BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI Nguyễn Thu Quỳnh NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VÀ SINH KHẢ DỤNG VIÊN NÉN METRONIDAZOL GIẢI PHÓNG TẠI ĐẠI TRÀNG Chuyên ngành: Công nghệ dược phẩm bào chế thuốc Mã số: 62720402 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC Hà Nội, năm 2017 Công trình hoàn thành tại: Bộ môn Bào chế- Trường Đại học Dược Hà Nội Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Nguyễn Thanh Hải GS.TS Võ Xuân Minh Phản biện 1: Phản biện 2: Phản biện 3: Luận án bảo vệ trước Hội đồng đánh giá cấp trường họp tại: Vào hồi .ngày tháng năm Có thể tìm hiểu luận án tại: Thư viện Quốc gia Việt nam Thư viện Trường Đại học Dược Hà Nội KÝ HIỆU VIẾT TẮT DC Dược chất ĐT Đại tràng Cơ quan quản lý thực phẩm dược phẩm Mỹ FDA (Food Drug Administration) GPTĐT Giải phóng đại tràng HPMC Hydroxy propyl methyl cellulose MTZ Metronidazol Tlag Thời gian tiềm tàng ĐẶT VẤN ĐỀ Metronidazol kháng sinh phổ rộng, sử dụng đơn độc phối hợp với dược chất khác để điều trị bệnh như: bệnh viêm nhiễm đường sinh dục, bệnh viêm lợi, bệnh loét dày- tá tràng vi khuẩn Helicobacter pylori, bệnh viêm gan amip, bệnh nhiễm trùng hệ thần kinh trung ương Bacteroides, bệnh viêm đại tràng cấp mạn tính amip Trên thị trường, metronidazol thường bào chế dạng thuốc quy ước viên nén, viên nang thuốc tiêm Các dạng bào chế có sinh khả dụng cao (SKD > 80%) nên hiệu điều trị bệnh: viêm loét dày- tá tràng, viêm gan, nhiễm trùng hệ thần kinh trung ương nồng độ thuốc máu cao Tuy nhiên, với bệnh viêm đại tràng cấp mạn tính, dạng bào chế thường không đạt hiệu tối ưu nồng độ thuốc đại tràng thấp Nhằm mục đích nâng cao hiệu điều trị bệnh viêm đại tràng giảm tác dụng không mong muốn, hướng nghiên cứu phát triển dạng bào chế có khả tập trung nồng độ dược chất cao đại tràng phù hợp Trong năm qua, giới có nhiều công trình nghiên cứu dạng thuốc giải phóng đại tràng chứa metronidazol Ở nước, dạng viên quy ước chứa metronidazol có nhiều chế phẩm lưu hành thị trường Về viên nén chứa metronidazol giải phóng đại tràng, có vài tác giả nghiên cứu bào chế Tuy nhiên, kết nghiên cứu bước đầu chưa có công trình nghiên cứu đánh giá sinh khả dụng dạng bào chế Xuất phát từ thực tiễn trên, đề tài: ″Nghiên cứu bào chế sinh khả dụng viên nén metronidazol giải phóng đại tràng″ * Mục tiêu luận án • Xây dựng công thức quy trình bào chế viên nén metronidazol giải phóng đại tràng quy mô 5.000 viên • Xây dựng tiêu chuẩn chất lượng bước đầu đánh giá độ ổn định viên nghiên cứu • Bước đầu đánh giá sinh khả dụng viên nghiên cứu chó thí nghiệm * Nội dung nghiên cứu luận án • Xây dựng công thức viên nhân phương pháp xát hạt ướt • Xây dựng công thức bào chế viên nén metronidazol giải phóng đại tràng kỹ thuật bao dập bao bồi • Xây dựng quy trình bào chế viên nén metronidazol giải phóng đại tràng quy mô 5.000 viên • Xây dựng tiêu chuẩn sở đánh giá độ ổn định viên nghiên cứu • Bước đầu đánh giá sinh khả dụng viên nghiên cứu * Những đóng góp luận án • Sử dụng phương pháp bao dập bao bồi để bào chế viên nén MTZ giải phóng đại tràng với tá dược pectin (là polyme bị phân hủy vi sinh vật đại tràng) • Xây dựng mô hình đánh giá giải phóng dược chất in vitro sở Tlag- pH- enzym vi sinh vật đại tràng * Cấu trúc luận án Luận án gồm 158 trang, 78 bảng, 39 hình, 112 tài liệu tham khảo (15 tài liệu tiếng việt, 97 tài liệu tiếng anh) Bố cục sau: Đặt vấn đề trang, tổng quan 38 trang, đối tượng phương