Đang tải... (xem toàn văn)
Phân tích đột biến gen tARN và ND3 của ADN ty thể ở bệnh nhân ung thư đại trực tràng Phân tích đột biến gen tARN và ND3 của ADN ty thể ở bệnh nhân ung thư đại trực tràng Phân tích đột biến gen tARN và ND3 của ADN ty thể ở bệnh nhân ung thư đại trực tràng Phân tích đột biến gen tARN và ND3 của ADN ty thể ở bệnh nhân ung thư đại trực tràng Phân tích đột biến gen tARN và ND3 của ADN ty thể ở bệnh nhân ung thư đại trực tràng Phân tích đột biến gen tARN và ND3 của ADN ty thể ở bệnh nhân ung thư đại trực tràng
ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - NGUYỄN THỊ NGỌC TÚ PHÂN TÍCH ĐỘT BIẾN GEN tARN VÀ ND3 CỦA ADN TY THỂ Ở BỆNH NHÂN UNG THƢ ĐẠI TRỰC TRÀNG LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội – 2012 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - Nguyễn Thị Ngọc Tú PHÂN TÍCH ĐỘT BIẾN GEN tARN VÀ ND3 CỦA ADN TY THỂ Ở BỆNH NHÂN UNG THƢ ĐẠI TRỰC TRÀNG Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 60 42 30 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS Trịnh Hồng Thái Hà Nội – 2012 LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS TS Trịnh Hồng Thái, ngƣời thầy quan tâm, tận tình bảo, hƣớng dẫn suốt trình học tập thực luận văn Trong trình học tập, làm việc thực luận văn, nhận đƣợc giúp đỡ TS Đỗ Minh Hà anh chị, bạn sinh viên làm việc Phòng Proteomics Sinh học cấu trúc thuộc Phòng thí nghiệm Trọng điểm Công nghệ Enzyme Protein, trƣờng Đại học Khoa học tự nhiên Tôi xin chân thành cảm ơn Trong trình thực luận văn, nhận đƣợc nhiều quan tâm, giúp đỡ cán nhân viên thuộc khoa Tế bào Giải phẫu bệnh, Bệnh viện K Tam Hiệp, Hà Nội khoa Giải phẫu bệnh, Bệnh viện Việt Đức, Hà Nội Tôi xin chân thành cảm ơn Trong trình học tập thực luận văn, Ban lãnh đạo bạn bè đồng nghiệp Bệnh viện 19-8 tạo điều kiện cho có thời gian học tập, nghiên cứu để hoàn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn Cuối cùng, vô biết ơn gia đình bạn bè khích lệ, động viên bên suốt thời gian qua Hà Nội, tháng 12 năm 2012 Học Viên Nguyễn Thị Ngọc Tú MỤC LỤC BẢNG KÝ HIỆU VÀ CÁC CHỮ VIẾT TẮT a DANH MỤC CÁC BẢNG c DANH MỤC CÁC HÌNH d MỞ ĐẦU .1 Chƣơng 1- TỔNG QUAN 1.1 TY THỂ 1.1.1 Hệ genome ty thể 1.1.2 Đột biến ADN ty thể bệnh ty thể 1.1.3 Đột biến ADN ty thể bệnh ung thƣ 1.2 UNG THƢ ĐẠI TRỰC TRÀNG 10 1.2.1 Khái quát ung thƣ đại trực tràng 10 1.2.2 Nguyên nhân gây ung thƣ đại trực tràng 11 1.2.3 Phân loại dạng ung thƣ đại trực tràng theo mô học 12 1.2.4 Các phƣơng pháp chẩn đoán ung thƣ đại trực tràng [20] 15 1.3 ĐỘT BIẾN ADN TY THỂ VÀ BỆNH UNG THƢ ĐẠI TRỰC TRÀNG 16 1.3.1 Đột biến gen tARN ADN ty thể .17 1.3.2 Đa hình gen ND3 ADN ty thể 19 1.3.3 Các phƣơng pháp phát đột biến gen ty thể giúp chẩn đoán bệnh 22 1.3.4 Tình hình nghiên cứu nƣớc .24 CHƢƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP .26 2.1 NGUYÊN LIỆU .26 2.1.1 Đối tƣợng nghiên cứu .26 2.1.2 Hóa chất 26 2.1.3 Thiết bị 27 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 2.2.1 Tách chiết ADN tổng số từ mô 28 2.2.2 Khuếch đại đoạn gen 398 đoạn gen 3243 ADN ty thể PCR 29 2.2.3 Phân tích RFLP .31 2.2.4 Điện di kiểm tra sản phẩm PCR sản phẩm cắt enzym giới hạn 32 2.2.5 Tinh ADN .35 Chƣơng - KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 37 3.1 KẾT QUẢ PHÂN TÍCH ĐỘT BIẾN ĐIỂM A3243G CỦA GEN tARN TY THỂ BẰNG KỸ THUẬT PCR-RFLP 37 3.1.1 Tách chiết ADN tổng số từ mẫu mô ung thƣ đại trực tràng 37 3.1.2 Kết nhân đoạn gen 3243 ADN ty thể 