR0113, Typ I-PR0213, Typ I-PR0313; Typ IIPR0113, Typ II-PR0213, Typ II-PR0313; Typ III-PR0113, Typ III-PR0213, Typ III-PR0313 Và vắc Bại liệt tam liên loạt PR-0113, với số lƣợng 1215 ampul (1ml/ ampul) 41 Luận văn thạc sĩ Trần Thị Phương Thảo – CB130717 3.2 Kết qủa lựa chọn vắc xin Bại liệt mẫu chuẩn 3.2.1 Kết kiểm tra chất lượng ứng cử viên vắc xin Bại liệt đơn typ tam liên Sau sản xuất, thực kiểm tra chất lƣợng loạt vắc xin OPV ứng cử viên mẫu chuẩn nội theo thử nghiệm yêu cầu Kết đƣợc thể bảng 2: Bảng Kết kiểm chất lượng ứng cử viên vắc xin Bại liệt đơn typ tam liên Kết Chỉ tiêu kỹ Tên TN thuật Đánh giá Vắc xin Bại liệt đơn typ I, II, III Vắc xin Bại liệt tam liên #PR-0113; #PR-0213; #PR-0313 #PR-0113 Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Âm tính Âm tính Đạt Là virus Polio Là virus Polio Đạt Vắc xin suốt, màu vàng Cảm quan ánh đỏ, dị vật lạ 7.0-7.5 pH Không có Tính vô phát triển khuẩn vi khuẩn nấm (Âm tính) Không có Mycoplasma phát triển Mycoplasma Nhận dạng Là virus Polio Kết kiểm tra chất lƣợng cho thấy loạt vắc xin Bại liệt typ I, II, III loạt vắc xin tam liên loạt bị nhiễm khuẩn nấm, Mycoplasma đạt tiêu chuẩn cảm quan, pH, hiệu giá tính ổn định 3.2.2 Thiết lập phạm vi quản lý hiệu giá cho mẫu chuẩn nội vắc xin Bại liệt Chúng tiến hành xây dựng mẫu chuẩn nội vắc xin Bại liệt dựa loạt vắc xin đơn typ (I, II, III) loạt PR-0113, PR-0213, PR-0313 loạt vắc xin 42 Luận văn thạc sĩ Trần Thị Phương Thảo – CB130717 tam liên PR-0113 đƣợc sản xuất năm 2013 Đánh giá chất lƣợng loạt vắc xin dự tuyển mẫu chuẩn nội thời điểm sau sản xuất Bảng Kết thiết lập giá trị quản lý mẫu chuẩn vắc xin Bại liệt đơn giá typ I Kết (log10 CCID50/ 0,1ml) Lần TN JP-I TypI-PR0113 TypI-PR0213 TypI-PR0313 7,27 7,69 ± 0,11 7,82 ± 0,07 7,78 ± 0,12 7,22 7,70 ± 0,11 7,77 ± 0,11 7,66 ± 0,16 7,25 7,60 ± 0,12 7,75 ± 0,06 7,78 ± 0,17 7,22 7,66 ± 0,10 7,69 ± 0,22 7,66 ± 0,10 7,20 7,57 ± 0,09 7,67 ± 0,07 7,57 ± 0,10 7,28 7,55 ± 0,04 7,78 ± 0,13 7,68 ± 0,10 7,21 7,72 ± 0,09 7,84 ± 0,11 7,80 ± 0,15 7,22 7,60 ± 0,05 7,70 ± 0,09 7,61 ± 0,11 7,23 7,76 ± 0,01 7,84 ± 0,08 7,69 ± 0,10 10 7,22 7,64 ± 0,07 7,72 ± 0,06 7,70 ± 0,09 11 7,19 7,61 ± 0,09 7,67 ± 0,09 7,64 ± 0,09 12 7,19 7,51 ± 0,06 7,60 ± 0,06 7,60 ± 0,05 13 7,37 7,75 ± 0,06 7,90 ± 0,08 7,85 ± 0,13 14 7,30 7,66 ± 0,04 7,81 ± 0,17 7,81 ± 0,06 15 7,16 7,62 ± 0,07 7,70 ± 0,08 7,78 ± 0,06 TB 7,23 ± 0,05 7,64 ± 0,07 7,75 ± 0,08 7,71 ± 0,09 (*) Ghi chú: Hiệu giá giá trị