pháp nghiên cứu 23 trang, kết nghiên cứu 75 trang, bàn luận 18 trang, kết luận trang, đề xuất trang, danh mục công trình công bố có liên quan đến luận án trang, tài liệu tham khảo 10 trang Ngoài ra, luận án có phụ lục kèm theo 25 bảng 16 hình CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 METRONIDAZOL Trình bày nội dung về: công thức, tính chất lý hóa, phương pháp định lượng, dược động học, tác dụng, chế, định, tương tác thuốc, tác dụng không mong muốn, chống định, dạng bào chế metronidazol thị trường 1.2 THUỐC GIẢI PHÓNG TẠI ĐẠI TRÀNG 1.2.1 Đặc điểm sinh lý đại tràng liên quan đến dạng thuốc Trình bày nội dung về: Cấu tạo vận động đại tràng, hấp thu nước chất điện giải, pH, vi sinh vật đại tràng, yếu tố ảnh hưởng đến thời gian lưu giải phóng thuốc đại tràng 1.2.2 Dạng thuốc giải phóng đại tràng 1.2.2.1 Ưu điểm hạn chế dạng thuốc • Ưu điểm điều trị bệnh điều trị chỗ, bệnh theo nhịp sinh học, protein peptid, phân phối vacxin • Hạn chế: Đưa thuốc đến đại tràng phải qua dày ruột non (chịu ảnh hưởng pH, enzym dày ruột non) Đại tràng nước, nhung mao, nhu động nên trình giải phóng dược chất khó khăn 1.2.2.2 Phân loại thuốc giải phóng đại tràng • Hệ phụ thuộc pH • Hệ phụ thuộc thời gian • Hệ thẩm thấu • Hệ phụ thuộc áp suất • Tiền thuốc • Sử dụng polyme bị phân hủy vi sinh vật • Hệ giải phóng đại tràng dạng hạt 1.2.2.3 Phương pháp bào chế dạng thuốc giải phóng đại tràng Phương pháp bào chế dạng viên giải phóng đại tràng hay sử dụng phương pháp bao với kỹ thuật bao dập, bao khô, bao màng mỏng Đặc điểm chung kỹ thuật bao thường sử dụng tá dược bao polyme có khả giải phóng dược chất đặc hiệu đại tràng polysaccarid tự nhiên (pectin, chitosan, gôm Guar, alginat, inulin, ) polyme có đặc tính phụ thuộc pH, thời gian • Phương pháp bao khô: Bao khô phương pháp bao bột nguyên liệu bao trực tiếp lên dạng bào chế rắn không sử dụng sử dụng dung môi sử dụng nhiệt trình ủ để tạo thành lớp bao Gồm loại: - Bao bột khô với chất hóa dẻo - Bao khô dựa kết dính nhiệt - Bao khô tĩnh điện - Bao khô với chất hóa dẻo- tĩnh điện- kết dính nhiệt • Phương pháp bao dập: Kỹ thuật bao dập dựa sở dùng lực nén định để tạo lớp bao kiểm soát giải phóng dược chất quanh viên nhân Kỹ thuật không sử dụng dung môi, chất hóa dẻo nhiệt độ trình bao • Phương pháp bao màng mỏng: Ứng dụng hơn, sử dụng polyme phụ thuộc pH số polyme phân hủy theo chế ăn mòn trương nở hòa tan HPMC, Eudragit, cellulose acetat phthalat, hydroxy propyl methyl cellulose acetat succinat • Ngoài dạng viên đa lớp, viên thẩm thấu, viên nang GPTĐT 1.2.4 Phương pháp đánh giá chất lượng 1.2.4.1 Đánh giá giải phóng in vitro Do đặc điểm sinh lý đại tràng có nhiều điểm khác biệt dày ruột non, nên mô hình thử giải phóng in vitro có số điểm cải tiến so với phương pháp thử hòa tan dạng thuốc rắn quy ước Qua tổng hợp tài liệu tham khảo, phương pháp chia thành loại: • Mô hình thử giải phóng in vitro dựa sở Tlag- pH • Mô hình thử giải phóng in vitro sử dụng Tlag- pH- vi sinh vật đại tràng • Mô hình thử giải phóng in vitro sử dụng Tlag- pH- enzym vi sinh vật đại tràng 1.2.4.2 Đánh giá giải phóng in vivo • Hiện nay, công trình nghiên cứu thường đánh giá giải phóng in vivo phương pháp chụp X- quang sử dụng chất đánh dấu sinh học sau chụp hình ảnh (X- quang gama) động vật thí nghiệm người tình nguyện • Xác định khối lượng metronidazol dịch đại tràng: Để so sánh rõ khác biệt giải phóng in vivo dạng thuốc quy ước dạng thuốc giải phóng