Nghiên cứu chế tạo phức hệ nano chitosan mang gen mã hóa telomerase reverse transcriptase (hTERT) Hoàng Thị Ngà Trường Đại học Khoa học Tự nhiên Luận văn ThS Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm; Mã số 60 42 01 14 Người hướng dẫn: TS Lã Thị Huyền, PGS TS Nguyễn Quang Huy Năm bảo vệ: 2013 Abstract Thiết kế vector tái tổ hợp pcDNA3.1(+)/hTERT mang đoạn gen mã hóa cho epitope kháng nguyên hTERT Tạo hạt nano chitosan/TPP có kích thước mong muốn Tạo phức hệ nano chitosan-plasmid tái tổ hợp pcDNA3.1(+)/hTERT Đánh giá khả mang plasmid DNA hạt nano chitosan/TPP Keywords Sinh học thực nghiệm; Phức hệ Nano Chitosan; Gen mã hóa Luận văn thạc sỹ khoa học MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Ung thƣ bệnh hiểm nghèo, bệnh nhân mắc bệnh có tỷ lệ tử vong cao số ngƣời mắc bệnh ngày tăng Mặc dù cộng đồng y sinh nỗ lực nhƣng ung thƣ nguyên nhân hàng đầu dẫn đến chết, đau khổ bệnh tật Hầu hết bệnh nhân ung thƣ đƣợc điều trị liệu pháp: phẫu thuật, xạ trị hóa trị Các phƣơng pháp ngăn chặn tạm thời không tiêu diệt đƣợc tận gốc khối u nguyên phát Bên cạnh đó, phƣơng pháp không đặc hiệu thƣờng gây tác dụng phụ gây suy nhƣợc, đau đớn cho thể ngƣời bệnh, phá hủy mô khỏe mạnh Với hy vọng khắc phục trở ngại trên, nhiều nhà khoa học tập trung phát triển liệu pháp miễn dịch để chống lại bệnh ung thƣ Một liệu pháp sử dụng vaccine ung thƣ, vaccine ung thƣ cung cấp lợi khác biệt so với phƣơng pháp tiếp cận thông thƣờng: đặc hiệu, giảm thiểu độc tính, loại bỏ đƣợc tính kháng thuốc, tiềm bền điều trị thông qua nhớ miễn dịch, Với phát triển công nghệ nano, vaccine dạng nano đƣợc nghiên cứu Các vaccine dạng thƣờng cho tính kích thích sinh miễn dịch, bảo hộ cao Telomerase enzyme ribonucleoprotein cần thiết cho chép telomere đầu cuối nhiễm sắc thể hầu hết sinh vật nhân chuẩn Telomerase ngƣời phức hệ ribonucleoprotein gồm hTR hTERT hTR (hoặc hTERC) (human template for replication) RNA làm khuôn để chép, hTERT (human telomerase reverse transcriptase) enzyme phiên mã ngƣợc Chúng hoạt động tế bào mầm tế bào ung thƣ, không hoạt động hoạt động thấp tế bào soma Vì vậy, việc tạo vacxin DNA mang gen mã hóa kháng nguyên hTERT mang lại nhiều triển vọng ứng dụng điều trị ung thƣ Hiện giới có nhiều nghiên cứu epitope hTERT nhận thấy chúng có đáp ứng miễn dịch tốt với hầu hết tế bào ung thƣ Hoàng Thị Ngà – Trƣờng ĐH Khoa học tự nhiên – ĐHQGHN Luận văn thạc sỹ khoa học Việc tạo vacxin DNA mang gen mã hóa kháng nguyên hTERT điều trị ung thƣ hƣớng nghiên cứu triển vọng, nhƣng để tăng cƣờng trình chuyển DNA tăng hiệu vacxin cần có chất mang Cùng với phát triển công nghệ nano chất mang có chất polymer có khả liên kết bảo vệ DNA đƣợc chọn làm chất truyền trung gian Một polymer đặc biệt đƣợc quan tâm chitosan, công nghệ nano chitosan đƣợc sử dụng lĩnh vực y học nhƣ để phân phối thuốc đƣợc ứng dụng nhiều nghiên cứu làm vật liệu dẫn truyền vacxin DNA Chitosan sản phẩm biến tính chitin, loại polymer không độc, có khả phân hủy sinh học tan tốt môi trƣờng axit Vì chitosan tích điện dƣơng nên tạo phức hợp với DNA tích điện âm, hứa hẹn ứng cử viên tốt cho hệ thống mang gen Ngoài khả chitosan liên kết hiệu với DNA chúng bảo vệ DNA khỏi phân hủy nuclease Xuất phát từ sở khoa học thực tiễn