Header Page of 145 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG VÕ THỊ THANH KIỀU NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH, XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC TRONG MỘT SỐ DỊCH CHIẾT CỦA LÁ VÀ NHÂN QUẢ BÀNG Chuyên ngành: Hóa hữu Mã số: 60 44 01 14 TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Đà Nẵng – Năm 2016 Footer Page of 145 Header Page of 145 Công trình hoàn thành ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS LÊ TỰ HẢI Phản biện 1: TS Trần Mạnh Lục Phản biện 2: PGS.TS Trần Thị Xô Luận văn bảo vệ trước Hội đồng chấm Luận văn tốt nghiệp thạc sĩ Khoa học họp Đại học Đà Nẵng vào ngày 20 tháng năm 2016 Có thể tìm hiểu luận văn tại: - Trung tâm Thông tin – Học liệu, Đại học Đà Nẵng - Thư viện trường Đại học Sư phạm, Đại học Đà Nẵng Footer Page of 145 Header Page of 145 MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Sức khỏe vốn quý người vấn đề thực phẩm bẩn khiến cho nguy mắc nhiều loại bệnh tật gia tăng, việc tìm phương thuốc chữa trị vừa mang lại hiệu không gây tác dụng phụ người dân quan tâm lựa chọn Đã từ lâu, dựa vào kinh nghiệm dân gian người biết sử dụng loại có tự nhiên để làm thực phẩm, thuốc chữa bệnh Việt Nam quốc gia nằm vùng nhiệt đới gió mùa có nhiều điều kiện cho hệ thực vật phát triển tạo phong phú đa dạng, nguồn tài nguyên sinh học quý giá, thuộc loại tài nguyên tái tạo được, nhiều thuốc quý với đầy đủ chủng loại số lượng, có bàng Cây bàng gọi quang lang, tên khoa học Terminalia catappa L, thuộc họ Bàng Combretaceae Đây loại trồng loại cảnh để lấy bóng râm nhờ tán lớn rậm Quả ăn có vị chua Hạt bàng dùng làm nguyên liệu để chế biến thành mứt Ở Việt Nam bàng dễ trồng, phát triển tốt có mặt hầu hết địa bàn nước Người dân từ xưa dùng bàng để chữa cảm sốt, mồ hôi, chữa tê thấp lỵ Dùng búp non phơi khô, tán bột rắc trị ghẻ, sắc đặc ngậm trị sâu Ngoài ra, người ta dùng vỏ thân bàng dạng thuốc sắc uống trị lỵ tiêu chảy, rửa vết loét, vết thương Đặc biệt, nhựa non trộn với dầu hạt nấu chín thứ để chữa bệnh hủi Hạt nấu chín dùng để chữa cầu máu Ngoài ra, dùng việc nuôi cá cảnh để Footer Page of 145 Header Page of 145 xử lý kim loại nặng trong nước có hại cho cá, ngăn ngừa hữu hiệu loại vi khuẩn, loại nấm cá Mặc dù có nhiều công dụng nước ta chưa có công trình khoa học mang tính hệ thống nghiên cứu trình chiết tách hay xác định thành phần hóa học, xác định cấu trúc số hợp chất bàng Chính chọn đề tài: “Nghiên cứu chiết tách, xác định thành phần hóa học số dịch chiết nhân Bàng’’ nhằm cung cấp thêm thông tin loại này, góp phần vào việc khai thác, chế biến ứng dụng sản phẩm bàng cách có hiệu quả, khoa học Mục đích nghiên cứu - Định danh thành phần hóa học từ dịch chiết lá, nhân bàng - Thử hoạt tính kháng khuẩn số dịch chiết bàng, nhân bàng Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu 3.1 Đối tượng: - Lá, nhân bàng thu hái huyện Phú Ninh, tỉnh Quảng Nam 3.2 Phạm vi nghiên cứu: - Lá nhân bàng thu hái huyện Phú Ninh, tỉnh Quảng Nam Quá trình thực nghiệm tiến hành phòng thí nghiệm Hóa học, phòng thí nghiệm sinh học trường Đại học Sư Phạm, Đại học Đà Nẵng Phƣơng pháp nghiên