ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM MA KIÊN CHƢƠNG Tên đề tài: NGHIÊN CỨU TÁI SINH GIỐNG CÂY ĐINH LĂNG (Polyscias fruticosa (L.) Harms) CHẤT LƢỢNG CAO BẰNG KỸ THUẬT IN VITRO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo Chuyên ngành Khoa Khoá học : Chính quy : Công nghệ sinh học : CNSH & CNTP : 2011 - 2015 Thái Nguyên, 2015 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM MA KIÊN CHƢƠNG Tên đề tài: NGHIÊN CỨU TÁI SINH GIỐNG CÂY ĐINH LĂNG (Polyscias fruticosa (L.) Harms) CHẤT LƢỢNG CAO BẰNG KỸ THUẬT IN VITRO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành : Công nghệ sinh học Khoa : CNSH & CNTP Khoá học : 2011 - 2015 Giảng viên hƣớng dẫn: ThS Vi Đại Lâm Khoa CNSH & CNTP- Trƣờng ĐHNL Thái Nguyên ThS Đào Duy Hƣng Viện Khoa học Sự Sống - Trƣờng ĐHNL Thái Nguyên Thái Nguyên, 2015 i LỜI CẢM ƠN Được trí Ban giám hiệu nhà trường, Ban chủ nhiệm Khoa Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm, Viện khoa học sống em tiến hành đề tài: “Nghiên cứu tái sinh Đinh lăng (Polyscias fruticosa (L.) Harms) chất lượng cao kỹ thuật in vitro” Phòng thí nhiệm nuôi cấy mô Bộ môn Công Nghệ Tế Bào thuộc Viện Khoa học Sự Sống thuộc trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên Hiện nay, em hoàn thành đề tài tốt nghiệp Đại Học Được kết ngày hôm em xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu nhà trường, Ban chủ nhiệm khoa thầy cô Bộ môn Công nghệ Tế bào thầy cô môn tạo điều kiện giúp đỡ em thời gian qua Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới: ThS Vi Đại Lâm ThS Đào Duy Hưng tận tình bảo, hướng dẫn em thời gian thực đề tài Cuối cùng, em xin chân thành cảm ơn toàn thể gia đình, bạn bè hết lòng động viên, giúp đỡ tạ điều kiện vật chất tinh thần cho em trình học tập nghiên cứu Do thời gian thực đề tài có hạn nên đề tài tránh khỏi sai sót Em mong nhận đóng góp ý kiến thầy cô bạn để đề tài em hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, ngày 26 tháng năm 2015 Sinh viên thực Ma Kiên Chƣơng ii DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 2.1 Các vi lượng thông dụng sử dụng nuôi cấy mô tế bào thực vật 19 Bảng 2.2 Bốn loại vitamin thường dùng 20 Bảng 4.1 Kết ảnh hưởng thời gian khử trùng dung dịch H2O2 (5%) đến hiệu vô trùng mẫu cấy 31 Bảng 4.2 Kết ảnh hưởng thời gian khử trùng sử dụng viên khử trùng Johnson (2,5 ppm) đến hiệu khử trùng mẫu cấy 33 Bảng 4.3 Kết ảnh hưởng thời gian khử trùng với HgCl2 (0,1%) 34 đến hiệu vô trùng mẫu cấy 34 Bảng 4.4 Kết ảnh hưởng kinetin đến hiệu tái sinh chồi 36 Bảng 4.5 Kết ảnh hưởng BAP đến hiệu tái sinh chồi 38 Bảng 4.6 Kết ảnh hưởng kết hợp BAP IAA đến hiệu tái sinh chồi 40 Bảng 4.7 Kết ảnh hưởng kết hợp BAP IBA đến hiệu tái sinh chồi 42 iii DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 4.1 Biểu đồ thể kết ảnh hưởng thời gian khử trùng dung dịch H2O2 (5%) đến hiệu vô trùng mẫu cấy……………… 32 Hình 4.2 Biểu đồ thể kết ảnh hưởng thời gian khử trùng sử dụng viên khử trùng Johnson (2,5 ppm) đến hiệu khử trùng mẫu cấy 33 Hình 4.3: Biểu đồ thể kết ảnh hưởng thời gian khử