I H C QU C GIA HÀ N I TR NG I H C KHOA H C T NHIÊN - Nguy n Ng c H ng XÁC NH M T S AXÍT BÉO TRONG D U G C B NG K THU T S C KÝ KHÍ LU N V N TH C S KHOA H C Hà N i – 2010 I H C QU C GIA HÀ N I TR NG I H C KHOA H C T NHIÊN - Nguy n Ng c H ng XÁC NH M T S AXÍT BÉO TRONG D U G C B NG K THU T S C KÝ KHÍ Chuyên ngành: Hóa phân tích Mã s : 60 44 29 LU N V N TH C S KHOA H C NG IH NG D N KHOA H C PGS TS Ph m Lu n Hà N i - 2010 M CL C Trang M U 1  CH NG 1: T NG QUAN 2  1.1 Cây G c d u G c 2  1.1.1 Cây G c 2  1.1.2.  D u G c 3  1.2 T ng quan v axít béo không no 5  1.2.1 Axít linoleic 5  1.2.2 Axít oleic 7  1.3 Các ph ng pháp phân tích axít béo 8  1.3.1 Các ph ng pháp chung 8  1.3.2 Các ph ng pháp s c ký 12  CH NG 2: I T NG - PH NG PHÁP NGHIÊN C U 24  2.1 i t ng, m c tiêu nhi m v nghiên c u 24  2.1.1 i t ng m c tiêu nghiên c u 24  2.1.2 Nhi m v nghiên c u 25  2.2 Ph ng pháp nghiên c u 26  2.2.1 Ph ng pháp s c ký khí 26  2.2.2 nh l ng axit béo b ng GC – FID 32  2.2.3 Ph ng pháp x lý đánh giá k t qu 33  2.3 Hóa ch t d ng c 34  2.3.1 Hóa ch t 34  2.3.2 D ng c 35  CH NG 3: K T QU VÀ TH O LU N 36  3.1 Kh o sát u ki n s c ký t i u đ i v i vi c phân tích axít béo 36  3.1.1 L a ch n c t tách 36  3.1.2 Kh o sát ch ng trình nhi t đ c t tách 36  3.1.3 Kh o sát t c đ khí mang 39  3.1.4 Kh o sát th tích b m m u 41  3.1.5 T ng k t u ki n ch y s c ký 43  3.2 T i u hóa trình metyl este hóa 43  3.2.1 Kh o sát nh h ng c a th tích NaOH/MeOH 0,5M 43  3.2.2 Kh o sát nh h ng c a th tích BF3/MeOH 20% 46  3.2.3 Kh o sát nh h ng th i gian este hóa 48  3.2.4 Qui trình chu n b m u chu n h n h p 51  3.3 Xây d ng ph ng pháp đ nh l ng h n h p hai axít béo 51  3.3.1 Kh o sát gi i h n phát hi n gi i h n đ nh l ng 51  3.3.2 Kh o sát kho ng n tính 53  3.3.3 Kh o sát đ l p l i c a phép đo 56  3.4 ng d ng qui trình phân tích m u d u G c 57  3.4.1 X lý s b m u phân tích 57  3.4.2 Phân tích m u th t 58  K T LU N 64  TÀI LI U THAM KH O 67  M U T xa x a, ông cha ta bi t s d ng c thiên nhiên đ làm thu c c ng nh ch ph m sinh h c nh m t ng c kh e c a N ng b o v s c c Vi t Nam n m khu v c nhi t đ i, gió mùa, thu n c phát tri n, có G c Các b ph n ti n cho nhi u lo i th o d c a G c có nhi u công n ng khác nhau, d u G c đ đ dùng nh m t lo i th c ph m ch c n ng nh m t ng c c chi t xu t ng s c đ kháng, ch ng lão hóa t bào, cung c p vitamin, … cho c th D u G c có ch a nhi u nhi u ch t b d ng, có axít béo no không no mà vai trò c a axít béo không no quan tr ng h n c Hi n có nhi u ph ng pháp phân tích axít béo không no v i nhi u k thu t khác nhau, nhiên áp d ng d u G c có r t công trình công b m t cách t m chi ti t đóng góp thêm ph ng pháp phân tích cho đ i t ng này, ti n hành nghiên c u u ki n tách c ng nh xác đ nh đ ng th i hai axít béo không no có hàm l b ng ph ng cao d u G c axít oleic axít linoleic ng pháp s c ký khí (GC) s d ng detector FID CH NG 1: T NG QUAN 1.1 Cây G c d u G c 1.1.1 Cây G c G c có tên khoa h c Momordica cochinchinesis (Lour.) Spreng, h Bí (Cucurbitaaceae) b Violales G c có tên khác Muricia cochinchinensis Lour., Momordica macrophuylla Gage, Momordica mixta Roxburgh m ts n c, G c đ c g i là: M c Mi t (Trung Qu c), Spiny bitter- cucumber, Chinese bitter-cucumber, Chinese cucumber (Anh), Margones piquants (Pháp), Makkao (Kh me) [1,5] 1.1.1.1 c m th c v t G c loài thân th o dây leo thu c chi M p đ ng Cây g c leo kh e, chi u dài có th đ n 15m Thân dây có ti t di n góc Lá g c nh n, thùy