cứu 4.1 Nghiên cứu lý thuyết - Thu thập, tổng hợp tư liệu nước đặc điểm hình thái thực vật, thành phần hóa học, tác dụng dược lý Footer Page of 145 Header Page of 145 bàng - Tổng hợp tài liệu phương pháp nghiên cứu chiết tách xác định hợp chất thiên nhiên - Đánh giá kết quả, đề xuất kiến nghị 4.2 Nghiên cứu thực nghiệm - Phương pháp thu gom xử lý mẫu bàng, nhân bàng - Phương pháp xác định thông số hóa lý: xác định độ ẩm, hàm lượng tro - Phương pháp chiết tách: chiết soxhlet dung môi có độ phân cực khác nhau: n-hexan, diclometan, etylaxetat, etanol - Phương pháp phân tích công cụ: + Phương pháp phổ hấp thụ nguyên tử AAS xác định hàm lượng số kim loại nặng + Phương pháp sắc ký khí - phổ khối liên hợp (GC-MS) nhằm định danh hợp chất dịch chiết - Phương pháp thăm dò khả kháng khuẩn dịch chiết nhân bàng Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 5.1 Ý nghĩa khoa học Cung cấp thông tin khoa học số tiêu hóa lý, thành phần hóa học số hợp chất chính, hoạt tính sinh học chất chiết tách từ nhân bàng 5.2 Ý nghĩa thực tiễn - Góp phần nâng cao ứng dụng nhân bàng phạm vi rộng cách khoa học - Giải thích cách khoa học số kinh nghiệm dân gian ứng dụng bàng Cấu trúc luận văn: Bố cục luận văn gồm phần Phần mở đầu Footer Page of 145 Header Page of 145 Phần Nội dung nghiên cứu Chương Tổng quan tài liệu Chương Nguyên liệu phương pháp nghiên cứu Chương Kết thảo luận Phần Kết luận kiến nghị CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ CÂY BÀNG 1.1.1 Tên gọi 1.1.2 Phân loại 1.1.3 Đặc điểm thực vật 1.1.4 Phân bố, sinh học sinh thái 1.1.5 Thành phần hóa học 1.1.6 Tác dụng dƣợc lý, công dụng 1.2 TỔNG QUAN VỀ VI KHUẨN 1.2.1 Tổng quan vi khuẩn Escherichia coli a Phân loại khoa học b Đặc điểm sinh học c Tính chất nuôi cấy d Khả gây bệnh 1.2.2 Sơ lƣợc vi khuẩn Bacillius subtilis a Đặc điểm phân loại phân bố b Đặc điểm hình thái c Đặc điểm nuôi cấy 1.2.3 Sự khác vi khuẩn gram dƣơng vi khuẩn gram âm Footer Page of 145 Header Page of 145 1.3 CƠ SỞ LÝ THUYẾT CÁC PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 1.3.1 Phƣơng pháp phân hủy mẫu phân tích a Vô hóa phương pháp ‘‘khô’’ b Vô hóa phương pháp ‘‘ướt’’ c Vô hóa phương pháp khô ướt kết hợp 1.3.2 Phƣơng pháp chiết a Giới thiệu chung b Kỹ thuật chiết soxhlet 1.3.3 Phƣơng pháp đo quang phổ hấp thụ nguyên tử AAS a Giới thiệu phương pháp b Nguyên tắc phép đo c Qui trình phép đo AAS 1.3.4 Phƣơng pháp sắc ký khí GC-MS a Phương pháp sắc ký b Phương pháp sắc kí khí (GC) c Phương pháp khối phổ (MS) d Phương pháp sắc ký khí kết hợp khối phổ (GC-MS) 1.4 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG NƢỚC VÀ TRÊN THẾ GIỚI VỀ CÂY BÀNG 1.4.1 Tình hình nghiên cứu giới 1.4.2 Tình hình nghiên cứu nƣớc Footer Page of 145 Header Page of 145 CHƢƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 NGUYÊN LIỆU 2.1.1 Thu nguyên liệu Lá nhân bàng thu hái xã Tam An huyện Phú Ninh, tỉnh Quảng Nam vào tháng năm 2015 2.1.2 Xử lý nguyên liệu 2.2 HÓA CHẤT, DỤNG CỤ VÀ THIẾT BỊ 2.2.1 Hóa chất 2.2.2 Dụng cụ, thiết bị 2.3 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.3.1 Xác định số số vật lý a Xác định độ ẩm b Xác định hàm lượng tro c Xác định hàm lượng số kim loại phương pháp quang phổ hấp phụ nguyên tử AAS 2.3.2 Khảo sát điều kiện chiết thích hợp a Khảo sát thời gian chiết thích hợp b Hiệu chiết dung môi 2.3.3 Phƣơng pháp tách chất 2.3.4 Phƣơng pháp xác định thành phần hóa học 2.3.5 Phƣơng pháp thử khả kháng khuẩn dịch chiết nhân bàng a Môi trường nuôi cấy vi khuẩn b Cách tiến hành thử khả kháng khuẩn dịch chiết nhân bàng Footer Page of 145 Header Page of 145 2.4 SƠ ĐỒ QUI TRÌNH NGHIÊN CỨU Hình 2.6 Sơ đồ thực nghiệm CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH MỘT SỐ CHỈ TIÊU HÓA LÝ 3.1.1 Xác định độ ẩm Độ ẩm trung bình bột bàng khô 5,393 %, bột nhân bàng khô 6,723%, độ ẩm tương đối thấp Vì bảo quản nguyên liệu thời gian dài giữ chất lượng tốt nguyên liệu, tránh xâm nhập vi sinh vật nấm mốc 3.1.2 Xác định hàm lƣợng tro Hàm lượng tro trung bình bàng khô 10,591%, nhân bàng khô 3,697 % Hàm tro cao nhiều so với Footer Page of 145 Header Page 10 of 145 nhân bàng có chứa nhiều kim loại muối số kim loại 3.1.3 Xác định hàm lƣợng số kim loại nặng Căn vào định Bộ Y tế số 46/2007/QD-BYT ngày 19-12-2007 việc ban hành danh mục „„giới hạn tối đa ô nhiễm sinh học hóa học thực phẩm” hàm lượng kim loại nặng lá, nhân bàng hàm lượng cho phép sử dụng, an toàn, không ảnh hưởng đến sức khỏe người 3.2 KẾT QUẢ KHẢO SÁT THỜI GIAN CHIẾT BẰNG CÁC DUNG MÔI KHÁC NHAU 3.2.1 Khảo sát thời gian chiết với dung môi n-hexan a Kết khảo sát thời gian chiết bàng Bảng 3.6 Thời gian chiết với dung môi n-hexan bàng Dung môi n-hexan Thời gian giờ) m1(g) m2(g) m(g) V(ml) d(g/ml) 20,571 53,142 32,571 50 0,6514 20,548 53,197 32,649 50 0,6530 20,571 53,577 33,006 50 0,6601 20,548 53,459 32,911 50 0,6582 10 20,565 53,177 32,612 50 0,6522 - Thời gian tối ưu để chiết bàng n-hexan b Kết khảo sát thời gian chiết nhân bàng Bảng 3.7 Thời gian chiết nhân bàng n-hexan Dung môi n-hexan Thời gian (giờ) m1(g) m2(g) m(g) V(ml) d(g/ml) 20,545 53,697 33,152 50 0,6630 20,567 54,221 33,654 50 0,6731 20,571 55,242 34,671 50 0,6934 20,623 55,305 34,911 50 0,6982 10 20,618 55,213 34,595 50 0,6919 12 20,547 54,553 34,006 50 0,6801 Footer Page 10 of 145 Header Page 12 of 145 10 - Thời gian tối ưu chiết bàng etyl axetat b Kết khảo sát thời gian chiết nhân bàng Bảng 3.11 Thời gian chiết với dung môi etyl axetat nhân bàng Thời gian (giờ) 10 12 Dung môi etyl axetat m1(g) m2(g) m(g) 20,578 64,764 44,186 20,630 64,994 44,364 20,573 65,094 44,521 20,569 65,159 44,590 20,710 65,139 44,429 20,653 64,859 44,206 V(ml) 50 50 50 50 50 50 d(g/ml) 0,8837 0,8873 0,8904 0,8918 0,8886 0,8841 - Thời gian tối ưu chiết nhân bàng etyl axetat 3.2.4 Khảo sát thời gian chiết với dung môi etanol a Kết khảo sát thời gian chiết bàng Bảng 3.12 Thời gian chiết với dung môi etanol bàng Thời gian (giờ) 10 12 m1(g) 20,548 20,561 20,644 20,571 20,568 20,624 Dung môi etanol m2(g) m(g) 60,024 39,476 60,342 39,781 61,294 40,650 61,305 40,734 61,583 41,015 60,986 40,362 V(ml) 50 50 50 50 50 50 d(g/ml) 0,7895 0,7956 0,8130 0,8147 0,8203 0,8072 - Thời gian tối ưu để chiết bàng etanol 10 b Kết khảo sát thời gian chiết nhân bàng Bảng 3.13 Thời gian chiết với dung