Luận văn thạc sỹ Cơng nghệ sinh học Nguyễn Hồi Thu BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI - Nguyễn Hoài Thu Đặc điểm dịch tễ học phân tử chủng Vibrio parahaemolyticus phân lập đƣợc bệnh nhân ngộ độc thực phẩm Hà Nội LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: PGS TS Nguyễn Bình Minh Hà Nội - Năm 2010 Luận văn thạc sỹ Cơng nghệ sinh học Nguyễn Hồi Thu Lời cảm ơn Trước hết, xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới PGS TS Nguyễn Bình Minh, người tận tình hướng dẫn, giúp đỡ hỗ trợ tơi suốt q trình cơng tác thời gian học tập, nghiên cứu hồn thành luận văn Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn tới thầy cán công tác Viện Công nghệ Sinh học thực phẩm, Viện đào tạo sau đại học - Trường Đại học Bách khoa Hà Nội dạy dỗ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình học tập trường Tôi xin chân thành cảm ơn cán bộ, anh chị em phịng thí nghiệm Vi khuẩn đường ruột, Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương, giúp đỡ động viên trình cơng tác nghiên cứu khoa học vừa qua Và xin gửi lời cảm ơn tới gia đình, bố, mẹ, em gái, chồng trai Hồng Dương ln bên tơi, nhiệt tình động viên, giúp đỡ tơi q trình học tập, nghiên cứu khoa học sống Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, tháng 10 năm 2010 Nguyễn Hoài Thu Luận văn thạc sỹ Công nghệ sinh học Nguyễn Hồi Thu Lời cam đoan Tơi xin cam đoan trực tiếp thực nghiên cứu luận văn Mọi kết thu nguyên bản, không chỉnh sửa chép từ nghiên cứu khác; số liệu, kết luận văn chưa cơng bố Mọi liệu, hình ảnh trích dẫn tham khảo luận văn thu thập sử dụng từ nguồn liệu mở với đồng ý tác giả Phần mềm phân tích kết Bio Numeric sử dụng phần mềm có quyền Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm với lời cam đoan trên! Nguyễn Hoài Thu Luận văn thạc sỹ Công nghệ sinh học Nguyễn Hồi Thu Mục lục Trang phụ bìa Lời cảm ơn Lời cam đoan Mục lục Danh mục chữ viết tắt Danh mục bảng Danh mục hình minh họa 11 ĐẶT VẤN ĐỀ 12 CHƢƠNG TỔNG QUAN 15 1.1 Ngộ độc thực phẩm nguyên nhân V parahaemolyticus 15 1.1.1 Tình hình ngộ độc thực phẩm V parahaemolyticus giới .15 1.1.2 Tình hình ngộ độc thực phẩm V parahaemolyticus Việt nam 16 1.1.3 Đặc điểm lâm sàng 16 1.1.4 Phòng chống bệnh .17 1.2 Vi khuẩn Vibrio parahaemolyticus 18 1.2.1 Định danh 18 1.2.2 Phân loại 18 1.2.3 Hình thái tính chất hóa sinh 18 1.2.4 Đặc điểm sinh thái 21 1.2.5 Tính chất kháng nguyên 23 1.2.6 Bộ gen V parahaemolyticus 24 1.2.7 Độc tố chế gây bệnh .24 1.2.8 Chủng V parahaemolyticus gây dịch type huyết O3:K6 .28 1.2.8.1 Nguồn gốc phát sinh chủng O3:K6 28 1.2.8.2 Các biến thể type huyết O3:K6 29 1.3 Các phƣơng pháp chẩn đoán 30 Luận văn thạc sỹ Công nghệ sinh học Nguyễn Hồi Thu 1.3.1 Phƣơng pháp ni cấy phân lập .30 1.3.2 Phƣơng pháp sinh học phân tử 33 1.3.2.1 Kỹ thuật lai ADN 33 1.3.2.2 Kỹ thuật PCR 34 1.3.2.3 Kỹ thuật Real-time PCR 34 1.4 Ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử nghiên cứu chẩn đoán V parahaemolyticus 35 1.4.1 Trên giới .35 1.4.1.1 Phƣơng pháp PCR .35 1.4.1.2 Phƣơng pháp xác định genotype .37 1.4.1.3 Kỹ thuật Ribotyping 39 1.4.1.4 Phƣơng pháp sử dụng enzyme giới