trên, tiến hành thực đề tài: “Nghiên cứu chế tạo phức hệ nano chitosan mang gen mã hóa telomerase reverse transcriptase (hTERT)” Mục tiêu nghiên cứu Thiết kế thành công vector tái tổ hợp biểu tế bào động vật pcDNA3.1(+)/hTERT mang đoạn gen mã hóa cho epitope kháng nguyên telomerase reverse transcriptase (hTERT) Hệ vector tái tổ hợp đƣợc bao gói nano chitosan Nội dung nghiên cứu - Thiết kế vector tái tổ hợp pcDNA3.1(+)/hTERT mang đoạn gen mã hóa cho epitope kháng nguyên hTERT - Tạo hạt nano chitosan/TPP có kích thƣớc mong muốn - Tạo phức hệ nano chitosan-plasmid tái tổ hợp pcDNA3.1(+)/hTERT Đánh giá khả mang plasmid DNA hạt nano chitosan/TPP Hoàng Thị Ngà – Trƣờng ĐH Khoa học tự nhiên – ĐHQGHN Luận văn thạc sỹ khoa học TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Nguyễn Anh Dũng (2008), "Nghiên cứu chế tạo hạt nano-chitosan làm chất mang kích thích đáp ứng miễn dịch cho vaccine cúm H5N1", Báo cáo đề tài thành phố HCM, Trần Đại Lâm c s (2010), "Một số ứng dụng y sinh môi trƣờng chitosan", Hội nghị khoa học Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam, 168172 Trần Thị Luyến (2006), "Nghiên cứu sử dụng oligoglucosamin từ chitosan để giữ tƣơi thịt heo", Tạp chí khoa học phát triển, Nguyễn Thị Bích Thúy N T T N., Đỗ Thị Thu Thủy (2008), "Ảnh hƣởng nồng độ chitosan đến chất lƣợng thời gian bảo quản chanh", Tạp chí khoa học phát triển, Tập VI(1), 70-75 Dƣơng Thị Ánh Tuyết (2010), Nghiên cứu chế tạo vật liệu nano chitosan làm chất hấp thụ protein ứng dụng dẫn truyền thuốc, Luận văn thạc sỹ khoa học, Trƣờng Đại học Thủ Dầu Một TIẾNG ANH Ada G (2005), "Overview of vaccines and vaccination ", Mol Biotechnol, 29(3), 255-272 Agnihotri S A., Mallikarjuna N N., Aminabhavi T M (2004), "Recent advances on chitosan-based micro- and nanoparticles in drug delivery", J Control Release, 100(1), 5-28 Arai J., Yasukawa M., Ohminami H., Kakimoto M., Hasegawa A., Fujita S (2001), "Identification of human telomerase reverse transcriptase-derived peptides that induce HLA-A24-restricted antileukemia cytotoxic T lymphocytes", Blood, 97(9), 2903-2907 Bailey S E O., T.J.; Bricka, R.M and Adrian, D.D (1999), "A review of potentially low-cost sorbent for heavy metals", Water Research, 33(11), 2469-2479 Hoàng Thị Ngà – Trƣờng ĐH Khoa học tự nhiên – ĐHQGHN 55 Luận văn thạc sỹ khoa học 10 Bernhardt S L., Gjertsen M K., Trachsel S., Moller M., Eriksen J A., Meo M., Buanes T., Gaudernack G (2006), "Telomerase peptide vaccination of patients with non-resectable pancreatic cancer: A dose escalating phase I/II study", Br J Cancer, 95(11), 1474-1482 11 Bodnar A G., Ouellette M., Frolkis M., Holt S E., Chiu C P., Morin G B., Harley C B., Shay J W., Lichtsteiner S., Wright W E (1998), "Extension of life-span by introduction of telomerase into normal human cells", Science, 279(5349), 349- 352 12 Bozkir A., Saka O M (2004), "Chitosan nanoparticles for plasmid DNA delivery: effect of chitosan molecular structure on formulation and release characteristics", Drug Deliv, 11(2), 107-112 13 Brine C J., Stanford, P.A, Zikalis, J.P, (1992), "Advances in chitin and chitosan", 14 Broberg K., Bjork J., Paulsson K., Hoglund M., Albin M (2005), "Constitutional short telomeres are strong genetic