trung bình lọ có cộng trừ SD, ví dụ: 7,25 ± 0,16 Tiêu chuẩn Typ I ≥ 6,5 log10CCID50/0,1ml Loạt vắc xin typ I-R0113 có hiệu giá thấp 7,51 log10CCID50/0,1ml, cao 7,76 log10CCID50/0,1ml; typ I-PR0213 có hiệu giá thấp 7,60 log10 CCID50/0,1ml, cao 7,90 log10CCID50/0,1ml; typ I-PR0313 có hiệu giá thấp 7,57 log10CCID50/0,1ml, cao 7,85 log10CCID50/0,1ml (Bảng 3) 43 Luận văn thạc sĩ Trần Thị Phương Thảo – CB130717 Bảng Kết thiết lập giá trị quản lý mẫu chuẩn vắc xin Bại liệt đơn giá typ II Kết (log10 CCID50/ 0,1ml) Lần TN JP-II TypII-PR0113 TypII-PR0213 TypII-PR0313 7,87 7,45 ± 0,13 7,29 ± 0,03 6,30 ± 0,05 7,45 7,39 ± 0,06 7,31 ± 0,10 6,35 ± 0,10 7,60 7,49 ± 0,04 7,45 ± 0,07 6,36 ± 0,13 7,40 7,36 ± 0,09 7,35 ± 0,10 6,30 ± 0,13 7,52 7,48 ± 0,09 7,41 ± 0,12 6,36 ± 0,15 7,56 7,49 ± 0,08 7,33 ± 0,05 6,33 ± 0,13 7,55 7,58 ± 0,10 7,46 ± 0,02 6,45 ± 0,06 7,41 7,43 ± 0,05 7,36 ± 0,07 6,34 ± 0,07 7,45 7,47 ± 0,03 7,42 ± 0,09 6,37 ± 0,13 10 7,37 7,41 ± 0,13 7,39 ± 0,07 6,26 ± 0,06 11 7,50 7,45 ± 0,14 7,43 ± 0,13 6,34 ± 0,11 12 7,41 7,44 ± 0,01 7,39 ± 0,10 6,34 ± 0,12 13 7,41 7,51 ± 0,08 7,17 ± 0,09 6,13 ± 0,14 14 7,34 7,44 ± 0,18 7,42 ± 0,08 6,32 ± 0,14 15 7,32 7,45 ± 0,38 7,31 ± 0,08 6,32 ± 0,08 TB 7,48 ± 0,07 7,46 ± 0,10 7,37 ± 0,08 6,32 ± 0,07 Tiêu chuẩn Typ II ≥ 5,5 log10CCID50/0,1ml; Loạt vắc xin typ IIPR0113 có hiệu giá thấp 7,36 log10CCID50/0,1ml, cao 7,58 log10CCID50/0,1ml; typ II-PR0213 có hiệu giá thấp 7,17 log10 CCID50/0,1ml, cao 7,46 log10CCID50/0,1ml; typ II-PR0313 có hiệu giá thấp 6,13 log10CCID50/0,1ml, cao 6,45 log10CCID50/0,1ml (Bảng 4) 44 Luận văn thạc sĩ Trần Thị Phương Thảo – CB130717 Bảng Kết thiết lập giá trị quản lý mẫu chuẩn vắc xin Bại liệt đơn giá typ III Kết (log10 CCID50/ 0,1ml) Lần TN JP-III TypIII-PR0113 TypIII-PR0213 TypIII-PR0313 7,27 7,62 ± 0,07 7,49 ± 0,09 7,64 ± 0,11 7,22 7,53 ± 0,13 7,44 ± 0,11 7,59 ± 0,24 7,25 7,40 ± 0,09 7,47 ± 0,16 7,42 ± 0,15 7,22 7,65 ± 0,08 7,58 ± 0,08 7,52 ± 0,15 7,20 7,55 ± 0,07 7,63 ± 0,06 7,60 ± 0,14 7,28 7,49 ± 0,10 7,49 ± 0,04 7,50 ± 0,17 7,21 7,76 ± 0,15 7,53 ± 0,04 7,68 ± 0,10 7,22 7,60 ± 0,17 7,45 ± 0,08 7,54 ± 0,12 7,23 7,53 ± 0,06 7,45 ± 0,08 7,62 ± 0,11 10 7,22 7,74 ± 0,08 7,57 ± 0,14 7,64 ± 0,12 11 7,19 7,62 ± 0,17 7,51 ± 0,05 7,58 ± 0,07 12 7,19 7,47 ± 0,14 7,34 ± 0,13 7,56 ± 0,11 13 7,37 7,75 ± 0,09 7,53 ± 0,15 7,75 ± 0,08 14 7,30 7,41 ± 0,16 7,29 ± 0,14 7,30 ± 0,04 15 7,16 7,63 ± 0,10 7,53 ± 0,13 7,74 ± 0,18 TB 7,86 ± 0,08 7,58 ± 0,10 