hình chân v t phân t đ n d , dài 8-18 cm G c loài đ n tính khác g c (dioecious) Hoa s c vàng Qu hình tròn, s c xanh, chín chuy n sang màu đ cam, đ ng kính 15-20 cm V g c có gai r m B m i qu th ng có sáu múi Th t g c màu đ cam H t g c màu nâu th m, hình d p, có khía G c tr hoa mùa hè sang mùa thu, đ n mùa đông m i chín M i n m g c ch thu ho ch đ c m t mùa Do v thu ho ch t ng đ i ng n (vào kho ng tháng 12 hay tháng 1), nên g c ph bi n h n lo i qu khác 1.1.1.2 Thu hái Qu G c chín hái v , đem b ngang, vét h t v i c màng đ N u đ n u xôi dùng h t v i c màng đ tr n v i g o (có th thêm r u) N u đ ch d u ph i ph i hay s y khô h t t i không còn dính tay Bóc l y l p màng h t r i l i ph i hay s y khô nhi t đ th p (60 – 700C) 1.1.1.3 Công d ng c a b ph n ng đ H t G c (Semen Momordicae) th c g i M c mi t t h t qu G c chín bóc v màng ch bi n khô, đ l y n Vi t Nam (1983) D c ghi vào D c c n Trung Qu c (1963, 2000) D u G c (Oleum Momordicae) ép t màng đ bao xung quanh h t ph i hay s y khô đ c ghi vào D c n Vi t Nam I (1971) R G c (Radix Momordicae) g i Phòng k nam r G c thu hái vào mùa đông ph i khô 1.1.2 D u G c 1.1.2.1 Các ph ng pháp s n xu t Mu n ch d u G c, tr áp d ng m t ph c h t s y khô màng h t G c, sau tán nh r i ng pháp sau [3]: - Chi t b ng dung môi ete d u h a: L y ki t b ng dung môi ete d u h a, sau thu h i ete d u h a b ng cách đun cách th y môi tr ng khí tr , c n l i d u G c - Ép: Màng đ s y khô, tán nh đem đ lên r i ép - Ph ng pháp th công nghi p: Màng h t G c s y khô tán nh cho vào ch o d u l c hay m l n đun nóng nhi t đ 60 – 700C D u l c hay m l n s hòa tan ch t d u ch a màng d u G c D u G c sau đ c b o qu n chai màu nâu, đóng đ y, nút kín 1.1.2.2 Tính ch t lý hóa - D u G c ch t l ng, sánh, trong, màu đ máu, mùi th m ng t đ c bi t, v béo, không khé c N u đ lâu ho c nhi t đ – 50C xu t hi n c n, c n tinh th carotenoid - hòa tan: D tan ete d u h a, cloroform ete - T tr ng: D = 0,9151 – 0,9156 g/cm3 150C - Ch s khúc x : 1,4681 – 1,4685 [2] - Thành ph n hóa h c: 100g d u có 150 - 175mg - caroten, kho ng 4g lycopen 12mg alpha tocopherol (vitamin E thiên nhiên) Axít panmitic (33,4%), axít stearic (7,9%), đ c bi t axít không no nh axít oleic (44%) axít linoleic (14,7%) hai axít béo r t c n thi t cho c th D u G c c ng ch a vi l ng c n thi t nh : s t, đ ng, coban, kali k m [1,5] 1.1.2.3 Tác d ng sinh h c công d ng Khi vào c th , - caroten (ch t ti n vitamin A) s đ c chuy n hoá thành vitamin A tu theo nhu c u, v y dùng d u g c, hi n t ng th a vitamin A Hàm l ng vitamin A d u g c cao g p 1,8 l n so v i d u gan cá thu, g p 15 l n so v i c cà r t g p 68 l n so v i qu cà chua ây ngu n vitamin A thiên nhiên r t quý giá, có tác d ng phòng ng a ch a b nh thi u vitamin A, nguyên nhân gây khô giác m c m t, b nh quáng gà, suy dinh d th tr ng ch m l n tr em Các thu c vitamin A ng ch t t ng h p, n u u ng nhi u s có h i, đ c bi t gây nguy c gãy x ng háng ph n N u ch đ nh c a th y thu c không nên u ng tr c ti p vitamin A mà c n thay th b ng lo i th c n có ch t - caroten thiên nhiên ngu n cung c p vitamin A giúp c th d h p th an toàn không đ c h i cho gan D u g c có hàm l ng lycopen r t cao nên có tác d ng làm gi m nguy c ung th (nh t ung th n ti n li t ung th d dày) - caroten lycopen ch t carotenoid, lo i ch t ch ng oxy hoá c a th c v t có tác d ng d n s ch g c t (các nguyên t phân t tr ng thái không n đ nh, có ho t tính hoá h c r t cao) s n ph m oxy hoá đ c h i g