hạn 40 1.4.2 Tại Việt Nam 40 CHƢƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 42 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 42 2.2 Vật liệu nghiên cứu 42 2.3 Thiết bị, hóa chất sinh phẩm 42 2.3.1 Trang thiết bị 42 2.3.2 Hóa chất, sinh phẩm 43 2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 44 2.4.1 Thu thập mẫu nghiên cứu 44 2.4.2 Nuôi cấy phân lập vi khuẩn Vibrio parahaemolyticus 44 2.4.3 Phƣơng pháp PCR xác định gen ToxR, tdh, trh GS 45 2.4.3.1 đƣợc Tách chiết ADN vi khuẩn Vibrio parahaemolyticus phân lập 45 2.4.3.2 Phản ứng chuỗi men (PCR) phát gen ToxR 45 2.4.3.3 PCR phát gen tdh 47 2.4.3.4 PCR phát gen trh 48 2.4.3.5 PCR phát gen GS 50 Luận văn thạc sỹ Công nghệ sinh học 2.5 Nguyễn Hoài Thu So sánh genotype chủng vi khuẩn Vibiro parahaemolyticus phân lập đƣợc 51 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 55 3.1 Tỷ lệ V parahaemolyticus phân lập từ bệnh nhân ngộ độc thực phẩm Hà Nội 55 3.2 Xác định type huyết chủng V parahaemolyticus phân lập đƣợc 3.3 58 Tỷ lệ phát gen đặc hiệu loài ToxR gen độc tố tdh, trh, gen điểm chủng gây dịch GS 60 3.4 So sánh kiểu gen chủng phân lập đƣợc 63 KẾT LUẬN 68 KIẾN NGHỊ 69 TÀI LIỆU THAM KHẢO 70 Luận văn thạc sỹ Công nghệ sinh học Nguyễn Hoài Thu Danh mục chữ viết tắt ADN axit deoxyribonucleic ARN axit ribonucleic bp base pair (cặp ba zơ) CDC Centers for Disease Control and Prevention (Trung tâm kiểm sốt phịng bệnh dịch) CLB Cell Lysis Buffer (dung dịch đệm ly giải tế bào) cs cộng CSB Cell Solution Buffer (dung dịch đệm hòa tan tế bào) GS group specific (đặc hiệu nhóm) KP Kanagawa Phenomenon (hiện tƣợng Kanagawa) LB Luria Bertani LDC Lysine Decarboxylase PCR Polymerase Chain Reaction (phản ứng chuỗi men) PFGE Pulse Field Gel Electrophoresis (điện di trƣờng xung) TBE Tris Borate EDTA TCBS Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrose Agar tdh thermostable direct hemolysin (ly giải hồng cầu trực tiếp chịu nhiệt) TE Tris EDTA trh thermostable related hemolysin (ly giải hồng cầu có liên quan đến yếu tố chịu nhiệt) TTSS Type III Secretion System (hệ thống tiết type III) UT Untype (không xác định type) Luận văn thạc sỹ Công nghệ sinh học Nguyễn Hoài Thu Danh mục bảng Bảng 1.1 Tính chất hóa sinh Vibrio parahaemolyticus .20 Bảng 1.2 Các điều kiện tối ƣu cho giới hạn phát triển V parahaemolyticus 22 Bảng 1.3 Các type huyết V parahaemolyticus 23 Bảng 1.4 So sánh đặc điểm khuẩn lạc môi trƣờng thạch TCBS .32 Bảng 1.5 So sánh đặc điểm khuẩn lạc môi trƣờng thạch Chrom 33 Bảng 2.1 Trình tự cặp mồi ToxR 45 Bảng 2.2 Thành phần phản ứng khuếch đại gen ToxR 46 Bảng 2.3 Chu trình chạy PCR phát gen ToxR 46 Bảng 2.4 Trình tự cặp mồi tdh 47 Bảng 2.5 Thành phần phản ứng khuếch đại gen tdh 47 Bảng 2.6 Chu trình chạy PCR phát gen tdh .48 Bảng 2.7 Trình tự cặp mồi trh 48 Bảng 2.8 Thành phần phản ứng khuếch đại gen trh 49 Bảng 2.9 Chu trình chạy PCR phát gen trh 49 Bảng 2.10 Trình tự cặp mồi gen GS 50 Bảng 2.11 Thành phần phản ứng khuếch đại gen GS 50 Bảng 2.12 Chu trình chạy PCR phát gen GS 51 Bảng 2.13 Thành phần dung dịch đệm trƣớc cắt ADN enzyme giới hạn 53 Bảng 2.14 Thành phần hỗn hợp phản ứng