7,49 ± 0,09 7,58 ± 0,12 Tiêu chuẩn Typ III ≥ 6,0 log10CCID50/0,1ml Loạt vắc xin typ IIIPR0113 có hiệu giá thấp 7,40 log10CCID50/0,1ml, cao 7,76 log10CCID50/0,1ml; typ III-PR0213 có hiệu giá thấp 7,34 log10CCID50/0,1ml, cao 7,63 log10CCID50/0,1ml; typ III-PR0313 có hiệu giá thấp 7,30 log10CCID50/0,1ml, cao 7,75 log10CCID50/0,1ml (Bảng 5) 45 Luận văn thạc sĩ Trần Thị Phương Thảo – CB130717 Bảng Kết thiết lập giá trị quản lý mẫu chuẩn vắc xin Bại liệt tam liên PR-0113 Kết (log10 CCID50/ 0,1ml) Lần TN Typ I Typ II Typ III JP-52 PR-0113 JP-52 PR-0113 JP-52 PR-0113 6,30 6,34±0,07 5,41 5,42±0,06 5,81 5,90±0,14 6,18 6,42±0,10 5,30 5,40±0,07 5,97 5,97±0,08 6,70 6,32±0,08 5,31 5,40±0,07 5,84 5,84±0,07 6,32 6,45±0,07 5,44 5,48±0,08 5,70 5,88±0,11 6,37 6,30±0,08 5,4 5,42±0,10 5,96 5,96±0,14 6,40 6,37±0,10 5,46 5,74±0,10 5,90 6,12±0,08 6,38 6,37±0,12 5,50 5,42±0,10 6,14 5,70±0,11 6,42 6,30±0,08 5,43 5,41±0,05 5,58 6,14±0,10 6,80 6,45±0,07 5,40 5,55±0,08 5,76 5,76±0,07 10 6,31 6,70±0,07 5,28 5,41±0,05 6,12 5,79±0,10 11 6,37 6,41±0,09 5,74 5,38±0,07 5,71 6,16±0,10 12 6,43 6,71±0,16 5,73 5,40±0,10 5,78 5,81±0,08 13 6,29 6,34±0,07 5,41 5,77±0,12 5,82 5,71±0,07 14 6,37 6,40±0,07 5,46 5,43±0,08 5,84 5,84±0,07 15 6,45 6,31±0,07 5,41 5,46±0,10 6,00 5,81±0,07 TB 6,40±0,16 6,41±0,15 5,44±0,13 5,47±0,14 5,86±0,15 5,89±0,17 KQ NICVB 6,34 5,14 5,53 Tiêu chuẩn vắc xin Bại liệt tam liên: Typ I ≥ 6,0 log10CCID50/0,1ml; Typ II ≥ 5,0 log10CCID50/0,1ml; Typ III ≥ 5,5 log10CCID50/0,1ml Ứng cử viên vắc xin tam liên PR-0113 có hiệu giá: Typ I có hiệu giá thấp 6,30 log10CCID50/0,1ml, cao 6,71 log10CCID50/0,1ml, trung bình 6,41 log10CCID50/0,1ml Typ II có hiệu giá thấp 5,38 log10CCID50/0,1ml, cao 5,77 log10CCID50/0,1ml, trung bình 5,47 log10CCID50/0,1ml Typ III có hiệu giá thấp 5,70 log10CCID50/0,1ml, cao 6,16 log10CCID50/0,1ml, trung bình 5,89 log10CCID50/0,1ml Kết hiệu giá phòng thí nghiệm chuẩn thức NICVB cho kết typ I: II :III tƣơng ứng 6,34 log10CCID50/0,1ml : 5,14 log10CCID50/0,1ml : 5,53 log10CCID50/0,1ml, khác biệt ý nghĩa thống kê với phòng thí nghiệm POLYVAC, mẫu chuẩn có tính đồng ổn định cao (Bảng 6) 46 A) Hiệu giá ứng cử viên mẫu chuẩn công hiệu vắc xin Bại liệt typ I B) Hiệu giá ứng cử viên mẫu chuẩn công hiệu vắc xin Bại liệt typ II C) Hiệu giá ứng cử viên mẫu chuẩn công hiệu vắc xin Bại liệt typ III D) Hiệu giá ứng cử viên mẫu chuẩn công hiệu vắc xin Bại liệt tam liên Hình Hiệu giá ứng cử viên mẫu chuẩn Bại liệt