susceptibility markers for bladder cancer", Carcinogenesis, 26(7), 1263-1271 15 Brunsvig P F., Aamdal S., Gjertsen M K., Kvalheim G., Markowski-Grimsrud C J., Sve I., Dyrhaug M., Trachsel S., Moller M., Eriksen J A., Gaudernack G (2006), "Telomerase peptide vaccination: a phase I/II study in patients with non-small cell lung cancer", Cancer Immunol Immunother, 55(12), 1553-1564 16 Calvo P., J L Vila-Jato, and M J Alonson (1997), "Novel hydrophilic chitosan-polyethylene oxide nanoparticles as protein carrier", J Appl Poly Sci, 63(125-132 17 Capezzone M., Cantara S., Marchisotta S., Filetti S., De Santi M M., Rossi B., Ronga G., Durante C., Pacini F (2008), "Short telomeres, telomerase reverse transcriptase gene amplification, and increased telomerase activity in the blood of familial papillary thyroid cancer patients", J Clin Endocrinol Metab, 93(10), 3950-3957 Hoàng Thị Ngà – Trƣờng ĐH Khoa học tự nhiên – ĐHQGHN 56 Luận văn thạc sỹ khoa học 18 Carrero-Gomez B A D., R., (1997), "Evaluation of the biological properties of soluble chitosan and chitosan microspheres", Int J Pharm, 148(131-140 19 Cattamanchi A., Posavad C M., Wald A., Baine Y., Moses J., Higgins T J., Ginsberg R., Ciccarelli R., Corey L., Koelle D M (2008), "Phase I study of a herpes simplex virus type (HSV-2) DNA vaccine administered to healthy, HSV-2-seronegative adults by a needle-free injection system", Clin Vaccine Immunol, 15(11), 1638-1643 20 Cesare A J., Reddel R R (2008), "Telomere uncapping and alternative lengthening of telomeres", Mech Ageing Dev, 129(1-2), 99-108 21 Cheba B A (2011), "Chitin and chitosan: Marine Biopolymers with Unique Properties and Versatide Applications", Global Joumal of Biotechnology & Biochemistry, 6(3), 149-153 22 Chow KS K E., Wan ACA (2001), "Porous chitin matrices for tissue engineering: fabrication and in - vitro cytotoxic assessment", J Polym Res, 8(27-35 23 Cong Y S., Wright W E., Shay J W (2002), "Human telomerase and its regulation", Microbiol Mol Biol Rev, 66(3), 407-425, table of contents 24 Dastan T a K T (2004), "In vitro characterization and delivery of chitosanDNA microparticles into mammalian cells", J Pharm Pharm Sci, 7(2), 205214 25 Davis H L (1997), "Plasmid DNA expression systems for the purpose of immunization", Curr Opin Biotechnol, 8(5), 635-646 26 de Lange T (2004), "T-loops and the origin of telomeres", Nat Rev Mol Cell Biol, 5(4), 323-329 27 de Lange T (2002), "Protection of mammalian telomeres", Oncogene, 21(4), 532-540 28 Erbacher P., Zou S., Bettinger T., Steffan A M., Remy J S (1998), "Chitosanbased vector/DNA complexes for gene delivery: biophysical characteristics and transfection ability", Pharm Res, 15(9), 1332-1339 Hoàng Thị Ngà – Trƣờng ĐH Khoa học tự nhiên – ĐHQGHN 57 Luận văn thạc sỹ khoa học 29 Faurez F., Dory D., Le Moigne V., Gravier R., Jestin A (2010), "Biosafety of DNA vaccines: New generation of DNA vectors and current knowledge on the fate of plasmids after injection", Vaccine, 28(23), 3888-3895 30 Feng J., Funk W D., Wang S S., Weinrich S L., Avilion A A., Chiu C P., Adams R R., Chang E., Allsopp R C., Yu J., et al (1995), "The RNA component of human telomerase", Science, 269(5228), 1236-1241 31 Filaci G., Fravega