cắt ADN NotI .54 Bảng 3.1 Tính chất hóa sinh 84 chủng V parahaemolyticus 57 Bảng 3.2 Kết xác định type huyết chủng V parahaemolyticus 58 Luận văn thạc sỹ Công nghệ sinh học Nguyễn Hồi Thu Bảng 3.3 Phân nhóm kiểu gen độc tố .62 Bảng 3.4 Mối liên quan type huyết kiểu gen chủng vi khuẩn 65 10 Luận văn thạc sỹ Cơng nghệ sinh học Nguyễn Hồi Thu Danh mục hình minh họa Hình 1.1 Vi khuẩn Vibrio parahaemolyticus dƣới kính hiển vi điện tử 19 Hình 1.2 Khuẩn lạc V parahaemolyticus môi trƣờng thạch TCBS 30 Hình 1.3 Khuẩn lạc V parahaemolyticus mơi trƣờng thạch Chrom 31 Hình 1.4 Tính chất sinh hóa V parahaemolyticus 32 Hình 1.5 Vị trí cặp mồi khuếch đại trình tự ToxRS vị trí base khác dịng O3:K6 cũ 36 Hình 2.1 Hình ảnh điện di gen ToxR 46 Hình 2.2 Hình ảnh điện di gen tdh 48 Hình 2.3 Hình ảnh điện di gen trh 49 Hình 2.4 Hình ảnh điện di gen GS 51 Hình 2.5 Vị trí cắt enzyme NotI 53 Hình 3.1 Phân bố theo giới tính bệnh nhân nhiễm V parahaemolyticus 55 Hình 3.2 Phân bố theo độ tuổi bệnh nhân nhiễm V parahaemolyticus 56 Hình 3.3 Tỷ lệ ca nhiễm trùng V parahaemolyticus theo tháng .57 Hình 3.4 Tỷ lệ type huyết chủng V parahaemolyticus 59 Hình 3.5 Tỷ lệ mang gen độc tố chủng V parahaemolyticus .61 Hình 3.6 Kết kiểu gen PFGE đại diện 84 chủng V parahaemolyticus phân lập Hà Nội 64 Hình 3.7 Tỷ lệ tƣơng đồng kiểu gen PFGE .66 11 Luận văn thạc sỹ Công nghệ sinh học 1: 2: 3: 4: 5: 6: 7: 8: Marker Salmonella braenderup O3:K5 O4:K9 O1:K36 O4:K68 O4:K55 O4:K8 O3:K6 Nguyễn Hoài Thu 9: O1:K1 10: O3:K6 (Chủng V parahaemolyticus gây dịch trƣờng đại học Kyoto Nhật Bản cung cấp) 11: O3:K75 12: O8:K41 13: O3:KUT 14: O3:K45 15: Marker Salmonella braenderup Hình 3.6 Kết kiểu gen PFGE đại diện 84 chủng V parahaemolyticus phân lập Hà Nội 64 Luận văn thạc sỹ Công nghệ sinh học Nguyễn Hoài Thu Bảng 3.4 Mối liên quan type huyết kiểu gen chủng vi khuẩn Type huyết Số lƣợng ToxR tdh trh GS Kiểu gen PFGE O1:K1 + - + - B O1:K36 + + - + A O3:K5 + + - + A O3:K5 + + - - B O3:K6 61 + + - + A O3:K45 + - - - B O3:K75 + + - + A O3:KUT + - - - B O4:K8 10 + + - - B O4:K9 + + - - B O4:K55 + + - - B O4:K68 + + - + A O8:K41 + + - - B Cây phả hệ (hình 3.7) minh họa mối liên quan kiểu gen PFGE chủng phân lập Hà Nội Cây phả hệ chia làm cụm rõ rệt Cụm X gồm chủng có GS (+) có độ tƣơng đồng giống từ 90-100% Điều đáng ý chủng O1:K36, O3:K5, có độ tƣơng đồng lần lƣợt 97%, 93% với chủng O3:K6, hai chủng O3:K75 O4:K68 có độ tƣơng đồng giống giống chủng O3:K6 92% Cụm Y gồm chủng có GS âm tính khác Kết cho thấy chủng phát sinh từ chủng O3:K6 cách biến đổi kháng nguyên O:K Kết PFGE chứng minh chủng phân lập Hà nội có gen GS (+) có kiểu gen PFGE tƣơng tự nhƣ chủng chứng chủng gây dịch số nƣớc châu Á có mối liên quan gần gũi với phát sinh lồi Có thể kết luận: chủng 65 Luận văn thạc sỹ Công nghệ sinh học Nguyễn Hồi Thu phân lập Hà Nội có gen GS (+) dòng với chủng gây dịch lƣu hành số nƣớc châu Á Hình 3.7 Tỷ lệ tƣơng đồng kiểu gen PFGE 66 Luận văn thạc sỹ Cơng nghệ sinh học Nguyễn Hồi Thu 67 Luận văn thạc sỹ Cơng nghệ sinh học Nguyễn Hồi Thu KẾT LUẬN - Tỷ lệ tƣơng đối cao bệnh nhân nhiễm V parahaemolyticus ngộ độc thực phẩm : 