BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM - NGUYỄN THỊ THANH NGHIÊN CỨU SỰ LƯU HÀNH VIRUS CÚM CHỦNG A/H3N2 Ở ĐÀN LỢN NI TRÊN ĐỊA BÀN HẢI PHỊNG VÀ ỨNG DỤNG KỸ THUẬT REALTIME-PCR ĐỂ CHẨN ĐOÁN BỆNH LUẬN VĂN THẠC SĨ HÀ NỘI – 2015 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM - NGUYỄN THỊ THANH NGHIÊN CỨU SỰ LƯU HÀNH VIRUS CÚM CHỦNG A/H3N2 Ở ĐÀN LỢN NI TRÊN ĐỊA BÀN HẢI PHỊNG VÀ ỨNG DỤNG KỸ THUẬT REALTIME-PCR ĐỂ CHẨN ĐOÁN BỆNH CHUYÊN NGÀNH : THÚ Y MÃ SỐ : 60.64.01.01 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS NGUYỄN THỊ LAN HÀ NỘI – 2015 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan rằng, số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa sử dụng để bảo vệ học vị Tôi xin cam đoan rằng, giúp đỡ cho việc hoàn thành luận văn cảm ơn, thông tin trích dẫn luận văn ghi rõ nguồn gốc Hà Nội, tháng 09 năm 2015 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Thanh ii LỜI CẢM ƠN Mở đầu Luận văn cho xin chân thành cảm ơn giúp đỡ thầy, cô giáo khoa Thú y, cán Ban quản lý đào tạo, trường Học viện Nơng nghiệp Việt Nam, tồn thể thầy giáo, cô giáo giảng dạy thời gian học Cao học trường Đặc biệt xin chân thành cảm ơn PGS.TS.Nguyễn Thị Lan tận tình hướng dẫn, đóng góp nhiều ý kiến q báu, tạo điều kiện thuận lợi cho suốt q trình học tập hồn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn đồng nghiệp, bạn bè gia đình giúp đỡ, động viên để tơi hồn thành chương trình học tập hồn thành Luận văn tốt nghiệp Hà Nội, tháng 09 năm 2015 Tác giả Nguyễn Thị Thanh iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN ii LỜI CẢM ƠN iii MỤC LỤC iv DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vii DANH MỤC BẢNG viii DANH MỤC HÌNH, BIỀU ĐỒ ix MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục đích yêu cầu Ý nghĩa thực tiễn đề tài Chương I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Lịch sử bệnh cúm lợn 1.2 Nghiên cứu bệnh cúm lợn giới Việt Nam 1.2.1 Nghiên cứu bệnh cúm lợn giới 1.2.2 Nghiên cứu bệnh cúm lợn Việt Nam 1.3 Đặc điểm dịch tễ bệnh cúm lợn 10 1.3.1 Loài nhiễm bệnh 10 1.3.2 Mùa phát bệnh 10 1.3.3 Sự lây truyền 10 1.3.4 Cơ chế sinh bệnh 11 1.4 Virus học bệnh cúm lợn 12 1.4.1 Đặc điểm hình thái cấu trúc virus cúm type A 12 1.4.2 Kháng nguyên virus cúm A 15 1.4.3 Tính thích ứng đa vật chủ virus cúm 20 1.4.4 Cơ chế xâm nhiễm gây bệnh virus cúm A tế bào vật chủ 21 1.4.5 Đặc tính kháng nguyên virus cúm type A 22 1.4.6 Độc lực virus 25 1.4.7 Sức đề kháng virus cúm 25 iv 1.4.8 Tính chất nuôi cấy 26 1.5 Bệnh cúm lợn 26 1.5.1 Triệu chứng 26 1.5.2 Bệnh tích 27 1.5.3 Chẩn đoán 27 1.5.4 Điều trị 28 1.5.5 Phòng bệnh 28 Chương ĐỐI TƯỢNG, ĐỊA ĐIỂM, THỜI GIAN, NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.1 Đối tượng nghiên cứu 30 2.2 Địa điểm nghiên cứu 30 2.3 Thời gian nghiên cứu 30 2.4 Nội dung nghiên cứu 30 2.5 Nguyên liệu 30 2.5.1 Mẫu bệnh phẩm 30 2.5.2 Thiết bị 30 2.5.3 Hóa chất 31 2.6 Phương pháp nghiên cứu 31 2.6.1 Phương pháp điều tra dịch tễ học 31 2.6.2 Phương pháp lấy mẫu: 31 2.7 Phương pháp Realtime – PCR 32 2.8 Phương pháp xử lý số liệu 37 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 39 3.1 Thực trạng chăn ni địa bàn Hải Phịng 39 3.1.1 Nguồn cung cấp giống 40 3.1.2 Mức độ thường xuyên chăn nuôi 41 3.1.3 Nguồn nước 42 3.1.4 Thức ăn sử dụng chăn nuôi 43 3.1.5 Vệ sinh tiêu độc khử trùng 44 3.1.6 Tần suất vệ sinh, tiêu độc sát trùng 46 v 3.1.7 Tình hình tiêm vắc xin phòng bệnh 47 3.1.8 Tình hình bệnh cúm lợn địa bàn thành phố 48 3.2 Kết thu mẫu giám sát lưu hành virus cúm lợn chủng A/H3N2 49 3.2.1 Tổng số mẫu thu thập hộ chăn nuôi theo địa phương 49 3.2.2 Tổng số mẫu thu thập hộ chăn nuôi theo thời gian 50 3.2.3 Tổng số mẫu thu thập hộ chăn nuôi theo lứa tuổi lợn 51 3.2.4 Tổng số mẫu thu thập hộ chăn nuôi 51 3.3 Kết xác định virus cúm type A mẫu thu thập 51 3.3.1 Kết xác định virus cúm type A lợn theo địa phương 51 3.3.2 Kết mẫu dương tính với virus cúm type A lợn theo thời gian 54 3.3.3 Kết xác định virus cúm type A theo đối tượng lợn 54 3.3.3 Kết xác định dương tính với virus cúm type A lợn phân bố theo hộ chăn nuôi 55 3.4 Kết xác định virus cúm subtype H3 mẫu thu thập 56 3.5 Kết xác định virus cúm subtype N2 mẫu thu thập 59 KẾT LUẬN VÀ KHUYẾN NGHỊ 62 Kết luận 62 Đề nghị 62 TÀI LIỆU THAM KHẢO 64 PHỤ LỤC 66 vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT ADN: Axit deoxiribonucleic ARN: Axit ribonucleic CDC: Center for Disease Cotrol and Prevention Cs: Cộng FAO: Food and Agricatural Organization of the United Nations HA: Hemagglutinin NA: Neuraminidase PCR: Polymerase Chain Reaction vii DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Trang 3.1 Thống kê chăn nuôi lợn địa bàn Hải Phòng 39 3.2 Nguồn cung cấp giống lợn nuôi địa bàn thành phố Hải Phịng 40 3.3 Phương thức chăn ni lợn địa bàn thành phố Hải Phòng 41 3.4 Nguồn nước sử dụng chăn nuôi lợn địa bàn thành phố Hải Phòng 42 3.5 Thức ăn sử dụng chăn nuôi lợn địa bàn thành phố Hải Phòng 43 3.6 Các biện pháp vệ sinh, tiêu độc sát trùng sử dụng chăn nuôi lợn 45 3.7 Tần suất vệ sinh, tiêu độc sát trùng sử dụng chăn ni lợn địa bàn thành phố Hải Phịng 46 3.8 Tổng hợp số lượng lợn tiêm phòng tháng 2015 địa bàn thành phố Hải Phòng 47 3.9 Số hộ có lợn mắc bệnh đường hơ hấp 48 3.10 Lượng mẫu ngoáy mũi thu thập theo địa phương 49 3.11 Lượng mẫu thu thập theo thời gian 50 3.12 Lượng mẫu thu thập theo hộ 51 3.13 Kết xác định virus cúm type A 52 3.14 Kết mẫu dương tính virus cúm type A theo thời gian 54 3.15 Kết mẫu dương tính với virus cúm type A theo lứa tuổi 54 3.16 Kết mẫu dương tính type A theo hộ 55 3.17 Kết mẫu dương tính virus cúm subtype H3 theo địa phương 57 3.18 Kết mẫu dương tính virus cúm subtype H3 so với mẫu thu thập 57 3.19 Kết mẫu dương tính subtype H3 theo thời gian 58 3.20 Kết mẫu dương tính subtype H3 theo lứa tuổi 58 3.21 Kết mẫu dương tính với subtype N2 59 3.22 Kết mẫu dương tính subtype N2 subtype H3 60 3.23 Kết mẫu dương tính subtype N2 subtype H3 60 3.24 Kết mẫu dương tính subtype N2 theo lứa tuổi 61 viii DANH MỤC HÌNH, BIỀU ĐỒ STT Tên hình biểu đồ Trang Hình 1.1 Cấu trúc bên virus cúm gia cầm 12 Hình 1.2 Cấu trúc hệ gen virus cúm type A 15 Hình 1.3 Mơ hình cấu trúc kháng nguyên HA virus cúm A 23 Hình 2.1 Cơ chế hoạt động Taqman probe 33 Hình 3.1: Địa điểm triển khai lấy mẫu giám sát lưu hành virus cúm lợn 50 Hình 3.2 Bản đồ lưu hành virus cúm A đàn lợn 53 Biểu đồ 3.1: Tỷ lệ lưu hành virus cúm A địa phương 53 Biểu đồ 3.2: Tỷ lệ lưu hành virus cúm A theo lứa tuổi 55 Biểu đồ 3.3: Tỷ lệ lưu hành virus cúm A theo hộ chăn nuôi 56 ix ... ? ?Nghiên cứu lưu hành virus cúm chủng A/ H3N2 đàn lợn nuôi đ? ?a bàn Hải Phòng ứng dụng kỹ thuật Realtime- PCR để chẩn đốn bệnh? ?? Mục đích u cầu - Đánh giá lưu hành virus cúm chủng A/ H3N2 đàn lợn ni Hải Phịng... - Ứng dụng Realtime - PCR chẩn đoán bệnh Ý ngh? ?a thực tiễn đề tài - Kết nghiên cứu giúp đánh giá sựu lưu hành virus cúm chủng A/ H3N2 đàn lợn ni đ? ?a bàn Hải Phịng - Ứng dụng phản ứng Realtime- PCR. .. DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM - NGUYỄN THỊ THANH NGHIÊN CỨU SỰ LƯU HÀNH VIRUS CÚM CHỦNG A/ H3N2 Ở ĐÀN LỢN NI TRÊN Đ? ?A BÀN HẢI PHỊNG VÀ ỨNG DỤNG KỸ THUẬT