M., Setti M., Traverso P., Millo E., Fenoglio D., Negrini S., Ferrera F., Romagnoli A., Basso M., Contini P., Rizzi M., Ghio M., Benatti U., Damonte G., Ravetti J L., Carmignani G., Zanetti M., Indiveri F (2006), "Frequency of telomerase-specific CD8+ T lymphocytes in patients with cancer", Blood, 107(4), 1505-1512 32 Gan Q., Wang T (2007), "Chitosan nanoparticle as protein delivery carrier-systematic examination of fabrication conditions for efficient loading and release", Colloids Surf B Biointerfaces, 59(1), 24-34 33 Greider C W (1994), "Mammalian telomere dynamics: healing, fragmentation shortening and stabilization ", Curr Opin Genet Dev, 4(2), 203-211 34 Gryaznov S M., Jackson S., Dikmen G., Harley C., Herbert B S., Wright W E., Shay J W (2007), "Oligonucleotide conjugate GRN163L targeting human telomerase as potential anticancer and antimetastatic agent", Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids, 26(10-12), 1577-1579 35 Gurunathan S., Klinman D M., Seder R A (2000), "DNA vaccines: immunology, application, and optimization*", Annu Rev Immunol, 18(927974 36 Hahn W C., Stewart S A., Brooks M W., York S G., Eaton E., Kurachi A., Beijersbergen R L., Knoll J H., Meyerson M., Weinberg R A (1999), "Inhibition of telomerase limits the growth of human cancer cells", Nat Med, 5(10), 1164-1170 Hoàng Thị Ngà – Trƣờng ĐH Khoa học tự nhiên – ĐHQGHN 58 Luận văn thạc sỹ khoa học 37 Harley C B., Futcher A B., Greider C W (1990), "Telomeres shorten during ageing of human fibroblasts", Nature, 345(6274), 458-460 38 Hathcock K S., Hemann M T., Opperman K K., Strong M A., Greider C W., Hodes R J (2002), "Haploinsufficiency of mTR results in defects in telomere elongation", Proc Natl Acad Sci U S A, 99(6), 3591-3596 39 Herbert B., Pitts A E., Baker S I., Hamilton S E., Wright W E., Shay J W., Corey D R (1999), "Inhibition of human telomerase in immortal human cells leads to progressive telomere shortening and cell death", Proc Natl Acad Sci U S A, 96(25), 14276-14281 40 Hochreiter A E., Xiao H., Goldblatt E M., Gryaznov S M., Miller K D., Badve S., Sledge G W., Herbert B S (2006), "Telomerase template antagonist GRN163L disrupts telomere maintenance, tumor growth, and metastasis of breast cancer", Clin Cancer Res, 12(10), 3184-3192 41 Ingolotti M., Kawalekar O., Shedlock D J., Muthumani K., Weiner D B (2010), "DNA vaccines for targeting bacterial infections", Expert Rev Vaccines, 9(7), 747-763 42 Jang J S., Choi Y Y., Lee W K., Choi J E., Cha S I., Kim Y J., Kim C H., Kam S., Jung T H., Park J Y (2008), "Telomere length and the risk of lung cancer", Cancer Sci, 99(7), 1385-1389 43 Joseph I., Tressler R., Bassett E., Harley C., Buseman C M., Pattamatta P., Wright W E., Shay J W., Go N F (2010), "The telomerase inhibitor imetelstat depletes cancer stem cells in breast and pancreatic cancer cell lines", Cancer Res, 70(22), 9494-9504 44 Kaats G R., Michalek J E., Preuss H G (2006), "Evaluating efficacy of a chitosan product using a double-blinded, placebo-controlled protocol", J Am Coll Nutr, 25(5), 389-394 45 Khor E., Lim L Y (2003), "Implantable applications of chitin and chitosan", Biomaterials, 24(13), 2339-2349 Hoàng Thị Ngà – Trƣờng ĐH Khoa học tự nhiên – ĐHQGHN 