Đang tải... (xem toàn văn)
Phân tích THEAFLAVINS (TFs) và THEARUBIGINS (TRs) trong chè đen sử dụng phương pháp MALDITOF (PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ KHỐI PHỔ)Hoạt tính sinh học và các hoạt tính chống oxy hóa của flavanols trong chè sau khi uống với mẫu chè xanh (CX), chè đen (CĐ), hoặc bổ sung dịch chiết từ chè xanh (DCCX)
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM Nha trang, 14 tháng 03 năm 2012 NỘI DUNG Phân tích THEAFLAVINS (TFs) THEARUBIGINS (TRs) chè đen sử dụng phương pháp MALDI-TOF (PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ KHỐI PHỔ) Hoạt tính sinh học hoạt tính chống oxy hóa flavanols chè sau uống với mẫu chè xanh (CX), chè đen (CĐ), bổ sung dịch chiết từ chè xanh (DCCX) 1.Phân tích THEAFLAVINS (TFs) THEARUBIGINS (TRs) chè đen sử dụng phương pháp MALDI-TOF (PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ KHỐI PHỔ) 1.Giới thiệu 2.Phương pháp nghiên cứu 3.Kết thảo luận GIỚI THIỆU Trong năm qua, có nhiều nghiên cứu chè (Camellia sinensis) Có nhiều nghiên cứu cho thấy uống trà giảm nguy bệnh tim mạch bệnh ung thư người Chè có chứa chất chống oxy hóa hợp chất polyphenol, đặc biệt catechin dẫn xuất chúng Các dẫn xuất catechin giúp bảo vệ thể, chống lại bệnh tim ung thư cách giảm thiểu tác động gốc tự gây hại cho tế bào mô Nghiên cứu chè đen, sau chiết xuất có thearubigins (TRs) có hiệu bảo vệ chống lại hành động liệt Botulinum neurotoxins CÁC SẢN PHẨM TRÀ Đọt chè tươi Chè đen Chè đen có chứa hai nhóm màu chính: Theaflavins (TFs- màu vàng) thearubigins (TRs- màu đỏ) TFs chứa bis-flavan thay 1,2-dihydroxy-3 ,4-benzotropolone phân nửa Không giống TFs, cấu trúc hóa học TRs điều bí ẩn Việc phân tích quang phổ MALDI-TOF (phương pháp cản trở xung ion ion tạo thông qua kỹ thuật hỗ trợ ma trận laser giải hấp ion hóa) phần phân đoạn chè đen cho thấy cấu trúc số TRs PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Có loại trà nghiên cứu: trà xanh (không lên men), trà Ô long (bán lên men) trà đen (đã lên men) Quá trình lên men chè gây oxy hoá enzym catechin dẫn đến hình thành sắc tố chủ yếu trà đen, theaflavins (TFs), thearubigins (TRs) TFs-màu vàng, gồm khoảng 3-5% (m /m) chất rắn chiết xuất Cấu trúc chúng có chứa nhân benzotropolone hình thành trình oxy hóa catechin với Vic- trihydroxyphenyl phân nửa TRs, màu đỏ nâu màu nâu đen, bao gồm khoảng 20% (m/m) chất rắn chiết xuất , polymer không đồng nhất, cấu trúc chưa miêu tả Phân loại số TRs : 1.Phân loại TRs thành ba nhóm theo khả hòa tan chúng dung môi khác Nhóm 1: Tan ethyl acetate Nhóm : Tan diethyl Phân loại theo phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (high performance liquid