trùng v ới HgCl2 (0,1%) đến hiệu vô trùng mẫu cấy 35 Hình 4.4 Biểu đồ thể kết ảnh hưởng kinetin đến hiệu tái sinh chồi 37 Hình 4.5 Ảnh hưởng kinetin đến hiệu tái sinh chồi Đinh lăng Hình A: Công thức đối chứng, Hình B: Công thức 38 Hình 4.6 Biểu đồ thể kết ảnh hưởng BAP đến hiệu tái sinh chồi 39 Hình 4.7 Ảnh hưởng BAP đến hiệu tái sinh chồi Đinh lăng; Hình A: Công thức đối chứng, Hình B: Công thức 40 Hình 4.8 Biểu đồ thể kết ảnh hưởng kết hợp BAP IAA đến hiệu tái sinh chồi 41 Hình 4.9 Ảnh hưởng BAP đến hiệu tái sinh chồi Đinh lăng; Hình A: Công thức đối chứng, Hình B: Công thức 42 Hình 4.10 Biểu đồ thể kết ảnh hưởng kết hợp BAP IBA đến hiệu tái sinh chồi 43 Hình 4.11 Ảnh hưởng BAP đến hiệu tái sinh chồi Đinh lăng; Hình A: Công thức đối chứng, Hình B: Công thức 44 iv DANH MỤC CÁC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT Cs : Cộng CT : Công thức CV : Coeficient of Variation LSD : Least Significant Difference Test Kinetin : Furfurylaminopurine BAP : Best Absolute Perfect IAA : Indole-3- lacetic acid IBA : Indole-3-butyric acid NAA : α-naphthaleneaceticd Đ/C : Đối chứng B1 : Thiamin B2 : Ribonavin B6 : Pyridoxien 2,4D : 2,4-diclorophenoxy axetic acid C : Acid ascorbic MS : Murashige and skoog TDZ : Thidiazuron WPM : Woody Plant Medium GA3 : Gibberellin v MỤC LỤC Trang PHẦN 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu đề tài 1.3 Yêu cầ u đề tài 1.4 Ý nghĩa khoa học thực tiến đề tài 1.4.1 Ý nghĩa khoa học đề tài 1.4.2 Ý nghĩa thực tiến đề tài PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu chung Đinh lăng 2.1.1 Đặc điểm thực vật học Đinh lăng 2.1.2 Nguồn gốc phân bố 2.1.3 Giá trị Đinh lăng 2.1.4 Saponin 2.2 Tình hình nghiên cứu Đinh lăng nước 10 2.3 Khái niệm sở khoa học nuôi cấy mô tế bào thực vật 10 2.3.1 Sơ lược lịch sử nuôi mô tế bào thực vật 10 2.3.2 khái niệm nuôi cấy mô tế bào thực vật 12 2.3.3 Tầm quan trọng nuôi cấy mô tế bào 13 2.3.4 Cơ sở khoa học nuôi cấy mô tế bào thực vật 14 2.4 Một số yếu tố ảnh hưởng đến nuôi cấy mô tế bào thực vật 16 2.4.1 Vật liệu nuôi cấy 16 2.4.2 Điều kiện nuôi cấy 17 2.4.3 Thành phần môi trường nuôi cấy 17 2.4.4 Các giai đoạn nuôi cấy mô tế bào thực vật 23 PHẦN 3: NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 vi 3.1.Vật liệu, hóa chất thiết bị nghiên cứu 25 3.1.1 Vật liệu nghiên cứu 25 3.1.2 Hóa Chất 25 3.1.3.Thiết bị 25 3.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 25 3.2.1 Địa điểm nghiên cứu 25 3.2.2 Thời gian nghiên cứu 25 3.3 Nội dung nghiên cứu 25 3.4 Phương pháp nghiên cứu 26 3.4.1 Nội dung 1: Nghiên cứu ảnh hưởng số chất khử trùng đế n hiệu vô trùng mẫu Đinh lăng 26 3.4.2 Nội dung 2: Nghiên cứu ảnh hưởng số chất điều tiết sinh trưởng đến hiệu tái sinh chồi Đinh lăng 28 3.5 Xử lý số liệu 30 PHẦN 4: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 31 4.1 Kết ảnh hưởng số chất khử trùng đến hiệu vô trùng mẫu Đinh lăng 31 4.1.1 Kết ảnh hưởng thời gian khử trùng dung dịch H2O2 (5%) đến hiệu vô trùng mẫu 31 4.1.2 Kết ảnh hưởng thời gian khử trùng sử dụng viên khử trùng Johnson (2,5 ppm) đến hiệu