c t sinh ra, giúp c th kho m nh kéo dài tu i xuân Có th ví ch t carotenoid nh ch i quét rác c th có nhi m v "quét d n" th ng xuyên s n ph m oxy hoá không nh ng làm cho c th b già nhanh, mà tham gia gây nhi u b nh hi m nghèo nh s v a đ ng m ch, thoái hoá th n kinh, đ c thu tinh th m t, b nh Alzheimer, viêm nhi m, ung th D u g c có tác d ng phòng ng a u tr b nh viêm gan, x gan ho c nguy c phát tri n ung th gan, lo i tr đ c h i cho ng i làm vi c ng có ch t đ c G n đây, nhi u công trình nghiên c u ch r ng môi tr - caroten, lycopen alpha - tocopherol d u g c có kh n ng làm m t tác d ng c a 75% nh ng ch t gây b nh ung th nói chung, đ c bi t ung th vú Nó đ c dùng cho b nh nhân b ung th sau c t b kh i u, sau hoá tr x tr Axít linoleic d u g c m t vitamin F, có nh h ng đ n chuy n hoá lipit, phospholipit, giúp c th th i b t cholesterol ch ng nhi m m làm v ng b n thành m ch máu Nó c ng có tác d ng b o v da t ng s c ch ng đ c a c th D u g c kích thích sinh l p mô m i, làm cho v t th ng mau lành, đ ch a v t b ng, loét n t k vú … [4] 1.2 T ng quan v axít béo không no D u G c ch a nhi u axít béo no không no, có axít không no oleic ( 9) linoleic ( 6) nhi u h n c ây axít quan tr ng nh t c n thi t cho s phát tri n c a c th ng c ng đ c g i vitamin F [7],[12],[30] 1.2.1 Axít linoleic - Công th c c u t o i Các axít - Tên IUPAC: axít (9Z, 12Z) – octadeca – 9,12 – dienoic - Công th c phân t : C18H32O2 - Kh i l ng phân t : 280,45 g.mol-1 - T kh i: 0,9 g.cm-3 - i m nóng ch y: - 0C - i m sôi: 229 0C - tan metanol : 903,05 g.l-1 - Tên khác: Omega - Tác d ng: Axít linoleic m t axít béo không no nhi u l n đ c s d ng đ sinh t ng h p axít arachidonic sau prostaglandin Axít linoleic n m nhóm axít béo c n thi t g i vitamin F mà c th không t ng h p đ c [18] Nó đ c tìm th y lipid c a màng t bào Nó c ng có nhi u d u th c v t c a lo i h t anh túc, hoa h 50% kh i l ng tinh d u ngô v i ng S thi u h t axít linoleic s d n đ n hi n t n ng lành v t th ng d ng [27] ng khô r ng tóc [14] kh 1.2.2 Axít oleic - Công th c c u t o - Tên IUPAC: axít (9Z) – octadec – – enoic - Công th c phân t : C18H34O2 - Kh i l ng phân t : 282,4614 g.mol-1 - T kh i: 0,895 g.cm-3 - i m nóng ch y: 14 0C - i m sôi: 360 0C - Tên khác: Omega - Tác d ng: Axít béo c n cho s phát tri n bình th m nh, cân b ng l ng giúp cho màng t bào kh e ng hormon h th ng mi n d ch Axít béo c n thi t cho vi c t ng h p mô m , gi vai trò quan tr ng vi c cân b ng m c cholesterol, u ch nh m c protagladin, hormon V i da, axít béo cung c p ch t dinh d ng, làm cho tóc da óng m t, kh e m nh Nó c ng có vai trò trình t ng h p hormon adrenalin hormon sinh d c Axít béo no c ng có tác d ng kích thích h vi khu n có ích ru t Phù c ng m t ph n thi u axít béo Axít béo có l i cho b nh viêm kh p, chúng giúp vi c v n chuy n d n truy n th n kinh N u thi u axít béo có th d n đ n thông minh nh h ng đ n trí nh [14] 3.3.3 Kh o sát đ l p l i c a phép đo ng pháp phân tích t t yêu c u v đ c a ph M t ph ng pháp ng i ta ý đ l p l i c a ph s c ký đ c kh o sát b ng cách b m l n m t m u chu n h n h p axít oleic (0,1mg/ml) linoleic (0,15mg/ml) đ ng pháp l p l i c a h th ng c metyl este hóa vào máy s c ký khí Các m u đ c phân tích theo u ki n ch y máy nêu 3.1.4 K t qu đ c đánh giá thông qua đ l ch chu n (S) đ l ch chu n t m c ng đ i (RSD) c a di n tích pic s c ký Spíc th i gian l u tR theo công th c (2.9) (2.10) Các s li u đ B ng 3.12: Tên ch t c ghi chi ti t l p l i