Header Page of 126 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Công trình ñược hoàn thành NGUYỄN THANH HƯNG Người hướng dẫn khoa học: GS.TS ĐÀO HÙNG CƯỜNG NGHIÊN CỨU TỔNG HỢP MUỐI CANXIHYDROXYCITRAT TỪ AXIT HIDROXYCYTRIC CỦA VỎ QUẢ BỨA Ở QUẢNG NGÃI Chuyên ngành: Hóa hữu Mã số: 60 44 27 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Phản biện 1: GS.TSKH TRẦN VĂN SUNG Phản biện 2: PGS.TS LÊ TỰ HẢI Luận văn ñược bảo vệ Hội ñồng bảo vệ chấm Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khoa học họp Đại học Đà Nẵng vào ngày 30 tháng năm 2012 TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Đà Nẵng - Năm 2012 Footer Page of 126 Có thể tìm hiểu luận văn tại: - Trung tâm Thông tin - Học liệu, Đại học Đà Nẵng - Thư viện Trường Đại học Sư Phạm, Đại học Đà Nẵng Header Page of 126 MỞ ĐẦU HCA làm tăng nồng ñộ serotonin có vai trò kiểm soát thèm ăn, Lý chọn ñề tài làm tăng trình tổ hợp glycogen tăng ñộ oxi hóa, ñốt cháy mỡ Theo Tổ chức Y tế giới, dư cân béo phì ñề thừa…Dạng lỏng tự HCA có xu hướng không ổn ñịnh, dễ bị tài mà ngành y ñang quan tâm ñối với nước phát triển lacton hóa nên việc tổng hợp muối ñi từ HCA ñã ñược nghiên cứu ñang phát triển Hội nghị quốc tế lần thứ VIII béo phì họp Paris nhằm làm tăng ổn ñịnh hoạt tính sinh học HCA ngày 01/09/1998 nhận ñịnh Bệnh béo phì ñã trở thành ñại dịch Lowenstein ñã mô tả muối HCA dựa kim loại kiềm, toàn cầu, vấn ñề lớn ñang ñe dọa sức khoẻ cộng ñồng Số liệu kiềm thổ như: kali, natri, canxi… thống kê gần ñây Tổ chức Y tế giới cho thấy số người béo phì ñang gia tăng cách ñáng báo ñộng với 1,5 tỉ người toàn cầu Muối canxi (-)-hydroxycitrat có hoạt tính sinh học HCA Canxi loại khoáng chất quan trọng cần thiết cho phát triển vững Cây bứa, bứa tròn dài – tên khoa học Garcinia xương giúp làm giảm nguy loãng xương Canxi oblongifolia Champ Ex Benth, thuộc họ Bứa chi bứa Được giữ vai trò chất truyền dẫn thông tin tham gia vào hầu hết Antonie Laurent de Jusieu ñưa năm 1789, loại thực vật có hoạt ñộng thể tế bào Như vậy, hiệu giảm hoa bao gồm khoảng 50 chi 1.200 loài thân gỗ hay cân muối canxi (-)-hydroxycitrat giúp bổ sung lượng canxi bụi Cây mọc hoang rừng thứ sinh tỉnh từ Hà Tuyên, cần thiết cho phát triển thể Ở Mỹ, Hydrotrim sản phẩm Vĩnh Phú, Quảng Nam, Đà Nẵng, Quảng Ngãi, Tây Nguyên ñến ñộc quyền ñược ñiều chế từ muối canxi HCA, có hiệu cao Nam Bộ việc ñiều trị giảm cân ñược người tiêu dùng ưa Trên giới việc nghiên cứu bứa ñã có từ lâu,tính chuộng ñến ñã có hàng trăm công trình nghiên cứu bứa bao gồm: Với lý mà chọn ñề tài: “Nghiên cứu tổng chiết tách, xác ñịnh thành phần hoá học hợp chất hữu cơ, ứng hợp muối canxihydroxycitrat từ axit hidroxycytric vỏ bứa dụng công nghệ thực phẩm, công nghệ dược phẩm, ñặc biệt Quảng Ngãi ” chế phẩm giảm béo Mục