môi etanol nhân bàng Thời gian (giờ) 10 m1(g) 20,577 20,635 20,546 20,568 20,625 Footer Page 12 of 145 Dung môi etanol m2(g) m(g) 59,978 39,401 60,095 39,460 60,132 39,586 60,078 39,510 60,099 39,474 V(ml) 50 50 50 50 50 d(g/ml) 0,7880 0,7892 0,7917 0,7902 0,7895 Header Page 13 of 145 11 - Thời gian tối ưu để chiết nhân bàng etanol 3.2.5 Hiệu chiết dung môi Bảng 3.14 Kết khảo sát dung môi chiết bàng STT Dung môi n-hexan diclometan etyl axetat etanol t (giờ) 8 10 m (g) 33,006 67,235 44,630 41,015 d (g/ml) 0,6601 1,3447 0,8926 0,8203 Bảng 3.15 Kết khảo sát dung môi chiết nhân bàng STT  Dung môi n-hexan diclometan etyl axetat etanol t (giờ) 8 m (g) 34,911 67,301 44,590 39,586 d (g/ml) 0,6982 1,3460 0,8918 0,7917 Nhận xét: Qua kết Bảng 3.14 Bảng 3.15 ta thấy chiết bàng nhân bàng với dung môi diclometan khối lượng dịch chiết thu nhiều đồng thời dịch chiết có khối lượng riêng cao dung môi 3.3 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC CÓ TRONG DỊCH CHIẾT LÁ VÀ NHÂN QUẢ BÀNG 3.3.1 Thành phần hóa học dịch chiết n-hexan bột bàng Kết sắc ký đồ GC mẫu thể Hình 3.3 Hình 3.3 Sắc ký đồ dịch chiết bàng với dung môi n-hexan Footer Page 13 of 145 Header Page 14 of 145 12 Bảng 3.16 Thành phần hóa học dịch chiết n-hexan bàng STT Thời gian Tỉ lệ lƣu (%) (phút) Công thức phân tử 26,483 4,12 C10H18 29,621 33,643 41,046 43,369 44,761 45,518 1,21 4,24 3,21 3,13 1,53 8,52 C16H32O2 C20H40O C30H50 C29H50O2 C29H48O C29H50O Tên gọi Bicyclo[3.1.1]heptane,2,6,6trimethyl-(1.alpha,2.beta,5.alpha) n-hexandecanoic acid Phytol Squalene Vitamin E Stigmasterol Beta-sistosterol  Nhận xét: Thành phần hóa học dịch chiết n-hexan chủ yếu cấu tử có độ phân cực yếu đến không phân cực, bao gồm: xicloankan, axit panmitic, ditecpen, steroid Trong dịch chiết nhexan có chứa số cấu tử có hoạt tính sinh học cao đáng quan tâm như: Beta-sistosterol; Phytol; Squalene; Vitamin E; Stigmasterol, nhexadecanoic acid 3.3.2 Thành phần hóa học dịch chiết diclometan bột bàng Kết sắc ký đồ GC mẫu thể Hình 3.4 Hình 3.4 Sắc ký đồ dịch chiết bàng với diclometan Footer Page 14 of 145 Header Page 15 of 145 13 Bảng 3.17 Thành phần hóa học dịch chiết diclometan bàng Thời gian Tỉ lệ Công thức lƣu (phút) (%) phân tử 26,503 7,61 C10H18 29,653 2,06 C16H32O2 n-hexandecanoic acid 33,643 2,65 C20H40O Phytol 34,772 1,76 C19H32O2 9,12,15-octadecatrienoic acid, (z,z,z)- 41,053 2,81 C30H50 Squalene 41,707 0,33 C15H26O 2,6,10-Dodecatrien-1-ol, 3,7,11-trimethyl- 43,368 1,81 C29H50O2 Vitamin E 44,761 1,16 C29H48O Stigmasterol 45,532 6,75 C29H50O Beta-sistosterol STT Tên gọi Bicyclo[3.1.1]heptane,2,6,6-trimethyl(1.alpha,2.beta,5.alpha)  Nhận xét: Ngoài cấu tử lặp lại chiết với dung môi n-hexan định danh thêm cấu tử axit béo: 9,12,15-octadecatrienoic acid, (z,z,z)- (1,76%) ancol không no: 2,6,10-Dodecatrien-1-ol, 3,7,11-trimethyl- (0,33% ) Các axit béo chất có hoạt tính sinh học 3.3.2 Thành phần hóa học dịch chiết etylaxetat bột bàng Kết sắc ký đồ GC mẫu thể Hình 3.5 Hình 3.5 Sắc ký đồ dịch chiết bàng với dung môi etylaxetat Footer Page 15 of 145 Header Page 16 of 145 14 Bảng 3.18 Thành phần hóa học dịch chiết etylaxetat bàng