c a h th ng s c ký khí đ i v i metyl linoleat tR (phút) S li u th ng kê tR 17,227 17,236 Metyl linoleat b ng 3.12 3.13 17,255 (n = 5) 17,276 Spíc S li u th ng kê Spíc 25423,5 xtb = 17,234 S = 0,022 RSD = 0,13% 17,223 24846,2 24919,4 25151,8 24871,3 56 xtb = 25042,4 S = 245,0 RSD = 0,98% B ng 3.13: Tên ch t l p l i c a h th ng s c ký khí đ i v i metyl oleat tR (phút) S li u th ng kê tR 17,372 17,379 S li u th ng kê Spíc Spíc 16794,6 xtb = 17,388 16610,0 xtb = 16633,1 Metyl oleat 17,400 S = 0,022 16337,9 S = 178,1 (n = 5) 17,420 RSD = 0,13% 17,369 16691,3 RSD = 1,07% 16731,6 Nh n xét: Theo k t qu kh o sát ta th y h th ng s c ký khí có đ l p i v i phân tích đ nh tính, thông s th i gian l u tR có đ l ch chu n l i t t t ng đ i r t nh 0,13%, đ i v i phân tích đ nh l ng, thông s di n tích pic Spic có RSD 0,98% 1,07% ng v i metyl este c a axít linoleic oleic Qui trình phân tích n đ nh có th áp d ng đ phân tích m u th t 3.4 ng d ng qui trình phân tích m u d u G c 3.4.1 X lý s b m u phân tích M u d u G c đ c thu th p t hi u thu c v , ghi l i thông tin v m u, bao bì s n xu t, ngày s n xu t, s đ ng kí ki m soát, ngày h t h n thành ph n nh b ng 3.14 Trong khuôn kh lu n v n, kh o sát l viên nang : l VINAGA l VINADICA 57 B ng 3.14: M t s m u d u G c dùng đ phân tích Tên m u Nhà s n xu t M1 M2 M3 Công ty ch bi n d u th c v t th c M4 Công ty TNHH d ph m Vi t Nam ph m L c Vi t VINAGA VINADICA Tên s n ph m Ngày s n xu t 07/2008 12/2008 28/10/2009 15/12/2009 Ngày h t h n 07/2011 12/2011 28/10/2012 12/2012 S đ ng kí Thành ph n 6341/2007/YT-CNTC 1279/2007/YT-CNTC D u G c tinh t ch a beta caroten, lycopen, vitamin E, ch t béo th c v t vi ch t cho c th ng i 3.4.2 Phân tích m u th t 3.4.2.1 X lý m u phân tích Do m u n m d ng l ng viên nang nên ti n hành cân xác 100 mg d u G c cho vào bình đ nh m c 10 ml nh m c b ng dung môi n-hexan L y 0,1 ml dung d ch cho vào ng nghi m 20 ml có nút xoáy Thêm vào ng nghi m 2,0 ml dung d ch NaOH 0,5M pha metanol, đ y kín n p, l c ng nghi m th i gian 15 phút Cho ti p 2,0 ml BF3 20% metanol, s c khí N2, đun cách th y 800C 30 phút M u sau đ hexan đ c chi t b ng ml dung d ch n-hexan (chi t l n) D ch chi t nc đ nh m c đ n 10 ml Sau cho d ch chi t vào l nh (vial) dùng đ b m tr c ti p vào c t GC 3.4.2.2 K t qu phân tích m u th t M i m u phân tích M1, M2, M3, M4 đ u ki n x ph c ti n hành phân tích l n lý m u u ki n ch y s c ký D a vào ng trình h i qui (3.1) (3.2) đ xác đ nh hàm l 58 c ng c a axít béo m u K t qu phân tích đ c cho b ng 3.15 hình 3.15, 3.16, 3.17 3.18 C uV(x10,000) 5.0 Chromatogram Column Temp.(Setting) 47.5 4.5 4.0 45.0 3.5 42.5 3.0 40.0 MM ee tyty lL lO inleioa le t at 2.5 2.0 1.5 37.5 35.0 32.5 1.0 30.0 0.5 27.5 0.0 -0.5 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 25.0 Hình 3.15: S c đ c a m u d u G c M1 uV(x10,000) 5.0 Chromatogram 4.5 4.0 3.5 3.0 tylL le in ao tle a t MMeetylO 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 -0.5 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 Hình 3.16: S c đ c a m u d u G c M2 59 17.5 uV(x10,000) 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 e tylOlLleinaot le a t MMe ty 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 -0.5 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 Hình 3.17: S c đ c a m u d u G c M3 uV(x10,000) 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 tylLle inaotle a t MMeetylO 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 