BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY NGUYÊN PHAN ĐÌNH THUẬN XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN LOÀI, SỰ PHÂN BỐ VÀ KHẢ NĂNG NHIỄM VIRUS VIÊM NÃO NHẬT BẢN CỦA GIỐNG MUỖI CULEX TẠI CÁC TỈNH TÂY NGUYÊN, 2006 – 2009 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Buôn Ma Thuột - 2009 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY NGUYÊN ………… ………… PHAN ĐÌNH THUẬN TÊN ĐỀ TÀI XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN LOÀI, SỰ PHÂN BỐ VÀ KHẢ NĂNG NHIỄM VIRUS VIÊM NÃO NHẬT BẢN CỦA GIỐNG MUỖI CULEX TẠI CÁC TỈNH TÂY NGUYÊN, 2006 – 2009 Chuyên ngành: Sinh học Thực nghiệm Mã số: LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS ĐẶNG TUẤN ĐẠT Buôn Ma Thuột, năm 2009 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam ñoan: ñây công trình nghiên cứu riêng tôi, số liệu kết nghiên cứu nêu luận văn trung thực, ñược ñồng tác giả cho phép sử sụng chưa ñược công bố công trình khác HỌC VIÊN Phan Đình Thuận Lời cảm ơn Hoàn thành luận văn em xin chân thành cảm ơn: • BGH Trường Đại học Tây Nguyên ñã tạo ñiều kiện cho em suốt thời gian học tập trình thục luận văn • Khoa Sau ñại học, Khoa KHTN & CN Trường Đại học Tây Nguyên • PGS.TS Đặng Tuấn Đạt - Viện trưởng Viện VSDT Tây Nguyên ñã ñộng viên khích lệ em trình học tập thầy trược tiếp hướng dẫn em hoàn thành luận văn • Khoa Côn Trùng Kiểm dịch, Khoa Virus Viện VSDT Tây Nguyên • TS Nguyễn Văn Châu Khoa Côn trùng Viện Sốt rét - KST - CT Trung Ương • PGS.TS Phan Thị Ngà labo Virus Viện VSDT Trung Ương ñã giúp ñỡ chuyên môn kỹ thuật phân lập virus VNNB • Chân thành cảm ơn Trung tâm Y học dự phòng tỉnh Tây Nguyên, Ủy Ban nhân dân trạm Y tế xã nhân dân ñịa phương ñã giúp ñỡ nhiều mặt ñến ñịa phương thực ñề tài HỌC VIÊN PHAN ĐÌNH THUẬN MỤC LỤC Trang MỞ ĐẦU……………………………………………………………… Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU…………………………………… 1.1 Nghiên cứu muỗi Culex vai trò truyền bệnh VNNB chúng 1.1.1 Tình hình nghiên cứu giới 1.1.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam khu vực Tây Nguyên 1.2 Những nghiên cứu virus viêm não Nhật Bản 11 1.2.1 Nghiên cứu virus VNNB giới 11 1.2.2 Nghiên cứu virus viêm não Nhật Bản Việt Nam 12 1.3 Tình hình bệnh VNNB giới, Việt Nam Tây Nguyên 15 1.4 Một số yếu tố tự nhiên xã hội Tây Nguyên 20 Chương PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU……………… ………… 24 2.1 Địa ñiểm thời gian nghiên cứu 24 2.1.1 Địa ñiểm nghiên cứu 24 2.1.2 Đặc ñiểm sinh cảnh ñiểm nghiên cứu 26 2.1.3 Thời gian nghiên cứu 29 2.2 Đối tượng vật liệu nghiên cứu 29 2.2.1 Đối tượng 29 2.2.2 Thiết bị thu thập, ñịnh loại bảo quản muỗi 29 2.2.3 Vật liệu phân lập virus 30 2.3 Phương pháp nghiên cứu 31 2.3.1 Phương pháp thu thập ñịnh loại muỗi Culex 31 3.3.1.1 Phương pháp thu thập muỗi Culex 31 2.3.1.2 Phương pháp ñịnh loại muỗi Culex 32 2.3.2 Kỹ thuật phân lập virus 32 2.3.2.1 Kỹ thuật phân lập virus viêm não Nhật Bản từ muỗi 32 2.3.2.2 Định danh virus kỹ thuật RT – PCR 33 2.4 Xử lý số liệu 33 Chương KẾT QỦA VÀ BÀN LUẬN 34 3.1 Thành phần, phân bố loài muỗi Culex Tây Nguyên 34 3.1.1 Kết thu thập muỗi bọ gậy ñiểm nghiên cứu 34 3.1.2 Thành phần phân bố loài muỗi Culex Tây Nguyên (2006 - 2009) 36 3.1.3 Các loài muỗi Culex có vai trò truyền bệnh ñã ñược ghi nhận Tây Nguyên 38 3.1.4 Đặc ñiểm sinh thái số loài muỗi Culex chủ yếu truyền bệnh VNNB Tây Nguyên 39 3.1.4.1 Mật ñộ, tập tính hoạt ñộng, ổ bọ gậy Culex gelidus 39 3.1.4.2 Mật ñộ, tập tính hoạt ñộng, ổ bọ gậy Cx tritaeniorhynchus 41 3.1.4.3 Mật ñộ, tập tính hoạt ñộng, ổ bọ gậy loài Culex vishnui 43 3.2 Kết phân lập virus từ muỗi Tây Nguyên 45 3.2.1 Kết phân lập virus từ số loài muỗi Culex thu thập Tây Nguyên, ( 2006 – 2009) 45 3.2.2 Kết phân lập virus VNNB từ số loài muỗi Culex Tây Nguyên năm 2006 47 3.2.3 Kết phân lập virus VNNB từ số loài muỗi Culex Tây Nguyên năm 2007 51 3.2.4 Kết phân lập virus VNNB từ số loài muỗi Culex Tây Nguyên năm 2009 53 3.2.5 Kết phân lập chủng virus viêm não Nam Định từ muỗi Culex Tây Nguyên 53 3.2.6 Kết phân lập virus viêm não theo thành phần loài muỗi thuộc giống Culex Tây Nguyên (2006 - 2009) 54 3.2.7 Kết phân lập virus viêm não theo ñiểm nghiên cứu Tây 55 Nguyên, (2006 - 2009) KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ…………………………….……………… 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO 58 PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC BẢNG BIỄU Bảng 1.1: Số bệnh nhân viêm não/100.000 dân Việt Nam, năm 2006 Trang 19 Bảng 1.2: Số ñơn vị hành Tây Nguyên 20 Bảng 1.3: Dân số tỉnh Tây Nguyên 22 Bảng 3.1: Số lượng muỗi bọ gậy Culex ñã thu thập thực ñịa 34 Bảng 3.2: Số lượng loài muỗi Culex thu thập ñiểm nghiên cứu 36 Bảng 3.3: Những loài muỗi Culex có khả truyền bệnh TN 38 Bảng 3.4: Mật ñộ Culex gelidus ñiểm nghiên cứu 40 Bảng 3.5: Mật ñộ Culex tritaeniorhynchus ñiểm nghiên cứu 42 Bảng 3.6: Mật ñộ Culex vishnui ñiểm nghiên cứu 44 Bảng 3.7: Kết phân lập virus từ muỗi thu thập ñiểm nghiên cứu Tây Nguyên 46 Bảng 3.8: Kết phân lập virus VNNB từ muỗi Culex thu thập năm 2006 47 Bảng 3.9: Kết phân lập virus VNNB từ muỗi Culex thu thập năm 2007 51 Bảng 3.10: Kết phân lập virus VNNB từ muỗi Culex thu thập năm 2009 53 Bảng 3.11: Kết phân lập virus viêm não Nam Định từ muỗi (2006-2009) 54 Bảng 3.12: Kết phân lập virus viêm não từ số loài muỗi Culex 54 Bảng 3.13: Kết phân lập virus viêm não từ muỗi theo ñiểm nghiên cứu 55 DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Trang Hình 1.1 Muỗi Culex - vật trung gian truyền bệnh viêm não Nhật Bản Hình 1.2 Hình ảnh virus viêm não Nhật Bản (Japanese Encephalitis Virus) 11 Hình 1.3 Tình hình viêm não