38 3.1.3 Kết phân tích RFLP đoạn gen chứa vị trí 3243 ADN ty thể 38 3.2 KẾT QUẢ PHÂN TÍCH ĐA HÌNH A1 398G CỦA GEN ND3 ADN TY THỂ BẰNG KỸ THUẬT PCR-RFLP 40 3.2.1 Kết nhân đoạn gen 10398 ADN ty thể 40 3.2.2 Kết phân tích RFLP đoạn gen mang đa hình A1 398G 41 3.2.3 Kết giải trình tự đoạn gen mang đột biến A10398G 42 3.2.4 Phân tích mối liên quan đa hình A1 398G với đ c điểm bệnh học lâm sàng bệnh nhân ung thƣ đại trực tràng 46 KẾT LUẬN .59 KIẾN NGHỊ 60 TÀI LIỆU THAM KHẢO 61 PHỤ LỤC .i Phụ lục Danh sách bệnh nhân đ c điểm lâm sàng .i Phụ lục Kết giải trình tự đoạn 10398 vi Luận văn Cao học Nguyễn Thị Ngọc Tú _ BẢNG KÝ HIỆU VÀ CÁC CHỮ VIẾT TẮT Viết tắt Viết đầy đủ bp Base pair (c p bazơ) CPEO Chronic progressive external ophthalmoplegia (Bệnh liệt mắt tiến triển mãn) cs Cộng DHPLC Denaturing high performance liquid chromatography (Sắc ký lỏng biến tính hiệu cao) EDTA Ethylene Diamine Tetraacetic Acid KSS Kearn–Sayre syndrome (Hội chứng Kearn-Sayre) LHON Leber hereditary optic neuropathy (Bệnh liệt thần kinh thị giác di truyền Leber) LS Leigh syndrome (Hội chứng Leigh) MELAS Mitochondrial encephalopathy, lactic acidosis and stroke -like episodes (Bệnh viêm não tủy nhiễm acid lactic với biểu tƣơng tự đột quỵ) MERRF Myoclonus epilepsy and ragged red fibers (Chứng động kinh co giật có sợi đỏ nham nhở) mtDNA Mitochondrial DNA (ADN ty thể) NARP Neuropathy, ataxia, and retinitis pigmentosa (Bệnh thần kinh, điều hòa thoái hóa võng mạc) ND3 NADH dehydrogenase PCR Polymerase chain Reaction (Phản ứng chuỗi trùng hợp) a Luận văn Cao học Nguyễn Thị Ngọc Tú _ RFLP Restriction Fragment Length Polymorphism (Đa hình độ dài đoạn cắt giới hạn) ROS Reactive oxygen species (Các loại oxy phản ứng) SDS Sodium dodecyl sulfate SNP Single nucleotide polymorphism (Đa hình đơn nucleotide) TBE Tris borate EDTA TNM TumorNodeMetastasis b Luận văn Cao học Nguyễn Thị Ngọc Tú _ DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Hệ thống phân loại TNM ung thƣ đại trực tràng [29] .13 Bảng Các giai đoạn bệnh TNM tỉ lệ sống sót giai đoạn bệnh khác [29] 15 Bảng Thống kê mẫu sử dụng 26 Bảng Các hóa chất đƣợc sử dụng nghiên cứu .26 Bảng Các thiết bị đƣợc sử dụng nghiên cứu 27 Bảng Các c p mồi đƣợc sử dụng phản ứng PCR 29 Bảng Thành phần phản ứng PCR với thể tích phản ứng 12,5 l 30 Bảng Thành phần phản ứng cắt sử dụng enzyme cắt giới hạn HaeIII DdeI 32 Bảng Dải nồng độ gel agarose dùng phân tách acid nucleic [6] 33 Bảng 10 Khả phân tách gel polyacrylamide acid nucleic [6] .34 Bảng 11.Các thành phần cần sử dụng cho gel dày ,75 mm, kích thƣớc 7cm35 Bảng 12 Phân bố đa hình A10398G ADN ty thể bệnh nhân ung thƣ đại trực tràng theo đ c điểm bệnh học lâm sàng 46 c Luận văn Cao học Nguyễn Thị Ngọc Tú _ DANH MỤC CÁC HÌNH Hình Sơ đồ cấu tạo ADN ty thể ngƣời [ 75] Hình Các bệnh liên quan đến rối loạn ADN ty thể [64] Hình Genome ty thể với đột biến bệnh ung thƣ [19] Hình Hình ảnh đại trực tràng [76] 11 Hình Các giai đoạn phát triển ung thƣ đại trực tràng [77] 15 Hình Một số đột biến điểm tARN ty thể ngƣời [59] 17 Hình Hình ảnh điện di ADN tổng số tách chiết từ mô 37 Hình Ảnh điện di sản phẩm PCR đoạn gen 3243 38 Hình Ảnh điện di sản phẩm cắt đoạn 3243 với enzyme HaeIII .39 Hình 10 Ảnh điện di sản phẩm PCR đoạn gen 10398 .41 Hình 11 Ảnh điện di sản phẩm cắt đoạn 398 với enzyme DdeI 42 Hình 12 Kết giải trình tự mẫu không mang đột biến A10398G 43 Hình 13 Kết so sánh trình tự mẫu không mang đột biến