Hình 3.18: S c đ c a m u d u G c M4 60 17.5 B ng 3.15: K t qu phân tích m u d u G c M u M1 M2 M3 M4 CLinoleic COleic (µg/ml) (µg/ml) 52671,1 27,88 28,99 52617,3 52435,6 28,30 28,87 51456,2 53589,0 27,69 29,49 51505,9 52288,0 27,71 28,79 51327,0 51176,5 27,62 28,199 50658,9 51628,9 27,27 28,44 52527,1 53015,5 28,25 29,18 51917,0 52852,8 27,93 29,098 52016,9 52616,4 27,98 28,96 52436,7 53233,0 28,20 29,30 51550,4 53098,5 27,74 29,22 51236,9 53189,7 27,57 29,27 SMeLino SMeOle 51834,8 T n ng đ axít béo tìm đ c m u, ta qui đ i sang hàm l ng c a chúng có 100 mg m u nh sau: mcpt = Cx V F đó: mcpt kh i l ng ch t phân tích có 100 mg m u (mg) Cx n ng đ ch t phân tích tính theo ph ng trình h i qui (µg/ml) V: th tích dung d ch đ c pha t 100 mg m u F: h s pha loãng 10-3: h s chuy n đ i t µg sang mg V y ta có: mcpt (mg) = Cx (µg/ml) 10 (ml) 100 10-3 (mg/µg) = Cx (mg) 61 Nh v y theo qui trình phân tích không no m u d u G c đ B ng 3.16: Hàm l M u M1 M1(tb) M2 M2(tb) M3 M3(tb) M4 M4(tb) ta có hàm l ng axít béo c tóm t t b ng 3.16 ng c a axít béo m u d u G c Axít Linoleic Axít Oleic (%) (%) 27,88 28,99 28,30 28,87 27,69 29,49 27,96 ± 0,78 29,12 ± 0,82 27,71 28,79 27,62 28,199 27,27 28,44 27,53 ± 0,58 28,48 ± 0,74 28,25 29,18 27,93 29,10 27,98 28,96 28,05 ± 0,43 29,08 ± 0,28 28,20 29,30 27,74 29,22 27,57 29,27 27,84 ± 0,81 29,26 ± 0,10 D a vào k t qu phân tích hàm l ng axít béo không no ta có nh n xét sau: + Hàm l ng axít béo m u d u G c n đ nh, đ i v i axít linoleic t 27,53 – 28,05 % c a axít oleic t 28,48 – 29,26 % 62 + Trong m u d u G c, hàm l (1 – 1,5%) dù hàm l ng axít béo không chênh l ch nhi u ng axít linoleic có h n axít oleic + Trong m u c a VINAGA (M1 – M3), hàm l ng c a t ng axít thay đ i không đáng k theo th i gian (27,53 – 28,05%) Qua cho ta th y thành ph n c a d u G c n đ nh th i gian h n s d ng, s n ph m có đ tin c y cao dùng + Hàm l t ng c a axít béo m u d u G c c a nhà s n xu t ng đ i gi ng cho th y qui trình s n xu t viên nang d u G c c a nhà s n xu t n đ nh 63 K T LU N K t qu đ tài “Xác nh M t S Axít Béo Trong D u G c B ng K Thu t S c Ký Khí” cho nh ng k t lu n sau: Ch n đ c u ki n phù h p đ tách xác đ nh đ ng th i hai axít béo không no có hàm l ng cao d u G c axít oleic axít linoleic b ng máy s c ký khí v i detector FID C t tách HP-5 (Polimetylsiloxan có 5% phenyl) 30m x 0,25 mm x 0,25 µm Khí mang Khí N2 T c đ khí mang 0,8 ml/phút Ch ng trình nhi t đ 1500C gi phút, t ng 100C/phút đ n 2000C, gi phút, t ng 20C/phút đ n 2500C, gi phút, t ng 100C/phút đ n 2700C, gi 10 phút Nhi t đ bu ng tiêm m u 2500C Nhi t đ FID 2800C Th tích b m m u 1µl Ki u b m B m chia dòng v i t l 10:1 T i u hóa trình metyl este hóa axít béo đ a qui trình chu n b m u chu n nh sau: Cân xác l n l t 100 mg chu n axít oleic 150 mg chu n axít linoleic cho vào bình đ nh m c 10 ml nh m c b ng dung môi n-hexan L y 0,1 ml dung d ch cho vào ng nghi m 20 ml có nút xoáy Thêm vào ng nghi m 2,0 ml dung d ch NaOH 0,5M pha metanol, đ y 64 kín n p, l c ng nghi m th i gian 15 phút Cho ti p 2,0 ml BF 20% metanol, s c khí N , đun cách th y 80 C 30 phút M u sau đ chi t n-hexan đ Ta đ n ng đ t c đ nh m c đ n 10 ml c dung d ch chu n axít oleic linoleic metyl este hóa có ng ng 0,1 mg/ml 0,15 mg/ml Xác đ nh đ c chi t b ng ml dung d ch n-hexan (chi t l n) D ch c LOD, LOQ kho ng n tính cho hai axít oleic linoleic nh sau: Ph Tên axit LOD (µg/ml) Axit linoleic 0,6 Axit oleic 0,4 LOQ (µg/ml) 2,0 1,3 