59 Luận văn thạc sỹ khoa học 46 Kim N W (1997), "Clinical implications of telomerase in cancer", Eur J Cancer, 33(5), 781-786 47 Kim N W., Piatyszek M A., Prowse K R., Harley C B., West M D., Ho P L., Coviello G M., Wright W E., Weinrich S L., Shay J W (1994), "Specific association of human telomerase activity with immortal cells and cancer", Science, 266(5193), 2011-2015 48 Kipling D (1997), "Telomere structure and telomerase expression during mouse development and tumorigenesis", Eur J Cancer, 33(5), 792-800 49 Koping-Hoggard M., Tubulekas I., Guan H., Edwards K., Nilsson M., Varum K M., Artursson P (2001), "Chitosan as a nonviral gene delivery system Structure-property relationships and characteristics compared with polyethylenimine in vitro and after lung administration in vivo", Gene Ther, 8(14), 1108-1121 50 Kutzler M A., Weiner D B (2008), "DNA vaccines: ready for prime time?" Nat Rev Genet, 9(10), 776-788 51 Kyte J A (2009), "Cancer vaccination with telomerase peptide GV1001", Expert Opin Investig Drugs, 18(5), 687-694 52 L Qui Z X., X Jiang, C Hu and X Zou (2004), "Preparation and antibacterial activity of chitosan nanoparticle", Carbohydrate Reseach, 339(2693-2700 53 Lansdorp P M., Verwoerd N P., van de Rijke F M., Dragowska V., Little M T., Dirks R W., Raap A K., Tanke H J (1996), "Heterogeneity in telomere length of human chromosomes", Hum Mol Genet, 5(5), 685-691 54 Lee V F (1974), "Solution and shear properties of chitin and chitosan Ph.D.Dissertation, university of Washington, university microfilms", Ann Arbor, MI, USA, Microfilm, 446(74-29 55 Leong K W., Mao H Q., Truong-Le V L., Roy K., Walsh S M., August J T (1998), "DNA-polycation nanospheres as non-viral gene delivery vehicles", J Control Release, 53(1-3), 183-193 Hoàng Thị Ngà – Trƣờng ĐH Khoa học tự nhiên – ĐHQGHN 60 Luận văn thạc sỹ khoa học 56 Liu D., Safari A., O'Connor M S., Chan D W., Laegeler A., Qin J., Songyang Z (2004), "PTOP interacts with POT1 and regulates its localization to telomeres", Nat Cell Biol, 6(7), 673-680 57 Mao H Q., Roy K., Troung-Le V L., Janes K A., Lin K Y., Wang Y., August J T., Leong K W (2001), "Chitosan-DNA nanoparticles as gene carriers: synthesis, characterization and transfection efficiency", J Control Release, 70(3), 399-421 58 Martens U M., Zijlmans J M., Poon S S., Dragowska W., Yui J., Chavez E A., Ward R K., Lansdorp P M (1998), "Short telomeres on human chromosome 17p", Nat Genet, 18(1), 76-80 59 Meyerson M., Counter C M., Eaton E N., Ellisen L W., Steiner P., Caddle S D., Ziaugra L., Beijersbergen R L., Davidoff M J., Liu Q., Bacchetti S., Haber D A., Weinberg R A (1997), "hEST2, the putative human telomerase catalytic subunit gene, is up-regulated in tumor cells and during immortalization", Cell, 90(4), 785-795 60 Mirabello L., Garcia-Closas M., Cawthon R., Lissowska J., Brinton L A., Peplonska B., Sherman M E., Savage S A (2010), "Leukocyte telomere length in a population-based case-control study of ovarian cancer: a pilot study", Cancer Causes Control, 21(1), 77-82 61 Moghaddam F A., Atyabi F., Dinarvand R (2009), "Preparation and in vitro evaluation of mucoadhesion and permeation enhancement of thiolated chitosan-pHEMA core-shell