Thời gian Tỉ lệ Công thức lƣu (phút) (%) phân tử 26,496 15,07 C10H18 29,620 2,66 C16H32O2 33,636 3,89 34,699 0,36 C19H32O2 41,046 5,15 43,362 5,46 C29H50O2 44,754 1,34 45,511 10,11 C29H50O STT C20H40O C30H50 C29H48O Tên gọi Bicyclo[3.1.1]heptane,2,6,6trimethyl(1.alpha,2.beta,5.alpha) n-hexandecanoic acid Phytol 9,12,15-octadecatrienoic acid, (z,z,z)Squalene Vitamin E Stigmasterol Beta-Sistosterol  Nhận xét: Ngoài cấu tử lặp lại chiết với dung môi n-hexan, định danh thêm cấu tử mới: 9,12,15octadecatrienoic acid (0,36%) Một số cấu tử có hoạt tinh sinh học dịch chiết etyl axetat có tỷ lệ % lớn so với dịch chiết n-hexan diclometan 3.3.1 Thành phần hóa học dịch chiết etanol bột bang Kết sắc ký đồ GC mẫu thể Hình 3.6 Hình 3.6 Sắc ký đồ dịch chiết bàng với dung môi etanol Footer Page 16 of 145 Header Page 17 of 145 15 Bảng 3.19 Thành phần hóa học dịch chiết etanol bàng TT Thời gian Tỉ lệ lƣu(phút) (%) 3,632 1,54 5,409 0,51 8,623 0,42 Công thức phân tử C5H4O2 C9H20O2 C5H6O2 9,361 1,63 C6H8O4 11,125 4,19 C6H6O3 14,705 24,700 18,30 0,51 C6H6O3 C14H28O2 26,484 7,56 C10H18 10 11 12 13 14 15 16 29,723 33,637 34,856 35,625 41,046 43,362 44,754 45,511 5,52 3,09 6,40 1,00 1,05 1,98 0,59 6,34 C16H32O2 C20H40O C19H32O2 C18H36O2 C30H50 C29H50O2 C29H48O C29H50O Tên gọi Furfural Butane,1,1-diethoxy-3-methyl2-furanmethanol 4-H-Pyran-4-one,2,3-dihydro-3,5dihydroxy-6-methyl2-Furancarboxaldehyde,5(hydroxymethyl)1,2,3-benzentriol Tetradecanoic acid Bicyclo[3.1.1]heptane,2,6,6trimethy(1.alpha,2.beta,5.alpha) n-hexandecanoic acid Phytol 9,12,15-octadecatrienoic acid, (z,z,z)Octadecanoic acid Squalene Vitamin E Stigmasterol Beta-sistosterol  Nhận xét: Phương pháp GC-MS định danh 16 cấu tử dịch chiết etanol từ bàng Thành phần hóa học dịch chiết etanol bao gồm xicloankan, ditecpen, steroid, ancol, phenol, axit béo, hợp chất dị vòng Ngoài cấu tử giống chiết với nhexan, diclometan, etyl axetat phát thêm cấu tử khác Các cấu tử chủ yếu hợp chất dị vòng cạnh có chứa oxi, phenol, ete Đây hợp chất phân cực nên dễ chiết etanol dung môi phân cực Các axit béo chiếm hàm lượng lớn dịch chiết so với chiết dung môi n-hexan, diclometan, etyl axetat Đó chất có hoạt tính sinh học đáng quan tâm Chiếm hàm lượng lớn dịch chiết 1,2,3bezenetriol axit độc hại, sử dụng sản xuất chất màu Footer Page 17 of 145 Header Page 18 of 145 16 thuốc nhuộm azo phát triển nhiếp ảnh kháng sinh để điều trị bệnh da 3.3.4 Thành phần hóa học dịch chiết n-hexan bột nhân bàng Kết sắc ký đồ GC thể hình 3.7 Hình 3.7 Sắc ký đồ dịch chiết nhân bàng với dung môi nhexan Bảng 3.20 Thành phần hóa học dịch chiết n-hexan nhân bàng Thời gian Tỉ lệ Công thức STT lƣu (phút) (%) phân tử 8,226 0,71 C8H11N 17,603 0,97 C15H24 18,400 0,72 C15H24 29,794 41,072 44,825 45,620 3,26 5,01 3,57 28,23 C16H32O2 C30H50 C29H48O C29H50O Tên gọi Benzenamine, N,N-dimethyl1,3-Cyclohexadiene,5-(1,5dimethyl-4-hexenyl)-2-methyl-, [S(R*,S*)] Cyclohexene,3-(1,5-dimethyl-4hexenyl)-6-methylene-, [S-(R*,S*)] n-hexandecanoic acid Squalene Stigmasterol beta-sistosterol  Nhận xét: Phương pháp GC-MS định danh cấu tử dịch chiết n-hexan từ nhân bàng chiếm 42,47 % Thành