với trình tự ADN chuẩn ty thể 44 Hình 14 Kết giải trình tự mẫu mang đột biến A10398G 44 Hình 15 Kết so sánh trình tự mẫu mang đột biến với trình tự ADN chuẩn ty thể 45 Hình 16 Biểu đồ phân bố đa hình A1 398G theo vị trí mô 48 Hình 17 Biểu đồ phân bố đa hình A1 398G theo giới tính 49 Hình 18 Biểu đồ phân bố đa hình A1 398G theo tuổi 50 d Luận văn Cao học Nguyễn Thị Ngọc Tú _ Hình 19 Biểu đồ phân bố đa hình A1 398G theo vị trí khối u 51 Hình 20 Biểu đồ phân bố đa hình A1 398G theo kích thƣớc u 52 Hình 21 Biểu đồ phân bố đa hình A10398G theo số hạch 53 Hình 22 Biểu đồ phân bố đa hình A1 398G theo giai đoạn TNM .54 Hình 23 Biểu đồ phân bố đa hình A1 398G theo mức độ biệt hóa 55 e Luận văn Cao học Nguyễn Thị Ngọc Tú _ 20 Cheah P Y (2009), "Recent advances in colorectal cancer genetics and diagnostics", Critical Reviews in Oncology/Hematology, 69(1), pp 44-45 21 Chen T et al (2011), "The mitochondrial DNA 4,977-bp deletion and its implication in copy number alteration in colorectal cancer", BMC Medical Genetics, 12, pp 22 Chinnery P F., Johnson M A and Wardell T M (2000), "Epidemiology of pathogenic mitochondrial DNA mutations", Annals of Neurology, 48, pp 188-193 23 Choi S J et al (2011), "Mutational hotspots in the mitochondrial genome of lung cancer", Biochemical and Biophysical Research Communications, 407(1), pp 23-27 24 Czarnecka A M., Golik P., and Bartnik E (2006), "Mitochondrial DNA mutations in human neoplasia", Journal of Applied Genetics , 47(1), pp 6778 25 Czarnecka A M., Krawczyk T., and Zdrozny M (2010), "Mitochondrial NADH-dehydrogenase subunit (ND3) polymorphism (A10398G) and sporadic breast cancer in Poland", Breast cancer Research Treatment, 121, pp 511-518 26 Darvishi K., Sharma S., and Bhat A K (2007), "Mitochondrial DNA G10398A polymorphism imparts maternal haplogroup N a risk for breast and esophageal cancer", Cancer Letters, 249, pp 249-255 27 Desler C et al (2011), "The importance of mitochondrial DNA in aging and cancer", Journal of Aging Research, 28 Dubeau F et al (2000), "Oxidative phosphorylation defect in the brains of carriers of the tRNAleu(UUR) A3243G mutation in a MELAS pedigree", Annals of Neurology , 47(2), pp 179-185 29 Edge S B and Byrd D R (2002), AJCC Cancer Staging Manual, sixth ed, Springer-Verlag New York 63 Luận văn Cao học Nguyễn Thị Ngọc Tú _ 30 Fang H., Shen L., and Chen T (2010), "Cancer type-specific modulation of mitochondrial haplogroups in breast, colorectal and thyroid cancer", BMC Cancer, 10(421) 31 Goto Y., Nonaka I., and Horai S (1990), "A mutation in the tRNA(Leu)(UUR) gene associated with the MELAS subgroup of mitochondrial encephalomyopathies", Nature, 348(6302), pp 651-653 32 Green D R (1998), "Apoptotic pathways: the roads to ruin", Cell, 6, pp 695-698 33 Howe J R and Guillem J G (1997), “The genetics of colorectal cancer”, Clinical Cancer Research, 8, pp 450-456 34 Juo S H., et al (2010), "A common mitochondrial polymorphism 10398A>G is associated metabolic syndrome in a Chinese population", Mitochondrion, 10(3), pp 294-299 35 Kaleigh S (2002), "Genetic Polymorphism and SNPs Genotyping, Haplotype Assembly Problem, Haplotype Map, Functional Genomics and Proteomics" 36 Karicheva O Z et al (2011), "Correction of the consequences of mitochondrial 3243A>G mutation in the MT-TL1 gene causing the MELAS syndrome by tRNA import into mitochondria", Nucleic Acids Research, 39(18), pp 8173-8186 37 