đích đại tràng Tuy nhiên dạng thuốc mới, có công trình nghiên cứu phương pháp định lượng Dựa vào chất MTZ sử dụng nghiên cứu base hữu yếu tan cloroform có số tính chất tương tự alcaloid Chiết cloroform định lượng MTZ phương pháp HPLC • Xác định nồng độ MTZ huyết tương: Viên nén MTZ giải phóng đại tràng bào chế với mục đích tác dụng chỗ hạn chế tối đa tác dụng toàn thân Xác định nồng độ MTZ huyết tương có ý nghĩa quan trọng việc đánh giá dạng thuốc có hấp thu hay không? Các nghiên cứu thường sử dụng phương pháp HPLC với chuẩn nội carbamazepin tinidazol để định lượng MTZ huyết tương 1.3 MỘT SỐ NGHIÊN CỨU VỀ VIÊN METRONIDAZOL GIẢI PHÓNG TẠI ĐẠI TRÀNG Các nghiên cứu chủ yếu theo hướng bản: Sử dụng polyme polysaccarid bị phân hủy vi sinh vật đại tràng như: gôm Guar, pectin, chitosan, gôm xanthan Phương pháp bào chế chủ yếu phương pháp bao sử dụng kỹ thuật bao dập Về đánh giá in vitro sử dụng vi sinh vật đại tràng enzym vi sinh vật giải phóng Đánh giá in vivo thường sử dụng hình ảnh X- quang sử dụng chất đánh dấu sinh học CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU, TRANG THIẾT BỊ, ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên liệu, trang thiết bị đối tượng nghiên cứu 2.1.1 Nguyên liệu, hóa chất, trang thiết bị Các nguyên liệu sử dụng bào chế đạt tiêu chuẩn dược dụng theo dược điển Anh, Mỹ, Việt Nam; hóa chất sử dụng kiểm nghiệm đạt tiêu chuẩn tinh khiết phân tích theo quy định Các thiết bị phân tích đại nước EU, Mỹ, Nhật sản xuất, đảm bảo độ tin cậy 2.1.2 Đối tượng nghiên cứu Metronidazol nguyên liệu: Đạt tiêu chuẩn BP 2009 Động vật thí nghiệm: 12 chó ta trưởng thành, giống đực, khỏe mạnh, khối lượng từ 10- 12 kg 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Các phương pháp bào chế • Bào chế viên nhân: sử dụng phương pháp xát hạt ướt • Bào chế lớp bao kiểm soát giải phóng dược chất đại tràng: Phương pháp bao dập: Tiến hành thiết bị bao dập (ZPW26 CORE-COVERED TABLET PRESS) Viên nhân cấp vào cối qua phận cấp viên nhân Bột bao (lớp trên, lớp dưới) cấp vào cối phễu Tiến hành dập viên bao với lực dập định Phương pháp bao bồi: Tiến hành nồi bao truyền thống Viên nhân cho vào nồi bao Phun dung dịch tá dược dính bám bề mặt viên nhân Tiếp tục phun bột bao bám bề mặt viên nhân Sấy viên lặp lại quy trình đến viên bao đạt khối lượng yêu cầu • Xây dựng quy trình bào chế viên bao: xây dựng quy mô 5.000 viên/mẻ • Xây dựng tiêu chuẩn chất lượng viên nén bao: Dựa vào tiêu chất lượng lô bào chế theo công thức tối ưu • Theo dõi độ ổn định chế phẩm nghiên cứu: Tiến hành mẫu viên nén bào chế theo công thức tối ưu, đóng lọ thủy tinh màu kín Bảo quản điều kiện phương pháp thử lão hóa cấp tốc phương pháp thử dài hạn 2.2.2 Các phương pháp kiểm nghiệm • Kiểm nghiệm tiêu chung viên nén theo DĐVN IV • Phương pháp đánh giá chất lượng bột, hạt: độ đồng hàm lượng MTZ bột hạt b Lựa chọn tỷ lệ pectin- HPMC Tỷ lệ pectin- HPMC thay đổi 90- 10 đến 50- 50 Khối lượng lớp bao 200% Kết trình bày bảng 3.15 hình 3.4 Bảng 3.15 Tlag công thức lớp bao thay đổi tỷ lệ pectin- HPMC TL90:10 TL80:20 TL70:30 TL60:40 TL50:50 90- 10 80- 20 70- 30 60- 40 50- 50 Tlag (giờ) 5,71±1,02 5,79±0,04 5,86±0,02 6,58±0,01 6,98±0,04 Tỷ lệ % MTZ giải phóng Công thức Tỷ lệ pectin 104-HPMC 100 TL90:10 80 TL80:20 60 TL70:30 40 TL60:40 20 TL50:50 0 10 Thời gian (giờ) 15 Hình 3.4 Tỷ lệ % MTZ giải phóng từ viên chứa lớp bao có tỷ lệ pectin- HPMC thay đổi (n= 6) Nhận xét: Khi tăng lượng HPMC công