virus Việt Nam 1996-2006 18 Hình 2.1 Vị trí ñiểm ñiều tra muỗi Culex Tây Nguyên năm 2006 - 2009 25 Hình 3.1 Kết ñịnh loại virus VNNB phân lập từ muỗi Culex Gia Lai, năm 2006 với cặp mồi ñặc hiệu virus VNNB 48 Hình 3.2 Kết ñịnh loại virus VNNB phân lập từ muỗi Culex Kon Tum, năm 2006 với cặp mồi ñặc hiệu virus VNNB 49 Hình 3.3 Kết ñịnh loại virus VNNB phân lập từ muỗi Culex Đắk Nông, năm 2006 với cặp mồi ñặc hiệu virus VNNB 50 Hình 3.4 Kết ñịnh loại virus VNNB phân lập từ muỗi Culex Đắk Nông, 2007 với cặp mồi ñặc hiệu virus VNNB 51 Hình 3.5 Kết ñịnh loại virus VNNB phân lập từ muỗi Culex Kon Tum, 2007 với cặp mồi ñặc hiệu virus VNNB 52 NHỮNG CHỮ VIẾT TẮC TRONG BÁO CÁO Ae: Aedes Ar: Armigeres bq: Bẫy quạt bñ: Bẫy ñèn CDC: Centers for Disease Control Cx: Culex DL : Đắk Lắk DN : Đắk Nông GL : Gia Lai KT : Kon Tum LĐ : Lâm Đồng KST- CT : Ký sinh trùng- Côn trùng NĐ : Nam Định MĐ : Mật ñộ MĐM: Mật ñộ muỗi RT - PCR: Reverse transcription - Polymerase Chain Reaction TN : Tây Nguyên TT: Thị trấn TX: Thị xã TƯ : Trung Ương VSDT : Vệ sinh Dịch tễ VNNB: Viêm não Nhật Bản MỞ ĐẦU Muỗi Culex có thành phần loài phong phú, chúng phân bố rộng khắp nơi giới [7] Sự diện loài thuộc nhóm côn trùng có khả truyền bệnh ñịa phương dấu hiệu cảnh báo xuất lưu hành nguồn bệnh Hiện nay, số bệnh ñược xác ñịnh muỗi truyền bệnh sốt Dengue/sốt xuất huyết Dengue (SD/SXHD), bệnh giun chỉ, bệnh viêm não Nhật Bản (VNNB) ñó bệnh VNNB muỗi Culex truyền có ý nghĩa quan trọng, ảnh hưởng lớn ñến sức khoẻ cộng ñồng nhiều quốc gia khu vực Trên giới, bệnh VNNB ñã biết từ năm 1871 Bệnh lưu hành vùng Châu Á, Thái Bình Dương Tại Việt Nam, từ năm 1959 ñã phát ñược hội chứng viêm não trẻ em, bệnh ñã xảy ñịa bàn rộng nhiều năm [28] Trên ñịa bàn tỉnh Tây Nguyên, năm 2000-2001 có nhiều trường hợp có hội chứng não cấp Trong ñó ñã xác ñịnh ñược 21 trường hợp VNNB, phân bố rải rác thời gian từ tháng ñến tháng 10 tỉnh Gia Lai, Kon Tum Đắk Lắk [7] Từ ñó ñến nay, hàng năm bệnh viêm não Nhật Bản ñược ghi nhận số ñịa phương tỉnh khu vực Theo số liệu ñiều tra Viện Vệ sinh dịch tễ Tây Nguyên, từ năm 2002 ñến 2005 ñịa bàn Tây Nguyên ñã phát ñược 283 trường hợp viêm não ñó có 50 trường hợp tử vong Đặc biệt, tỉnh Gia Lai ñã phát ñược 46 trường hợp viêm não Nhật Bản từ 74 bệnh phẩm từ bệnh nhân có hội chứng não cấp (HCNC) kỹ thuật MAC-ELISA Những năm gần ñây, ñã có số công trình ñiều tra nghiên cứu vector truyền bệnh nghiên cứu tình hình dịch tễ bệnh VNNB khu vực Tây Nguyên ñã ñược công bố, công trình nghiên cứu “Điều tra khu hệ côn trùng y học Tây Nguyên” Đặng Tuấn Đạt, Nguyễn Ái Phương, Lý Thị Vi Hương [3]; “Điều tra muỗi Culicinae Việt Nam” nhóm tác giả: Vũ Đức Hương, Nguyễn Thị Hoà, Đỗ Thị Hiền, Nguyễn Thị Bạch Ngọc, Nguyễn Văn Hà, Phạm Tất Thắng, Nguyễn Thị Bích Liên, năm 1996; công trình “Giám sát, chẩn ñoán viêm não Nhật Bản Việt Nam, 20002001” nhóm tác giả: Phan Thị Ngà, Nguyễn Thị Kiều Anh, Vương Đức Cường, Vũ Sinh Nam, Phạm Thị Minh Hằng, Trần Văn Tiến, 2002.v.v Song, Tây Nguyên ñịa bàn rộng lớn, ñịa hình sinh cảnh ña dạng, phức tạp, thành phần loài ñộng vật nói chung côn trùng nói riêng phong phú khả truyền bệnh chúng ña dạng Đặc biệt tình hình bệnh VNNB ngày có xu hướng gia tăng Vì vậy, việc nghiên cứu vector virus truyền bệnh VNNB cần ñược tiếp tục Tây Nguyên ñiều cần thiết Do ñó, xây dựng thực ñề tài:“Xác ñịnh thành phần loài, phân bố khả nhiễm virus viêm não Nhật Bản số loài muỗi Culex tỉnh Tây Nguyên, 2006 - 2009” với mục tiêu sau: Xác ñịnh thành phần loài, phân bố số loài muỗi Culex tỉnh thuộc khu vực Tây Nguyên Phát khả nhiễm virus viêm não Nhật Bản loài muỗi 3 Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Nghiên cứu muỗi Culex vai trò truyền bệnh VNNB chúng Khả lây truyền virus VNNB qua vector ñược xác ñịnh số yếu tố: Vector có khả truyền bệnh phải loài muỗi có khả hút máu trở thành muỗi bị nhiễm virus Vector ñó phải có ñiều kiện tốt ñể virus nhân lên với hiệu giá Hình 1.1: Muỗi Culex - vật trung gian truyền bệnh viêm não Nhật Bản cao Trên giới, ñã biết 17 loài muỗi có khả truyền virus VNNB, ñó loài Culex tritaeniorhyncus có khả truyền bệnh cao Các loài muỗi sinh sản ñồng ruộng, ñôi xa nơi người, bay ñến ñược vùng xung quanh nhà người ñể hút máu Muỗi Culex tritaeniorhynchus bay xa 1,5 km ñược phát ñộ cao 13-15m so với mặt ñất; ñó ñộ cao mà loài chim thường trú ñậu Đó ñiều kiện ñể virus VNNB lây truyền loài chim Muỗi hút máu ñộng vật có virus, ñặc biệt lợn, chim thời kỳ nhiễm virus huyết, sau ñó muỗi có khả truyền bệnh suốt ñời truyền virus sang ñời sau qua trứng Virus thường phát triển tốt thể muỗi nhiệt ñộ 270C - 300C Nếu 200C phát triển virus dừng lại Đó lý thể bệnh VNNB xảy tháng nóng, vùng nhiệt ñới [28] 4 1.1.1 Tình hình nghiên cứu giới Có nhiều loài muỗi Culex ñã ñược xác ñịnh trung gian truyền bệnh viêm não Nhật Bản Một số nước Đông Nam Á Thái Lan, Singapor, Indonesia, Philippin, Malaysia việc ñiều tra nghiên cứu khu hệ, sinh thái học, vai trò truyền bệnh biện pháp phòng chống loài muỗi Culex trung gian truyền bệnh VNNB ñã ñược nhiều tác giả quan tâm, G.L Chiang CS, 1985; I Vythilingam CS., 1992; M.S Chang CS., 1993… Những loài muỗi sau ñây ñã ñược xác ñịnh vector bệnh viêm não Nhật Bản ñã ñược nhiều tác giả nghiên cứu: Culex gelidus Theobald, 1901 truyền viêm não Nhật Bản Malaysia Thái Lan Theobald 1901, ñã thu thập loài muỗi Taipang, Perak, Malaya and Quilon, Travancore, Ấn Độ ñặt tên Culex cuneatus Năm 1907, Theobald thu thập ñược Ấn Độ Sarawak (Borneo), ông ñặt tên Culex bipunctata Loài muỗi phân bố khu vực châu Á Thái Bình Dương gồm nước như: Mianma, Trung Quốc, Ấn ñộ, Indonesia, Nhật