đơn typ I, II, III tam liên 47 Luận văn thạc sĩ Trần Thị Phương Thảo – CB130717 Giá trị hiệu giá loạt vắc xin đơn typ I, II, III loạt vắc xin tam liên 15 lần kiểm tra thời điểm khác đạt yêu cầu lớn giá trị hiệu giá tiêu chuẩn vắc xin mẫu chuẩn (Hình 7-A, B, C, D) Kết giá trị hiệu giá vắc xin mẫu chuẩn đơn typ JP-I; JP-II; JP-III thực 15 lần thử nghiệm nằm phạm vi quản lý hiệu giá lần lƣợt Typ I ≥ 6,5 log10CCID50/0,1ml; Typ II ≥ 5,5 log10CCID50/0,1ml; Typ III ≥ 6,0 log10CCID50/0,1ml Và kết giá trị hiệu giá vắc xin mẫu chuẩn tam liên JP-52 thực 15 lần thử nghiệm nằm phạm vi quản lý hiệu giá : Typ I ≥ 6,0 log10CCID50/0,1ml; Typ II ≥ 5,0 log10CCID50/0,1ml l; Typ III ≥ 5,5 log10CCID50/0,1ml Ngoài ra, giá trị SD loạt vắc xin thỏa mãn điều kiện SD ≤ 0,25 (Giá trị hiệu giá trung bình đƣợc thể bảng 3, 4, 5, 6): Typ I-PR0113 (0,07), Typ I-PR0213 (0,08), Typ I-PR0313 (0,09); Typ II-PR0113 (0,10), Typ II-PR0213 (0,08), Typ II-PR0313 (0,07); Typ III-PR0113 (0,10), Typ III-PR0213 (0,09), Typ III-PR0313 (0,12) PR-0113: Typ I (0,15), Typ II (0,14), Typ III (0,17) Và nhƣ tất loạt vắc xin Bại liệt đơn typ I, II, III đạt điều kiện mẫu chuẩn nội POLYVAC Tuy nhiên, với tiêu chí lựa chọn mẫu vắc xin có hiệu giá đạt tiêu chuẩn, có tính ổn định cao tƣơng đƣơng với mẫu chuẩn Nhật Bản làm mẫu chuẩn nội bộ, tính toán thống kê chọn typ loạt vắc xin làm mẫu chuẩn nội phạm vi quản lý hiệu giá nhƣ sau: Typ I-PR0113 7,5-7,78 log10CCID50/0,1ml; Typ II-PR0113 7,26-7,66 log10CCID50/0,1ml; Typ III-PR0113 7,38-7,78 log10CCID50/0,1ml Và phạm vi quản lý hiệu giá vắc xin tam liên PR-0113 là: Typ I: 6,41±0,30 log10CCID50/0,1ml; Typ II: 5,47±0,28 log10CCID50/0,1ml; Typ III: 5,89±0,34 log10CCID50/0,1ml 3.3 Kết qủa kiểm tra tính ổn định hiệu giá sau năm bảo quản -700C Ngoài ra, sau năm bảo quản vắc xin -700C, tiến hành lấy mẫu kiểm tra lại hiệu giá lần liên tiếp POLYVAC đối chiếu với kết NICVB (trong thời điểm lấy mẫu kiểm tra) Kết đƣợc thể Bảng 48 Luận văn thạc sĩ Trần Thị Phương Thảo – CB130717 Bảng Kết hiệu giá xác định tính ổn định mẫu chuẩn vi rút bại liệt đơn typ tam liên Tên ứng cử viên MC TypI-PR0113 JP-I TypII-PR0113 JP-II TypIII-PR0113 JP-III Tên ứng cử viên MC PR-0113 JP-52 Lần thử nghiệm Hiệu giá trung bình (log10CCID50/ml) SD CV 7,61 0,06 0,82 7,71 0,08 1,08 7,46 0,21 2,78 TB 7,60 0,13 1,65 Lab2 7,60 TB 7,18 0.00 0.00 7,27 0,08 1,11 7,43 0,10 1,28 7,36 0,15 2,00 TB 7,35 0,08 1,14 Lab 7,02 TB 7,37 0,14 1,94 7,48 0,11 1,50 