ñích nghiên cứu HCA ñược chiết từ vỏ Bứa có tác dụng ngăn chặn trình tích lũy mỡ, cải thiện bilance máu, kìm hãm trình - Khảo sát trình chiết tách axit hidroxycytric từ vỏ bứa chuyển hóa lượng ñường thừa thể thành mỡ, giúp ngăn chặn - Xây dựng quy trình tổng hợp muối canxihydroxycitrat trình béo phì Ngoài ra, HCA cải thiện giảm loại mỡ xấu - Đóng góp thêm thông tin, tư liệu khoa học như: tryglixerit, CDL cholesterol, cholesterol toàn phần tăng HDL bứa, tạo sở khoa học ban ñầu cho nghiên cứu sâu ứng dụng cholesterol loại mỡ có tác dụng bảo vệ tim mạch Bên cạnh ñó, axit hidroxycytric Footer Page of 126 Header Page of 126 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 3.1 Đối tượng nghiên cứu: Phương pháp phân tích công cụ: Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC), phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử (AAS), phương pháp ño phổ hồng ngoại (IR) Vỏ bứa (Garcinia oblongifolia Champ Ex Benth.) xã Bình Hải Bình Hoà, huyện Bình Sơn, tỉnh Quảng Ý nghĩa khoa học tính thực tiễn ñề tài Từ nghiên cứu trên, ñề tài ñã thu ñược số kết với Ngãi 3.2 Phạm vi nghiên cứu: ý nghĩa sau: - Xây dựng quy trình chiết tách axit hidroxycytric từ vỏ - Chiết tách axit hidroxycytric phương pháp chưng ninh Kiểm tra sản phẩm chiết phương pháp chuẩn ñộ axit-bazơ, bứa khô phổ hồng ngoại (IR) phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) - Xây dựng quy trình tổng hợp muối canxihydroxycitrat từ axit hidroxycytric ñược chiết vỏ bứa - Tổng hợp muối canxihydroxycitrat khảo sát ảnh hưởng yếu tố: pH, thể tích thời gian tới hiệu suất trình tổng - Cung cấp thông tin khoa học thành phần cấu tạo muối canxihydroxycitrat hợp muối - Tinh chế muối kiểm tra sản phẩm muối ñã tinh chế phương pháp ño phổ IR, HPLC xác ñịnh hàm lượng canxi muối - Làm sở liệu ñể ứng dụng muối canxihydroxycitrat thực tế Cấu trúc luận văn Luận văn phần mở ñầu, kết luận, kiến nghị tài liệu tham Phương pháp nghiên cứu 4.1 Nghiên cứu lý thuyết: khảo Nội dung luận văn chia làm 03 chương: Chương 1: Tổng quan Chương 2: Nguyên liệu phương pháp nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu hợp chất thiên nhiên, tổng quan tài liệu ñặc ñiểm hình thái thực vật, thành phần hoá học, ứng dụng số loài thực vật thuộc họ bứa Clusiaceae 4.2 Phương pháp thực nghiệm: Phương pháp chiết tách: Phương pháp chiết chưng ninh sử dụng dung môi nước cất Footer Page of 126 Chương 3: Kết thảo luận Header Page of 126 CHƯƠNG TỔNG QUAN Phương pháp thuỷ nhiệt 1.1 CÂY BỨA Phương pháp clo hoá 1.1.1 Bộ chè Phương pháp vô hoá chất hữu Để xác ñịnh nguyên tố vô hợp chất hữu 1.1.1.1 Họ Chè (Theaceae) 1.1.1.2 Họ Măng cụt (Clusiaceae) thực vật, ñộng vật, muốn chuyển hợp chất hữu vào dung dịch, 1.1.2.Bứa trước hết ta phải chuyển chất ñó thành chất vô Cách ñó