Bản, Malaysia, Nê Pan, Niu Gui Nê, Pakixtan, Philippin, Đài Loan, Thái Lan, Việt Nam Ấu trùng tìm thấy loại ổ nước tạm thời khác nhau, ổ nước bán cố ñịnh cố ñịnh ao tù, vũng nước nhỏ cống rãnh nhỏ Thỉnh thoảng tìm thấy ấu trùng dụng cụ nhân tạo thùng, bể chứa nước Muỗi hút máu nguy hiểm, chúng ưa thích hút máu gia súc người (Bram, 1967) [32] Culex tritaeniorhynchus Giles, 1901 vector chủ yếu bệnh viêm não Nhật Bản B vùng Đông Phương (Oriental region) Theobald 1905, ñã thu thập loài muỗi Bom Bay - Ấn Độ ñặt tên Culex biroi Dyar 1920, ñã thu thập loài muỗi Los Banos, Philippin ñặt tên Culex summorosus Baraud and Christophers 1931, ñã thu thập loài muỗi Chieng Mai, Thái Lan ñặt tên Culex siamensis Loài muỗi phân bố khắp giới: Angôla, Camerun, Cộng Hoà Trung Phi, Dahomaey, Ai Cập, Gambia, Gha Na, Ấn Độ, Iran, Iraq, Israel, Jordan, Kenya, Lebanon, Malagasy, ñảo Maldive, Mozambique, Nigeria, Nga, Arập Xê út, Senegal, Sri Lanka, Tanzania, Togo, Thổ Nhĩ kỳ, Turkmen, khu vực Châu Á Thái Bình Dương Ấu trùng tìm thấy nhiều loại ổ nước khác nhau, vũng nước cố ñịnh hay bán cố ñịnh, có ánh nắng mặt trời cỏ Nơi sống không giới hạn, gồm ñầm lầy, ao tù, mương, rãnh Muỗi chủ yếu hút máu loài gia súc có sừng lợn hút máu người thiếu gia súc (Bram,1967) [32] Culex vishnui Theobald, 1901 vector quan trọng bệnh viêm não Nhật Bản Loài muỗi phân bố rộng, khắp nước thuộc châu Á –Thái Bình Dương: Bangladesh, Mianma, Campuchia, Trung Quốc, Ấn Độ, Indonesia, Nhật Bản, Malaysia, Nê Pan, Philippin, Singapo, Sri Lanka, Đài Loan, Thái Lan, Đông Timor, Việt Nam Ấu trùng ñặc biệt tìm thấy ao tù, bao gồm chỗ nước bùn, mương rãnh, ao, vũng chân gia súc, lốp bánh xe, ñồng ruộng cho nước vào lúa cấy Muỗi chủ yếu hút máu loài chim lợn, sẵn sàng hút máu người thiếu gia súc (Sirivanakarn 1976)[32] Culex sitiens Wiedemann, 1928 có khả truyền viêm não Nhật Bản nhiễm tự nhiên với giun Brugia malayi Thái Lan (Harbach,1988) Walker 1859, ñã thu thập ñược loài muỗi Makessar, Celebes ñặt tên Culex impellens Theobald 1901, ñã thu thập ñược loài muỗi Quilon, Travancore, Madras, and Shahjahanpur provinces ñặt tên Culex microannulatus Nhưng năm 1901, ông thu thập ñược loài muỗi Australia lại ñặt tên Culex annulirostris; năm 1903, mẫu thu thập Bruas, Dindings Malaya ông ñặt tên Culex somaliensis Taylor 1912, 1913, 1914 ñã ñặt tên khác thu thập ñịa phương khác như: Culex saibaii, Culex paludis, Culex annulata Culex milni Harbach 1988, ñã ñặt tên Culex mauritanicus cho mẫu thu thập Taghjicht, Morocco Ấu trùng loài muỗi ñã tìm thấy môi trường nước mặn, nước lợ nước ñọng ñất dụng cụ nhân tạo chứa nước vùng ven biển Muỗi chủ yếu hút máu loài chim lợn, sẵn sàng ñốt người (Harbach, 1988) [32] 1.1.