Footer Page 18 of 145 Header Page 19 of 145 17 phần hóa học dịch chiết n-hexan bao gồm anken, amin, tecpen, axit panmitic, steroid Cấu tử có hàm lượng cao có hoạt tính sinh học là: Beta-sistosterol; Squalene ; Stigmasterol; n-hexandecanoic acid 3.3.5 Thành phần hóa học dịch chiết diclometan bột nhân bàng Kết sắc ký đồ GC thể Hình 3.8 Hình 3.8 Sắc ký đồ dịch chiết nhân bàng với diclometan Bảng 3.21 Thành phần hóa học dịch chiết diclometan nhân bàng TT Thời gian lƣu (phút) 29,698 41,053 44,767 45,543 Tỉ lệ (%) 9,56 3,70 4,25 35,17 Công thức phân tử C16H32O2 C30H50 C29H48O C29H50O Tên gọi n-hexandecanoic acid Squalene Stigmasterol beta-sistosterol Nhận xét: Phương pháp GC-MS định danh cấu tử, cấu tử trùng lặp chiết với dung môi n-hexan Các cấu tử có hoạt tính sinh học có hàm lượng lớn: Beta-sistosterol (35,17%); n-hexandecanoic acid (9,56 %); Stigmasterol (4,25%); Squalene (3,7%) 3.3.5 Thành phần hóa học dịch chiết etyl axetat bột nhân bàng Kết sắc ký đồ GC thể Hình 3.9 Footer Page 19 of 145 Header Page 20 of 145 18 Hình 3.9 Sắc ký đồ dịch chiết nhân bàng với etyl axetat Bảng 3.22 Thành phần hóa học dịch chiết etyl axetat nhân bàng STT Thời gian lƣu (phút) Tỉ lệ (%) Công thức phân tử 17,617 0,85 C15H24 18,386 0,49 C15H24 29,736 41,059 44,799 45,588 3,16 5,04 3,85 30,14 C16H32O2 C30H50 C29H48O C29H50O Tên gọi 1,3-Cyclohexadiene,5-(1,5dimethyl-4-hexenyl)-2-methyl-, [S(R*,S*)] Cyclohexene,3-(1,5-dimethyl-4hexenyl)-6-methylene-, [S-(R*,S*)] n-hexandecanoic acid Squalene Stigmasterol beta-sistosterol  Nhận xét: Phương pháp GC-MS định danh cấu tử dịch chiết etyl axetat từ nhân bàng, cấu tử trùng lặp chiết với dung môi n-hexan Cấu tử có hoạt tính sinh học có hàm lượng cao là: Beta-sistosterol (30,14%); số cấu tử có hoạt tính sinh học có hàm lượng đáng kể: Squalene (5,04%); Stigmasterol (3,85%); n-hexandecanoic acid (3,16%) 3.3.8 Thành phần hóa học dịch chiết etanol bột nhân bàng Kết sắc ký đồ GC thể Hình 3.10 Footer Page 20 of 145 Header Page 21 of 145 19 Hình 3.10 Sắc ký đồ dịch chiết nhân bàng với etanol Bảng 3.23 Thành phần hóa học dịch chiết etanol nhân bàng STT Thời gian lƣu (phút) Tỉ lệ (%) Công thức phân tử Tên gọi 9,586 0,50 C6H8O4 4H-Pyran-4-one,2,3-dihydro-3,5dihydroxy-6-methyl- 11,427 2,78 C6H6O3 2-Furancarboxaldehyde,5(hydroxymethyl)- 30,371 6,68 C16H32O2 n-hexandecanoic acid 36,164 21,47 C18H34O2 Cis-13-Octadecanoic acid 45,826 1,56 C29H50O beta-sistosterol  Nhận xét: Phương pháp GC-MS định danh cấu tử dịch chiết etanol từ nhân bàng, có cấu tử lặp lại chiết với dung môi n-hexan, etyl axetat, diclometan Ngoài phát thêm cấu tử mới: cis-13-Octadecanoic acid (21,47%); 2-Furancarboxaldehyde,5-(hydroxymethyl)-(2,78%); 4H-Pyran-4-one, 2,3-dihydro-3,5-dihydroxy-6-methyl- (0,50%) cấu tử hợp chất phân cực nên dễ chiết dung môi etanol phân cực Cis-13-Octadecanoic acid (21,47%), sử dụng tá dược dược phẩm Footer Page 21 of 145 Header Page 22 of 145 20 3.3.8 Tổng hợp thành phần hóa học dịch chiết nhân bàng a Thành phần hóa học dịch chiết bàng Các cấu tử định danh thể qua Bảng 3.24 Bảng 3.24 Thành phần hóa học dịch chiết bàng với dung môi STT Định danh Furfural