nanoparticles", Nanomedicine, 5(2), 208-215 62 Muzzarelli R A (1997), "Human enzymatic activities related to the therapeutic administration of chitin derivatives", Cell Mol Life Sci, 53(2), 131-140 63 Nakamura T M., Morin G B., Chapman K B., Weinrich S L., Andrews W H., Lingner J., Harley C B., Cech T R (1997), "Telomerase catalytic subunit homologs from fission yeast and human", Science, 277(5328), 955-959 64 Nakayama J., Tahara H., Tahara E., Saito M., Ito K., Nakamura H., Nakanishi T., Tahara E., Ide T., Ishikawa F (1998), "Telomerase activation by hTRT in Hoàng Thị Ngà – Trƣờng ĐH Khoa học tự nhiên – ĐHQGHN 61 Luận văn thạc sỹ khoa học human normal fibroblasts and hepatocellular carcinomas", Nat Genet, 18(1), 65-68 65 Nguyen Anh Dung N T N H., Dang Thi Hong Van, Nguyen Thi Lan Phuong, Nguyen Thi Nhu Quynh, Dinh Minh Hiep, Le Van Hiep (2011), "Chitosan nanoparticle as a novel delivery system for A/H1N1 influenze vaccine: safe property and immunogenicity in mice", World Academy of Science, Engineering and Technology, 5(12), 1300-1308 66 No H K., Park N Y., Lee S H., Meyers S P (2002), "Antibacterial activity of chitosans and chitosan oligomers with different molecular weights", Int J Food Microbiol, 74(1-2), 65-72 67 Okamoto Y., Watanabe M., Miyatake K., Morimoto M., Shigemasa Y., Minami S (2002), "Effects of chitin/chitosan and their oligomers/monomers on migrations of fibroblasts and vascular endothelium", Biomaterials, 23(9), 1975-1979 68 Park I K., Park Y H., Shin B A., Choi E S., Kim Y R., Akaike T., Cho C S (2000), "Galactosylated chitosan-graft-dextran as hepatocyte-targeting DNA carrier", J Control Release, 69(1), 97-108 69 Pascual E., Julia M R (2001), "The role of chitosan in wool finishing", J Biotechnol, 89(2-3), 289-296 70 Purbhoo M A., Li Y., Sutton D H., Brewer J E., Gostick E., Bossi G., Laugel B., Moysey R., Baston E., Liddy N., Cameron B., Bennett A D., Ashfield R., Milicic A., Price D A., Classon B J., Sewell A K., Jakobsen B K (2007), "The HLA A*0201-restricted hTERT(540-548) peptide is not detected on tumor cells by a CTL clone or a high-affinity T-cell receptor", Mol Cancer Ther, 6(7), 2081-2091 71 Reyes-Sandoval A., Ertl H C (2001), "DNA vaccines", Curr Mol Med, 1(2), 217-243 Hoàng Thị Ngà – Trƣờng ĐH Khoa học tự nhiên – ĐHQGHN 62 Luận văn thạc sỹ khoa học 72 Richardson S., Kolbe, H.V.J and Ducan, R., (1997), "Evaluation of highly purified chitosan as a potential gene delivery vector", Proceed Int Symp Contr Rel Bioact Mater, 24(649-650 73 Risques R A., Vaughan T L., Li X., Odze R D., Blount P L., Ayub K., Gallaher J L., Reid B J., Rabinovitch P S (2007), "Leukocyte telomere length predicts cancer risk in Barrett's esophagus", Cancer Epidemiol Biomarkers Prev, 16(12), 2649-2655 74 Roberts G A F (1992), "Solubilitity and solution behavior of chitin and chitosan", GAF Roberts,ed Chitin Chemistry MacMillan, Houndmills, 274329 75 Roy M., H.Q.Mao, and K.W Leong (1997), "DNA-chitosan nanospheres: transfection efficacy and cellular uptake", Proceed Int'l Symp Control Red Bioact Mater, 24(673-674 76 Sato T., Ishii T., Okahata Y (2001), "In vitro gene delivery mediated by chitosan effect of pH, serum, and molecular mass of chitosan on the transfection