thức màng bao, Tlag tăng từ 5,71 lên đến 6,98 Tỷ lệ pectin- HPMC 90- 10 (TL90:10) có Tlag (5,71 giờ) đạt yêu cầu đề tốc độ giải phóng dược chất ổn định nên lựa chọn cho khảo sát c Ảnh hưởng enzym Pectinex Ultra SP-L (26 PG/ml) Để đánh giá xác chế giải phóng viên MTZ giải phóng tràng theo tín hiệu sinh học, mẫu viên pectin - HPMC K100M có tỷ lệ 90- 10 (CT91) 50- 50 (CT55) tiến hành thử hòa tan với thay đổi nồng độ enzym dịch thử hòa tan Kết thử hòa tan trình bày bảng 3.18, hình 3.6 3.7 11 Bảng 3.18 Tlag (giờ) mẫu viên có nồng độ enzym thay đổi Công thức CT91 CT55 Nồng độ enzym (%) 0,11 0,22 0,33 0,0 5,73±0,21 5,65±0,10 5,00±0,07 5,01±0,04 7,75±0,02 7,88±0,14 7,73±0,11 6,98±0,10 6,97±0,10 80 0% CT91 0,11% CT91 0,22% CT91 0,33% CT91 0,44% CT91 60 40 20 0 10 Thời gian (giờ) Tỷ lệ % MTZ giải phóng 100 100 Tỷ lệ % MTZ giải phóng 0,44 6,42±0,01 15 80 60 0% CT55 0,11% CT55 0,22% CT55 0,33% CT55 0,44% CT55 40 20 0 10 Thời gian (giờ) 15 Hình 3.6 Tỷ lệ (%) MTZ giải Hình 3.7 Tỷ lệ (%) MTZ giải phóng mẫu CT91 môi phóng mẫu CT55 môi trường có lượng enzym thay đổi trường có lượng enzym thay đổi Nhận xét: Khi tăng lượng enzym vào môi trường thử hòa tan, Tlag giảm đáng kể hai mẫu viên CT91 (6,42- 5,00) CT55 (7,75- 6,97) Mức độ giảm Tlag mẫu CT91 nhiều mẫu CT55 Tăng lượng enzym từ 0,33- 0,44% Tlag có xu hướng không thay đổi Về khả giải phóng dược chất: Khi tăng lượng enzym vào môi trường thử hòa tan, có tăng rõ rệt mức độ tốc độ giải phóng dược chất Từ kết trên, lựa chọn nồng độ enzym 0,33 % so với thể tích môi trường hòa tan cho nghiên cứu Nghiên cứu khảo sát ảnh hưởng loại HPMC, tỷ lệ tá dược trơn, kích thước bột bao, đường kính chày cối đến chất lượng viên bao Lựa chọn công thức lớp bao dập sau: Pectin 104 450,0 mg; HPMC K100M 50,0 mg; Talc 30,0 mg; magnesi stearat 30,0 mg; Aerosil 15,0 mg 12 3.2.2 Kết xây dựng công thức viên metronidazol giải phóng đại tràng phương pháp bao bồi 3.2.2.1 Kết xây dựng công thức viên nhân Trên sở viên nhân phương pháp bao dập, tiến hành khảo sát yếu tố thuộc thành phần công thức nhằm mục đích không thay đổi độ hòa tan, tăng độ bền học viên nhân để thích hợp sử dụng phương pháp bao bồi Kết lựa chọn công thức viên nhân có thành phần sau: Metronidazol 200,0 mg; Disolcel 10,0 mg; Avicel PH102 25,0 mg; PVP K30 10,0 mg; talc 2,5 mg; magnesi stearat 2,5 mg Mẫu viên cho kết độ hòa tan tương tự viên nhân bao dập (giải phóng >85% DC sau 30 phút), độ cứng 8,3 kP, độ mài mòn 0,24% Viên nhân sử dụng cho phương pháp bao bồi 3.2.2.2 Kết xây dựng công thức lớp bao kiểm soát giải phóng dược chất đại tràng phương phap bao bồi a Lựa chọn khối lượng lớp bao Khối lượng lớp bao yếu tố quan trọng định Tlag tốc độ giải phóng dược chất sau Tlag Qua khảo sát cho thấy, sử dụng pectin đơn công thức lớp bao, trình bao khó khăn viên bao dính với dính vào nồi bao Thời gian bao thường kéo dài, hiệu suất bao thấp (H < 40%) Khi đánh giá độ hòa tan, Tlag ngắn (< giờ) nên không đạt yêu cầu Tlag Khi kết hợp thêm HPMC vào công thức lớp bao, cải thiện đáng kể mức độ thuận tiện trình bao, thời gian bao rút ngắn hiệu suất bao cao Thay đổi khối lượng lớp bao so với khối lượng viên nhân từ 50%, 75%, 100%, 130% đến 150% Kết trình bày bảng 3.26 hình 3.11 Bảng 3.26 Tlag viên có khối lượng lớp bao khác Mẫu viên Tlag (giờ) TL50% 2,48±0,24 TL75% 5,79±0,19 13 TL100% 6,99±0,21 TL130% 8,01±0,46 TL150% 8,56±0,31 Tỷ lệ % MTZ giải phóng 100 TL50% TL75% TL100% TL130% TL150% 80 60 40 20 