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam khu vực Tây Nguyên Đã có số công trình nghiên cứu khu hệ, sinh thái, dịch tễ học muỗi Culicinae, vector số bệnh nguy hiểm bệnh giun chỉ, sốt xuất huyết, viêm não Nhật Bản… tác giả: Vũ Thị Phan, CS, 1975; Vũ Đức Hương CS.,1984, 1992, 1996; Đỗ Sĩ Hiển CS., 1992; Trần Tiến, 1992 Một số công trình ñi sâu nghiên cứu ñặc ñiểm phân bố, sinh lý, sinh thái muỗi truyền bệnh viêm não miền Bắc Việt Nam tác giả: Nguyễn Thị Bạch Ngọc, Trương Quang Học, Tạ Huy Thịnh CS., 1993.v.v…ñã ñược công bố Những năm gần ñây, công trình nghiên cứu ñã quan tâm ñến biện pháp phòng trừ muỗi hoá chất, biện pháp sinh học, biện pháp môi trường… ñồng thời tiếp tục ñánh giá nhạy cảm vector với hoá chất ñang sử dụng Việt Nam Các kết nghiên cứu ñó ñã góp phần tích cực vào việc phòng chống bệnh Trước năm 1954, công trình nghiên cứu muỗi Culicinae Việt Nam chủ yếu người nước thực hiện: Borel (1926,1928, 1930), Toumanoff (1933, 1937), Galiard (1936), Galiard Đặng Văn Ngữ (1947, 1949, 1950) Vào năm 50 kỷ trước, bệnh viêm não Nhật Bản ñã ñược phát Việt Nam (Prevot, 1953, 1954) Năm 1954-1975, công trình nghiên cứu trung gian truyền bệnh viêm não miền Bắc Việt Nam ñược tiến hành kết hợp với công tác ñiều tra khác, công trình Vũ Thị Phan (1957), Bộ môn ký sinh trùng Đại học Y dược Hà Nội (1961), Grokhovskaia (1967), Vũ Thị Phan CS., 1973 Ở miền Nam có công trình Stojanovich Scott (1966), Renert (1973), Nguyễn Thị Kim Thoa (1966, 1974)… [22] Từ năm 1964 ñến 1968, Viện Sốt rét - KST - CT Trung Ương Viện VSDT Trung Ương ñã phối hợp ñiều tra, phân lập virus từ muỗi quy mô lớn, ñi tới nhận ñịnh nhóm Culex tritaeniorhynchus, Culex vishnui có liên quan mật thiết ñến mùa dịch VNNB Song tất phân lập virus từ muỗi ñều không thành công Năm 1971, tiếp tục tìm hiểu vai trò truyền bệnh VNNB muỗi nước ta Nhầm xác ñịnh liên quan loài muỗi dịch tễ bệnh viêm não thực ñịa (tại xã M.T, huyện Từ Liêm - Hà Nội xã H.T, huyện Việt Yên, tỉnh Hà Bắc) cảm thụ chúng thực nghiệm Kết nghiên cứu ñã rút nhận xét: - Muỗi Culex tritaeniorhynchus có mật ñộ cao từ tháng - - Số bệnh nhân có hội chứng viêm não phát vào tháng 6,7 - Trong thời gian từ tháng ñến tháng ñã phân lập ñược chủng viêm não Nhật Bản từ muỗi Culex tritaeniorhynchus Đồng thời tham khảo kết nghiên cứu trước ñó, tác giả ñã khẳng ñịnh: Culex tritaeniorhynchus loài muỗi truyền bệnh VNNB Việt Nam [29] Từ năm 1975 ñến nay, bệnh viêm não Nhật Bản xảy hầu khắp ñịa phương nước, việc nghiên cứu muỗi Culex mang tính chất quy mô rộng lớn hơn, chủ yếu người Việt Nam tiến hành, gồm công trình tác giả : Phan Thị Như Ý (1974, 1975), Đỗ Quang Hà (1976, 1978), Vũ Đức Hương (1984), Vũ Đức Hương, Nguyễn Thị Bạch Ngọc CS (1985, 1987, 1993), Vũ Sinh Nam CS (1990, 1992), Đỗ Sĩ Hiển CS (1992), Trần văn Tiến (1992), Nguyễn Thị Bạch Ngọc (1993, 1995)… Kết nghiên cứu ñặc ñiểm sinh thái số loài