chromatography - HPLC) Nhóm I : bao gồm TRs bị loại trừ từ cột HPLC, Nhóm II : TRs giải Nhóm III : TRs lại chưa giải • Thu thập mẫu lưu trữ Các mẫu máu thu thập sau lần pha bảo quản môi trường lạnh vận chuyển đến Trung tâm dinh dưỡng người để xử lý lưu trữ Máu ống chân không EDTA ly tâm ° C 10 phút với máy ly tâm GS6R , 0,8 mL dịch huyết tương lưu trữ 70 ° C mà không cần bổ sung với 80 mL ascorbic 20%, dung dịch acid 0,1% EDTA (0,4mmol / L Na2PO4, pH 3,6) Phân tích Flavanol huyết tương nước tiểu 200 L huyết tương hay nước tiểu trộn lẫn với 12 L acidascorbic 10%: 40 mmol / L NaH2PO4: 0,1% EDTA, , 20L 50 mmol sodium phosphate/L (pH 7.4), 20L 23 mol catechin gallate / L tiêu chuẩn, 500 đơn vị D -glucuronidase loại XA từ Escherichia coli , đơn vị loại sulfatase VIII từ ruột bào ngư Hỗn hợp ủ 37 ° C 45 phút • THỐNG KÊ Các nồng độ huyết tương cao điểm (Cmax) thời gian để tập trung cao điểm (tmax) ghi lại vùng thuộc huyết tương tập trungthời gian (0 - h), đường cong(AUC) ước tính quy tắc h ình thang tuyến tính Nghiên cứu lặp lặp lại với trình tự, giai đoạn, mẫu (CX, CĐ, DCCX) • Tất phân tích thống kê thực cách sử dụng SAS phiên tất kiểm định từ hai phía với mức ý nghĩa 0.05 KẾT QUẢ Sau uống chè xanh, chè đen, đồ uống bổ sung chiết xuất từ chè xanh, nồng độ tổng số flavanols trà đượcđịnh lượng sắc ký lỏng phương pháp đo mảng điện Các flavanols trà phát huyết tương EGC,EC,EGCG ECG Phương pháp chiết xuất cho thấy phục hồi từ 90% -109% CX( túi CĐ( túi ) DCCX ( túi ) Axit galic 1.6 0.01a 22.9 0.2b 1.0 0.02c Catechin 14.7 2.3a 42.1 4.9b 14.1 0.4c Cafein 110.9 0.6a 268.9 1.9a 24.9 0.1c EGC 269.6 1.7a 103.4 1.0b 38.3 EGCG 76.5 ECG 213.6 3.3a 230.8 Gallocatechin gallate 119.3 4.1a 122.5 Catechin gallate 2.0 0.07a 2.3 Tổng theaflavins 1.4 0.2a - 0.3a 39.8 0.4b 1.0 b 38.3 1.0b 0.5a 38.3 1.0b 1.4a 45.5 0.04c 0.01a 35.2 0.3 Bảng Thành phần flavanols, axit galic, theaflavin tổng số, caffein sản phẩm chè sử dụng thí nghiệm Nhận xét: Thành phần EC không khác CĐ DCCX, khác biệt ECG CX, CĐ, DCCX EC huyết tương Cmax cao đáng kể sau uống CX uống CĐ DCCX EGC CĐ nhiều lần so với DCCX, huyết tương Cmax AUC tập trung hai lần uống CĐ DCCX CX CĐ DCCX EGC 269.6 1.2a 103.4 0.7a 24.9 0.06c Lượng ( mg ) 1.3 0.1a 1.5 0.1a 2.6 0.3b Nồng độ lớn nhất( nmol/L) 740 40a 220 10b 110 10c AUC nmol/L 2590 140a 970 40b 580 30c Lượng ( mg ) 76.5 0.2a 39.8 0.3b 38.3 0.3b Thời gian lớn ( ) 1.2 0.07a 1.4 0.1a 2.5 0.2b Nồng độ lớn nhất( nmol/L) 330 30a 80 10b 240 20c EC BẢNG 2: So sánh thông số dược cho huyết tương epigallocatechin (EGC), epicatechin (EC), epigallocatechin-3-gallate (EGCG), epicatechin-3-gallate (ECG) tiêu thụ CX, CĐ, DCCX Những kết cho thấy