7,40 0,10 1,28 7,43 0,11 1,51 TB 7,44 0,04 0,50 Lab2 7,28 TB 7,47 Phòng thí nghiệm POLYVAC NICVB POLYVAC NICVB POLYVAC POLYVAC NICVB 0,31 POLYVAC Typ I Hiệu giá trung bình (log10CCID50/ml) Typ II Typ III Phòng thí nghiệm Lần 6,34 5,47 5,65 Lần 6,31 5,61 5,69 Lần 6,57 5,52 5,62 TB 6,41±0,16 5,53±0,14 5,72±0,17 Lab 6,34 5,14 5,53 NICVB TB 6,41 5,47 5,89 POLYVAC Phòng nghiệm 0,02 49 POLYVAC Luận văn thạc sĩ Trần Thị Phương Thảo – CB130717 Các ứng cử viên Bại liệt đơn typ I, II, III (Typ I-PR0113; Typ II-PR0113; Typ III-PR0113) qua lần thử nghiệm xác định tính ổn định cho kết ổn định với lần thử nghiệm có chênh lệch hiệu giá không 0,3 log10CCID50/0,1ml l nằm tiêu chuẩn đƣợc chấp thuận vắc xin Bại liệt đơn typ: Typ I ≥ 6,5 log10 CCID50/0,1ml; Typ II ≥ 5,5 log10CCID50/0,1ml; Typ III ≥ 6,0 log10CCID50/0,1ml Typ I-PR0113 có hiệu giá chênh lệch lần thử nghiệm 2, so với lần thứ lần lƣợt tăng 0,1 log10CCID50/0,1ml giảm 0,15 log10CCID50/0,1ml Giá trị SD 0,13 thỏa mãn tiêu chuẩn SD ≤ 0,25 Và hiệu giá trung bình (7,60 log10CCID50/0,1mlml) nằm phạm vi quản lý: 7,50 ÷ 7,78 log10CCID50/0,1ml Tại phòng thí nghiệm NICVB hiệu giá mẫu chuẩn typ I giá trị trung bình kết hiệu giá thực POLYVAC 7,60 log10CCID50/0,1ml Typ II-PR0113 có hiệu giá chênh lệch lần thử nghiệm 2, so với lần thứ lần lƣợt tăng 0,16 log10CCID50/0,1ml tăng 0,09 log10CCID50/0,1ml Giá trị SD 0,08 thỏa mãn tiêu chuẩn SD ≤ 0,25 hiệu giá trung bình (7,35 log10CCID50/0,1ml) nằm phạm vi quản lý: 7,26 ÷ 7,66 Tại phòng thí nghiệm NICVB hiệu giá typ II giám so với kết phòng thí nghiệm POLYVAC lần 0,25 log10CCID50/0,1ml, nằm phạm vi dao động cho phép thực phòng thí nghiệm Typ III-PR0113 có hiệu giá chênh lệch lần thử nghiệm 2, so với lần thứ giảm 0,08 log10CCID50/0,1ml giảm 0,05 log10CCID50/0,1ml Giá trị SD 0,04 thỏa mãn tiêu chuẩn SD ≤ 0,25 Và hiệu giá trung bình (7,44 log10CCID50/0,1ml) nằm phạm vi quản lý: 7,38-7,78 log10CCID50/0,1ml Tại phòng thí nghiệm NICVB, hiệu giá đạt đƣợc 7,28 log10CCID50/0,1ml, thấp hiệu giá thực phòng thí nghiệm POLYVAC 0,16 log10CCID50/0,1ml, nằm phạm vi dao động cho phép thực phòng thí nghiệm Theo tiêu chuẩn thẩm định phân tích phƣơng pháp chuẩn độ, độ xác phép thử đƣợc đánh giá thông qua số CV, phƣơng pháp thử có độ xác CV < 10% 50 Luận văn thạc sĩ Trần Thị Phương Thảo – CB130717 Đối với vắc xin Bại liệt tam liên qua lần thử nghiệm xác định tính ổn định cho kết ổn định với lần thử nghiệm chênh lệch hiệu giá không 0,3 log10CCID50/0,1ml (tính đồng nhất); không 0,5 log10CCID50/0,1ml (tính ổn định) nằm tiêu chuẩn chấp thuận vắc xin Bại liệt tam liên (Typ I ≥ 6,0 log10CCID50/0,1ml; Typ II ≥ 5,0 log10CCID50/0,1ml; Typ III ≥ 5,5 log10CCID50/0,1ml) Typ I có hiệu giá chênh lệch lần thử nghiệm 2, so với lần thứ lần lƣợt giảm 0,03 log10 CCID50/0,1mlvà tăng 0,24 log10CCID50/0,1ml; Typ II có hiệu giá chênh lệch lần thử nghiệm 2, so với lần thứ lần lƣợt tăng 0,14 log10CCID50/0,1ml tăng 0,05 log10CCID50/0,1ml; Typ III có hiệu giá chênh lệch lần thử nghiệm 2, so với lần thứ tăng 0,04 log10CCID50/0,1ml giảm 0,03 log10CCID50/0,1ml Và nằm giới hạn: Typ I có hiệu giá trung bình 6,41 (giới hạn: 6,41±0,32) Typ II có hiệu giá trung bình 5,53 (giới hạn: 5,47±0,28) Typ III có hiệu giá trung bình 5,72 (giới hạn: 5,89±0,34) Giá trị SD lần lƣợt 0,13 (Typ I-PR0113); 0,08 (Typ II-PR0113) 0,04 (Typ III-PR0113) thỏa mãn tiêu chuẩn SD ≤ 0,25 Nhƣ kết thử nghiệm POLYVAC NICVB, ứng cử viên mẫu chuẩn Bại liệt đơn typ tam liên đạt tiêu chuẩn độ xác Điều chứng tỏ tính đồng ổn định ứng cử viên mẫu chuẩn 51 Luận văn thạc sĩ Trần Thị Phương Thảo – CB130717 KẾT LUẬN  Đã sản xuất đƣợc loạt vắc xin OPV đơn typ I, II, III loạt vắc xin tam liên làm ứng cử viên mẫu chuẩn với số lƣợng 1215 ampul/ loạt (1ml/ ampul)  Kết kiểm tra thông số tiêu chuẩn chất lƣợng ứng cử viên mẫu chuẩn vắc xin OPV cho thấy ứng cử viên đơn typ I, II, III ứng cử viên tam liên đạt yêu cầu tiêu chuẩn chất lƣợng theo TC WHO, TRS 840, phụ lục 3, 1994  Đã thiết lập đƣợc phạm vi quản lý hiệu giá cho vắc xin OPV đơn typ I, II, III vắc xin tam liên mẫu chuẩn nội bộ:  Đơn TypI-PR0113: 7,1-7,38 log10CCID50/0,1ml  Đơn TypII-PR0113: 7,26-7,66 log10CCID50/0,1ml  Đơn TypIII-PR0113: 7,38-7,78 log10CCID50/0,1ml  Vắc xin tam liên PR-0113: typI: 6,41±0,15 log10CCID50/0,1ml ; typII: 5,47±0,14 log10CCID50/0,1ml; typ III: 5,89±0,17 log10CCID50/0,1ml 52 Luận văn thạc sĩ Trần Thị Phương Thảo – CB130717 KIẾN NGHỊ  Tiếp tục nghiên cứu đánh giá tính ổn định loạt vắc xin mẫu chuẩn năm  Tiếp tục phối hợp với NICVB để xây dựng mẫu chuẩn sở thành mẫu chuẩn quốc gia 53 Luận văn thạc sĩ Trần Thị Phương Thảo – CB130717 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Bộ Y tế (2001), Tổng kết công tác tiêm chủng mở rộng năm 2001, Hà Nội Nguyễn Đình Bảng, Hoàng Ngọc Hiển, Phạm Lê Hùng, Đàm Viết Cƣơng (1992), Vi sinh vật Y học, Nhà xuất Đại học Trung học chuyên nghiệp, Hà Nội Bùi Đại (1982), Bệnh học truyền nhiễm, Học