efficiency", Biomaterials, 22(15), 2075-2080 77 Shay J W., Bacchetti S (1997), "A survey of telomerase activity in human cancer", Eur J Cancer, 33(5), 787-791 78 Smogorzewska A., de Lange T (2004), "Regulation of telomerase by telomeric proteins", Annu Rev Biochem, 73(177-208 79 Takakura M., Kyo S., Kanaya T., Tanaka M., Inoue M (1998), "Expression of human telomerase subunits and correlation with telomerase activity in cervical cancer", Cancer Res, 58(7), 1558-1561 80 Tasker R A., Ross S J., Dohoo S E., Elson C M (1997), "Pharmacokinetics of an injectable sustained-release formulation of morphine for use in dogs", J Vet Pharmacol Ther, 20(5), 362-367 81 Tiyaboonchai W (2003), "Chitosan Nanoparticles: APromising System for Drug Delivery", Naresuan University Journal, 11(3), 51-66 Hoàng Thị Ngà – Trƣờng ĐH Khoa học tự nhiên – ĐHQGHN 63 Luận văn thạc sỹ khoa học 82 Vonderheide R H (2008), "Prospects and challenges of building a cancer vaccine targeting telomerase", Biochimie, 90(1), 173-180 83 Vonderheide R H., Anderson K S., Hahn W C., Butler M O., Schultze J L., Nadler L M (2001), "Characterization of HLA-A3-restricted cytotoxic T lymphocytes reactive against the widely expressed tumor antigen telomerase", Clin Cancer Res, 7(11), 3343-3348 84 Vonderheide R H., Domchek S M., Schultze J L., George D J., Hoar K M., Chen D Y., Stephans K F., Masutomi K., Loda M., Xia Z., Anderson K S., Hahn W C., Nadler L M (2004), "Vaccination of cancer patients against telomerase induces functional antitumor CD8+ T lymphocytes", Clin Cancer Res, 10(3), 828-839 85 Vonderheide R H., Hahn W C., Schultze J L., Nadler L M (1999), "The telomerase catalytic subunit is a widely expressed tumor-associated antigen recognized by cytotoxic T lymphocytes", Immunity, 10(6), 673-679 86 W.L Du S S N., Y.L Xu, Z.R Xu, C.L Fan (2009), "Antibacterial activity of chitosan tripolyphosphate nanoparticles load with various metal ions", Carbohyddrate Polymers, 75(385-389 87 Weinrich S L., Pruzan R., Ma L., Ouellette M., Tesmer V M., Holt S E., Bodnar A G., Lichtsteiner S., Kim N W., Trager J B., Taylor R D., Carlos R., Andrews W H., Wright W E., Shay J W., Harley C B., Morin G B (1997), "Reconstitution of human telomerase with the template RNA component hTR and the catalytic protein subunit hTRT", Nat Genet, 17(4), 498-502 88 Wierecky J., Muller M R., Wirths S., Halder-Oehler E., Dorfel D., Schmidt S M., Hantschel M., Brugger W., Schroder S., Horger M S., Kanz L., Brossart P (2006), "Immunologic and clinical responses after vaccinations with peptide-pulsed dendritic cells in metastatic renal cancer patients", Cancer Res, 66(11), 5910-5918 Hoàng Thị Ngà – Trƣờng ĐH Khoa học tự nhiên – ĐHQGHN 64 Luận văn thạc sỹ khoa học 89 Ye J Z., Hockemeyer D., Krutchinsky A N., Loayza D., Hooper S M., Chait B T., de Lange T (2004), "POT1-interacting protein PIP1: a telomere length regulator that recruits POT1 to the TIN2/TRF1 complex", Genes Dev, 18(14), 1649-1654 90 Yoo S H., Lee J S., Park S Y., Kim Y S., Chang P S., Lee H G (2005), "Effects of selective oxidation of chitosan on physical and biological properties", Int J Biol Macromol, 35(1-2), 27-31 Hoàng Thị Ngà – Trƣờng ĐH Khoa học tự nhiên – ĐHQGHN 65