Kazuno A., Munakata K., and Nagai T (2006), "Identification of Mitochondrial DNA Polymorphisms That Alter Mitochondrial Matrix pH and Intracellular Calcium Dynamics", Public Library of Science Genetics, 2(8) 38 Kim M M., Clinger J D., and et al (2004), "Mitochondrial DNA quantity increases with histopathologic grade in premalignant and malignant head and neck lesions", Clinical Cancer Research, 10, pp 8512-8515 64 Luận văn Cao học Nguyễn Thị Ngọc Tú _ 39 Kornprat P., Pollheimer M J., and Lindtner R A (2011), "Value of Tumor Size as a Prognostic Variable in Colorectal Cancer: A Critical Reappraisal", American Journal of Clinical Oncology, 34(1), pp 43-49 40 Lascorz J et al (2012), "Polymorphisms in the mitochondrial oxidative phosphorylation chain genes as prognostic markers for colorectal cancer", BMC Medical Genetics, 13 41 Lee H C et al (2004), "Somatic mutations in the D-Loop and decrease in the copy number of mitochondrial DNA in human hepatocellular carcinoma", Mutations, 547, pp 71-78 42 Yao D S (2 7), “Specific molecular markers in hepatocellular carcinoma”, Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International , 6(3), 241-247 43 Lim K S., Naviaux R K., and Haas R H (2007), "Quantitative Mitochondrial DNA Mutation Analysis by Denaturing HPLC", Clinical Chemistry, 53(6), pp 1046-1052 44 Lin P C et al (2 8), "Expression of β-F1-ATPase and mitochondrial transcription factor A and the change in mitochondrial DNA content in colorectal cancer: clinical data analysis and evidence from an in vitro study", International Journal of Colorectal Disease, 23, pp 1223-1232 45 Liu V W et al (2001), "High incidence of somatic mitochondrial DNA mutations in human ovarian carcinomas", Cancer Research, 61, pp 59986001 46 Lorenc A et al (2003), "Homoplasmic MELAS A3243G mtDNA mutation in a colon cancer sample", Mitochondrion , 3(2), pp 119-124 47 Mambo E et al (2005), "Tumor-specific changes in mtDNA content in human cancer", International Journal Cancer, 116(6), pp 920-924 48 Mancuso M., Conforti F L., and Rocchi A (2004), "Could mitochondrial haplogroups play a role in sporadic amyotrophic lateral sclerosis?", Neuroscience Letters., 371, pp 158-162 65 Luận văn Cao học Nguyễn Thị Ngọc Tú _ 49 Mansoureh A et al (2011), "Analysis of mitochondrial ND1 gene in human colorectal cancer", Journal of Research in Medical Sciences, 16(1), pp 5055 50 Marzuki S., Noer A S., and Lertrit P (1991), "Normal variants of human mitochondrial DNA and translation products: the building of a reference data base", Human Genetics, 88(2), pp 139-145 51 Modica-Napolitano J S., Kulawiec M., and Singh K K (2007), "Mitochondria and Human Cancer", Current Molecular Medicine, 7, pp 121-131 52 Pezzotti A., Kraft P., and Hankinson S E (2009), "The Mitochondrial A10398G Polymorphism, Interaction with Alcohol Consumption and Breast Cancer Risk", PLoS ONE, 4(4) 53 Polyak K et al (1998), "Somatic mutations of the mitochondrial genome in human colorectal tumours", Nature Genetics, 20, pp 291-293 54 Reid F M., Vernham G A., and Jacobs H T (1994), "A novel mitochondrial point mutation in a maternal pedigree with sensorineural deafness", Human Mutations, 3(3), pp 243-247 55 Setiawan V W., Chu L H., and John E M (2008), "Mitochondrial DNA G10398A variant is not associated with breast cancer in African- American women", Cancer Genetic Cytogenetics, 181, pp 16-19 56 Skonieczna K., Malyarchuk