muỗi có vai trò truyền bệnh viêm não Nhật Bản tác giả ñược tóm tắt sau: Culex gelidus Theobald, 1901 thường thấy làng mạc thuộc nội, ngoại thành Hà Nội, nơi có nhiều ao hồ Muỗi thường nơi bẩn thỉu, có phân súc vật chuồng trâu bò, chuồng lợn…còn nhà thấy (nhất nhà không nuôi súc vật) Muỗi thường ñậu chỗ thấp có bóng tối bãi cỏ, bụi rậm chung quanh chuồng nuôi súc vật Muỗi Culex gelidus có quanh năm, phát triển mạnh vào tháng 10, tháng 11 [1] Culex tritaeniorhynchus Giles, 1901 khắp nơi có hồ ao, bụi rậm, nơi có chuồng nuôi súc vật trâu, bò, gà, lợn…Trong nhà người thấy, có nhà mà chung quanh có chuồng gia súc thấy muỗi Nói chung, nơi cao ráo, hồ ao, bụi rậm muỗi Muỗi ưa ñậu chỗ thấp, tối Muỗi phát triển quanh năm, nhiều từ tháng 10, tháng 11[1] Culex vishnui Theobald, 1901 có khắp làng mạc thuộc nội ngoại thành Hà Nội, nơi ao hồ, bụi rậm, chuồng trâu bò, v.v…Ít thấy loài muỗi nhà, có nhà chung quanh có hồ ao nuôi súc vật, trâu bò… có nhiều Nói chung muỗi ưa nơi bẩn, bụi rậm, ánh sáng, nơi cao thấy Muỗi thường ñậu chổ tối Quanh năm ñều thấy có loài muỗi Culex fuscocephala Theobald, 1907 thường nơi thiếu ánh sáng, bẩn thỉu nơi hồ, ao có nước ñọng Thường thấy ñậu bãi cỏ, bụi rậm quanh hồ ao Trong nhà người chuồng nuôi gia súc có loài muỗi Chúng phát triển quanh năm, nhiều vào tháng 7, tháng 8[1] Năm 1987-1990, nghiên cứu “Sinh học số loài muỗi Culicinae có ý nghĩa dịch tễ Hà Nội” ñã ñược tiến hành Kết quả, ñã thu thập ñược 21 loài thuộc giống Muỗi Culex tritaeniorhynchus có nhiều chuồng gia súc vào ban ñêm, chuồng trâu, bò có nhiều chuồng lợn, phát triển vào mùa khô, từ tháng ñến tháng 10, có hai ñỉnh cao vào tháng tháng Bọ gậy tìm thấy nhiều ruộng lúa, mương máng, ao, hồ, hố vũng có thực vật thủy sinh thảo rong Muỗi Culex vishnui có ñặc ñiểm biến ñộng số lượng, nơi hoạt ñộng nơi trú ẩn, ổ bọ gậy giống với muỗi Culex tritaeniorhynchus, có số lượng muỗi bọ gậy nhiều [6] Năm 1992, nghiên cứu ñầy ñủ lý thú ñặc ñiểm sinh thái Culex tritaeniorhynchus ñã ñược tiến hành thực ñịa xã Đồng Quang, Quốc Oai, Hà Tây nhóm tác giả Nguyễn Thị Bạch Ngọc, Trương Quang Học, Tạ Huy Thịnh, cho thấy rằng: muỗi Culex tritaeniorhynchus phát triển vào mùa khô (từ tháng ñến tháng 9) Trong thời gian thời tiết ấm áp ruộng trồng lúa có nước thường xuyên, tạo ñiều kiện thuận lợi cho bọ gậy phát triển Ở ñây, quần thể muỗi Culex tritaeniorhynchus có ñỉnh cao vào tháng 5, mật ñộ muỗi hoạt ñộng hút máu ban ñêm tăng cao kể nhà, chuồng trâu bò chuồng lợn Muỗi thường trú ñậu tiêu máu nhà, chuồng trâu bò nhiều chuồng lợn nhà Tập tính hút máu loài muỗi phụ thuộc nhiều vào yếu tố khí hậu, ñặc biệt bị ảnh hưởng mạnh mẽ lượng mưa Vào tháng mưa nhiều, số lượng muỗi trú ẩn nhà chuồng gia súc ban ngày gia tăng Vào ban ñêm, muỗi tích cực hoạt ñộng ñể tìm mồi chuồng gia súc