ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM MÔNG THỊ HƢƠNG Tên đề tài: NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG KHÁNG KHUẨN CỦA DỊCH CHIẾT LÁ TRẦU KHÔNG VÀ DIẾP CÁ KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành : Công nghệ Sinh học Khoa : CNSH-CNTP Khoá học : 2011 – 2015 Giảng viên hƣớng dẫn: ThS Bùi Tuấn Hà Thái Nguyên, năm 2015 i LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành khóa luận tốt nghiệp em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy cô trường Đại Học Nông Lâm Thái Nguyên, thầy cô khoa CNSH-CNTP dạy dỗ, truyền đạt kiến thức kinh nghiệm quý báu suốt năm học tập rèn luyện trường Em xin cảm ơn thầy Bùi Tuấn Hà, người nhiệt tình hướng dẫn, bảo, giúp đỡ em suốt trình thực khóa luận Em xin cảm ơn gia đình, bạn bè người thân động viên, giúp đỡ suốt thời gian thực khóa luận tốt nghiệp Với việc hạn chế kiến thức kinh nghiệm thực tiễn nên khóa luận tránh khỏi thiếu sót, mong nhận ý kiến đóng góp quý báu Thầy Cô bạn Em xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, ngày 30 tháng năm 2015 Sinh viên Mông Thị Hƣơng ii DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1: Thành phần chất chứa trầu tươi 15 Bảng 2.2: Các loại dung huyết tố tụ cầu vàng 26 Bảng 3.1 Danh mục thiết bị sử dụng 37 Bảng 4.1: Ảnh hưởng nhiệt độ chiết đến khả kháng khuẩn dịch chiết Trầu không 41 Bảng 4.2: Ảnh hưởng thời gian chiết đến khả kháng khuẩn dịch chiết Trầu không 42 Bảng 4.3: Ảnh hưởng dung môi chiết đến khả kháng khuẩn dịch chiết Trầu không 44 Bảng 4.4: Ảnh hưởng nhiệt độ chiết đến khả kháng khuẩn dịch chiết Diếp cá 47 Bảng 4.5: Ảnh hưởng thời gian chiết đến khả kháng khuẩn dịch chiết Diếp cá 48 Bảng 4.6: Ảnh hưởng dung môi chiết đến khả kháng khuẩn dịch chiết Diếp cá 50 iii DANH MỤC HÌNH Hình 2.1: Cây Trầu không 13 Hình 2.2: Cây Diếp cá 17 Hình 4.1: Đồ thị biểu diễn ảnh hưởng nhiệt độ chiết đến khả kháng khuẩn dịch chiết Trầu không 42 Hình 4.2: Đồ thị biễu diễn ảnh hưởng thời gian đến khả kháng khuẩn dịch chiết Trầu không 43 Hình 4.3: Đồ thị biểu diễn ảnh hưởng dung môi đến khả kháng khuẩn dịch chiết Trầu không 45 Hình 4.4: Vòng kháng khuẩn dịch chiết Trầu không chủng vi sinh vật thử nghiệm 46 Hình 4.5: Đồ thị biểu diễn ảnh hưởng nhiệt độ chiết đến khả kháng khuẩn dịch chiết Diếp cá 47 Hình 4.6: Ảnh hưởng thời gian chiết đến khả khảng khuẩn dịch chiết Diếp cá 49 Hình 4.7: Đồ thị biểu diễn ảnh hưởng dung môi đến khả kháng khuẩn dịch chiết Diếp cá 51 Hình 4.8: Vòng kháng khuẩn dịch chiết Diếp cá chủng vi sinh vật thử nghiệm 52 iv DANH MỤC VIẾT TẮT CFU Colony fomat unit DNA Axit Deoxyribo Nucleic E coli Escherichia coli E ictaruli Edwardsiella ictaruli EAEC Enteroadherent E.coli EHEC Enterohaemorrhagic E.coli EIEC Enteroinvasive E.coli EPEC Enteropathogenic E.coli ETEC Enterotoxigenic E.coli I Intermediate ( trung gian) MH Mueller-Hinton MIC Minimum Inhibitory Concentration MRSA Methicillin resistance S.aureus PBS Phosphate buffer saline PPCĐ Phương pháp cổ điển PPVS Phương pháp vi sóng R Resistante (đề kháng) S Susceptible (nhạy cảm) S aureus Staphylococus areus TNF Tumor necrosis factor TSST Toxic shock syndromme toxin v MỤC LỤC Phần MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích nghiên cứu 1.3 Yêu cầu 1.4 Ý nghĩa đề tài 1.4.1 Ý nghĩa khoa học 1.4.2 Ý nghĩa thực tiễn Phần TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan chất có hoạt tính sinh học từ thực vật 2.1.1 Một số chất có hoạt tính tính sinh học từ thực vật 2.1.2 Một số phương pháp tách chiết chất từ thực vật 2.1.