gọi 1.1.3 Phân loại bứa vô hoá Vô hoá lối khô: Cách thường dùng ñơn 1.1.3.1 Bứa 1.1.3.2 Bứa mủ vàng giản Ta ñem nung mẫu khoảng 500-6000C chén platin 1.1.3.3 Bứa nhà thạch anh, chất hữu bị ñốt cháy, tro lại chất vô 1.1.3.4 Garcinia cowa Roxb khó bay Cần ý trình nung số 1.1.3.5 Garcinia cambogia nguyên tố bay halogen, thuỷ ngân, lưu huỳnh Cũng 1.1.3.6 Garcinia indica cần ñốt cháy chất hữu bình kín, áp suất 1.1.3.7 Garcinia atro Viridis cao phân huỷ cách nung chảy ñối với chất vô cơ, 1.1.3.8 Garcinia dulcis phải thêm chất oxi hoá như: KNO3, Na2O2 1.1.3.9 Garcinia hombroniana Vô hoá lối ướt: Cách ñược dùng không 1.1.3.10 Garcinia echinocarpa thuận tiện, ñược dùng không dùng lối khô ñược Có thể 1.1.4 Dẫn xuất HCA phân huỷ chất hữu H2SO4 ñặc, hỗn hợp H2SO4 + HNO3, 1.2 CÁC PHƯƠNG PHÁP KĨ THUẬT HClO4 thêm H2O2, KMnO4 ñể làm tăng nhanh trình phân 1.2.1 Các phương pháp phân huỷ mẫu phân tích huỷ Muốn phân tích chất ñối tượng ñó, trước hết ta Vô hoá lối khô ướt kết hợp: Là kết hợp hai phải chuyển chất ñó vào dung dịch, ñặc biệt với ñối tượng phân tích phương pháp Phương pháp ñược sử dụng nhiều chất rắn Có cách chuyển chất rắn thành dung dịch: phương pháp ướt 1.2.2 Phương pháp trọng lượng phương pháp khô 1.2.2.1 Xác ñịnh ñộ ẩm nguyên liệu Phân loại: Phương pháp ướt Phương pháp khô Footer Page of 126 1.2.2.2 Xác ñịnh hàm lượng tro nguyên liệu 1.2.3 Phương pháp sắc ký lỏng cao áp (HPLC) Header Page of 126 10 Trong phương pháp tách làm chất, phương pháp sắc ký nghệ Trong HPLC, hỗn hợp cần phân tích ñược hòa tan xem hiệu lực cả, cho phép tách ñược dung môi thích hợp, tiêm thể tích xác vào phận tiêm hỗn hợp phức tạp gồm hàng chục, chí hàng trăm cấu tử mẫu ñược mang vào cột dòng chảy liên tục dung Sắc ký trình tách phụ thuộc vào phân bố khác môi (pha ñộng) ñó mẫu ñược hòa tan Sự tách diễn cột cấu tử hỗn hợp pha ñộng thể tích pha tĩnh phim có chứa hạt xốp có diện tích bề mặt lớn (pha tĩnh) Các cấu tử mỏng mẫu liên tục tương tác với pha tĩnh Pha ñộng (còn gọi chất - Pha ñộng thường trạng thái lỏng, hợp chất hữu rửa giải) ñược bơm qua cột ñược nhồi chặt hạt sắc ký Với việc hỗn hợp hợp chất hữu với nước Các chất phải thỏa chọn pha ñộng vật liệu nhồi cột thích hợp, cấu tử mẫu mãn ñiều kiện sau: hòa tan ñược chất hữu cơ; trơ với pha di chuyển dọc cột với tốc ñộ khác Khi cấu tử tĩnh; có ñộ nhớt thấp tốt, bền theo thời gian, có ñộ tinh thoát khỏi cột ñi vào detector thích hợp, ñây tín hiệu khiết cao; cân ñộng thiết lập nhanh; phù hợp với detector ñem ñược ghi lại chuyển sắc ký ñồ, cho biết diện sử dụng… cấu tử dạng pic Khi ñó lượng cấu tử có mẫu - Pha tĩnh thường hạt nhỏ màng mỏng lỏng bám ñược tính toán dựa vào chiều cao diện tích pic ñều lên bề mặt chất mang trơ Nếu hạt phải có kích thước 1.2.4 Phương pháp chuẩn ñộ axit- bazơ [8] ñồng ñều, dạng hình cầu mảnh Phải ñảm bảo ñộ 1.2.5 Phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử (AAS) [7], [12] xốp ñịnh, trơ bền vững với ñiều kiện sắc ký Nếu dạng lỏng 1.2.6 Phương pháp chưng ninh phải màng phim mỏng bám ñều lên bề mặt chất mang trơ 1.2.7 Phương pháp phân tích vi sinh vật (chất mang trơ SiO2, Al2O3…) Trước ñây chủ yếu sử dụng sắc ký lỏng áp suất thường, thiết bị rẻ hiệu suất tách thấp, tốn dung môi ñể rửa giải, nên sử dụng HPLC Là kết phát triển suốt thập kỉ qua cải tiến thiết bị nhồi cột, HPLC lên phương pháp ñược ưa thích cho kĩ thuật tách phân tích ñịnh lượng dải rộng mẫu Phương pháp HPLC ñại, nhanh, hiệu quả, dò tìm lượng mẫu nhỏ ñến 200pg Những trường hợp áp dụng HPLC giới hạn, ñó HPLC ñã trở thành công cụ thiếu khoa học công Footer Page of 126 Tiêu chuẩn quy ñịnh mật ñộ cho phép vi sinh vật thực phẩm thay ñổi tùy theo nhóm vi sinh vật cần phân tích, ñối tượng thực phẩm, tiêu chuẩn vệ sinh an toàn thực phẩm nước Đối với vi sinh vật gây bệnh, mức ñộ nguy hiểm cao, tiêu chuẩn thường quy ñịnh không cho phép diện vi sinh vật gây bệnh ñơn vị khối lượng thực phẩm ñịnh Trường hợp cần ñịnh tính diện vi sinh vật Thông thường, tiêu chuẩn quy ñịnh mật ñộ vi sinh vật cho phép diện khối lượng thực phẩm ñịnh, trường hợp cần tiến hành ñịnh lượng mật ñộ vi sinh vật diện mẫu kiểm tra Header Page of 126 11 12 Kiểm tra tiêu vi sinh vật thực phẩm quan trọng CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ñược quy ñịnh Bộ Y tế là: tổng số vi khuẩn hiếu khí, E coli tổng số nấm men, nấm mốc 2.1 THIẾT BỊ - DỤNG CỤ - HÓA CHẤT 2.2 SƠ ĐỒ QUY TRÌNH THỰC NGHIỆM Xác ñịnh ñộ ẩm Quả bứa Xử lý nguyên liệu Hàm lượng tro Làm Hong khô Xay nhỏ Nguyên liệu sau xử lý Thành phần kim loại Chiết tách HCA Xác ñịnh tổng lượng axit Dịch chiết HCA Định lượng axit (HPLC) Khảo sát yếu tố ảnh hưởng pH Thể tích Thời gian Tổng hợp Canxihydroxycitrat Tinh chế Xác ñịnh hàm lượng canxi Footer Page of 126 Canxihydroxycitrat tinh khiết Đo phổ IR Đo phổ HPLC Header Page of 126 13 14 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 2.3 NGUYÊN LIỆU 2.3.1 Cây bứa 2.3.2 Thu nguyên liệu 3.1 MỘT SỐ TÍNH CHẤT VẬT LÝ CỦA NGUYÊN LIỆU 2.3.3 Xử lý nguyên liệu 3.1.1 Độ ẩm nguyên liệu 2.4 XÁC ĐỊNH MỘT SỐ TÍNH CHẤT VẬT LÝ 2.4.1 Xác ñịnh ñộ ẩm Bằng phương pháp trọng lượng, ñộ ẩm nguyên liệu ñược xác ñịnh tổng hợp bảng kết 3.1 2.4.2 Xác ñịnh hàm lượng tro 2.4.3 Xác ñịnh hàm lượng số kim loại phương pháp Bảng 3.1 Kết xác ñịnh ñộ ẩm vỏ bứa sấy khô Khối lượng Độ nước vỏ ẩm (g) (%) 9,249 0,848 8,39 10,098 9,277 0,821 8,13 10,099 9,230 0,869 8,61 STT Khối lượng vỏ Khối lượng vỏ mẫu trước sấy (g) sau sấy (g) chuẩn ñộ axit- bazơ 10,097 2.4.5 Chưng ninh nồi áp suất ñể thu dịch chiết axit 2.4.6 Xác ñịnh hàm lượng HCA mẫu phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử (AAS) 2.4.4 Chuẩn ñộ tổng lượng axit thu ñược phương pháp HPLC Nhận xét: Độ ẩm vỏ bứa khô khoảng 8,37 ± 2.4.7 Tổng hợp muối canxihydroxycitrat HCA Dịch chiết sau cô ñặc ñược trung hòa axit cách cho 0,24%, ñộ ẩm trung bình vỏ 8,37%, Với ñộ ẩm này, ñã bảo quản nguyên liệu thời gian dài làm thí nghiệm thêm dung dịch CaCl2 (32g/100ml dịch) Dung dịch thu ñược ñược không bị hư hỏng khuấy trộn khoảng 30-120 phút Khi thêm CaCl2 vào, lúc ñầu xuất 3.1.2 Hàm lượng tro kết tủa trắng, sau xuất ngày dày ñặc tạo thành bùn, Bảng 3.2 Kết xác ñịnh tỉ lệ tro vỏ bứa sấy khô pH hỗn hợp bùn thích hợp từ 9,5-11 Sử dụng dung dịch NaOH STT mẫu Khối lượng vỏ ñã sấy khô (g) Khối lượng cốc (g) Khối lượng vỏ sấy khô + cốc trước tro hóa (g) Khối lượng vỏ + cốc sau tro hóa (g) Khối lượng tro (g) Tỉ lệ tro (%) 4,039 4,150 4,221 16,750 19,560 32,120 20,789 23,710 36,341 16,792 19,603 32,166 0,042 0,043 0,046 1,04 1,03 1,09 10% (44,4g/400ml nước) ñể chỉnh ñộ pH Hỗn hợp bùn ñược lọc rửa với nước cất ñể loại bỏ tất muối bám vào Nước rửa ñược kiểm tra ion Clorua việc lọc rửa kết thúc không phát ion Clorua nước rửa Phần bánh ướt ñược sấy khô nhiệt ñộ 1000C ñể thu ñược dạng bột khô màu nâu xám muối HCCa Footer Page of 126 Header Page of 126 15 16 Nhận xét: Hàm lượng tro vỏ bứa khô khoảng 1,06 BYT Bộ Y Tế ngày 4/4/1998 việc ban hành Danh mục tiêu ± 0,03 % Hàm lượng tro vỏ khô thấp, chiếm khoảng chuẩn vệ sinh ñối với lương thực, thực phẩm hàm lượng kim 1,05 % khối lượng vỏ khô loại nặng nằm khoảng cho phép Như sử dụng vỏ 3.1.3 Xác ñịnh thành phần kim loại phương pháp AAS Bứa ñể làm thực phẩm dược phẩm mà không ảnh hưởng Kết xác ñịnh hàm lượng số kim loại vỏ bứa 3.1.4 Xác ñịnh tổng lượng axit mẫu chiết phương khô phương pháp ño AAS ñược xác ñịnh bảng 3.3 Bảng 3.3 Kết xác ñịnh hàm lượng số kim loại vỏ bứa Tên STT kim loại Sn Pb Zn Cu Fe As Phương pháp Kết Hàm lượng cho thử AAS (mg/L) phép (mg/kg) TCVN 61931996 TCVN 61931996 TCVN 61931996 TCVN 61931996 TCVN 61771996 TCVN 61931996 Tổng Cu, Zn, Fe pháp chuẩn ñộ Bảng 3.4 Kết xác ñịnh tổng lượng axit vỏ Bứa Tổng Dung 0,0043 40 Mẫu môi STT P (g) chiết 0,6715 5,3224 40 2,2675 30 26,512 x 30,1019 x kết so sánh với tiêu chuẩn CODEX STAN 164 – 1989: Tiêu chuẩn chất lượng trái hàm lượng kim loại nặng cho phép loại rau quy ñịnh Quyết ñịnh số 867/1998/QĐ – V (ml) (ml) Tổng lượng TB lượng axit lần axit trung chuẩn (g/100g) Bứa KPH Vcd n (ml) bình (g/100g) Vỏ Nhận xét: Thành phần kim loại nặng vỏ bứa thấp, Footer Page of 126 ñến sức khỏe người 10,000 10,095 50 50 5 Nước khô 10,105 50 25,9 17,88 26,0 17,95 26,1 18,02 23,9 16,35 24,0 16,42 24,1 16,48 20,2 13,80 20,3 13,87 20,1 13,73 16,06 Header Page of 126 17 Nhận xét: Tổng lượng axit chuẩn ñộ ñược mẫu