B A., and Grzybowski T (2012), "The landscape of mitochondrial DNA variation in human colorectal cancer on the background of phylogenetic knowledge", Biochimica et Biophysica Acta, 1825, pp 153-159 57 Solano A., Playan A., and Lopez-Perez M (2001), "Genetic diseases of human mitochondrial DNA", Salud publica de Mexico, 43, pp 151-161 58 Tan D J., Bai R K., and Wong L J (2002), "Comprehensive scanning of somatic mitochondrial DNA mutations in breast cancer", Cancer Research, 62, pp 972-976 66 Luận văn Cao học Nguyễn Thị Ngọc Tú _ 59 Taniike M and Yanagihara F H (1992), "Mitochondrial tRNA(Ile) mutation in fatal cardiomyopathy", Biochemical and Biophysical Research Communications, 186, pp 47-53 60 Taylor R W and Turnbull D M (2005), "Mitochondrial DNA mutations in human disease", Nature Reviews Genetics, 6, pp 389-402 61 Theodoratou E., Din F V N., and Farrington S M (2006), "Association between comon mtDNA variants and all-cause or colorectal cancer mortality", Carcinogenesis, 31, pp 296-301 62 Torroni A., Schurr T G., and Cabell M F (1993), "Asian affinities and continental radiation of the four founding Native American mtDNAs", The American Journal of Human Genetics, 53(3), pp 563-590 63 Tseng L M et al (2006), "Mitochondrial DNA mutations and mitochondrial DNA depletion in breast cancer", Genes, Chromosomes and Cancer, 45, pp 629-638 64 Tuppen H A., Blakely E L., and Turnbull D M (2010), "Mitochondrial DNA mutations and human disease", Biochimica et Biophysica Acta (BBA) Bioenergetics, 1797(2), pp 113-128 65 Van der Walt J M et al (2004), "Analysis of European mitochondrial haplogroups with Alzheimer disease risk.", Neuroscience Letters., 365(1), pp 28-32 66 Van der Walt J M., Nicodemus K K., and Martin E R (2003), "Mitochondrial Polymorphisms Significantly Reduce the Risk of Parkinson Disease", The American Journal of Human Genetics, 72(4), pp 804-811 67 Wallace D C and Lott M T (2002), Mitochondrial Genes in Degenerative Diseases, Cancer, and Aging, London, Churchill Livingstone 68 Wallace D C et al (1988), "Mitochondrial DNA mutation accociated with Leber's hereditary optic neuropathy", Science, 242(1427-1430) 67 Luận văn Cao học Nguyễn Thị Ngọc Tú _ 69 Wang Y., et al (2006), "Association of decreased mitochondrial DNA content with ovarian cancer progression", British Journal of Cancer, 95, pp 1087-1091 70 Warburg O (1930), "The metabolism of tumors", London Constable Co Ltđ 71 Webb E., Broderick P., and Chandler I (2008), "Comprehensive analysis of common mitochondrial DNA variants and colorectal cancer risk", British Journal of Cancer, 99, pp 2088-2093 72 Wu C W et al (2005), "Mitochondrial DNA mutations and mitochondrial DNA depletion in gastric cancer", Genes, Chromosomes and Cancer 44, pp 19-28 73 Ye C., Shu X., and Wen W (2008), "Quantitative analysis of mitochondrial DNA 4977-bp deletion in sporadic breast cancer and benign breast diseases", Breast Cancer Research Treatment 108, pp 427-434 74 Yeh J J., Lunetta K L., and van Orsouw N J (2000), "Somatic mitochondrial DNA (mtDNA) mutations in papillary thyroid carcinoma and differential mtDNA sequence variants in case with thyroid tumour", Oncogene, 19, pp 2060-2066 Tài liệu World wide web 75 http://chemistry.umeche.maine.edu/CHY431/Code4.html 76 http://suckhoedoisong.vn/201012280936443p0c44/khong-chu-quan-voidau-hieu-ban-dau.htm 77 https://www.c3life.com/ostomy/ostomybasics/colorectal-cancer/ 