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến trình chiết 2.2 Tổng quan phương pháp đánh giá tác động kháng khuẩn 2.2.1 Phương pháp xác định nồng độ ức chế tối thiểu 2.2.2 Phương pháp khoanh giấy kháng sinh khuếch tán 11 2.2.3 Phương pháp khuếch tán qua giếng thạch 12 2.3 Cơ sở khoa học 13 2.3.1 Tổng quan Trầu không 13 2.3.2 Tổng quan vi sinh vật thử nghiệm 20 2.4 Tình hình nghiên cứu nước 32 2.4.1 Trầu không 32 2.4.2 Diếp cá 33 Phần VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 36 3.1 Vật liệu nghiên cứu 36 3.1.1 Vật liệu 36 3.1.2 Chủng vi sinh vật thử nghiệm 36 vi 3.1.3 Môi trường nuôi cấy vi khuẩn 36 3.1.4 Dụng cụ, thiết bị 37 3.2 Địa điểm, thời gian nghiên cứu 37 3.3 Nội dung nghiên cứu 37 3.4 Phương pháp nghiên cứu 37 3.4.1 Phương pháp xử lý nguyên liệu 37 3.4.2 Phương pháp chiết 38 3.4.3 Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng nhiệt độ tới khả kháng khuẩn dịch chiết 38 3.4.4 Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng thời gian chiết tới khả kháng khuẩn dịch chiết 38 3.4.5.Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng dung môi chiết tới khả kháng khuẩn dịch chiết 39 3.4.6 Phương pháp thử khả kháng vi khuẩn thử nghiệm loại dịch chiết 39 PHẦN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 41 4.1 Kết nghiên cứu khả kháng khuẩn dịch chiết Trầu không……………………………………………………………………41 4.1.1 Kết ảnh hưởng điều kiện đến khả kháng khuẩn dịch chiết Trầu không chủng vi khuẩn thử nghiệm: E coli, S aureus, E ictaruli 41 4.1.2 Kết ảnh hưởng dung môi đến khả kháng khuẩn dịch chiết Trầu không chủng vi khuẩn thử nghiệm: E coli, S aureus, E ictaruli 44 4.2 Kết nghiên cứu khả kháng khuẩn dịch chiết Diếp cá 46 4.2.1 Kết ảnh hưởng nhiệt độ chiết đến khả kháng khuẩn dịch chiết Diếp cá chủng vi khuẩn thử nghiệm: E coli, S aureus, E ictaruli 46 vii 4.2.2 Kết ảnh hưởng dung môi chiết đến khả kháng khuẩn dịch chiết Diếp cá chủng vi khuẩn thử nghiệm: E coli, S aureus, E ictaruli 49 PHẦN KẾT LUẬN 53 5.1 Kết luận 53 5.1.1 Dịch chiết Trầu không 53 5.1.2 Dịch chiết Diếp cá 53 5.2 Kiến nghị 53 TÀI LIỆU THAM KHẢO Phần MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Đất nước ta với nguồn tài nguyên dược liệu dồi dào, phong phú thuận lợi việc nghiên cứu điều chế loại thuốc có nguồn gốc tự nhiên để phục vụ cho nhu cầu chăm sóc sức khỏe người.Với điều kiện khí hậu nhiệt đới gió mùa, nước ta xem mảnh đất màu mỡ cho phát triển chủng loại cỏ, có không loại dùng làm thuốc hiệu Có loại thảo mộc thông dụng dân gian nhà khoa học chứng minh có tác dụng trị bệnh không so với loại thuốc tân dược Điển hình Trầu không Diếp cá Trầu không loại thân leo, thuộc học hồ tiêu Piperaceae, trồng nhiều nơi nước ta để ăn trầu (lá trầu không, vôi, cau vỏ cây) Nó trồng nhiều nước Châu Á Philipin, Malaisia, Trung Quốc Ngoài công dụng ăn trầu, nhân dân ta sử dụng Trầu không giã nhỏ, cho thêm vào nước sôi dùng rửa vết loét, mẩn ngứa, viêm Nước pha Trầu không dùng làm thuốc nhỏ mắt chữa viêm kết mạc, bệnh chàm mặt trẻ em, có nơi dùng chúng để đắp lên ngực chữa ho hen, đắp lên vú để chữa tắc sữa bà mẹ cho bú Chúng có công dụng thành phần Trầu không tanin, đường tinh dầu có chứa hợp chất phenol có tên gọi chavicol có đặc tính khử trùng tốt, (Đỗ Tất Lợi, 2004) [3] Diếp cá dân gian gọi với tên gọi phổ biến giấp cá hay ngư tinh thảo, loại nhỏ, mọc lâu năm, ưa chỗ ẩm ướt, có thân rễ mọc ngầm đất Rễ nhỏ mọc đốt, thân đứng, có lông lông, (Đỗ Tất Lợi, 2004) [3] Từ xa xưa Diếp cá sử dụng rộng rãi loại rau gia vị giúp kích thích tiêu hóa, tăng thêm mùi vị ăn, tạo cảm giác ngon miệng Theo Đông y, Diếp cá có vị cay, tính lạnh, giúp nhiệt giải độc cho thể, lợi tiểu sát trùng Theo Y khoa đại thành phần Diếp cá có chất decanoyl-acetaldehyde mang tính kháng sinh, có tác dụng lọc máu, giải độc, kháng viêm, tăng sức miễn dịch cho thể, [32] Kinh nghiệm chữa bệnh nhân dân ta vô quý giá, nghiên cứu Y học gần chứng minh thuốc mang chất có tính kháng sinh trầu không Diếp cá