Butane,1,1-diethoxy-3-methyl2-furanmethanol 4-H-Pyran-4-one,2,3-dihydro-3,5dihydroxy-6-methyl2-Furancarboxaldehyde, (hydroxymethyl)1,2,3-benzentriol Tetradecanoic acid Bicyclo[3.1.1]heptane,2,6,6trimethyl-(1.alpha,2.beta,5.alpha) n-hexandecanoic acid Phytol 9,12,15-octadecatrienoic acid, (z,z,z)Octadecanoic acid Squalene Vitamin E Stigmasterol Beta-sistosterol 2,6,10-Dodecatrien-1-ol,3,7,11trimethyl- 10 11 12 13 14 15 16 17 Hàm lƣợng % etyl n-hexan diclometan etanol axetat 1,54 0,51 0,42 1,63 4,19 4,12 7,61 15,07 18,30 0,51 7,56 1,21 4,24 2,06 2,65 1,76 2,66 3,89 0,36 5,52 3,09 6,40 3,21 3,13 1,53 8,52 2,81 1,81 1,16 6,75 0,33 5,15 5,46 1,34 10,11 1,00 1,05 1,98 0,59 6,34  Nhận xét: Phương pháp GC-MS định danh 17 cấu tử: dịch chiết n-hexan cấu tử, dịch chiết etyl axetat cấu tử, dịch chiết diclometan cấu tử, dịch chiết etanol 16 cấu tử Có cấu tử trùng lặp cho dung môi khác hàm lượng b Thành phần hóa học dịch chiết nhân bàng Các cấu tử định danh thể qua Bảng 3.25 Footer Page 22 of 145 Header Page 23 of 145 21 Bảng 3.25 Thành phần hóa học dịch chiết nhân bàng với dung môi Định danh STT 10 Benzenamine, N,N-dimethyl1,3-Cyclohexadiene,5-(1,5-dimethyl4-hexenyl)-2-methyl-, [S-(R*,S*)] Cyclohexene,3-(1,5-dimethyl-4hexenyl)-6-methylene-, [S-(R*,S*)] 4-H-Pyran-4-one,2,3-dihydro-3,5dihydroxy-6-methyl2-Furancarboxaldehyde,5(hydroxymethyl)n-hexandecanoic acid Cis-13-Octadecanoic acid Squalene Stigmasterol Beta-sistosterol Hàm lƣợng % Dịch Dịch Dịch Dịch chiết chiết chiết chiết n-hexan diclo etyl etanol metan axetat 0,71 0,97 0,85 0,72 0,49 0,50 2,78 3,26 9,56 3,16 5,01 3,70 3,57 4,25 28,23 35,17 5,04 3,85 30,14 6,68 21,47 1,56  Nhận xét: Bằng phương pháp GC-MS định danh 10 cấu tử: dịch chiết n-hexan cấu tử, dịch chiết etyl axetat cấu tử, dịch chiết diclometan cấu tử, dịch chiết etanol cấu tử Trong số cấu tử có cấu tử trùng lặp cho dung môi Tổng số cấu tử dịch chiết bàng cao dịch chiết nhân bàng (Bảng 3.26) Bảng 3.26 Thống kê số lượng hàm lượng cấu tử dịch chiết Dung môi n-hexan Diclometan Etyl axetat Etanol Lá bàng Số cấu tử Hàm lƣợng định danh (%) 25,96 26,94 44,04 16 60,93 Footer Page 23 of 145 Nhân bàng Số cấu tử Hàm lƣợng định danh (%) 42,47 52,68 43,53 32,99 Header Page 24 of 145 22  Nhận xét: Hàm lượng phần trăm cấu tử định danh chiết bàng etyl axetat, etanol; chiết nhân bàng diclometan, n-hexan, etyl axetat tương đối cao Đã định danh số cấu tử với hàm lượng % lớn trùng lặp lại nhân bàng như: Beta-sistosterol; Stigmasterol; Squalene; n-hexandecanoic acid Đây cấu tử có hoạt tinh sinh học cao Kết luận: Bằng phương pháp GC-MS sau chiết với dung môi nhân bàng định danh 21 cấu tử, bàng phát 17 cấu tử, nhân bàng phát 10 cấu tử Trong có cấu tử trùng lại nhân bàng 3.4 KẾT QUẢ THỬ HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN Dịch chiết bàng dung môi n-hexan, diclometan, etyl axetat hoạt tính kháng khuẩn loại vi khuẩn B.subtilis (Gram dương) E.coli (Gram âm) Dịch chiết bàng dung môi etanol thể hoạt hoạt tính kháng khuẩn loại vi khuẩn E.coli (Gram âm) B.subtilis (Gram dương) Đường kính vòng kháng khuẩn dịch chiết bàng etanol vi khuẩn E.coli 13,5 mm B.subtilis 