khử trùng mẫu cấy 33 1.3 Kết ảnh hưởng thời gian khử trùng với HgCl (0,1%) đến hiệu vô trùng mẫu cấy 34 4.2 Kết số chất điều hòa sinh trưởng đến hiệu tái sinh chồi Đinh lăng 36 4.2.1 Kết ảnh hưởng kinetin đến hiệu tái sinh chồi 36 4.2.2 Kết ảnh hưởng BAP đến hiệu tái sinh chồi 38 vii 4.2.3 Kết ảnh hưởng kết hợp BAP IAA đến hiệu tái sinh chồi 40 4.2.4 Kết ảnh hưởng kết hợp BAP IBA đến hiệu tái sinh chồi 42 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 45 5.1 Kết luận 45 5.2 Kiến nghị 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO 46 I Tài liệu tiếng Việt 46 II Tài liệu tiếng Anh 48 PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Cây Đinh lăng có tên khoa ho ̣c Polyscias fruticosa (L.) Harms, thuộc họ ngũ gia bì Araliaceae (Đỗ Tất Lợi, 2004) [17] Cây Đinh lăng có nguồn gốc từ Polynesie (Thái Bình Dương), thuộc họ Ariliaceae, chi Polyscias Forst Forst.f, chi gần 100 loài giới phân bố rải rác vùng nhiệt đới cân nhiệt đới, nhiều vùng đảo Thái Bình Dương (Đỗ Huy Bích cs, 2004) [1] Đinh lăng có nhiều loài thuộc chi Polyscias, Đinh lăng trổ, Đinh lăng ráng, Đinh lăng tròn Đinh lăng nhỏ… Trong loài đinh lăng nhỏ (Polyscias fruticosa (L.) Harms) loài dân gian sử dụng rộng rãi làm thuốc tăng cường sức khỏe hoạt huyết dưỡng não từ lâu đời (Phạm Hoàng Hộ, 1999) [6] Đinh lăng loài thực vật sử dụng nhiều y học dân gian Viê ̣t Nam và Trung Quố c (Nguyễn Ngọc Dung, 1998) [4] Cây Đinh lăng có chứa hai hơ ̣p chấ t chin n, hợp chất ́ h quan tro ̣ng là polyacetylen và saponi có nhiều rễ (Phạm Thị Tố Liên cs, 2007) [12] Saponin trirtepen có tác dụng tích cực chố ng oxy hóa, chố ng stress Ngoài Đinh lăng chứa 20 acid amin loại acid amin không thay lysine, methionin, tryptophan, cysteine (Ngô Ứng Long, 1985) [15] Nhiều nghiên cứu cho thấy rễ củ Đinh lăng có chứa nhiều chất có tác dụng bồi bổ sức khoẻ chữa bệnh Đặc biệt, Đinh lăng chứa hợp chất saponin tương tự nhân sâm (Ninh Thi Phím, 2013) [20] ̣ Năm 1961, khoa dược lý, dươ ̣c liê ̣u và giải phẫu bê ̣nh lý Viê ̣n y ho ̣c quân sự Viê ̣t Nam nghiên cứu tác du ̣ng của Đinh lăng làm tăng cường sức dẻo dai của thể và mô ̣t số tác du ̣ng khác Trên sở kế t quả nghiên cứu dươ ̣c ly,́ Viê ̣n y ho ̣c quân sự Viê ̣t Nam năm 1964 cho thử nghiê ̣m người thấ y với 43 Ghi chú: (+) chất lượng chồi xấu; (++) chất lượng chồi trung bình; (+++) chất lượng chồi tốt; ns: sai khác ý nghĩa; *: sai khác có ý nghĩa Hình 4.10 Biểu đồ thể kết ảnh hưởng của sự kết hợp BAP và IBA đến hiệu tái sinh chồi Kết nghiên cứu sau 30 ngày cho thấy, bổ xung IBA thêm vào môi trường nuôi cấy với nồng độ tăng dần từ 0,1 mg/l lên 0,2 mg/l tỷ lệ mẫu bật chồi tăng từ 93,33% đến 96,67% hệ số bật chồi tương ứng 2,90 lần lên 3,27 lần Khi tăng nồng độ IBA lên 0,3 mg/l – 0,4mg/l tỷ lệ mẫu bật chồi giảm từ 96,67% xuống 90% hệ số bật chồi tương ứng giảm từ lần xuống 2,73 lần, tỷ lệ mẫu bật chồi công thức với nồng độ IBA 0,3mg/l 96,67% với tỷ lệ mẫu bật chồi công thức hệ số bật chồi công thức lần thấp so với hệ số bật chồi công thức 3,27 lần Với mục đích tai sinh chồi in vitro công thức