78 http://www.medicinenet.com/colon_cancer/article.htm 79 http://www.cancer.gov/cancertopics/types/colon-and-rectal 68 PHỤ LỤC Phụ lục Danh sách bệnh nhân đặc điểm lâm sàng Bệnh viện K, Tam Hiệp STT Mã số 8702 10200 Tuổi Giới tính Vị trí khối u Kích thƣớc u (cm) Số hạch Kích thƣớc hạch (cm) Vị trí hạch Kiểu ung thƣ Lê Văn S 31 Nam Trực tràng 4x5cm 1.5 Gần trực tràng Ung thƣ biểu mô tuyến Dƣơng Thị H 58 Nữ Trực tràng Gần trực tràng Ung thƣ biểu mô tuyến + Nguyễn Sỹ V 73 Nam Trực tràng 6x7cm 1-1.2 Ung thƣ biểu mô tuyến + 0.5-1 Họ tên Gần đại tràng Ung thƣ biểu mô tuyến 11 Gần đại tràng Ung thƣ biểu mô tuyến 2x2cm Gần đại tràng Ung thƣ biểu mô tuyến Đại tràng 4x5cm Gần đại tràng Ung thƣ biểu mô tuyến Nữ Trực tràng 2x2.5cm Gần trực tràng Ung thƣ biểu mô tuyến 51 Nữ Đại tràng 4x4.5cm Gần đại tràng Ung thƣ biểu mô tuyến Nguyễn Thị T 48 Nữ Trực tràng 3x4cm Gần trực tràng Ung thƣ biểu mô tuyến Ninh Thị C 46 Nữ Trực 2.5x4cm Gần trực Ung thƣ biểu 9802 Lê Tất L 26 Nam Đại tràng 2x2.5cm 9807 Nguyễn Thị V 87 Nữ Đại tràng 8x10cm 10489 Đỗ Văn C 54 Nam Đại tràng 8619 Nguyễn Tiến Ƣ 60 Nam 10517 Triệu Thị T 44 10597 Hoàng Thị Q 10 10600 11 10608 0.5 i Ổ sùi loét + + TNM Đa hình A10398G T3N1M0 A T2N0M0 A A T1N0M0 G T4N1M1 G T1N0M0 G T3N1M0 A T1N0M0 G T3N1M0 + Mức độ biệt hóa G T2N0M0 G T2N0M0 G tràng tràng mô tuyến Gần đại tràng Ung thƣ biểu mô tuyến T2N1M0 G 12 10611 Bùi Công H 71 Nam Đại tràng 3.5x4cm 11 13 10626 Nguyễn Duy A 54 Nam Đại tràng 2x6cm Gần đại tràng Ung thƣ biểu mô tuyến T3N1M0 A 14 10731 Lê Thu P 63 Nữ Đại tràng 3.5x4cm Gần đại tràng Ung thƣ biểu mô tuyến T2N0M0 G 15 10740 Ngũ Thanh H 42 Nữ Trực tràng 2.5x3cm Gần trực tràng Ung thƣ biểu mô tuyến + T2N0M0 G 16 10774 Phạm Văn T 57 Nam Trực tràng 2.5x2cm Gần trực tràng Ung thƣ biểu mô tuyến + T2N0M0 G 17 11777 Nguyễn Thị T 71 Nữ Trực tràng 3x4cm 0.5-1 Gần trực tràng Ung thƣ biểu mô tuyến T3N0M0 A 18 11781 Dƣơng Văn T 57 Nam Trực tràng 2.5x3cm 0.5-0.8 Ung thƣ biểu mô tuyến + T2N0M0 A 19 11803 Cao Ngọc T 48 Nam Trực tràng 4x6cm 11 0.5-1.2 Ung thƣ biểu mô tuyến + T3N1M0 A 20 11812 Nguyễn Trung T 57 Nam Trực tràng 4x6cm 0.5x0.5 Gần trực tràng Ung thƣ biểu mô tuyến + T3N0M0 G 21 11822 Cao Xuân V 49 Nam Trực tràng 2.5cm 0.4 Gần trực tràng Ung thƣ biểu mô tuyến + T2N0M0 G 22 10282 Nghiêm Thị M 74 Nữ Đại tràng 3x4cm Gần đại tràng Ung thƣ biểu mô tuyến T2N0M0 A 23 8276 Vũ Quang N 63 Nam Đại tràng 4x5cm Ung thƣ biểu mô tuyến T2N1M0 A 24 16678 Phạm Vĩnh B 75 Nam Trực tràng 4x6 25 16756 Nguyễn Văn T 55 Nam Đại trực tràng 0.5-1 ii Ung thƣ biểu mô tuyến - T1N2M0 Kém G Ung thƣ biểu mô tuyến - T2N1M0 Vừa G 26 16675 Đào Tiến L 51 Nam Đại trực tràng 3x4 Ung thƣ biểu mô tuyến + T1N0M0 27 16689 Trần Văn T 61 Nam Trực tràng 2x2.5 Ung thƣ biểu mô tuyến + T1N1M0 28 16890 Chu Thị C 68 Nữ Trực tràng Ung thƣ biểu mô tuyến - 29 16714 Trần Thị T 48 Nữ Trực tràng Ung thƣ biểu mô tuyến + T2N0M0 30 16723 Lê Đình H 56 Nam Đại tràng Gần đại tràng Ung thƣ biểu mô tuyến + T1N2M0 A 31 8614 Lê Thị Y 55 Nữ Đại tràng Gần đại tràng Ung thƣ biểu mô tuyến T2N0M0 A 3x3.5 2.5x3 3 2x3 0,5-1 G Vừa G G T2N1M0 Vừa A Bệnh viện Việt Đức Ổ sùi loét TNM Mức độ phân hóa Đa hình A10398G Ung thƣ biểu mô tuyến + T3N0M0 Cao G 5x4 cm Ung thƣ biểu mô tuyến T3N1 Vừa A Trực tràng x3cm Ung thƣ biểu mô tuyến T4NoM1 Vừa G Nam Đại tràng 4x5x3 cm Ung thƣ biểu mô tuyến T3N0 Cao A 63 Nam Đại tràng 5x3 cm Ung thƣ biểu mô tuyến T3N0 Vừa A 42 Nam Trực tràng 