0 gian (giờ) Thời 10 15 Hình 3.11 Tỷ lệ (%) MTZ giải phóng từ viên có khối lượng lớp bao khác (n=6) Nhận xét: Tăng khối lượng lớp bao Tlag tăng Mẫu viên khối lượng lớp bao 50% (TL50%) và 75% (TL75%) giải phóng dược chất không đều, độ lệch chuẩn lớn Mẫu viên khối lượng lớp bao (TL100%), DC giải phóng ổn định có Tlag gần đạt mục tiêu, nên lựa chọn cho nghiên cứu b Lựa chọn tỷ lệ pectin 104- HPMC K100M Thay đổi tỷ lệ pectin-HPMC từ 1- lên 4- Kết trình bày bảng 3.28 hình 3.12 Bảng 3.28 Tlag mẫu lớp bao có tỷ lệ pectin - HPMC K100M khác Mẫu viên P1H1 P2H1 P3H1 P4H1 6,99 ± 0,04 4,99 ± 0,07 4,99 ± 0,10 4,99 ± 0,06 Tlag (giờ) Tỷ lệ % MTZ giải phóng 100 80 P1H1 P2H1 P3H1 P4H1 60 40 20 0 5Thời gian (giờ) 10 15 Hình 3.12 Tỉ lệ (%) MTZ giải phóng từ viên có tỷ lệ pectin- HPMC K100M khác 14 Nhận xét: Tăng tỷ lệ pectin- HPMC thành phần bột bao từ 1:1 (P1H1) đến 2- (P2H1) Tlag giảm mạnh (6,99 xuống 4,99 giờ) Tiếp tục tăng từ 2- lên 4- không thấy khác biệt Tlag Mẫu viên tỷ lệ pectin- HPMC 2- có Tlag đạt yêu cầu tốc độ giải phóng DC ổn định, nên lựa chọn cho nghiên cứu tiếp Ngoài ra, luận án khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ talc, kích thước bột bao, loại tỷ lệ chất hóa dẻo, nồng độ tá dược dính quy trình ủ viên sau bao Kết lựa chọn công thức lớp bao bồi: Bột bao: pectin 104 : HPMC K100M : talc = 57% : 28% : 15% Kích thước bột bao 0,125 - 0,180 mm Dịch bao: 75% dung dịch HPMC E6 10% 25% DBP Tỷ lệ khối lượng lớp bao 100% so với khối lượng viên nhân Viên ủ điều kiện 600C/72 Bao bảo vệ viên HPMC E6 tỷ lệ 5% khối lượng viên So sánh kỹ thuật bao dập bao bồi mức độ thuận tiện thao tác, hiệu suất, chất lượng lớp bao tính khả thi nâng quy mô Kết cho thấy, số giai đoạn trình bao bồi tiến hành thủ công thích hợp quy mô nghiên cứu Kỹ thuật bao dập tiến hành thiết bị bao dập ZPW26 CORE- COVERED TABLET PRESS, có hiệu suất bao cao (≥ 90%), thông số kiểm soát chặt chẽ Kỹ thuật bao dập lựa chọn nâng quy mô nghiên cứu 3.3 Kết nghiên cứu xây dựng quy trình bào chế viên nén metronidazol giải phóng đại tràng quy mô 5.000 viên Quy trình bào chế viên MTZ giải phóng đại tràng gồm giai đoạn: Bào chế viên nhân bào chế lớp bao kiểm soát giải phóng dược chất đại tràng Trong giai đoạn bào chế, tiến hành đánh giá yếu tố nguy thông số trọng yếu quy trình cần thẩm định đề biện pháp xử lý 15 Kết cho thấy, với quy trình bào chế viên MTZ giải phóng đại tràng với thiết bị cụ thể, lựa chọn thông số thiết bị tương ứng với giai đoạn cụ thể để bào chế lô chế phẩm đạt yêu cầu chất lượng có đồng chất lượng lô bào chế 3.4 Kết nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn sở độ ổn định viên nén metronidazol giải phóng đại tràng 3.4.1 Kết nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn sở Tiến hành bào chế lô chế phẩm, quy mô lô 5.000 viên Dựa vào kết kiểm nghiệm tiêu chất lượng, đề xuất tiêu chuẩn sở viên nén thực nghiệm Kết trình bày bảng 3.63 Bảng 3.63 Đề xuất tiêu chuẩn chất lượng viên bao metronidazol GPTĐT (n= 3) Chỉ tiêu chất lượng Tính chất Định tính Độ đồng khối lượng (%, n= 20) Độ hòa tan (%, n= 6, TB± SD) giờ Định lượng (%, n=10, TB± SD) Kết đánh giá Dự kiến Lô Lô giới hạn Viên bao, nhẫn bóng, màu vàng ngà tiêu Chế phẩm phải có phép thử định tính chuẩn metronidazol (theo Dược Điển Việt Nam IV, trang 409) Lô ± 2,17 ± 2,28 ± 2,33 ±5 2,9 ± 1,54 85,16 ± 3,28 93,55 ± 2,17 3,2 ± 0,89 87,09 ± 3,82 95,17 ± 2,96 5,87 ± 1,05 84,72 ± 2,97 92,79 ± 1,66 ≤ 10 ≥ 75 ≥ 85 