Y = (1906,67±8,96) X Y = (1866,90±19,84)X ng trình h i qui - (1333,70±616,90) H s t ng quan Kho ng n tính (µg/ml) - (1458,9±910,30) 0,99996 0,99977 1,8 – 150 1,2 – 100 Kh o sát phân tích m u th t, m u VINAGA v i th i gian xu t x ng khác m u VINADICA K t qu kh o sát cho th y hàm l ng c a axít béo hãng không khác nhi u, m t hãng c ng thay đ i theo th i gian s n ph m h n s d ng i u cho th y axít béo không no d u G c có đ cao có th l u tr đ n đ nh c lâu Qui trình chi t xu t d u G c c a nhà s n xu t n đ nh Nh v y, t k t qu thu đ c, th y ph ng pháp GC- FID có đ nh y cao, thích h p cho vi c phân tích đ ng th i axít béo không no m u d u G c 65 Chúng hi v ng nh ng nghiên c u góp ph n vào vi c ng d ng k thu t GC-FID nói riêng hay k thu t GC nói chung đ xác đ nh axít béo m u d u th c v t hay nhiên li u sinh h c khác 66 TÀI LI U THAM KH O Ti ng Vi t Huy Bích (2004), Cây thu c đ ng v t làm thu c Vi t Nam, Nxb Khoa h c k thu t, Hà n i, tr 861 – 863 B Y t (1971), D c n Vi t Nam, Nxb Y h c, Hà n i, tr 186 – 187 Nguy n V n àn, Ngô Ng c Khuy n (1999), H p ch t thiên nhiên dùng làm thu c, Nxb Y h c, Hà n i, tr 20 – 27 Tr n Công Khánh (2004), “D u g c – Thu c tr ng xuân”, T p chí thu c s c kh e, Hà n i, s 258 T t L i (1999), Nh ng thu c v thu c Vi t Nam, Nxb Y h c, Hà N i, tr 920 – 921 T Th Th o (2006), Bài Gi ng Chuyên Th ng Kê Trong Hóa Phân Tích, H KHTN – HQG Hà N i V ình Trác (1986), 100 thu c có tác d ng ch a b nh, Nxb Y h c, Hà n i, tr 175 Ph m Hùng Vi t (2003), C S Lý Thuy t Ph ng Pháp S c Ký Khí, Nxb Khoa h c k thu t, Hà n i Ti ng Anh Adosh Mehta, Annette M Oeser and Michael G Carlson (1998), “Rapid quantitation of free fatty acids in human plasma by high-performance liquid chromatography”, Journal of Chromatography B: Biomedical Sciences and Applications, 719, pp – 23 10 Albert Tomàs, Marc Tor, Gemma Villorbina, Ramon Canela, Mercè Balcells and Jordi Eras (2009), “A rapid and reliable direct method for quantifying meat acylglycerides with monomode microwave irradiation”, J Chromatography A, 1216, pp 3290 – 3295 11 Bahruddin Saad, et al, (2007), “Determination of free fatty acids in palm oil samples using non-aqueous flow injection titrimetric method”, Food Chemistry, 102, pp 1407 67 12 Bialostosky K et al (2002), “Dietary intake of macronutrients, micronutrients and other dietary constituents”, United States 1988 – 1994, National Center for Health Statistics, Vital Health Stat 11, pp 245 13 Carrapiso A I., García C (2000), “Development in lipid analysis: some new extraction techniques and in situ transesterification”, Lipids, 35, pp 1167 – 1177 14 Cunnane S, Anderson M (1997), "Pure linoleate deficiency in the rat: influence on growth, accumulation of n-6 polyunsaturates, and (1-14C) linoleate oxidation", J Lipid Res, 38, pp 805 – 812 15 Di Wu et at (2009), “Determination of -linolenic acid and linoleic acid in edible oils using near-infrared spectroscopy improved by wavelet transform and uninformative variable elimination”, Analytical Chimica Acta, 634, pp 166 – 171 16 Ernesto Mendez Antolin et al (2008), “Evaluation of five methods for derivatization and GC determination of a mixture of very long chain fatty acids (C24:0 – C36:0)”, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 46, pp 194 – 199 17 Hans M.H van Eijk, Johanne G Bloemen and Cornelis H.C Dejong (2009), “Application of liquid chromatography–mass spectrometry to measure short chain