vỏ bứa 18 Bảng 3.5 Kết xác ñịnh axit hữu vỏ bứa khô chiết với dung môi nước 16,06% So sánh với kết HPLC loài ñã nghiên cứu như: Garcinia cambogia (17 – 19,2%), Garcinia Dung india (12,48 – 15,1%), Garcinia cowa (27,1%) kết vỏ bứa Quảng Ngãi chiết nước cho kết trung bình Mẫu môi chiết 3.2 XÁC ĐịNH HCA TRONG MẪU CHIẾT BẰNG SẮC KÝ LỎNG CAO ÁP (HPLC) 3.2.1 Kết xây dựng ñường chuẩn 3.2.2 Kết xác ñịnh axit hữu vỏ bứa Thành phần axit hữu xác ñịnh phương pháp sắc ký lỏng cao áp ñược tính công thức: Axit Am STT mẫu Axit m (g) HCA Vcñ Kpl citri c Vỏ bứa khô Nước 10,423 238,537 5,512 50 100 15,348 0,413 10,325 232,618 5,298 50 100 15,085 0,391 10,210 229,248 5,110 50 100 15,047 0,372 Công thức tính HCA: Cm (ppm) = (1,37 * Am – 6,88) * Vcñ * Kpl / m Công thức tính CA: Cm (ppm) = (2,55 * Am – 5,43) * Vcñ * Kpl / m Cm (%) = Cm (ppm) / 10000 Trong ñó: Cm (ppm): Nồng ñộ tính ppm Cm (%): Nồng ñộ phần trăm Am : Diện tích pic sắc kí : Thể tích mẫu cô ñặc (ml) Vcñ Kpl : Hệ số pha loãng m : Trọng lượng mẫu thử (g) Hình 3.3 Sắc kí ñồ mẫu axit HCA chuẩn Footer Page of 126 HCA citric (%) (%) Header Page 10 of 126 19 20 3.3.TỔNG HỢP MUỐI CANXI CỦA HCA 3.3.1 Quy trình Dịch chiết sau cô ñặc ñược trung hòa axit cách cho thêm dung dịch CaCl2 (32g/100ml dịch) Dung dịch thu ñược ñược khuấy trộn khoảng 30-120 phút Khi thêm CaCl2 vào, lúc ñầu xuất kết tủa trắng, sau xuất ngày dày ñặc tạo thành bùn, pH hỗn hợp bùn thích hợp từ 9,5-11 Sử dụng dung dịch NaOH 10% (44,4g/400ml nước) ñể chỉnh ñộ pH Hỗn hợp bùn ñược lọc rửa với nước cất ñể loại bỏ tất muối bám vào Nước rửa ñược kiểm tra ion Clorua việc lọc rửa kết thúc không phát ion Clorua nước rửa Phần bánh ướt ñược sấy khô nhiệt ñộ 1000C ñể thu ñược dạng bột khô màu nâu xám muối HCCa Tiến hành cân khối lượng ñể tính toán hiệu suất trình chuyển hóa 3.3.2 Khảo sát ảnh hưởng pH ñến trình chuyển hoá tạo muối Canxi HCA Bảng 3.6 Kết khảo sát phụ thuộc khối lượng muối thu Hình 3.4 Sắc kí ñồ mẫu vỏ bứa khô nước Axit chủ yếu ñược tìm thấy vỏ bứa HPLC HCA ñược thể sắc kí ñồ hình 3.4 Pic thứ yếu ñược xác ñịnh STT mẫu Khối lượng mẫu (g) Lượng axit (g) 100,352 15,274 100,418 15,284 100,125 15,240 pic axit citric Xác ñịnh pic HCA ñược dựa vào pic axit HCA chuẩn ñược vào pH Khối pH lượng muối lý thuyết (g) 9,5 Khối lượng muối thực tế (g) Hiệu suất (%) 19,459 15,153 77,871 19,472 16,652 85,517 19,416 16,513 85,052 xuất thời gian lưu 4,939 phút, tương tự pic axit citric xác ñịnh nhờ pic axit chuẩn xuất thời gian lưu 5,623 phút 10 (hình 3.3) Thời gian lưu HCA axit citric tìm thấy mẫu 4,955 phút 5,606 phút Footer Page 10 of 126 10,5 Header Page 11 of 126 21 22 Nhận xét: Từ kết khảo sát thu ñược bảng 3.6 ñồ thị Bảng 3.8 Kết khảo sát phụ thuộc khối lượng muối thu biểu diễn hình 3.7 cho thấy giá trị pH = 