11,80 % - Type huyết O3:K6 chiếm ƣu (72,6%), tƣơng tự nhƣ số nƣớc châu Á - Các chủng phân lập đƣợc hầu hết chủng độc mang gen độc tố tdh, chiếm tỷ lệ 96,5% Chủng gây dịch mang gen tdh GS, chiếm tỷ lệ 78,57% - Các chủng V parahaemolyticus phân lập Hà nội dƣơng tính với gen GS có kiểu gen PFGE tƣơng tự với chủng gây dịch số nƣớc châu Á 68 Luận văn thạc sỹ Công nghệ sinh học Nguyễn Hoài Thu KIẾN NGHỊ Cần tiếp tục nghiên cứu tỷ lệ ngộ độc thực phẩm V parahaemolyticus Việt Nam Nghiên cứu phát V parahaemolyticus từ hải sản mối liên quan dịch tễ học phân tử chủng phân lập đƣợc từ ngƣời hải sản nhằm hạn chế nguy gây bệnh ngƣời 69 Luận văn thạc sỹ Công nghệ sinh học Nguyễn Hoài Thu TÀI LIỆU THAM KHẢO Lee, Phủng, PGS TS Lê Văn (2009) Vi khuẩn Y học, Nhà Xuất giáo dục Việt Nam Baba, K., Shirai, H., Terai, A., Kumagai, K., Takeda, Y., Nishibuchi, M (1991) "Similarity of the tdh gene-bearing plasmids of Vibrio cholerae nonO1 and Vibrio parahaemolyticus," Microb Pathog, 10(1): 61-70 Bag, P K., Nandi, S., Bhadra, R K., Ramamurthy, T., Bhattacharya, S K., Nishibuchi, M., Hamabata, T., Yamasaki, S., Takeda, Y., Nair, G B (1999) "Clonal diversity among recently emerged strains of Vibrio parahaemolyticus O3:K6 associated with pandemic spread," J Clin Microbiol, 37(7): 2354-7 Begue, R E., Meza, R., Castellares, G., Cabezas, C., Vasquez, B., Ballardo, A., Cam, J., Sanchez, J L (1995) "Outbreak of diarrhea due to Vibrio parahaemolyticus among military personnel in Lima, Peru," Clin Infect Dis, 21(6): 1513-4 Chang, B., Taniguchi, H., Miyamoto, H., Yoshida, S (1998) "Filamentous bacteriophages of Vibrio parahaemolyticus as a possible clue to genetic transmission," J Bacteriol, 180(19): 5094-101 Chiou, C S., Hsu, S Y., Chiu, S I., Wang, T K., Chao, C S (2000) "Vibrio parahaemolyticus serovar O3:K6 as cause of unusually high incidence of food-borne disease outrbreaks in Taiwan from 1996 to 1999," J Clin Microbiol, 38: 4621-5 Chowdhury, N R., Chakraborty, S., Eampokalap, B., Chaicumpa, W., ChonGSa-Nguan, M., Moolasart, P., Mitra, R., Ramamurthy, T., Bhattacharya, S K., Nishibuchi, M., Takeda, Y., Nair, G B (2000) "Clonal dissemination of Vibrio parahaemolyticus displaying similar DNA 70 Luận văn thạc sỹ Cơng nghệ sinh học Nguyễn Hồi Thu fingerprint but belonging to two different serovars (O3:K6 and O4:K68) in Thailand and India," Epidemiol Infect, 125(1): 17-25 Chowdhury, N R., Chakraborty, S., Ramamurthy, T., Nishibuchi, M., Yamasaki, S., Takeda, Y., Nair, G B (2000) "Molecular evidence of clonal Vibrio parahaemolyticus pandemic strains," Emerg Infect Dis, 6(6): 631-6 DePaola, A., Hopkins, L H., Peeler, J T., Wentz, B., McPhearson, R M (1990) "Incidence of Vibrio parahaemolyticus in U.S coastal waters and oysters," Appl Environ Microbiol, 56(8): 2299-302 10 DiRita, V J (1992) "Co-ordinate expression of virulence genes by ToxR in Vibrio cholerae," Mol Microbiol, 6: 451-458 11 Eko, F O., Udo, S M., Antia-Obong, O E (1994) "Epidemiology and spectrum of Vibrio diarrheas in the lower cross river basin of Nigeria," Cent Eur J Public Health, 2: 37-41 12 Eyles, M J., Davey, G R (1984) "Microbiology of commercial depuration of the Sydney rock oyster: Crassostrea commercialis," J Food Prot, 47: 703-706 13 Fujino, T , Okuno, Y., Nakada, D., Aoyama, A., Mukai, T., Ueho, T (1953) "On the bacteriological examination of the shirasu food poisoning," Med J Osaka Univ, 4: 299-304 14 Fyfe, M., Yeung, S T., Daly, P., Schallie, K., Kelly, M T., Buchanan, S (1997) "Outbreak of Vibrio parahaemolyticus related to raw oysters in British Columbia," Can Commun Dis Rep, 23(19): 145-8 15 Gooch, J A., DePaola, A., Bowers, J., Marshall, D L (2002) "Growth and survival of Vibrio parahaemolyticus in postharvest American oysters," J Food Prot, 65(6): 970-4 16 Haddock, R L., Cabanero, A F (1994) "The origin of non-outbreak Vibrio parahaemolyticus infections on Guam," Trop Geogr Med, 46(1): 42-3 71 Luận văn thạc sỹ Công nghệ sinh học 17 Nguyễn Hoài Thu Hara-Kudo, Y., Nishina, T., Nakagawa, H., Konuma, H., Hasegawa, J., Kumagai, S (2001) "Improved method for detection of Vibrio parahaemolyticus in seafood," Appl Environ Microbiol, 67(12): 5819-23 18 Hlady, W G., Klontz, K C (1996) "The epidemiology of Vibrio infections in Florida, 1981-1993," J Infect Dis, 173: 1176-83 19 Honda, T., Lida, T (1993) "The pathogenicity ofVibrio parahaemolyticus and the role of the thermostable direct haemolysin and related haemolysins," Rev Med Microbiol, 4: 106-113 20 Honda, T., Nishibuchi, M., Miwatani, T., Kaper, JB (1986) "Demostration of a plasmid-borne gene encoding a thermostable direct hemolysin in Vibrio cholerae non-O1 strains," Appl Environ Microbiol Immunol, 52: 1218–20 21 Hughes, J M., Boyce, J M., Aleem, A R., Wells, J G., Rahman, A S., Curlin, G T (1978) "Vibrio parahaemolyticus enterocolitis in Bangladesh: report of an outbreak," Am J Trop Med Hyg, 27(1 Pt 1): 106-12 22 Iida, T., Hattori, A., Tagomori, K., Nasu, H., Naim, R., Honda, T (2001) "Filamentous phage associated with recent pandemic strains of Vibrio parahaemolyticus," Emerg Infect Dis, 7(3): 477-8 23 Iida, T., Park, K S., Suthienkul, O., Kozawa, J., Yamaichi, Y., Yamamoto, K., Honda, T (1998) "Close proximity of the tdh, trh and ure genes on the chromosome of Vibrio parahaemolyticus," Microbiology, 144 ( Pt 9): 251723 24 Kato, T., Y Obara, H Ichinoe, K Nagashima, A Akiuama, K Takitawa, A Matsuchima, S Yamai, Miyamoto, Y (1965) "Grouping of Vibrio parahaemolyticus with a hemolysis reaciton," Shokuhin Eisae Kankyu, 15: 83-86 25 Kaufman, G E., Myers, M L., Pass, C L., Bej, A K., Kaysner, C A (2002) "Molecular analysis of Vibrio parahaemolyticus isolated from human patients and shellfish during US Pacific north-west outbreaks," Lett Appl Microbiol, 34(3): 155-61 72 Luận văn thạc sỹ Cơng nghệ sinh học 26 Nguyễn Hồi Thu Kim, Y B., Okuda, J., Matsumoto, C., Takahashi, N., Hashimoto, S., Nishibuchi, M (1999) "Identification of Vibrio parahaemolyticus strains at the species level by PCR targeted to the ToxR gene," J Clin Microbiol, 37(4): 1173-7 27 Lalitha, M K., Walter, N M., Jesudason, M., Mathan, V I (1983) "An outbreak of gastroenteritis due to Vibrio parahaemolyticus in Vellore," Indian J Med Res, 78: 611-5 