nước ta có tác dụng chữa nhiều bệnh nhiễm khuẩn, kinh nghiệm chữa bệnh nhân dân ta có sở có kết quả, [32] Ưu điểm việc sử dụng loại thảo dược điều trị bệnh an toàn, dụng phụ, không gây tai biến nguy hiểm chết người loại thuốc kháng sinh thông thường, sử dụng điều trị vết thương làm vết thương mau lành hơn, hiệu sử dụng không cao chúng khắc phục nhược điểm kháng sinh thông thường tính kháng thuốc, dị ứng với thành phần phụ, điều trị lâu dài cần phối hợp nhiều loại kháng sinh, ảnh hưởng tới gan, thận dày Vì xu hướng sử dụng loại thảo dược việc điều trị bệnh trọng phát triển, (Nguyễn Thanh Hải, Bùi Thị Tho, 2013) [6] Ngày nay, với phát triển công nghiệp môi trường xung quanh trở nên ô nhiễm, kéo theo gia tăng nhiều số lượng vi khuẩn có hại gây bệnh nguy hiểm cho người động vật E coli- loại vi khuẩn đường ruột, thường gây bệnh tiêu chảy, số chủng khác gây rối loạn máu, suy thận, chí dẫn đến tử vong; Staphylococcus aureus- loại tụ cầu khuẩn, kí sinh da người, gây bệnh nhiễm trùng da niêm mạc, tiết độc tố gây ngộ độc thực 52 Theo nghiên cứu Hoàng Văn Tuấn cs(2013) [5], kích thước vùng kháng khuẩn dịch chiết diếp cá E coli 18mm, S aures 20mm cao so với nghiên cứu (a) (b) (c) Hình 4.8: Vòng kháng khuẩn dịch chiết Diếp cá chủng vi sinh vật thử nghiệm a E coil b S aureus c E ictaruli 53 PHẦN KẾT LUẬN 5.1 Kết luận 5.1.1 Dịch chiết Trầu không Việc thay đổi dung môi chiết điều kiện chiết có ảnh hưởng đến khả kháng khuẩn dịch chiết trầu không, dung môi chiết tốt cho hoạt động kháng chủng vi khuẩn kiểm định nghiên cứu hỗn hợp nước:cồn tỷ lệ 30:70, điều kiện chiết 800C, thời gian chiết 80 phút 5.1.2 Dịch chiết Diếp cá Dịch chiết Diếp cá có tác dụng kháng loại vi khuẩn kiểm định, với việc thay đổi điều kiện chiết dung môi chiết ảnh hưởng tới khả kháng khuẩn dịch chiết, nghiên cứu dung môi tốt sử dụng hỗn hợp nước:ethanol 10:90, điều kiện chiết 700C, thời gian chiết 100 phút 5.2 Kiến nghị Trong thời gian ngắn làm khóa luận tốt nghiệp này, kết thu kết bước đầu Nếu có thời gian, xin đề nghị tiếp tuc nghiên cứu sâu ảnh hưởng điều kiện chiết dung môi chiết ảnh hưởng đến khả kháng khuẩn dịch chiết Trầu không dịch chiết Diếp cá Chẳng hạn như: - Nghiên cứu ảnh hưởng số dung môi hỗn hợp số dung môi khác đến khả kháng khuẩn loại dịch chiết methanol, axeton, ether, axit acetic… - Nghiên cứu ảnh hưởng điều kiện chiết khác chiết soxlet, chiết ngấm kiệt, chiết lạnh…v.v - Thử nghiệm ảnh hưởng dung môi chiết điều kiện chiết loại dịch chiết chủng vi sinh khác Steptococus, Bacillus cereus, Samonela, nấm men Cadida albican, nấm mốc Aspergillus niger… TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Bộ Y tế (2002), Dược điển Việt Nam tập 3, 350 Đái Duy Ban, (2008), Các Hợp Chất Thiên Nhiên Có Hoạt Tính Sinh Học Phòng Chống Một Số Bệnh Cho Người Và Vật Nuôi, Nhà Xuất Bản Khoa Học Tự Nhiên Và Công Nghệ Hà Nội GS.TS Đỗ Tất Lợi, Những thuốc vị thuốc Việt Nam , NXB Y học, 2004 GS.TS Lê Huy Chính, Vi sinh vật y học, NXB Y học, 2001 Hoàng Văn Tuấn, Phạm Hương Sơn, Nguyễn Thị Hiền, Nguyễn Đình Luyện, Nguyễn Thanh Hảo(2013), “Nghiên cứu tách chiết xác định số hoạt tính sinh học dịch chiết flavonoid từ diếp cá (Houttuynia cordata thunberg) thu hái Hà Nội”, Tạp chí sinh học 2013, 35(3),183-187 Nguyễn Thanh Hải, Bùi Thị Tho (2013), “Nghiên cứu tác dụng diệt khuẩn invitro dịch chiết tỏi ( Allium SativumL.) E.coli gây bệnh E.coli kháng Ampicillin, Kanamycin”, Tạp chí khoa học phát triển,11(6),804-808 Phạm Thế Chính, Dương Nghĩa Bang, Phan Thanh Phương, Khiếu Thị Tâm, Phạm Thị Thắm, Lê Thị Xuân, Bùi Thị Thúy (2010), “Thành phần hóa học tinh dầu trầu ( Piper Betle L.) trồng Hải Dương”, Tạp chí Khoa học Công nghệ, Đại học Thái Nguyên, 72(10),48-52 Phạm Thị Ngọc Xuân (2009), “Xác định đặc điểm