3x2 cm Ung thƣ biểu mô tuyến T4N0M0 Cao A Giới tính Vị trí u Kích thƣớc u Số hạch Nguyễn Văn S 71 Nam Đại tràng 6x8 cm 3035 Nguyễn Thị M 61 Nữ Trực tràng 34 3161 Đỗ Thị H 36 Nữ 35 3352 Nguyễn Viết Q 95 36 3372 Nguyễn Khắc Q 37 3558 Nguyễn Hữu Đ Mã 32 2903 33 Họ tên Kích thƣớc hạch Kiểu ung thƣ Tuổi STT iii Vị trí hạch + + Hoàng Thị T 54 Nữ Đại tràng 5x3 cm Ung thƣ biểu mô tuyến T2N0 Vừa A X7492 Nguyễn Thị N 64 Nữ Trực tràng 8x5 cm Ung thƣ biểu mô tuyến T4N0M0 Vừa A 40 X7488 Nguyễn Thị M 59 Nữ Đại tràng 7x6 cm Ung thƣ biểu mô tuyến T1N1M1 Cao G 41 X7835 Đào Công H 55 Nam Đại tràng 3x4 cm Ung thƣ biểu mô tuyến + T3N0M0 Cao A 42 X7825 Nguyễn Thị T 60 Nữ Đại tràng 3x3.5 cm Ung thƣ biểu mô tuyến + T3N0M0 Vừa A 43 3822 Đỗ Thị H 26 Nữ Đại tràng 9x6 x6 cm Ung thƣ biểu mô tuyến T4N2Mo Vừa G 44 3825 Đinh Văn G 53 Nam Trực tràng 4x3 Ung thƣ biểu mô tuyến T3N0 Vừa G 45 3905 Nguyễn Thị T 80 Nữ Trực tràng 4x3 Ung thƣ biểu mô tuyến T3N0 Vừa A 46 3906 Nguyễn Thị T 65 Nữ Đại tràng 10x8x6 cm Ung thƣ biểu mô tuyến T4N0 Vừa A 47 4101 Nguyễn Thị X 53 Nữ Đại tràng 6x4 cm Ung thƣ biểu mô tuyến T4N1 Vừa G 48 4120 Đỗ Thị V 51 Nữ Trực tràng cm Ung thƣ biểu mô tuyến T3N0 Vừa G 49 4297 Phạm Văn T 43 Nam Đại tràng 10x8 cm Ung thƣ biểu mô tuyến T3N0 Vừa A 50 4374 Đoàn Thị R 46 Nữ Trực tràng 6x4 cm Ung thƣ biểu mô tuyến T3N0 Vừa G 51 4463 Nguyễn Văn M 53 Nam Đại tràng Ung thƣ biểu mô tuyến + T4N1M0 Vừa A 52 4475 Nguyễn Thị G 76 Nữ Trực tràng Ung thƣ biểu mô tuyến + T4N1M0 Kém G 38 3753 39 iv 53 4539 Hoàng Đình X 79 Nam Đại tràng Đại tràng 3x1 cm Ung thƣ biểu mô tuyến + T3N1 A Ung thƣ biểu mô tuyến + T4N2M0 G G 54 4595 Trịnh Thị N 51 Nữ 55 4603 Trần Văn V 46 Nam Trực tràng Ung thƣ biểu mô tuyến + T3N0 56 4620 Ngô Thị H 35 Nữ Đại tràng Ung thƣ biểu mô tuyến + T4N0 57 4644 Hoàng Hữu T 55 Nam Trực tràng Ung thƣ biểu mô tuyến 58 4779 Nguyễn Văn N 51 Nam Đại tràng 59 4833 Nguyễn Thị P 59 Nữ Đại tràng 60 4841 Cà Thị V 68 Nữ Trực tràng 61 4942 Nguyễn Thị C 58 Nữ Đại tràng 6x5 cm 2x1 Vừa A T4N1 G G Ung thƣ biểu mô tuyến + T3 Ung thƣ biểu mô tuyến + T3N0M0 Cao A Ung thƣ biểu mô tuyến + T3N0 Vừa G Ung thƣ biểu mô tuyến + T3N1 v G Phụ lục Kết giải trình tự đoạn vi vii viii ix [...]... Phân tích đột biến gen tARN và ND3 của ADN ty thể ở bệnh nhân ung thƣ đại trực tràng với mục đích: Phát hiện đột biến gen tARN và ND3 của ADN ty thể ở bệnh nhân ung thƣ đại trực tràng bằng kỹ thuật PCR-RFLP Đánh giá mối liên quan giữa đột biến gen tARN và ND3 của ADN ty thể với các đ c điểm lâm sàng của bệnh ung thƣ đại trực tràng ở ngƣời Việt Nam Đề tài đƣợc thực hiện tại phòng Proteomics và. .. thế giới đã cho thấy đột biến ADN ty thể liên quan ch t chẽ với nhiều loại bệnh, nhất là bệnh ty thể và bệnh ung thƣ Đối với bệnh ung thƣ đại trực tràng, để đạt đƣợc hiệu quả điều trị tốt thì bệnh nhân cần đƣợc chẩn đoán càng sớm, càng tốt Trong khuôn khổ luận văn này, chúng tôi tiến hành nghiên cứu những biến đổi của các gen tARN và ND3 của ADN ty thể ở bệnh nhân ung thƣ đại trực tràng với mục đích... (tại vị trí A3243G) và gen ND3 (tại vị trí A10398G) 1.3.1 Đột biến gen tARN của ADN ty thể Đột biến điểm tARN ty thể là đột biến chiếm phần lớn trong các đột biến ty thể gây ra bệnh ty thể Hai đột biến tARN đƣợc phát hiện đầu tiên là A8344G trên tRNALys và A3243G trên tARNLeu(UUR) là phổ biến và đƣợc nghiên cứu nhiều nhất Đột biến A3243G có liên quan đến rất nhiều biểu hiện lâm sàng và thƣờng gây ra hội... thống