viện Quân y, Hà Nội, tr 121130 Huỳnh Phƣơng Liên, Nguyễn Kim Thảo (1991), Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh vật y học, Nhà xuất văn hoá, Hà Nội Jdanov VM., S Ya Gaidamovich (1979), Vi rút học (Đoàn Xuân Mƣợu dịch), Nhà xuất Y học, Hà Nội Dƣợc điển Việt Nam IV, Chuyên đề vắc xin sinh phẩm, năm 2009, trang 664 – 665 TIẾNG ANH Mackenzie.A.P, The physico-chemical basis for the freeze-drying process Biol.Standard vol.36: pp 52-61 Simione F.P, Brown E.M, ATCC Preservation Methods: Freezing and Freezedrying Second edition, 1991 Published by Amarican Type Culture Collection, ATCC: pp 1-13 The International Pharmacopoeia 3rd edition, (1979), General methods of analysis, Volume 1, WHO, Geneva, pp.134 10 Researcher’s Associates (1996), The National Institute of Health, vaccines handbook, Tokyo 11 Requirement for Mealse vaccines (WHO, TRS 840, annex 3, 1994) 12 WHO (1973), General requirements for the sterility of biological substances, TRS No 530, Geneva, pp.135-136 54 Luận văn thạc sĩ Trần Thị Phương Thảo – CB130717 13 WHO (1990), Guidelines for the preparation, characterization, and establishment of International and other standards and reference reagents for biologycal substances, TRS No 800, annex 14 WHO, Guidelines for the preparation and establishment of reference materials and referrence reagent for biological subtances, 1978, No 626: pp 103-107 15 WHO, Guidelines for the preparation, chracterization and establishment of international and other standards and reference regent for biological subtances 1990, No 800: pp 181 - 215 16 WHO (1997), Manual of laboratory methods for testing of vacines used in the WHO Expanded programme on Immunization, WHO/VSQ/1997.04 17 WHO, Manual of laboratory methods for potency testing of vaccine used in the WHO Expanded Programme on Immunization BLG/1995 pp 55 ... ĐOAN Tôi xin cam đoan: Luận văn Nghiên cứu sản xuất mẫu chuẩn Vắc xin Bại liệt uống sử dụng kiểm định vắc xin OPV Việt Nam” công trình nghiên cứu nhóm nghiên cứu sản xuất mẫu chuẩn vắc xin OPV thuộc... cần thiết cho sở sản xuất vắc xin Xuất phát từ yêu cầu trên, Trung tâm tiến hành thực đề tài Nghiên cứu sản xuất mẫu chuẩn Vắc xin Bại liệt uống sử dụng kiểm định vắc xin OPV Việt Nam” nhằm giải... trƣờng đệm nhƣ chất ổn định nhiệt cho vắc xin 1.2.3 Tình hình nghiên cứu sản xuất sử dụng vắc xin mẫu chuẩn Bại liệt * Vắc xin mẫu chuẩn quốc tế có nay:  Mẫu chuẩn vi rút Bại liệt Sabin typ I -