sinh hóa khả kháng thuốc vi khuẩn gây bệnh mủ gan Edwardsiella ictaruli cá tra (Pagasianodon hypophthalmus) nuôi thâm canh số tính đồng sông Cửu Long”, Luận văn tốt nghiệp đại học, Khoa Thủy Sản, Trường đại học Cần Thơ Phạm Thị Thắm, Lại Thị Hải Yến, Triệu Thị Hường, Nguyễn Thị Thanh, Hoàng Thị Thanh Phạm Thế Chính(2010), “Phân lập hợp chất Trầu không (Piper Betle L.)”, Tạp chí Khoa học Và Công nghệ, Đại học Thái Nguyên, 112(12),27-31 10 Thầy thuốc ưu tú - Lương y Lê Trần Đức (1997), Cây thuốc Việt Nam, trồng hái, chế biến trị bệnh ban đầu, Nhà Xuất Bản Nông Nghiệp 11 Ths.Từ Thanh Dung, TS.Đặng Thị Hoàng Oanh, Ths Trần Thị Tuyết Hoa(2009), Giáo trình bệnh học thủy sản, Tủ sách Đại học Cần Thơ 2009 12 Trần Mỹ Linh, Vũ Hương Giang, Lê Quỳnh Liên (2013), “Đánh giá hoạt tính ức chế vi khuẩn kiểm định số loài thực vật ngập mặn vườn quốc gia Xuân Thủy, Nam Định”,Tạp chí sinh học,35(3),342-347 13 Trần Thị Dung (2010), “Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn dịch chiết từ trâm ổi (Lantana Camara L.) hoa móng tay (Impatiens Bansamina L.)”, Tạp chí khoa học phát triển 2013,11(6),804-808 14 Viện Dược Liệu- Bộ Y Tế, (2008), Kỹ Thuật Chiết Xuất Dược Liệu, Nhà Xuất Bản Khoa Học Và Kỹ Thuật 15 Võ Thị Mai Hương (2009), “Thành phần hóa sinh khả kháng khuẩn dịch chiết Muồng trâu (Casia alata L.)”, Tạp chí Khoa Học, Đại học Huế số 52, 2009, 45-50 16 Võ Văn Chi (2004), “Từ điển thực vật thông dụng- tập 2”, Nhà xuất khoa học kỹ thuật, 1386-1387 17 Võ Văn Chi (2007), Cây rau làm thuốc, NXB tổng hợp Đồng Tháp 18 Vụ Khoa Học Và Đào Tạo- Bộ Y Tế, (2006), Dược Học Cổ Truyền, Nhà Xuất Bản Y Học 19 Y học tạp chí số 4, tháng 11 năm 2011 Tiếng Anh 20 Chenielle Delahaye cs (2009),” Antibacterial and antifungal analysis of crude extracts from the leaves of Callistemon viminalis”, Journal of Medical and Biological Sciences,3(1),1-7 21 Ibtisam Mohammed Ababutain(2011),” Antimicrobial Activity of Ethanolic Extracts From Some Medicinal Plant”, Australian Journal of Basic and Applied Sciences, 5(11), 678-683 22 Jiangang Fu cs (2013),” Houttuynia cordata Thunb: A Review of Phytochemistry and Pharmacology and Quality Control”, Chinese Medicine,4(3), 101-123 23 Julio César Escalona-Arranz (2010),” Antimicrobial activity of extracts from Tamarindus indica L leaves”, Pharmacogn Mag,6(23),242-247 24 Klancnik, Piskernik S, Jersek B, Mozina SS(2010), “Evaluation of diffusion and dilution methods to determine the antibacterial activity of plant extracts”, Journal of microbiological method,81(2),121-126 25 LakshmiArabewela, K.G.A Kumaratunga and Kalyani Dias(2005), Studies on piper bettle of Sri Lanka, J.Natn.Sci.Foundation Sri Lanka,33(2),p133-139 26 M Mahfuzul Hoque, Shemona Rattila, M Asaduzzaman Shishir, M L Bari, YInatsu, and S Kawamoto (2011), “Antibacterial Activity of Ethanol Extract of Betel leaf (Piper betle L.) Against some Food Borne Pathogens”, Bangladesh J Microbiol, Volume 28, Number 2, December2011, pp 58-63, 27 Manoj Kuma Singh,Namita Singh,(2011), “Comparison of antimicrobial activity of herbs & spices and their phytochemical determination”, Departments of Training & Research and Development, Clonegen Biotechnology Pvt Ltd, Noida, Uttar Pradesh, India,5(3),229-235 28 Subashkumar cs(2013), “Antibacterial effect of crude aqueous extract of Piper betle L against pathogenic bacteria”,4(1),42-46 29 Sunhee Shin cs (2010), “Anti-inflammatory effects of a Houttuynia cordata supercritical extract”, Journal of Veterinary Science,11(3),273-275 30 Tarun Agarwal, Rachana Singh, Amar Deep Shukla, Imran Waris and Ankita Gujrati, “Comparative analysis of antibacterial activity of four Piper betel varieties”, Pelagia Research Library, Advances in Applied Science Research, 