kê giữa mô thƣờng và mô bệnh [49] Alonso và cs (1997) xác định sự có m t của đột biến ADN ty thể (23%) trên vùng D-Loop Những đột biến này là đột biến điểm A→T, G→C, đột biến mất 1bp, và đột biến thêm 2 bp [9] Skonieczna và cs (2012) khi tổng kết lại một số nghiên cứu về đột biến điểm của ADN ty thể ở bệnh nhân ung thƣ đại trực tràng thấy rằng 88,6% đột biến là dạng transition (biến đổi giữa các purin... copy M t khác, đột biến ADN ty thể ở các gen mã hóa cho các protein của chuỗi phosphoryl hóa oxy hóa lại có thể làm tăng số bản copy, nhƣ là một cách để đáp ứng lại sự mất chức năng của ty thể [38] 1.2 UNG THƢ ĐẠI TRỰC TRÀNG 1.2.1 Khái quát về ung thƣ đại trực tràng Ung thƣ đại trực tràng hay còn gọi là ung thƣ ruột kết (colon cancer) bao gồm ung thƣ đại tràng và ung thƣ trực tràng Đại tràng là phần... nhỏ (≈26 bp và ≈52 bp) trong vùng D-Loop của ADN ty thể trong mô ung thƣ của 1 bệnh nhân ung thƣ dạ dày [72] Hai đột biến này đ c trƣng bởi có 2 ho c 3 đoạn l p lại kế tiếp nhau Thay đổi số bản sao ADN ty thể Biến đổi về số bản sao ADN ty thể đã đƣợc phát hiện ở nhiều loại bệnh ung thƣ Số bản sao ADN ty thể tăng ở ung thƣ tuyến giáp [47], ung thƣ phổi [15], ung thƣ đại trực tràng [44] Biến đổi theo... _ Đột biến điểm Phân tích đột biến ADN ty thể ở bệnh ung thƣ vú, Tan và cs (2 2) đã giải trình tự genome ty thể trên 19 c p mô ung thƣ và mô bình thƣờng của cùng bệnh nhân và đã cho thấy có 74% bệnh nhân mang đột biến soma, trong đó có 81,5% đột biến thuộc vùng D-loop, phần còn lại (18,5%) đƣợc xác định trong các gen 16S rRNA, ND2 và ATPase 6 [58] Trong số các đột biến trên, đột biến thêm ho c mất base... vùng D-Loop, còn lại 52% là đột biến điểm thuộc vùng ghi mã và không ghi mã [55] Đột biến ADN ty thể đƣợc tìm thấy ở bệnh ung thƣ đại trực tràng Polyak và cs đã tìm thấy đột biến ADN ty thể trong các vùng ghi mã ND1, ND4, ND5, cytochrome b, COXI, COXII và COXIII, cũng nhƣ các gen rRNA 12S và 16S [53] Với bệnh ung thƣ buồng trứng, Liu và cs đã xác định đƣợc 6 % đột biến ADN ty thể, trong đó phần lớn là... Chẩn đoán dựa vào xét nghiệm sinh hóa máu: Một số các xét nghiệm phổ biến có thể kể tới là xét nghiệm sinh hóa phát hiện kháng nguyên ung thƣ (CEA), xét nghiệm máu trong phân (FOBT) 1.3 ĐỘT BIẾN ADN TY THỂ VÀ BỆNH UNG THƢ ĐẠI TRỰC TRÀNG Hiện nay đã có nhiều nghiên cứu phát hiện đột biến ADN ty thể ở vùng mã hóa và vùng không mã hóa (D-Loop) ở bệnh nhân ung thƣ đại trực tràng Năm 1998, Polyak và cs đã xác... số bản sao ADN ty thể đƣợc xác định thấy ở bệnh ung thƣ vú [63], ung thƣ biểu mô tế bào gan [42], ung thƣ buồng trứng [69] Nhƣ vậy biến đổi về hàm lƣợng ADN ty thể có liên quan với loại ung thƣ Ngƣời ta cho rằng số lƣợng bản sao ADN ty thể trong bệnh ung thƣ có thể phụ thuộc vị trí của đột biến trong bệnh ung thƣ đó Ví dụ nhƣ các đột biến trong vùng D-Loop, điều khiển sự nhân bản ADN ty thể sẽ làm ... sâu vào đột biến ADN ty thể gen tARN (Leu) (tại vị trí A3243G) gen ND3 (tại vị trí A10398G) 1.3.1 Đột biến gen tARN ADN ty thể Đột biến điểm tARN ty thể đột biến chiếm phần lớn đột biến ty thể. .. ung thƣ đại trực tràng với mục đích: Phát đột biến gen tARN ND3 ADN ty thể bệnh nhân ung thƣ đại trực tràng kỹ thuật PCR-RFLP Đánh giá mối liên quan đột biến gen tARN ND3 ADN ty thể với... 1.1.2 Đột biến ADN ty thể bệnh ty thể 1.1.3 Đột biến ADN ty thể bệnh ung thƣ 1.2 UNG THƢ ĐẠI TRỰC TRÀNG 10 1.2.1 Khái quát ung thƣ đại trực tràng 10 1.2.2 Nguyên nhân