28 Levine, W C., Griffin, P M (1993) "Vibrio Infections on the Gulf Coast: results of first year of regional surveillance Gulf Coast Vibrio Working Group," J Infect Dis, 167: 479-83 29 Lin, Z., Kumagai, K., Baba, K., Mekalanos, J J., Nishibuchi, M (1993) "Vibrio parahaemolyticus has a homolog of the Vibrio cholerae ToxRS operon that mediates environmentally induced regulation of the thermostable direct hemolysin gene," J Bacteriol, 175(12): 3844-55 30 Matsumoto, C., Okuda, J., Ishibashi, M., Iwanaga, M., Garg, P., Rammamurthy, T., Wong, H C., Depaola, A., Kim, Y B., Albert, M J., Nishibuchi, M (2000) "Pandemic spread of an O3:K6 clone of Vibrio parahaemolyticus and emergence of related strains evidenced by arbitrarily primed PCR and ToxRS sequence analyses," J Clin Microbiol, 38(2): 578-85 31 Miller, V L., Taylor, R K., Mekalanos, J J (1987) "Cholera toxin transcriptional activator ToxR is a transmembrane DNA binding protein," Cell, 48: 271-279 32 Miwatani, T., Takeda, Y (1976) "Vibrio parahaemolyticus: A causative bacterium of food poisoning," Saikon Publishing Co., Ltd., Tokyo 33 Miyamoto, Y., Kato, T., Obara, Y., Akiyama, S., Takizawa, K., Yamai, S (1969) "In vitro hemolytic characteristic of Vibrio parahaemolyticus: its close correlation with human pathogenicity," J Bacteriol, 100(2): 1147-9 73 Luận văn thạc sỹ Cơng nghệ sinh học 34 Nguyễn Hồi Thu Ndon, J A., Udo, S M., Wehrenberg, W B (1992) "Virbio-associated gastroenteritis in the lower Cross-River basin of Nigeria," J Clin Microbiol, 30: 2730-2 35 Nishibuchi, M., Ishibashi, M., Takeda, Y., Kaper, J B (1985) "Detection of the thermostable direct hemolysin gene and related DNA sequences in Vibrio parahaemolyticus and other Vibrio species by the DNA colony hybridization test," Infect Immun, 49(3): 481-6 36 Nishibuchi, M., Janda, JM., Ezaki, T (1996) "The thermostable direct hemolysin gene ( tdh) of Vibrio hollisae is dissimilar in prevalence to and phylogenetically from the tdh gene of other Vibrios: implication in the horizontal transfer of the tdh gene " Microbiol Immunol, 40: 59-65 37 Nishibuchi, M., Kaper, J B (1995) "Thermostable direct hemolysin gene of Vibrio parahaemolyticus: a virulence gene acquired by a marine bacterium," Infect Immun, 63(6): 2093-9 38 Nishibuchi, M., Khaeomanee-iam, V., Honda, T., Kaper, J B., Miwatani, T (1990) "Comparative analysis of the hemolysin genes of Vibrio cholerae non-01, V mimicus, and V hollisae that are similar to the tdh gene of V parahaemolyticus," FEMS Microbiol Lett, 55(3): 251-6 39 Nishibuchi, M., Taniguchi, T., Misawa, T., Khaeomanee-Iam, V., Honda, T., Miwatani, T (1989) "Cloning and nucleotide sequence of the gene (trh) encoding the hemolysin related to the thermostable direct hemolysin of Vibrio parahaemolyticus," Infect Immun, 57(9): 2691-7 40 Nolan, C M., Ballard, J., Kaysner, C A., Lilja, J L., Williams, L P., Jr., Tenover, F C (1984) "Vibrio parahaemolyticus gastroenteritis An outbreak associated with raw oysters in the Pacific northwest," Diagn Microbiol Infect Dis, 2(2): 119-28 41 Outbreak of Vibrio parahaemolyticus infection associated with