2012, (2):698-705 Tài liệu internet 31 http://nihe.org.vn/new-vn/thuong-quy-va-huong-dan-ky-thuat/937/Quitrinh-xac-dinh-nong-do-khang-sinh-toi-thieu-uc-che-vi-khuan-MIC.vhtm 32 http://sittovietnam.com/trung-tam-kien-thuc/1399/dung-la-trau-khonguc.html 33 .http://dongcong.net/misc/SucKhoeLaVang/diep-ca.htm Thí nghiệm 1: ảnh hƣởng nhiệt độ đến khả kháng khuẩn dịch chiết trầu không BALANCED ANOVA FOR VARIATE ECOLI FILE AH41 17/ 6/** 21:45 PAGE anh huong cua nhiet den kha nang khang khuan cua dich chiet trau khong VARIATE V003 ECOLI LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CTHUC$ 26.5400 8.84667 13.54 0.002 * RESIDUAL 5.22667 653334 * TOTAL (CORRECTED) 11 31.7667 2.88788 BALANCED ANOVA FOR VARIATE ST FILE AH41 17/ 6/** 21:45 PAGE anh huong cua nhiet den kha nang khang khuan cua dich chiet trau khong VARIATE V004 ST LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CTHUC$ 100.036 33.3453 30.06 0.000 * RESIDUAL 8.87333 1.10917 * TOTAL (CORRECTED) 11 108.909 9.90084 BALANCED ANOVA FOR VARIATE IC FILE AH41 17/ 6/** 21:45 PAGE anh huong cua nhiet den kha nang khang khuan cua dich chiet trau khong VARIATE V005 IC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CTHUC$ 37.0825 12.3608 28.91 0.000 * RESIDUAL 3.42000 427500 * TOTAL (CORRECTED) 11 40.5025 3.68205 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE AH41 17/ 6/** 21:45 PAGE anh huong cua nhiet den kha nang khang khuan cua dich chiet trau khong MEANS FOR EFFECT CTHUC$ CTHUC$ NOS ECOLI ST IC 13.7000 11.5333 15.7333 3 14.2000 15.2000 17.5667 16.7000 17.7333 19.2000 18.2333 18.0333 20.7000 SE(N= 3) 0.466667 0.608048 0.377492 5%LSD 8DF 1.52175 1.98278 1.23096 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE AH41 17/ 6/** 21:45 PAGE anh huong cua nhiet den kha nang khang khuan cua dich chiet trau khong F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE ECOLI ST IC GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 15.167 12 16.292 12 18.175 STANDARD DEVIATION C OF V |CTHUC$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.6994 0.80829 5.3 0.0019 3.1466 1.0532 6.5 0.0002 1.9189 0.65383 3.6 0.0002 | | | | Thí nghiệm 2: ảnh hƣởng thời gian BALANCED ANOVA FOR VARIATE ECOLI FILE TIME 17/ 6/** 22:23 PAGE anh huong cua thoi gian den knang khang khuan cua dich triet trau khong VARIATE V003 ECOLI LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 56.0000 28.0000 28.00 0.001 * RESIDUAL 6.00001 1.00000 * TOTAL (CORRECTED) 62.0000 7.75000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE STA FILE TIME 17/ 6/** 22:23 PAGE anh huong cua thoi gian den knang khang khuan cua dich triet trau khong VARIATE V004 STA LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 35.2022 17.6011 40.00 0.001 * RESIDUAL 2.63999 439999 * TOTAL (CORRECTED) 37.8422 4.73028 BALANCED ANOVA FOR VARIATE EIC FILE TIME 17/ 6/** 22:23 PAGE anh huong cua thoi gian den knang khang khuan cua dich triet trau khong VARIATE V005 EIC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 32.3467 16.1733 36.30 0.001 * RESIDUAL 2.67334 445556 * TOTAL (CORRECTED) 35.0200 4.37750 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TIME 17/ 6/** 22:23 PAGE anh huong cua thoi gian den knang khang khuan cua dich triet trau khong MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 ECOLI 16.2000 10.2000 12.2000 STA 14.2667 12.7333 8.36667 EIC 20.2000 16.8667 15.7333 SE(N= 3) 0.577351 0.382970 0.385381 5%LSD 6DF 1.99715 1.32476 1.33310 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TIME 17/ 6/** 22:23 PAGE anh huong cua thoi gian den knang khang khuan cua dich triet trau khong F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE ECOLI STA GRAND MEAN (N= 9) NO OBS 12.867 11.156 