102,0 ± 0,67 99,7 ± 0,93 102,7 ± 0,48 95 - 105 Các kết kiểm nghiệm thẩm định có phiếu kiểm nghiệm Viện kiểm nghiệm thuốc Trung Ương 16 3.4.2 Đánh giá độ ổn định • Chỉ tiêu theo dõi: hình thức, độ hòa tan, hàm lượng MTZ, Tlag theo tiêu chuẩn xây dựng • Kết quả: Sau 24 tháng bảo quản điều kiện phòng thí nghiệm tháng điều kiện lão hóa cấp tốc, tiêu hình thức, hàm lượng, độ hòa tan, Tlag mẫu viên không thay đổi đáng kể so với ban đầu Sử dụng phần mềm Minitab 17 tính toán dựa số liệu thực nghiệm, dự đoán tuổi thọ chế phẩm 36 tháng 3.5 Kết nghiên cứu đánh giá in vivo 3.5.1 Xác định vị trí viên metronidazol giải phóng đại tràng đường tiêu hóa chó thí nghiệm 10 giờ 16 Hình ảnh X- quang viên thực nghiệm đường tiêu hóa chó Nhận xét: Từ hình ảnh X- quang cho thấy, viên thực nghiệm đến đại tràng lên sau đại tràng xuống sau Nguyên nhân đại tràng chó ngắn đại tràng người nên thuốc đến đại tràng xuống 17 nhanh Tại thời điểm 16 hình ảnh viên thuốc Điều thuốc phân hủy nên hình ảnh thuốc 3.5.2 Xác định khối lượng metronidazol giải phóng dịch đại tràng Metronidazol chiết từ dịch đại tràng cloroform định lượng MTZ dịch chiết phương pháp HPLC với thông số: Cột Restek Ultra C8 (15 cm: 4,6 mm; 5µm) Pha động nước: methanol tỷ lệ 80: 20 Tốc độ dòng ml/phút Thể tích tiêm 20 µl Detector tử ngoại, bước sóng phát 254 nm Phương pháp định lượng thẩm định theo tiêu chí FDA Kết định lượng trình bày bảng 3.71 Bảng 3.71 Diện tích pic khối lượng MTZ STT dịch đại tràng chó (n = 3) Diện tích pic (mAU.s) Khối lượng MTZ (mg) 12737098 127,0 12006951 119,7 12469582 124,3 Nhận xét: Tại thời điểm 16 giờ, có khoảng gần 60% MTZ so với khối lượng ghi nhãn định lượng dịch đại tràng chó 3.5.3 Định lượng metronidazol huyết tương chó thí nghiệm Để đánh giá xác giải phóng viên bao thực nghiệm giải phóng đại tràng, nghiên cứu tiến hành so sánh nồng độ MTZ máu viên nén quy ước metronidazol 200 mg viên bao metronidazol giải phóng đại tràng Loại tủa protein huyết tương methanol Định lượng MTZ huyết tương phương pháp HPLC với thông số: Cột RESTEK Ultra C18 (5 µm; 250× 4,6 mm) Nhiệt độ phân tích: nhiệt độ phòng Detector UV bước sóng 320 nm Thể tích tiêm 20 µl 18 Pha động acetonitril- đệm phosphat pH 4,5 với tỷ lệ thay đổi 95; 10 - 90; 20 - 80; 30 - 70; 40 - 60 Tốc độ dòng ml/phút Kết cho thấy hệ dung môi acetonitril: đệm phosphat pH 4,5 tỷ lệ 30- 70 có khả tách tốt nhất, pic nhọn, chân pic gọn, pic tách rời có thời gian phân tích hợp lý, chọn làm pha động Phương pháp thẩm định theo tiêu chí FDA phương pháp phân tích dịch sinh học Kết định lượng trình bày bảng 3.78 hình 3.39 Bảng 3.78 Nồng độ MTZ huyết tương thuốc đối chiếu thuốc nghiên cứu theo thời gian Thời gian (giờ) 0,5 1,5 Nồng độ MTZ (µg/ml) Viên Viên MTZ nhân GPTĐT 0,00 0,00 0,00 0,00 2,39 0,00 5,33 0,00 11,51 0,00 35,48 0,00 28,72 0,00 24,33 0,00 19 Thời gian (giờ) 10 12 15 24 Nồng độ MTZ (µg/ml) Viên Viên MTZ nhân GPTĐT 22,31 0,00 21,06 0,00 20,95 0,00 19,36 0,00 18,95 0,00 17,73 0,18 15,90 2,03 0,28 0,96 Nồng độ (µg/ml) 40 Viên nhân Viên MTZ GPTĐT 30 20 10 0 10 20 Thời gian (giờ) 30 Hình 3.39 Đường cong nồng độ MTZ huyết tương chó viên nhân viên MTZ GPTĐT theo thời gian Nhận xét: Kết nghiên cứu cho thấy, với dạng viên quy ước nồng độ MTZ đạt nồng độ lớn thời điểm giờ, sau giảm dần đến 24 Với dạng viên MTZ giải phóng đại tràng nồng độ MTZ máu thời điểm đến 12 Tại thời điểm 15 có nồng độ MTZ máu nhỏ Điều chứng tỏ MTZ hấp thu không đáng kể vào máu