16,0 mm, nên khả diệt khuẩn dịch chiết bàng dung môi etanol vi khuẩn gram dương (B.subtilis) cao vi khuẩn gram âm (E.coli) Dịch chiết nhân bàng loại dung môi n-hexan, diclometan, etyl axetat, etanol hoạt tính kháng khuẩn loại vi khuẩn B.subtilis (Gram dương) E.coli (Gram âm) Footer Page 24 of 145 Header Page 25 of 145 23 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN uá trình nghiên cứu thực đề tài thu số kết sau: Đã xác định thông số hóa lý nguyên liệu: - Bột bàng khô có độ ẩm trung bình: 5,393 %; hàm lượng tro trung bình:10,591% - Bột nhân bàng khô có độ ẩm trung bình: 6,723%; hàm lượng tro trung bình: 3,697% - Hàm lượng kim loại Pb, Cu, Zn, Hg nhân bàng nằm khoảng cho phép theo qui định Quyết định 46/2007/QD-BYT ngày 19-12-2007 việc ban hành danh mục tiêu chuẩn vệ sinh lương thực, thực phẩm Tìm điều kiện tối ưu cho trình chiết tách số hợp chất nhân bàng: dung môi n-hexan thời gian chiết thích hợp chiết bàng giờ, nhân bàng giờ; với dung môi diclometan thời gian chiết thích hợp với bàng giờ, nhân bàng giờ; với dung môi etyl axetat thời gian chiết thích hợp với nhân bàng giờ; với dung môi etanol thời gian chiết thích hợp với bàng 10 giờ, nhân bàng Bằng phương pháp GC-MS định danh thành phần hóa học dịch chiết n-hexan, diclometan, etyl axetat, etanol bột nhân bàng khô: - Tổng số lượng cấu tử định danh nhân bàng 21 cấu tử, bàng phát 17 cấu tử, nhân bàng phát 10 cấu tử Trong có cấu tử trùng lại nhân bàng Footer Page 25 of 145 Header Page 26 of 145 24 Các cấu tử có hoạt tính sinh học cao, chiếm hàm lượng % lớn bàng gồm: Beta-sistosterol; Stigmasterol; Vitamin E; Phytol; Squalene; n-hexandecanoic acid; nhân bàng gồm: Betasistosterol; Stigmasterol; Squalene; n-hexandecanoic acid; cis-13Octadecanoic acid Dịch chiết bàng dung môi etanol thể hoạt tính kháng khuẩn loại vi khuẩn B.subtilis (Gram dương) E.coli (Gram âm), khả diệt khuẩn vi khuẩn gram dương (B.subtilis) cao vi khuẩn gram âm (E.coli) Các dịch chiết khác bàng dung môi n-hexan, diclometan, etyl axetat nhân bàng dung môi nhexan, diclometan, etyl axetat, etanol hoạt tính kháng khuẩn loại vi khuẩn B.subtilis (Gram dương) E.coli (Gram âm) KIẾN NGHỊ Trong trình nghiên cứu có kiến nghị sau: - Tiếp tục nghiên cứu hoạt tính chống oxi hóa số dịch chiết nhân bàng - Cần nghiên cứu phương pháp tách cấu tử có tính chất quí y học thực phẩm nhằm đáp ứng nhu cầu sống - Nghiên cứu phận khác bàng, đặc biệt vỏ rễ bàng Footer Page 26 of 145 ... Mục đích nghiên cứu - Định danh thành phần hóa học từ dịch chiết lá, nhân bàng - Thử hoạt tính kháng khuẩn số dịch chiết bàng, nhân bàng Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu 3.1 Đối tượng: - Lá, nhân bàng... HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG NƢỚC VÀ TRÊN THẾ GIỚI VỀ CÂY BÀNG 1.4.1 Tình hình nghiên cứu giới 1.4.2 Tình hình nghiên cứu nƣớc Footer Page of 145 Header Page of 145 CHƢƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN... diclometan, etyl axetat, etanol bột nhân bàng khô: - Tổng số lượng cấu tử định danh nhân bàng 21 cấu tử, bàng phát 17 cấu tử, nhân bàng phát 10 cấu tử Trong có cấu tử trùng lại nhân bàng Footer Page 25