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 2.7839 1.0000 7.8 0.0012 2.1749 0.66332 5.9 0.0006 | | | | EIC 17.600 2.0922 0.66750 3.8 0.0007 Thí nghiệm 3: ảnh hƣởng dung môi đến khả kháng khuẩn dịch chiết trầu không BALANCED ANOVA FOR VARIATE ECOLI FILE AH43 17/ 6/** 22:48 PAGE anh huong cua dung moi VARIATE V003 ECOLI LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CTHUC$ 140.933 35.2333 49.16 0.000 * RESIDUAL 10 7.16666 716666 * TOTAL (CORRECTED) 14 148.100 10.5786 BALANCED ANOVA FOR VARIATE ST FILE AH43 17/ 6/** 22:48 PAGE anh huong cua dung moi VARIATE V004 ST LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CTHUC$ 175.683 43.9207 51.51 0.000 * RESIDUAL 10 8.52667 852667 * TOTAL (CORRECTED) 14 184.209 13.1578 BALANCED ANOVA FOR VARIATE IC FILE AH43 17/ 6/** 22:48 PAGE anh huong cua dung moi VARIATE V005 IC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CTHUC$ 179.109 44.7773 53.26 0.000 * RESIDUAL 10 8.40666 840666 * TOTAL (CORRECTED) 14 187.516 13.3940 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE AH43 17/ 6/** 22:48 PAGE anh huong cua dung moi MEANS FOR EFFECT CTHUC$ CTHUC$ NOS 3 3 ECOLI 13.7333 8.62344 18.6667 13.6667 15.2333 ST 13.1667 11.4000 19.2667 11.6667 9.13333 IC 15.3333 17.2667 20.6667 10.4000 13.5333 SE(N= 3) 0.488762 0.533125 0.529360 5%LSD 10DF 1.54011 1.67990 1.66803 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE AH43 17/ 6/** 22:48 PAGE anh huong cua dung moi F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE ECOLI ST IC GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 13.900 15 12.927 15 15.440 STANDARD DEVIATION C OF V |CTHUC$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 3.2525 0.84656 6.1 0.0000 3.6274 0.92340 7.1 0.0000 3.6598 0.91688 5.9 0.0000 | | | | Thí nghiệm 4: ảnh hƣởng nhiệt độ BALANCED ANOVA FOR VARIATE ECOLI FILE A44 17/ 6/** 23:33 PAGE anh huong cua nhiet den kha nag khang khuan cua dich chiet diep ca VARIATE V003 ECOLI LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CTHUC$ 5.06250 1.68750 5.90 0.020 * RESIDUAL 2.28667 285833 * TOTAL (CORRECTED) 11 7.34917 668106 BALANCED ANOVA FOR VARIATE STA FILE A44 17/ 6/** 23:33 PAGE anh huong cua nhiet den kha nag khang khuan cua dich chiet diep ca VARIATE V004 STA LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CTHUC$ 7.71000 2.57000 2.77 0.111 * RESIDUAL 7.42667 928333 * TOTAL (CORRECTED) 11 15.1367 1.37606 BALANCED ANOVA FOR VARIATE EIC FILE A44 17/ 6/** 23:33 PAGE anh huong cua nhiet den kha nag khang khuan cua dich chiet diep ca VARIATE V005 EIC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CTHUC$ 72.7600 24.2533 68.64 0.000 * RESIDUAL 2.82667 353334 * TOTAL (CORRECTED) 11 75.5867 6.87152 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE A44 17/ 6/** 23:33 PAGE anh huong cua nhiet den kha nag khang khuan cua dich chiet diep ca MEANS FOR EFFECT CTHUC$ CTHUC$ NOS 3 3 ECOLI 13.6667 14.3333 14.1667 12.6667 STA 14.1667 15.2333 15.6667 13.6667 EIC 12.3333 16.6667 16.6667 11.2667 SE(N= 3) 0.308671 0.556277 0.343188 5%LSD 8DF 1.00655 1.81396 1.11910 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE A44 17/ 6/** 23:33 PAGE anh huong cua nhiet den kha nag khang khuan cua dich chiet diep ca F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE ECOLI STA EIC GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 13.708 12 14.683 12 14.233 STANDARD DEVIATION C OF V |CTHUC$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.81738 0.53463 3.9 0.0203 1.1731 0.96350 6.6 0.1105 2.6214 0.59442 4.2 0.0000 | | | | Thí nghiệm 5: ảnh hƣởng thời gian đến khả kháng khuẩn dịch chiết diếp cá BALANCED ANOVA FOR VARIATE ECOLI FILE A45 17/ 6/** 23:50 PAGE anh huong cua thoi gian den kha nang khan khuan cua diep ca VARIATE