eating raw oysters - Pacific Northwest, 1997 1998 MMWR Morb Mortal Wkly Rep p 457-62 74 Luận văn thạc sỹ Cơng nghệ sinh học 42 Nguyễn Hồi Thu Outbreak of Vibrio parahaemolyticus infection associated with eating raw oysters and clams harvested from Long Island Sound-Cnnecticut, New Jersey, and New York, 1998 1999 MMWR Morb Mortal Wkly Rep p 4851 43 Pal, S C., Sircar, B K., Nair, G B., Deb., B C (1984) "Epidemiology of bacterial diarrhoeal diseases in India with special reference to Vibrio parahaemolyticus infections," Bacterial diarrhoeal disease, KTK Scientific Publishers, Tokyo, Japan: 65-73 44 Pan, T M., Wang, T K., Lee, C L., Chien, S W., Horng, C B (1996) "Food-borne disease outbreaks in Taiwan, 1994," J Formos Med Assoc, 95: 417-20 45 Pan, T M., Wang, T K., Lee, C L., Chien, S W., Horng, C B (1997) "Food-borne disease outbreaks due to bacteria in Taiwan, 1986 to 1995," J Clin Microbiol, 35: 1260-2 46 Roberts, T A , Baird-Parker, A C , Tompkin (eds), R B (1996) International commission on Microbiological Specifications for Foods (ICMSF) Microorganisms in Foods Blakie Academic and Professional, London 47 Sakazaki, R., Iwanami, S., Fukumi, H (1963) "Studies on the Enteropathogenic, Facultatively Halophilic Bacteria, Vibrio parahaemolyticus I Morphological, Cultural and Biochemical Properties and Its Taxonomical Position," Jpn J Med Sci Biol, 16: 161-88 48 Sakazaki, R., Shimada., T (1986) "Virbio species as causative agents of food-borne infection," In R K Robinson, ed, Developments in Food Microbiology 2nd Ed Elsevier Applied Science Publishers, New York, NY 49 Sarkar, B L., Kumar, R., De, S P., Pal, S C (1987) "Hemolytic activity of and lethal toxin production by environmental strains parahaemolyticus," Appl Environ Microbiol, 53(11): 2696-8 75 of Vibrio Luận văn thạc sỹ Cơng nghệ sinh học 50 Nguyễn Hồi Thu Shirai, H., Ito, H., Hirayama, T., Nakamoto, Y., Nakabayashi, N., Kumagai, K., Takeda, Y., Nishibuchi, M (1990) "Molecular epidemiologic evidence for association of thermostable direct hemolysin ( TDH) and TDH-related hemolysin of Vibrio parahaemolyticus with gastroenteritis," Infect Immun, 58(11): 3568-73 51 Sircar, B K., Deb, B C., De, S P., Ghosh, A., Pal., S C (1976) "Clinical and epidemiological studies on Vibrio parahaemolyticus infection in Calcutta (1975)," Indian J Med Res., 64: 576-580 52 Smolikova, L M., Lomov, IuM., Khomenko, T V., al., et (2001) "Studies on halophilic Vibrios causing a food poisoning outbreak in the city of Vladivostock," Zh Mikrobiol Epidemiol Immunobiol, 6: 3-7 53 Sow, A I , Cisse, M F., Gaye, M., al., et (1997) "Bacterial diversity during the cholera epidemic in Dakar, Senegal (1995-1996)," Bull Soc Pathol Exot, 90: 160-1 54 Stephenie, L Drake, Angelo, DePaola, Lee-Ann, Jaykus, An over view of Vibrio vulnificus and Vibrio parahaemolyticus, in COMPREHENSIVE REVIEWS IN FOOD SCIENCE AND FOOD SAFETY 2007 55 Tada, J., Ohashi, T., Nishimura, N., Shirasaki, Y., Ozaki, H., Fukushima, S., Takano, J., Nishibuchi, M., Takeda, Y (1992) "Detection of the thermostable direct hemolysin gene ( tdh) and the thermostable direct