lượng flavanols trà pha DCCX DCCX hiệu nâng cao hàm flavanol huyết thanh, tổng số lượng EGC, EGCG, EC, ECG cung cấp CX, CĐ, DCCX tương ứng 679,0; 9,4; 496,5; 3,3 386,5; 3,2 mg Phù hợp với liều lượng , flavanol huyết tương tập trung cao đạt với CX (1,23 0,09 mol / L) (Hình 2) • Tuy nhiên, nồng độ huyết tương tổng số flavanol không tương quan với hấp thu ban đầu CĐ DCCX Sự bổ sung DCCX cho kết cao tổng số flavanol huyết tương (0.66 0,05 mol / L) so với nghiên cứu CĐ (0,47 0,04 mol / L), CĐ flavanols cao 28,5% (Hình 2) • Hình Huyết tương (SEM) nồng độ flavanol tổng [tổng hợp huyết tương ()-epigallocatechin ()-epicatechin, ()-epigallocatechin-3gallate, và()-epicatechin-3-gallate nồng độ] việc tiêu thụ CX, CĐ, DCCX • Sau uống DCCX , tmax kéo dài thêm cho tất flavanols trà so với uống CĐ CX (P 0,05; Bảng 2) Sự tiết flavanol qua nước tiểu , thể tỷ lệ phần trăm flavanol, EGC EC 0,21,3%, EGCG ECG 0,010,06% (Bảng 3) Tỷ lệ phần trăm chất tiết EGC EC cao đáng kể DCCX CX CĐ (Bảng 3) Tỷ lệ phần trăm chất tiết EGC EC cao đáng kể DCCX CX CĐ (Bảng Nướ 3) Huyết tương c tiểu CX EGC 0.36 EC 0.56 EGCG 0.07 ECG 0.12 0.02a CĐ DCCX CX CĐ DCCX 0.26 0.02b %khối lượng 0.53 0.04c 0.19 0.03a 0.27 0.05a 1.17 0.24b 0.23 0.02b 0.75 0.08a 0.50 0.08a 0.52 0.11a 1.26 0.28b 0.01a 0.08 0.01a 0.14 0.01b 0.06 0.01a 0.05 0.01a 0.06 0.01a 0.01a 0.11 0.01a 0.20 0.02b 0.02 0.01a 0.01 0.01a 0.02 0.01a 0.05a Hình Ảnh hưởng thời gian (0-60 phút) ngăn chặn hấp thụ gốc cation 2,2-azinobis THẢO LUẬN • Mục tiêu nghiên cứu so sánh dược động học hiệu hoạt động chống oxy hóa huyết tương fla-vanols trà sau uống chè xanh, chè đen bổ sung chiết xuất từ trà xanh • Nghiên cứu tiến hành với việc sử dụng CX, CĐ, DCCX phù hợp cho thành phần EGCG CX DCCX thường có chứa lượng cao EGCG CĐ KẾT LUẬN Chúng kết luận polyphenol hình thức DCCX mang hoạt tính sinh học tăng cường so với CX, CĐ, dẫn đến gia tăng nhỏ đáng kể khả chống oxy hóa Hình thành chất chuyển hóa flavonol góp phần tác dụng chống oxy hóa thiếu tương quan nồng độ flavanol huyết tương ... hình ion hóa phân tử để xác nhận cấu trúc TRs chè đen 2 Hoạt tính sinh học hoạt tính chống oxy hóa flavanols chè GIỚI THIỆU - Trà xanh (CX) chè đen (CĐ) bắt nguồn từ chè có tên khoa học Camellia... THEARUBIGINS (TRs) chè đen sử dụng phương pháp MALDI-TOF (PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ KHỐI PHỔ) Hoạt tính sinh học hoạt tính chống oxy hóa flavanols chè sau uống với mẫu chè xanh (CX), chè đen (CĐ), bổ... thearubigins (TRs) có hiệu bảo vệ chống lại hành động liệt Botulinum neurotoxins CÁC SẢN PHẨM TRÀ Đọt chè tươi Chè đen Chè đen có chứa hai nhóm màu chính: Theaflavins (TFs- màu vàng) thearubigins (TRs-