V003 ECOLI LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CTHUC$ 43.3867 21.6933 103.85 0.000 * RESIDUAL 1.25334 208889 * TOTAL (CORRECTED) 44.6400 5.58000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE ST FILE A45 17/ 6/** 23:50 PAGE anh huong cua thoi gian den kha nang khan khuan cua diep ca VARIATE V004 ST LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CTHUC$ 95.8200 47.9100 154.55 0.000 * RESIDUAL 1.86000 310000 * TOTAL (CORRECTED) 97.6800 12.2100 BALANCED ANOVA FOR VARIATE IC FILE A45 17/ 6/** 23:50 PAGE anh huong cua thoi gian den kha nang khan khuan cua diep ca VARIATE V005 IC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CTHUC$ 75.5000 37.7500 226.50 0.000 * RESIDUAL 999998 166666 * TOTAL (CORRECTED) 76.5000 9.56250 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE A45 17/ 6/** 23:50 PAGE anh huong cua thoi gian den kha nang khan khuan cua diep ca MEANS FOR EFFECT CTHUC$ CTHUC$ NOS ECOLI ST IC 10.6000 12.6667 15.6667 15.9333 15.5667 18.1667 12.6667 7.66667 11.1667 SE(N= 3) 0.263875 0.321455 0.235702 5%LSD 6DF 0.912784 1.11196 0.815331 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE A45 17/ 6/** 23:50 PAGE anh huong cua thoi gian den kha nang khan khuan cua diep ca F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE ECOLI ST IC GRAND MEAN (N= 9) NO OBS 13.067 11.967 15.000 STANDARD DEVIATION C OF V |CTHUC$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 2.3622 0.45704 3.5 0.0001 3.4943 0.55678 4.7 0.0000 3.0923 0.40825 2.7 0.0000 | | | | Thí nghiệm 6: ảnh hƣởng dung môi đến khả kháng khuẩn dịch chiết diếp cá BALANCED ANOVA FOR VARIATE ECOLI FILE A46 18/ 6/** 6:52 PAGE anh huong cua dung moi den kha nang khang khuan cua dich chiet diep ca VARIATE V003 ECOLI LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CTHUC$ 37.8573 9.46433 124.53 0.000 * RESIDUAL 10 760002 760002E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 38.6173 2.75838 BALANCED ANOVA FOR VARIATE ST FILE A46 18/ 6/** 6:52 PAGE anh huong cua dung moi den kha nang khang khuan cua dich chiet diep ca VARIATE V004 ST LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CTHUC$ 16.5440 4.13600 8.93 0.003 * RESIDUAL 10 4.63333 463333 * TOTAL (CORRECTED) 14 21.1773 1.51267 BALANCED ANOVA FOR VARIATE IC FILE A46 18/ 6/** 6:52 PAGE anh huong cua dung moi den kha nang khang khuan cua dich chiet diep ca VARIATE V005 IC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CTHUC$ 17.2467 4.31167 13.36 0.001 * RESIDUAL 10 3.22667 322667 * TOTAL (CORRECTED) 14 20.4733 1.46238 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE A46 18/ 6/** 6:52 PAGE anh huong cua dung moi den kha nang khang khuan cua dich chiet diep ca MEANS FOR EFFECT CTHUC$ CTHUC$ NOS ECOLI ST IC 4.66667 4.36667 4.33333 5.60000 4.66667 4.56667 3 5.60000 4.56667 4.56667 7.23333 5.23333 5.66667 9.16667 7.23333 7.20000 SE(N= 3) 0.159165 0.392994 0.327957 5%LSD 10DF 0.501534 1.23834 1.03340 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE A46 18/ 6/** 6:52 PAGE anh huong cua dung moi den kha nang khang khuan cua dich chiet diep ca F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CTHUC$ | (N= 15) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | ECOLI 15 6.4533 1.6608 0.27568 4.3 0.0000 ST 15 5.2133 1.2299 0.68069 7.1 0.0000 IC 15 5.2667 1.2093 0.56804 6.8 0.0000 [...]