công thức tốt thí nghiệm cho tỷ lệ mẫu bật chồi đạt 96,67% hệ số bật chồi 3,27 lần cao thí nghiệm, chồi sinh trưởng tốt, chồi xanh, thân mập Sai khác có ý nghĩa so với đối chứng 44 Hình A Hình B Hình 4.11 Ảnh hưởng của BAP đến hiệu tái sinh chồi Đinh lăng; Hình A: Công thức đối chứng, Hình B: Công thức 45 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Khử trùng mẫu HgCl2 nồng độ 0,1 thời gian 15 phút hiệu cho mục đích tạo vật liệu khởi đầu Đinh lăng nuôi cấy mô Môi trường MS + saccarose 30g/l + inositol 100 mg/l + agar 6,5g/l + BAP 1,5 mg/l + IBA 0,2 mg/l; Ph = 5,8 thích hợp cho tái sinh chồi Đinh lăng in vitro cho hệ số bật chồi đạt 96,67% hệ số bật chồi đạt 3,27 lần 5.2 Kiến nghị Cần nghiên cứu thêm ảnh hưởng môi trường nuôi cấy bổ sung kết hợp nước dừa, dịch chiết khoai tây dịch chiết cà rốt đến khả nhân nhanh chồi Đinh lăng Nghiên cứu ảnh hưởng số chất kinetin, BAP, IAA, NAA, IBA đến khả nhân nhanh chồi Đinh lăng Nghiên cứu ảnh hưởng số chất hữu tự nhiên dịch chiết nấm men, dịch chiết chuối đến khả nhan nhanh chồi Đinh lăng Nghiên cứu môi trường rễ giá thể thích hợp cho Đinh lăng 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu tiếng Việt Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Trung, Bùi Xuân Chương,Nguyễn Thượng Dong, Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn Hiển, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mái,Phạm Kim Mãn, Đàm Thị Như, Nguyễn Tập, Trần Toàn (2004), Cây thuốc động vật làm thuốc, Tập I, Nxb Khoa học Kỹ thuật, Trang 793-796 Ngô Xuân Bình, Bùi Bảo Hoàn, Nguyễn Thúy Hòa (2003), Giáo trình công nghệ sinh học Nxb Nông nghiệp Hà Nội Lê Trần Bình, Hồ Hữu Nghị, Lê Thị Muội (1997), Công nghệ sinh học thực vật cải tiến giống cấy trồng, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội Nguyễn Ngọc Dung (1998), “Nhân giống đinh lăng (Polyscias fruticosa L Harms) thông qua đường tạo phôi soma cấy in-vitro nuôi”, Trung tâm Khoa học Tự nhiên Công nghệ Quốc gia, Viện Sinh học Nhiệt đới, Nxb Nông nghiệp Tp.HCM, Trang 442-445 Phạm Tiến Dũng (2003), Xử lý kết thí nghiệm máy tính IRRISTAT 4.0 Windows, NXB Nông Nghiệp Phạm Hoàng Hộ (1999), Quyển II, Cây cỏ Viê ̣t Nam, Nxb Trẻ, Trang 516518 Trần Hùng (2003), Dược liệu Saponin, Giáo trình thực tập dược liệu, Bộ môn dược liệu, Trường ĐH Y Dược Tp Hồ Chí Minh Trang 26 – 33 Nguyễn Thị Thu Hương, Nguyễn Thị Ánh Như (2004), “Nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan Đinh lăng Polyscias fruticosa L Harms dựa chế tác dụng chống oxy hóa”, Tạp trí Dược liệu, Tập 6, (Số 1), Trang 26-33 Nguyễn Thị Thu Hương, Lương Kim Bích, Nguyễn Thới Nhân (2001), Tác dụng dược lý cao toàn phần chiết xuất từ rễ Đinh lăng (Polyscias 47 fruticosa L Harms Araliacea), Công trình Nghiên cứu khoa học 19872000 Viện Dược Liệu Nxb Khoa hHọc Kỹ Thuật Trang 241-244 10 Nguyễn Như Khanh, Nguyễn Văn Đính (2011), Giáo trình chất điều hòa sinh trưởng thực vật, Nxb Giáo dục Việt Nam 11 Trần Thị Lệ, Trương Thị Bích Phượng, Trần Thị Triêu Hà (2008), Giáo trình Công nghệ sinh học thực