10 ta thu ñược khối ñược vào thời gian khuấy trộn lượng muối lớn 16,652g (H = 85,517%) 3.3.3 Khảo sát theo thể tích Lượng lượng axit mẫu (g) (g) 100,315 15,268 100 19,452 15,173 78,005 100,305 15,266 150 19,450 15,983 82,175 100,247 15,257 200 19,438 16,656 85,690 100,414 15,282 250 19,470 16,655 85,552 100,102 15,234 300 19,409 16,576 85,405 mẫu tích axit (ml) Khối lượng muối lý thuyết (g) lượng muối thực tế (g) muối lý muối thực thuyết (g) tế (g) 30 19,422 14,712 75,752 15,267 60 19,450 15,589 80.150 100,318 15,269 90 19,452 16,786 86,295 100,295 15,265 120 19,447 16,754 86,152 axit gian mẫu (g) (g) (phút) 100,162 15,245 100,306 mẫu Khối lượng lượng ñược vào thể tích axit STT lượng Thời STT Khối Khối Lượng Bảng 3.7 Kết khảo sát phụ thuộc khối lượng muối thu Thể Khối Khối Hiệu suất (%) Hiệu suất (%) Nhận xét: Từ kết bảng 3.8 ñồ thị biểu diễn hình 3.9 cho thấy tăng thời gian khuấy trộn khối lượng muối tăng sau thời gian 90 phút khối lượng muối tăng không ñáng kể Vì Nhận xét: Từ kết thu ñược bảng 3.7 ñồ thị hình 3.8 cho thấy lượng muối ñạt khối lượng lớn 16,656g (H = 85,690%) ứng với thể tích axit 200ml 3.3.4 Khảo sát theo thời gian vậy, thời gian khuấy 90 phút ñược chọn làm thời gian tối ưu 3.3.5 Kiểm tra sản phẩm muối HCCa phổ hồng ngoại (IR) Để kiểm tra sản phẩm muối HCCa tạo thành ta chụp phổ hồng ngoại IR so với phổ hồng ngoại Canxihydroxycitrat chuẩn Kết chụp phổ IR muối canxihydroxycitrat (HCCa) (hình 3.10 ) so với muối canxihydroxycitrat (HCCa) chuẩn (hình 3.9) cho thấy xuất píc có bước sóng 3310 cm-1 ứng với phổ dao ñộng nhóm Footer Page 11 of 126 Header Page 12 of 126 23 24 –OH có píc ứng với bước sóng 1582 cm-1 ứng với nhóm C=O Nhận xét: Hàm lượng canxi sản phẩm HCCa thành nhóm (-COO)2Ca Về hình dáng, phổ IR muối HCCa phần kim loại chính, kết canxi xác ñịnh ñược phương pháp HCCa chuẩn tương tự AAS 17292,1 mg/L (chiếm 17,29%) Như sử dụng sản 3.3.6 Kiểm tra sản phẩm muối HCCa sắc ký lỏng cao áp phẩm HCCa tạo thành ñể làm thực phẩm dược phẩm mà không (HPLC) ảnh hưởng ñến sức khoẻ người theo ñịnh số 867/1998/QĐ- Nhận xét: BYT Bộ Y Tế ngày tháng năm 1998 việc ban hành Danh Kết ño phổ HPLC cho thấy thời gian lưu muối mục Tiêu chuẩn vệ sinh ñối với lương thực, thực phẩm HCCa ñã tổng hợp 3,89 phút So sánh với kết ño HPLC 3.7 KIỂM TRA CÁC CHỈ TIÊU VI SINH VẬT TRONG SẢN HCCa chuẩn có thời gian lưu 3,804 phút Do ñó kết luận PHẨM MUỐI HCCa ñã tổng hợp thành công muối HCCa Kết kiểm tra tiêu vi sinh vật mẫu muối HCCa sau: Tuy nhiên, phổ ñồ tổng hợp xuất số pic nhỏ Như Bảng 3.10 Kết xác ñịnh số tiêu vi sinh muối vậy, thành phần muối tổng hợp ñược HCCa có canxihydroxycitrat lẫn tạp chất nên cần phải tinh chế muối HCCa ñã tổng hợp Hàm lượng HCCa muối ñã tổng hợp ñược xác ñịnh TT Tên tiêu Đơn vị Phương pháp