... nhân và thực tế đó, chúng tôi đã tiến hành nghiên cứu đề tài với tên gọi : ‘ Nghiên cứu khả năng kháng khuẩn của dịch chiết lá Trầu không và Diếp cá ’ 1.2 Mục đích nghiên cứu - Khảo sát ảnh hưởng của điều kiện chiết và dung môi chiết tới khả năng kháng khuẩn của dịch chiết Trầu không đối với các chủng vi sinh vật thử nghiệm - Khảo sát ảnh hưởng của điều kiện chiết và dung môi chiết tới khả năng kháng khuẩn. .. kháng khuẩn của dịch chiết Diếp cá đối với các chủng vi sinh vật thử nghiệm 1.3 Yêu cầu - Tìm ra được điều kiện chiết và dung môi chiết thích hợp để tách chiết được các hoạt chất có tính kháng khuẩn trong lá Trầu không và Diếp cá - Đánh giá khả năng kháng khuẩn từ dịch chiết của 2 loại thực vật này 4 1.4 Ý nghĩa của đề tài 1.4.1 Ý nghĩa khoa học - Đưa ra nồng độ thích hợp khi tiến hành tách chiết để... thì càng tốt, sẽ giảm các kích thích gây ho + Bỏng nước sôi: Lá Trầu hơ nhẹ để lá mềm ra rồi phết 1 lớp thầu dầu rồi đặt nhẹ lên vết bỏng Cứ sau vài giờ lại thay 1 lá trầu mới Sau vài lần, dịch trong vết bỏng sẽ tiêu hết, chỗ rộp không mọng nước, không gây mủ Nên dùng vào ban đêm và vứt đi vào sáng sớm + Chữa đau mắt đỏ (viêm kết mạc): Lấy 3 lá Trầu không, 5-10 lá dâu vò nát, cho vào ca, đổ ngập nước... oxy hóa : Diếp cá có chứa hợp chất flavonoid có tác dụng đối với sự peroxy hóa lipid màng tế bào gan bằng cách hạn chế quá trình peroxy góp phần bảo vệ tế bào và duy trì sự hoạt động bình thường của tế bào + Tác dụng kháng tế bào ung thư : Dịch chiết Diếp cá có tác dụng chống lại quá trình oxy hóa và đột biến gen Nồng độ polyphenol trong dịch chiết nước cao hơn dịch chiết methanol, và khả năng kháng đột... nó có thể xâm nhập qua các lỗ chân lông, chân tóc hoặc các tuyến dưới da Sau đó gây nên các nhiễm khuẩn sinh mủ: mụn nhọt, đầu đinh, các ổ áp xe, eczema, hậu bối…Mức độ các nhiễm khuẩn này phụ thuộc vào sự đề kháng của cơ thể và độc lực của vi khuẩn Nhiễm tụ cầu ngoài da thường gặp ở trẻ em và người suy giảm miễn dịch - Nhiễm khuẩn huyết: Tụ cầu vàng là vi khuẩn thường gây nhiễm khuẩn huyết nhất Do chúng... tới 81,4%, vi khuẩn Staphylococcus aureus kháng Methicillin và các loại kháng sinh liên quan, (Nguyễn Thanh Hải, Bùi Thị Tho, 2013) [6] Vì vậy việc nghiên cứu tính kháng khuẩn và tìm ra các hoạt chất kháng khuẩn từ nguồn gốc thực vật là một biện pháp hiệu quả, vừa khắc phục tính kháng thuốc của vi khuẩn, đảm bảo an toàn cho người sử dụng, vừa giảm chi phí trong điều trị, và tận dụng được các dược liệu... enzyme phân giải các aicd hyaluroic của mô liên kết, giúp vi khuẩn lan tràn vào mô *Khả năng gây bệnh: Tụ cầu vàng thường ký sinh ở mũi họng và có thể cả ở da Vi khuẩn này gây bệnh cho người bị suy giảm đề kháng hoặc chúng có 27 nhiều yếu tố độc lực Tụ cầu vàng là vi khuẩn gây bệnh thường gặp nhất và có khả năng gây nhiều loại bệnh khác nhau - Nhiễm khuẩn ngoài da: Do tụ cầu vàng ký sinh ở da và niêm mạc... Pseudomonas aeruginosa Tác dụng mạnh mẽ trên các vi khuẩn Bacilius cereus, Bacillus subtilis, Vibrio parahaemolyticus và E.coli Ngoài ra chúng còn có khả năng diệt được Gonococuc (gây bệnh lậu mủ) và ngăn cản sự phát triển của các siêu vi trùng cảm cúm + Tác dụng kháng viêm: Hoạt chất trong Diếp cá có khả năng chống sưng viêm và làm hạ sốt Là các acid béo trong lá khô có khả năng ngăn chặn sự tổng hợp prostaglandin-... hoặc đề kháng (Resistante - viết tắt R) 2.2.2 Phương pháp khoanh giấy kháng sinh khuếch tán - Nguyên lý: Kháng sinh ở trong khoang giấy khuếch tán vào thạch MH có chứa các chủng vi khuẩn thử nghiệm và mức độ nhạy cảm của vi khuẩn với kháng sinh được biểu hiện bằng đường kính vòng kháng vô khuẩn xung quang giấy kháng sinh - Các bƣớc tiến hành: Các bước chuẩn bị đĩa thạch, chuẩn bị chủng vi khuẩn và pha... chuẩn và ghi lại kết quả của từng loại kháng sinh được thử nghiệm như là: nhạy cảm (S), trung bình (I) và kháng (S) 2.2.3 Phương pháp khuếch tán qua giếng thạch -Nguyên lý: Kháng sinh được bơm vào các giếng thạch MH đã được đục lỗ có chứa các chủng vi khuẩn thử nghiệm, mức độ nhạy cảm của vi 13 khuẩn với kháng sinh được biểu hiện bằng đường kính vòng kháng vô khuẩn xung quang các giếng thạch có chứa kháng