fatty acids in blood”, Journal of Chromatography B, 877, pp 719 – 724 18 Hilditch, T.P and William, P.N (1964), The chemical Constituent of natural fats, 4th edition, John Wiley & Son Inc, New York, pp 319 – 331 19 Ho J R., et al (1969), “A simple and ultrasensitive method for determination of free fatty acid by radiochemical assay”, Ana Biochem, 31, pp 426 – 436 20 Ichihara K, Fukubayashi Y (2010), “Preparation of fatty acid methyl esters for gas-liquid chromatography”, J Lipid Res, 51, pp 635 – 640 68 21 Ichihara K, Shibahara A, Yamamoto K, Nakayama T (1996), “An improved method for rapid analysis of the fatty acids of glycerolipids”, Lipids, 31, pp 535 22 Ichihara K et al (2010), “Preparation of fatty acid methyl esters by selective methanolysis of polar glycerolipids”, Lipids, 45, pp 367 – 374 23 Jebens E., et al (1992), “Enzymatic microdetermination of plasma and serum free fatty acids”, Scandinavian Journal of Clinical & Laboratory Investigation, 52, pp 717 – 724 24 Jinmao You, Weibing Zhang and Yukui Zhang (2001), “Simple derivatization method for sensitive determination of fatty acids with fluorescence detection by high-performance liquid chromatography using 9-(2-hydroxyethyl)-carbazole as derivatization reagent”, Analytica Chimica Acta, 436, pp 163 – 172 25 Jordi Eras, Javier Ferran, Belén Perpiña and Ramon Canela (2004), “Chlorotrimethylsilane, Chlorotrimethylsilane, a reagent for the direct quantitative analysis of fats and oils present in vegetable and meat samples”, J Chromatography A, 1047, pp 157 – 161 26 Marta Bernárdez, Laura Pastoriza, Gabriel Sampedro, Juan J R Herrera, and Marta L Cabo (2005), “Modified method for the analysis of free Fatty Acids in Fish”, J Agric Food Chem, 53 (6), pp 1903 – 1906 27 Ruthig D J and Meckling-Gill KA (1999), “Both (n-3) and (n-6) fatty acids stimulate wound healing in the rat intestinal epithelial cell line, IEC-6”, Journal of Nutrition, 129, pp 1791–1798 28 Shantha N C., Guillermo E Napolitano (1992), “Gas chromatography of fatty acids”, Journal of Chromatography A, 624, pp 37 – 51 29 Thomas K Smith (2003), “Analysis of FFA in edible oils by catalyzed endpoint thermometric titrimetry (CETT)”, J Am Oil Chem Soc, 80, pp 21 – 24 30 Wade L G (2006), Organic chemistry, 6th edition, Pearson Prentice Hall Inc, New York, pp 1200 – 1204 69 31 Wolf J H and Korf J (1988), “Automated solid-phase catalyzed precolumn derivatization of fatty acids for reversed-phase high-performance liquid chromatographic analysis with fluorescence detection”, Journal of Chromatography A, 436, pp 437 – 445 32 Yoshida S (2008), “Analysis of fatty acid compositions of human tissues using Fourier-transform infrared spectroscopy”, Lipid Technology, 20, pp 184 – 186 70 [...]... c u v v n đ nay Trong khuôn kh c a lu n v n ch đ c p đ n các qui trình nghiên c u chính khi s d ng ph 1.3.2.1 Ph ng pháp s c ký trong phân tích axít béo ng pháp s c ký khí (GC) S c ký khí đ c xem là ph ng pháp h u hi u nh t hi n nay dùng đ phân tích các axít béo trong các lo i n n m u khác nhau Tuy nhiên do s c ký khí ch áp d ng đ i v i nh ng ch t d bay h i trong khi các axít béo có trong t nhiên đa... s c ký khí 2.2.1.1 Khái ni m S c ký khí là m t ph khí (đ ng pháp tách ch t trong đó pha đ ng là 1 ch t c g i là khí mang) và pha t nh ch a trong c t là m t ch t r n ho c ch t l ng ph trên b m t ch t mang tr d ng r n, hay ph đ u lên thành phía trong c t