Kết thử tính thử nghiệm kl/g TCVN KPH HPLC 91,351% 3.5 TINH CHẾ MUỐI qua 02 pic nhỏ có thời gian lưu 2,36 2,89 phút Pic thể muối HCCa có diện tích lớn ñạt ñược ñộ tinh khiết 93,589% 3.6 KIỂM TRA HÀM LƯỢNG CANXI TRONG SẢN PHẨM MUỐI HCCa Bảng 3.9 Kết hàm lượng canxi muối HCCa AAS Kim Phương pháp thử Kết Hàm lượng cho phép loại (AAS) (mg/L) (mg/L) TCVN 6660 - 2000 Canxi 17292,1 – Footer Page 12 of 126 khuẩn ñếm ñược Nhận xét: Sau ta tiến hành rửa chất rắn tạp chất giảm Tổng vi 4884:2005 E coli kl/g FAO KPH Tổng bào tử nấm kl/g TCVN 4993- KPH men - mốc 89 Ghi chú: - Kph: không phát Như vậy, kết phân tích cho thấy mẫu muối canxihydroxycitric thỏa mãn Tiêu chuẩn vi sinh cho phép thực phẩm Bộ Y tế Header Page 13 of 126 25 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 26 Kiến nghị 1/ (-)-HCA có tính chống béo phì hiệu ñược cung cấp chủ Kết luận yếu dạng muối Vì vậy, nên tiếp tục nghiên cứu Trong ñề tài nghiên cứu ñã thu ñược số kết theo hướng ñiều chế ứng dụng muối (-)-HCA dạng muối sau: kép ñể tăng hiệu sản xuất dược liệu hay thực phẩm chức 1/ Độ ẩm vỏ Bứa khô: 8,37 %, Hàm lượng tro vỏ bứa với mục ñích giảm cân Khô:1,06 % 2/ Nghiên cứu xây dựng quy trình chiết tách (-)-HCA từ vỏ bứa Thành phần kim loại nặng gồm: Sn(0,0043mg/L), Pb(0,6715mg/L), Zn(5,3224mg/L), Cu(2,2675mg/L), Fe(26,512mg/L) 2/ Chứng minh ñược có mặt HCA vỏ Bứa phương pháp sắc ký lỏng cao áp (HPLC) Hàm lượng (-)-HCA tìm thấy vỏ Bứa khô (15,348%), axit thứ yếu axit citric (0,413%) Xác ñịnh ñược tổng lượng axit có mẫu chiết 16,06 (g/100g) 3/ Đã khảo sát xây dựng quy trình chuyển hoá tạo muối canxi HCA chiết từ vỏ Bứa khô Khối lượng muối HCCa dạng rắn tạo thành trung bình 16,698 g/100g mẫu, hiệu suất tạo muối vào khoảng 77,871% – 86,295% 4/ Đã kiểm tra sản phẩm muối HCCa tạo thành phổ hồng ngoại (IR), sắc ký lỏng cao áp (HPLC) Hàm lượng muối HCCa sản phẩm chuyển hoá 93,589% ứng với thời gian lưu 3,91 phút 5/Kết xác ñịnh số tiêu vi sinh hàm lượng số kim loại nặng sản phẩm muối canxi hydroxycitrat tổng hợp ñược nằm khoảng cho phép Footer Page 13 of 126 theo quy mô công nghiệp ñể sản xuất thực phẩm giảm cân chứa (-)HCA Việt Nam  ... trình nghiên cứu bứa bao gồm: Với lý mà chọn ñề tài: Nghiên cứu tổng chiết tách, xác ñịnh thành phần hoá học hợp chất hữu cơ, ứng hợp muối canxihydroxycitrat từ axit hidroxycytric vỏ bứa dụng... axit- bazơ, bứa khô phổ hồng ngoại (IR) phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) - Xây dựng quy trình tổng hợp muối canxihydroxycitrat từ axit hidroxycytric ñược chiết vỏ bứa - Tổng hợp muối canxihydroxycitrat... hàm lượng canxi muối - Làm sở liệu ñể ứng dụng muối canxihydroxycitrat thực tế Cấu trúc luận văn Luận văn phần mở ñầu, kết luận, kiến nghị tài liệu tham Phương pháp nghiên cứu 4.1 Nghiên cứu lý