hemolysin-related hemolysin gene (trh) of Vibrio parahaemolyticus by polymerase chain reaction," Mol Cell Probes, 6(6): 477-87 56 Takahashi, H., Iwade, Y., Konuma, H., Hara-Kudo, Y (2005) "Development of a quantitative real-time PCR method for estimation of the total number of Vibrio parahaemolyticus in contaminated shellfish and seawater," J Food Prot, 68(5): 1083-8 57 Tangkanakul, W., Tharmaphornpilas, P., Datapon, D., Sutantayawalle, S (2000) "Food poisoning outbreak from contaminated fish-balls," J Med Assoc Thai, 83: 1289-95 76 Luận văn thạc sỹ Cơng nghệ sinh học 58 Nguyễn Hồi Thu Tuyet, D T., Thiem, V D., Von Seidlein, L., Chowdhury, A., Park, E., Canh, D G., Chien, B T., Van Tung, T., Naficy, A., Rao, M R., Ali, M., Lee, H., Sy, T H., Nichibuchi, M., Clemens, J., Trach, D D (2002) "Clinical, epidemiological, and socioeconomic analysis of an outbreak of Vibrio parahaemolyticus in Khanh Hoa Province, Vietnam," J Infect Dis, 186(11): 1615-20 59 Twedt, R M (1989) "Vibrio parahaemolyticus," In M P Doyle (ed.), Foodborne Bacterial Pathogens Marcel Dekker, New York: 543-568 60 Wagatsuma, S (1968) "On a medium for hemolytic reation of Vibrio parahaemolyticus," Media Circ., 13: 159-162 61 Wong HC., Chen MC., Liu SH., Liu DP (1999) "Incidence of highly genetically diversified Vibrio parahaemolyticus in seafood imported from Asian countries," Int J Food Microbiol, 52: 181-7 62 Xu, M., Iida, T., Yamamoto, K., Takarada, Y., Miwatani, T., Honda, T (1994) "Demonstration and characterization of simultaneous production of a thermostable direct hemolysin ( TDH/I) and a TDH-related hemolysin (TRHx) by a clinically isolated Vibrio parahaemolyticus strain, TH3766," Infect Immun, 62(1): 166-71 63 Yamazaki, M., Inuzuka, K., Matsumoto, M., Miwa, Y., Hiramatsu, R., Matsui, H., Sakae, K., Suzuki, Y., Miyazaki, Y (2003) "[Epidemiological study of outbreaks and sporadic cases due to Vibrio parahaemolyticus-serotype O3:K6 in Aichi Prefecture, Japan, during 1988 and 2001]," Kansenshogaku Zasshi, 77(12): 1015-23 64 Yu, P Puhr N., Bopp, C., Gerner-Smidt, P., Painter, J., Vibrio parahaemolyticus hemolysins associated with decreased hospitalization from shellfish-borne illness, in Conference on Emerging Infectious Diseases 2006: Atlanta, Ga., p 19–22 77 Luận văn thạc sỹ Công nghệ sinh học 65 Nguyễn Hoài Thu ZenYoji, H., Sakai, S., Terayama, T., al, et (1965) "Epidemiology, enteropathogenicity and classification of Vibrio parahaemolyticus," J Infect Dis, 115: 436-44 66 http://vietsciences.org/ 78 ... thành phố lớn Nhằm hiểu sâu đặc tính chủng V parahaemolyticus gây ngộ độc thực phẩm Hà Nội, tiến hành đề tài nghiên cứu ? ?Đặc điểm dịch tễ học phân tử chủng V parahaemolyticus phân lập đƣợc bệnh. .. quan chủng V parahaemolyticus phục v? ?? cho công tác giám sát dịch tễ học v? ?? ngộ độc thức ăn vi khuẩn gây Dƣới số phƣơng pháp sinh học phân tử thƣờng dùng để nghiên cứu đặc tính phân loại V parahaemolyticus: ... hình ngộ độc thực phẩm V parahaemolyticus giới .15 1.1.2 Tình hình ngộ độc thực phẩm V parahaemolyticus Việt nam 16 1.1.3 Đặc điểm lâm sàng 16 1.1.4 Phòng chống bệnh .17 1.2 Vi