Tùy thu c b n ch t pha t nh, ng i ta chia thành 2 lo i s c ký khí: + N u pha t nh là m t ch t h p ph r n thì k thu t phân tích đ cg i là s c ký khí. .. nhanh, chính xác và có th áp d ng trong nhi u m u khác nhau 11 1.3.2 Các ph ng pháp s c ký T khi ra đ i đ n nay, s c ký v n luôn là ph ng pháp h u hi u nh t khi c n xác đ nh riêng r các ch t trong cùng m t h n h p Trong khi đó các axít béo hay đi cùng v i nhau và vi c xác đ nh riêng bi t chúng là m t vi c làm c n thi t Vi c áp d ng các ph hi n nay là ph ng pháp s c ký xác đ nh các axít béo ng pháp ph... c ký khí: 5 2 6 3 7 1 4 1- Ngu n khí mang 5 - Detector 2- i u ch nh áp su t 3 - B ph n b m m u 6 - Máy ghi 7 - Ph n m m và computer 4- C t tách Hình 2.1: Mô hình thi t b s c ký khí thông th 2.2.1.4 M t s đ i l ng ng dùng trong s c ký khí Hình 2.2: S c ký đ cùa 2 c u t 1 và 2 M t s thông s đ c mô t trên hình 2.2: • tM (th i gian ch t): là th i gian c n thi t đ khí mang đi qua c t tách c a h s c ký khí. .. đ sôi cao nên chúng ph i đ m t qui trình xác đ nh axít béo b ng s c ký khí th c d n xu t hóa Do đó ng bao g m 2 giai đo n chính là d n xu t hóa và xác đ nh a) Các ph Tr ng pháp d n xu t hóa axít béo: c khi phân tích s c ký khí, vi c làm đ u tiên là chuy n hóa các axít béo thành các d n xu t d bay h i nh là metyl este hay các d n xu t khác Các lipid trong ch t béo, d u th c v t th ng đ c este hóa đ chuy... pháp phân tích axít béo ng pháp chung ng pháp chung thông th béo ch không th xác đ nh đ ng dùng đ xác đ nh t ng các axít c các axít riêng r Có th chia chúng thành ng pháp sau đây: các ph 1.3.1.1 Ph Ph ng pháp chu n đ hóa h c ng pháp chu n đ hóa h c dùng đ xác đ nh các axít béo v i n ng đ b ng ho c l n h n 1mM Ph ng pháp này th ng dùng đ xác đ nh ch s axít trong d u th c v t và ch t béo Ph ng pháp chu... l ng đ ho c đ c ph d c g n lên b m t c a ch t mang tr i d ng m t l p phim m ng lên thành trong c a c t mao qu n thì k thu t này g i là s c ký khí – l ng [8] 2.2.1.2 Nguyên t c ho t đ ng Nh có khí mang t bom khí (ho c máy sinh khí) , m u t bu ng bay h iđ c d n vào c t tách n m trong bu ng đi u nhi t Quá trình s c ký x y ra t i đây Sau khi r i kh i c t tách t i các th i đi m khác nhau, các c u t l n l... b i các b c x vi sóng Xác đ nh axít béo b ng GC: Các axít béo sau khi este hóa đ c b m vào c t GC Tùy thu c vào thành ph n và tính ch t c a axít béo mà ta có th s d ng các c t tách và các qui trình khác nhau B ng 1.1 cho bi t m t s c t tách s d ng đ phân tích axít béo trong th c ph m [28] 17 B ng 1.1: Thành ph n hóa h c c a m t vài pha t nh thông d ng dùng đ phân tích axít béo trong th c ph m b ng GC... – FID Khí mang Khí N2 T c đ khí mang 0,8 ml/phút Ch ng trình nhi t đ 1500C gi 1 phút, t ng 100C/phút đ n 2000C, gi 1 phút, t ng 20C/phút đ n 2500C, gi 1 phút, t ng 100C/phút đ n 2700C, gi 10 phút Nhi t đ bu ng tiêm m u 2500C Nhi t đ FID 2800C Th tích b m m u 1µl Ki u b m B m chia dòng v i t l 10:1 2.2.3 Ph ng pháp x lý và đánh giá k t qu Theo lý thuy t s c ký khí, trong m t đi u ki n s c ký xác đ nh... i thành dung d ch c (95,5/4,5, w/w) t i phút th 24 trong vòng 10 phút T c đ dòng là 1 ml/phút 23 CH 2.1 NG 2: it 2.1.1 it IT NG - PH NG PHÁP NGHIÊN C U ng, m c tiêu và nhi m v nghiên c u ng và m c tiêu nghiên c u Axít béo không no có nhi u trong ch t béo có ngu n g c t th c v t nói chung và trong d u G c nói riêng So v i các axít béo no, các axít béo không no có ho t tính sinh h c cao h n Các nghiên