vật, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội 12.Phạm Thị Tố Liên, Võ Thị Bạch Mai (2007), “Bước đầu nghiên cứu tạo dịch treo tế bào đinh lăng Polyscias fruticosa L Harms”, Tạp chí phát triển KH&CN, tập 10, (số 07) 13.Trần Thị Liên, Nguyễn Văn Thuận, Đoàn Thị Thanh Nhàn (2005), “Nghiên cứu nhân nhanh Đinh lăng Polyscias fruticosa L Harms phương pháp in – vitro”, Tạp trí Nông nghiệp Phát triển nông thôn, (Số 14), trang 35- 40 14 24 Quách Thị Liên, Nguyễn Đức Thành (2004), “Nghiên cứu điều kiện nuôi cấy mô sẹo để thu sinh khối từ đơn men (Meesa balansea Mez)”, Tạp trí sinh học, Tập 26, (Số 2), Trang 41-46 15.Ngô Ứng Long (1985), “So sánh tác dụng tăng lực sinh thích nghi Đinh lăng Polycias frusticosa L Harms, Chân chim Eleuterococ”, Tạp trí Dược liệu, Tập 2, (Số 1), Trang 24-27 16 24 Nguyễn Hoàng Lộc (2006), Giáo trình công nghệ tế bào, Nhà xuất đại học Huế, TP Huế 17.Đỗ Tất Lợi (2004), Những thuố c và vi ̣ thuố c Niê ̣t Nam , Nxb Y ho ̣c Trang 828-830 18 Trần Công Luận (1996), “Phân lập xác đinh cấu trúc hợp chất polyacetylen Đinh lăng (Polyscias Fruticosa (L.) Harms Araliaceae)”, Tập 48 19 Trần Công luận cs (2000), “Nghiên cứu sàng lọc thuốc thuộc họ nhân sâm (Araliaceae) có tác dụng chống stress tăng lực”, Báo cáo tổng kết đề tài nghiên cứu khoa học, Bộ Y Tế 20.Ninh Thi ̣Phím, “Một số biện pháp kỹ thuật tăng hiệu nhân giống, Của đinh lăng nhỏ, Polyscias fruticosa (L.) Harms”, Tạp chí Khoa học Phát triển 2013, Tập 11, (số 2), 168-173 21 Nguyễn Kim Thanh, Nguyễn Thuận Châu (2005), Giáo trình sinh lý học thực vật, Nxb Giáo dục, Hà Nội 22.Nguyễn Đức Thành (2002), Nuôi cấy mô tế bào thực vật – nghiên cứu ứng dụng, Nxb Nông nghiệp Hà Nội 23.Nguyễn Quang Thạch (2005) Giáo trình công nghệ sinh học Nông nghiệp, Nxb Nông nghiệp Hà Nội 24.Ngô Văn Thu (1990), Hóa Học saponin, Khoa dược, trường Đại Học Y Dược Tp-HCM, Trang 194 25.Lê Thiên Thư, Võ Thị Bạch Mai (2005), “Nghiên cứu phát sinh hình thái nuôi cấy in – vitro Đinh lăng Polyscias fruticosa L Harms”, Tạp trí Phát triển Khoa học Công nghệ Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh, Tập 8, (số 11), trang 47-51 26.Đỗ Văn Vịnh (2007), Công nghệ tế bào thực vật ứng dụng, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội 27.Vũ Văn Vụ, Nguyễn Mộng Hùng, Lê Hồng Điệp (2009), Công nghệ sinh học tập - Công nghệ sinh học tế bào, Nxb Giáo dục II Tài liệu tiếng Anh 28 Vo D H., Yamamura, S., Ohtani, K., Kassai, R., Yamasaki, K., Nguyen, T.N., Hoang, M.C (1998) Oleanaae Saponins from Polysias Frutisoca Phytochemistry, Vol 29, No 12 2472 49 29 Wenck A R., Conger B V., Trigiano R N., and SamsC E (1988) Inhibitionof somatic embryogenesis in Ochardgrass by endogenenous cytokinins Plant Physiol, 88, pp 900-992 30 RH Smith (2005) Plant Tissue Culture: Techniques and Experiments 2ndedn Elsevier Publishers, New Dalhi 31 Murashige, T and Skoog, F (1962) A revised medium for rapid growth and bioassay with tobacco tissu culture Physiol Plant, Vol 15, pp 473497 32 Dodd J H., Roberts L W.