dạng viên metronidazol giải phóng đại tràng so với dạng viên quy ước CHƯƠNG BÀN LUẬN Viên metronidazol GPTĐT với tá dược pectin (loại polyme bị phân hủy vi sinh vật đại tràng) phải đạt yêu cầu Tlag nằm khoảng - Pectin sử dụng nghiên cứu loại pectin 104 có khả chịu nén tốt, dùng phương pháp dập thẳng Tuy nhiên, pectin dễ tan nước, sử dụng đơn độc khó kiểm soát giải phóng dược chất đại tràng Kết cho thấy, tỷ lệ pectin 104 đơn so với khối lượng viên nhân 5- Tlag kéo dài 3,3 Kết tương tự nghiên cứu số tác giả công bố Để kiểm soát GPDC, pectin 104 kết hợp HPMC K100M nhằm ổn định Tlag viên đạt 5- Khối lượng pectin 20 HPMC yếu tố ảnh hưởng nhiều đến Tlag tốc độ giải phóng dược chất sau Tlag Trong môi trường hòa tan mô dịch đại tràng, pectin bị thủy phân enzym pectinase, tạo lỗ xốp lớp bao, tạo điều kiện cho nước thấm vào viên nhân, viên nhân trương nở dược chất giải phóng Lớp bao dày thời gian để môi trường hòa tan thấm vào nhân lớn, Tlag viên kéo dài Viên nghiên cứu bào chế phương pháp bao dập bao bồi Phương pháp bao bồi, lớp bao có liên kết chặt chẽ với chất hóa dẻo tạo thành màng bao đồng Tuy nhiên hạn chế thiết bị, phương pháp phù hợp quy mô nghiên cứu phòng thí nghiệm Phương pháp bao dập, lớp bao đơn dùng lực nén tạo thành lớp bao rắn Tuy nhiên, phương pháp tiến hành đơn giản, hiệu suất cao, thiết bị đại, dễ kiểm soát thông số trình bao Đây nghiên cứu triển khai thiết bị bao dập ZPW26 CORE- COVERED TABLET PRESS trường Đại học Dược Hà Nội Về mô hình đánh giá giải phóng in vitro: Hiện nay, chưa có phương pháp đánh giá giải phóng in vitro dạng viên giải phóng đại tràng Dược điển Trong nghiên cứu, xây dựng mô hình đánh giá giải phóng in vitro dựa sở Tlag- pH- enzym vi sinh vật đại tràng Mô hình có tính ổn định khả thi mô hình có sử dụng dịch đại tràng chuột, lợn, người, số tác giả công bố Về mô hình đánh giá giải phóng in vivo, chưa có nghiên cứu sâu lĩnh vực này, nghiên cứu dừng lại chụp hình ảnh viên xác định Tlag viên đường tiêu hóa chó, thỏ, người, 21 Mô hình định lượng MTZ dịch đại tràng lần xây dựng Việt Nam Kết cho thấy viên thực nghiệm chủ yếu giải phóng dược chất đại tràng hấp thu vào máu không đáng kể KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT KẾT LUẬN Từ kết nghiên cứu luận án, rút kết luận sau: Về xây dựng công thức quy trình bào chế a Đã bào chế viên nhân metronidazol đạt yêu cầu thử hòa tan độ bền học thích hợp với phương pháp bào chế lớp bao kiểm soát giải phóng: Bao dập bao bồi b Đã bào chế viên MTZ giải phóng đại tràng phương pháp bao bồi: - Lựa chọn công thức bao viên với thành phần bột bao gồm pectin 104 - HPMC K100M Chất hóa dẻo DBP Tỷ lệ lớp bao 100% so với khối lượng viên nhân Các yếu tố thuộc thành phần công thức tỷ lệ pectin: HPMC K100M, tỷ lệ lớp bao, loại tỷ lệ chất hóa dẻo có ảnh hưởng nhiều đến khả giải phóng dược chất viên bao - Xây dựng quy trình bào chế viên MTZ giải phóng đại tràng phương pháp bao bồi quy mô 1000 viên Tiến hành thiết bị nồi bao truyền thống với thông số xác định Trong đó, yếu tố quy trình nhiệt độ ủ thời gian ủ có ảnh hưởng lớn đến cấu trúc lớp bao khả kiểm soát giải phóng dược chất viên bao c Đã bào chế viên nén metronidazol giải phóng đại tràng phương pháp bao dập: - Lựa chọn công thức lớp bao dập với thành phần bột bao gồm pectin- HPMC K100M tỷ lệ 90 - 10, tá dược trơn magnesi stearat22 talc- Aerosil chiếm 15% khối lượng pectin HPMC Tỷ lệ lớp bao khoảng 200% so với khối lượng viên nhân - Đã