(1999), Experiments in plant tissue culture, Cambridge University press, United Kingdom PHỤ LỤC MÔI TRƢỜNG MS Nhóm I II III IV V Thành phần NH4NO3 1650 KNO3 1900 MgSO4 7H2O 370 MnSO4 4H2O 22,3 ZnSO4 7H2O 10,6 CuSO4 5H2O 0,025 CaCl2 2H2O 440 KI 0,83 CoCl2 6H2O 0,025 KH2PO4 170 H3BO3 6,2 Na2MoO4 2H2O 0,25 FeSO4 7H2O 27,85 NaEDTA 2H2O 37,25 Nicotinic acid Glycine Vitamins Hàm lƣợng (mg/l) 0,5 Thiamine HCl 0,1 Pyridoxine HCl 0,5 Saccarose 30000 Agar 6800 Inositol 100 PHỤ LỤC KẾT QUẢ XỬ LÝ SỐ LIỆU BẰNG IRRISTAR Nghiên cứu ảnh hưởng thời gian khử trùng dung dịch H2O2 (5%) đến hiệu ô trùng mẫu cấy BALANCED ANOVA FOR VARIATE MS FILE H2O2 28/ 5/15 8:55 :PAGE VARIATE V003 MS LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 4183.33 1045.83 125.50 0.000 LL 376588E-12 188294E-12 0.00 1.000 * RESIDUAL 66.6667 8.33334 * TOTAL (CORRECTED) 14 4250.00 303.571 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE H2O2 28/ 5/15 8:55 :PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 DF MS 0.000000 26.6667 33.3333 48.3333 41.6667 SE(N= 3) 1.66667 5%LSD 8DF 5.43483 MEANS FOR EFFECT LL LL NOS 5 MS 30.0000 30.0000 30.0000 SE(N= 5) 1.29099 5%LSD 8DF 4.20980 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE H2O2 28/ 5/15 8:55 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE MS GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 30.000 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 17.423 2.8868 9.6 0.0000 |LL | | | 1.0000 | | | | Nghiên cứu ảnh hưởng thời gian khử trùng sử dụng viên khử trùng Johnson (2,5 ppm) đến hiệu vô trùng mẫu cấy BALANCED ANOVA FOR VARIATE MS FILE JONSHON 28/ 5/15 9: :PAGE VARIATE V003 MS LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1473.33 368.333 110.50 0.000 LL 23.3333 11.6667 3.50 0.080 * RESIDUAL 26.6668 3.33335 * TOTAL (CORRECTED) 14 1523.33 108.810 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE JONSHON 28/ 5/15 9: :PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 DF MS 0.000000 18.3333 21.6667 25.0000 28.3333 SE(N= 3) 1.05410 5%LSD 8DF 3.43730 MEANS FOR EFFECT LL LL NOS 5 MS 17.0000 20.0000 19.0000 SE(N= 5) 0.816498 5%LSD 8DF 2.66252 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE JONSHON 28/ 5/15 9: :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE MS GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 18.667 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 10.431 1.8257 9.8 0.0000 |LL | | | 0.0803 | | | | Nghiên cứu ảnh hưởng thời gian khử trùng với HgCl (0,1%) đến hiệu vô trùng mẫu cấy BALANCED ANOVA FOR VARIATE MS FILE HGCL2 28/ 5/15 9:13 :PAGE VARIATE V003 MS LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 10633.3 2658.33 455.71 0.000 LL 3.33333 1.66667 0.29 0.761 * RESIDUAL 46.6674 5.83342 * TOTAL (CORRECTED) 14 10683.3 763.095 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE HGCL2 28/ 5/15 9:13 :PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 DF MS 0.000000 53.3333 66.6667 73.3333 65.0000 SE(N= 3) 1.39444 5%LSD 8DF 4.54714 MEANS FOR EFFECT LL LL NOS 5 MS 51.0000 52.0000 52.0000 SE(N= 5) 1.08013 5%LSD 8DF 3.52220 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE HGCL2 28/ 5/15 9:13 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE MS GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 51.667 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 27.624 2.4152 4.7 0.0000 |LL | | | 0.7612 | | | | Nghiên cứu ảnh hưởng kinetin đến khả tái sinh chồi Đinh lăng BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMBT FILE KINETIN 27/ 5/15 14:25 :PAGE VARIATE V003 TLMBT LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1333.33 333.333 18.18 0.001 LL 53.3333 26.6667 1.45 0.289 * RESIDUAL 146.667 18.3333 * TOTAL (CORRECTED) 14 1533.33 109.524 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSBT FILE KINETIN 27/ 5/15 14:25 :PAGE VARIATE V004 HSBT SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1.02933 257333 90.82 0.000 LL 400000E-02 200000E-02 0.71 0.525 * RESIDUAL 226668E-01 283336E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 1.05600 754286E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE KINETIN 27/ 5/15 14:25 :PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 TLMBT 46.6667 73.3333 70.0000 66.6667 60.0000 HSBT 0.466667 1.20000 1.13333 1.03333 0.866667 SE(N= 3) 2.47207 0.307319E-01 5%LSD 8DF 8.06116 0.100214 MEANS FOR EFFECT LL LL NOS 5 TLMBT 62.0000 62.0000 66.0000 HSBT 0.920000 0.960000 0.940000 SE(N= 5) 1.91485 0.238049E-01 5%LSD 8DF 6.24415 0.776252E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE KINETIN 27/ 5/15 14:25 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TLMBT HSBT GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 63.333 15 0.94000 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 10.465 4.2817 6.8 0.0006 0.27464 0.53229E-01 5.7 0.0000 |LL | | | 0.2894 0.5254 | | | | Nghiên cứu ảnh hưởng BAP đến khả tái sinh chồi Đinh lăng BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMBT FILE BAP 27/ 5/15 10:58 :PAGE VARIATE V003 TLMBT LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 2266.67 566.667 48.57 0.000 LL 40.0000 20.0000 1.71 0.240 * RESIDUAL 93.3336 11.6667 * TOTAL (CORRECTED) 14 2400.00 171.429 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSBT FILE BAP 27/ 5/15 10:58 :PAGE VARIATE V004 HSBT SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 3.11067 777667 212.09 0.000 LL 373333E-01 186667E-01 5.09 0.037 * RESIDUAL 293336E-01 366670E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 3.17733 226952 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BAP 27/ 5/15 10:58 :PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 TLMBT 46.6667 73.3333 80.0000 80.0000 70.0000 HSBT 0.466667 1.16667 1.43333 1.76667 1.60000 SE(N= 3) 1.97203 0.349605E-01 5%LSD 8DF 6.43059 0.114003 MEANS FOR EFFECT LL LL NOS 5 TLMBT 68.0000 72.0000 70.0000 HSBT 1.22000 1.30000 1.34000 SE(N= 5) 1.52753 0.270803E-01 5%LSD 8DF 4.98111 0.883060E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BAP 27/ 5/15 10:58 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TLMBT HSBT GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 70.000 15 1.2867 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 13.093 3.4157 4.9 0.0000 0.47640 0.60553E-01 4.7 0.0000 |LL | | | 0.2397 0.0374 | | | | Nghiên cứu ảnh hưởng kết hợp BAP IAA đến khả tái sinh chồi Đinh lăng BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMBC FILE IAA 27/ 5/15 11:18 :PAGE VARIATE V003 TLMBC LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1133.33 283.333 12.14 0.002 LL 13.3333 6.66667 0.29 0.761 * RESIDUAL 186.667 23.3333 * TOTAL (CORRECTED) 14 1333.33 95.2381 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSBC FILE IAA 27/ 5/15 11:18 :PAGE VARIATE V004 HSBC SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 137333 343333E-01 4.68 0.031 LL 133333E-02 666666E-03 0.09 0.913 * RESIDUAL 586666E-01 733333E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 197333 140952E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE IAA 27/ 5/15 11:18 :PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 TLMBC 76.6667 80.0000 90.0000 96.6667 73.3333 HSBC 1.70000 1.80000 1.86667 1.96667 1.73333 SE(N= 3) 2.78887 0.494413E-01 5%LSD 8DF 9.09421 0.161223 MEANS FOR EFFECT LL LL NOS 5 TLMBC 84.0000 84.0000 82.0000 HSBC 1.80000 1.82000 1.82000 SE(N= 5) 2.16025 0.382971E-01 5%LSD 8DF 7.04435 0.124883 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE IAA 27/ 5/15 11:18 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TLMBC HSBC GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 83.333 15 1.8133 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 9.7590 4.8305 5.8 0.0021 0.11872 0.85635E-01 4.7 0.0309 |LL | | | 0.7612 0.9135 | | | | Nghiên cứu ảnh hưởng kết hợp BAP IBA đến khả tái sinh chồi Đinh lăng BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMBC FILE IBA 28/ 5/15 17:14 :PAGE VARIATE V003 TLMBC LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1133.33 283.333 21.25 0.000 LL 160.000 80.0000 6.00 0.026 * RESIDUAL 106.667 13.3333 * TOTAL (CORRECTED) 14 1400.00 100.000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSBT FILE IBA 28/ 5/15 17:14 :PAGE VARIATE V004 HSBT SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 4.14933 1.03733 105.49 0.000 LL 133333E-02 666665E-03 0.07 0.935 * RESIDUAL 786662E-01 983327E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 4.22933 302095 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE IBA 28/ 5/15 17:14 :PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 TLMBC 73.3333 93.3333 96.6667 96.6667 90.0000 HSBT 1.73333 2.90000 3.26667 3.00000 2.73333 SE(N= 3) 2.10818 0.572517E-01 5%LSD 8DF 6.87458 0.186692 MEANS FOR EFFECT LL LL NOS 5 TLMBC 86.0000 90.0000 94.0000 HSBT 2.72000 2.72000 2.74000 SE(N= 5) 1.63299 0.443470E-01 5%LSD 8DF 5.32502 0.144611 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE IBA 28/ 5/15 17:14 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TLMBC GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 90.000 HSBT STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 10.000 3.6515 4.1 0.0004 |LL | | | 0.0256 | | | | 15 2.7267 0.54963 0.99163E-01 3.6 0.0000 0.9346