xây dựng quy trình bào chế viên MTZ giải phóng đại tràng phương pháp bao dập quy mô 5000 viên Tiến hành thiết bị bao dập ZPW26 CORE- COVERED TABLET PRESS với tốc độ dập viên vòng/phút Kích thước tiểu phân bột bao, thời gian trộn tốc độ trộn, tỷ lệ tá dược trơn thời gian, tốc độ trộn tá dược trơn ảnh hưởng nhiều đến đồng khối bột đồng khối lượng viên bề dày mặt viên Chế phẩm bào chế phương pháp bao dập bao bồi có đầy đủ đặc tính viên giải phóng đại tràng với Tlag in vitro 56 giờ, giải phóng hoàn toàn dược chất sau Xây dựng tiêu chuẩn đánh giá độ ổn định chế phẩm Đã xây dựng tiêu chuẩn sở viên nén MTZ giải phóng đại tràng với tiêu: tính chất, định tính, độ đồng khối lượng, độ hòa tan, hàm lượng Viên nén MTZ giải phóng đại tràng ổn định chất lượng suốt thời gian bảo quản điều kiện lão hóa cấp tốc điều kiện thường, dự đoán tuổi thọ thuốc 36 tháng Về đánh giá sinh khả dụng viên nén metronidazol giải phóng đại tràng a Xác định vị trí viên nén MTZ giải phóng đại tràng đường tiêu hóa chó phương pháp chụp X-quang: Viên thực nghiệm xác định đến đại tràng sau đến đại tràng xuống, không thấy hình ảnh viên thuốc thời điểm 16 23 b Định lượng MTZ huyết tương chó: So sánh nồng độ MTZ huyết tương viên nén MTZ giải phóng đại tràng viên nén quy ước cho thấy, có khác biệt rõ ràng nồng độ MTZ huyết tương chó viên nén MTZ GPTĐT viên nén MTZ quy ước Tại thời điểm nồng độ MTZ huyết tương chó với dạng viên nén MTZ giải phóng đại tràng Nồng độ MTZ cao huyết tương thời điểm 15 c Xác định khối lượng MTZ giải phóng từ viên nén MTZ GPTĐT dịch đại tràng chó thời điểm 16 giờ: Kết định lượng khoảng 60 % lượng MTZ giải phóng từ viên nén MTZ giải phóng đại tràng ĐỀ XUẤT Hoàn thiện công thức quy trình bào chế viên metronidazol giải phóng đại tràng quy mô lớn Tiếp tục đánh giá độ ổn định nghiên cứu sâu sinh khả dụng viên giải phóng đại tràng 24 DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN Nguyễn Thu Quỳnh, Phạm Thị Minh Huệ, Nguyễn Thanh Hải, Võ Xuân Minh (2013), “Nghiên cứu bào chế viên nén metronidazol giải phóng đại tràng phương pháp bao dập”, Tạp chí dược học,444, tr.17- 20 Nguyễn Thu Quỳnh, Phạm Thị Minh Huệ, Nguyễn Thanh Hải, Võ Xuân Minh (2014), “Nghiên cứu bào chế viên nén metronidazol giải phóng đại tràng phương pháp bao bột”, Tạp chí dược học,457, tr.13- 17 Phạm thị Thanh Tâm, Nguyễn Thu Quỳnh, Nguyễn Thạch Tùng, Phạm Thị Minh Huệ, Nguyễn Thanh Hải, Võ Xuân Minh (2014), “ Nghiên cứu ảnh hưởng điều kiện ủ đến số đặc tính viên bao bồi giải phóng đại tràng chứa metronidazol”, Tạp chí Nghiên cứu dược &Thông tin thuốc, số 5, tr.175-180 Thach Tung Nguyen, Thi Minh Hue Pham, Thanh Hai Nguyen, Thanh Tam Pham, Thu Quynh Nguyen (2016), “Pectin/HPMC dry powder coating formulations for colon specific targeting tablets of metronidazole” Journal of Drug Delivery Science and Technology, 33, pp.19-27 25 ... nghiên cứu 3.3 Kết nghiên cứu xây dựng quy trình bào chế viên nén metronidazol giải phóng đại tràng quy mô 5.000 viên Quy trình bào chế viên MTZ giải phóng đại tràng gồm giai đoạn: Bào chế viên. .. chưa có công trình nghiên cứu đánh giá sinh khả dụng dạng bào chế Xuất phát từ thực tiễn trên, đề tài: Nghiên cứu bào chế sinh khả dụng viên nén metronidazol giải phóng đại tràng * Mục tiêu... bị phân hủy vi sinh vật • Hệ giải phóng đại tràng dạng hạt 1.2.2.3 Phương pháp bào chế dạng thuốc giải phóng đại tràng Phương pháp bào chế dạng viên giải phóng đại tràng hay sử dụng phương pháp