nhà, mật ñộ muỗi cao chuồng trâu 30 con/chuồng; chuồng lợn 3,5 con/chuồng nhà con/nhà Muỗi vào nhà hút máu người cao thời gian từ 2024h sau ñó giảm dần Các tác giả ñã nhận xét: số lượng quần thể muỗi có liên quan chặt chẽ với cảnh quan khu dân cư “Nơi nuôi lợn nhiều, mật ñộ dân cư cao, diện tích thổ cư chật hẹp làm cho mối liên hệ người gia súc gần gủi, tạo ñiều kiện thuận lợi cho bệnh viêm não Nhật Bản lan truyền thông qua vector Culex tritaeniorhynchus” [22] Ổ bọ gậy loài Culex tritaeniorhynchus có liên quan chặt chẽ ñến ñồng ruộng việc trồng lúa Tại ruộng lúa, thủy vực ñược hình thành lần ñầu năm (tháng 1, tháng 2) nhiệt ñộ thấp (15-16,50C) số lượng bọ gậy Từ tháng số lượng bọ gậy bắt ñầu gia tăng mạnh mẽ, bọ 10 gậy tuổi 3-4 ñạt ñỉnh cao vào tháng 4, tháng tháng 9, phù hợp với mật ñộ muỗi trưởng thành khu dân cư với hai mùa lúa trổ vào thời ñiểm cuối vụ chiêm (tháng sáu) Trong mùa ñông, ñồng ruộng khô cạn hẳn muỗi ñẻ mương dẫn nước hố, vũng sót lại ñồng ruộng Bằng cách ñó chúng trì quần thể qua mùa rét [22] Năm 1992-1994, Hà Nội ñã phát ñược 209 trường hợp mắc hội chứng não cấp trẻ em, ñó 21 trường hợp nội thành, việc giám sát vector truyền bệnh viêm não Nhật Bản nội, ngoại thành Hà Nội ñã ñược tiến hành Kết cho thấy, muỗi Culex tritaeniorhynchus thu thập ñược quanh năm, nhiều vào tháng 4, 8, Ở ngoại thành Culex tritaeniorhynchus thu ñược chuồng trâu bò nhiều Trong nội thành, chuồng bò, loài muỗi thu ñược chuồng lợn nhiều nhà Mật ñộ Culex tritaeniorhynchus giảm dần từ ngoại thành vào nội thành [24] Ở Tây Nguyên, năm 1993 tác giả Đặng Tuấn Đạt, Nguyễn Ái Phương, Lý Thị Vi Hương cộng ñã xác ñịnh có 41 loài muỗi thuộc phân họ Culicinae Trong ñó giống Aedes có 16 loài, Armigeres: loài, Mansonia: loài, Orthopodomya: loài, Malaya: loài, Toxorhynchites: loài, Tripteroides: loài ñặc biệt giống Culex có loài [3] Mặc dù ñã có số công trình nghiên cứu thành phần, phân bố muỗi Culex khu vực năm trước ñây Song, số ñiểm ñiều tra chưa nhiều, số lượng loài ñã ñược xác ñịnh phân bố chúng chưa phản ảnh cách ñầy ñủ loài muỗi thuộc giống Culex Tây Nguyên Vì việc mở rộng diện ñiều tra nhằm thu thập xác ñịnh ñược ñầy ñủ thành phần loài, phân bố chúng thực cần thiết 11 1.2 Những nghiên cứu virus viêm não Nhật Bản 1.2.1 Nghiên cứu virus VNNB giới Tác nhân gây bệnh VNNB virus thuộc họ Togaviridae nhóm B giống flavi virus Virus có dạng hình cầu, ñường kính trung bình 40-50nm Về cấu trúc virus VNNB gồm có: - Lõi ñược cấu tạo axit ribonucleic, sợi ñơn, vật liệu di truyền virus - Capsit bao bọc chung quanh lõi ñược cấu tạo nucleoprotein - Vỏ bọc cấu tạo glycoprotein Đó kháng nguyên bề mặt có tính ngưng kết hồng cầu nên gọi kháng nguyên ngưng kết hồng cầu có hoạt tính trung hoà Đặc tính virus: không bị phá hủy pH = - 9, tốt pH = Virus bị bất hoạt nhanh nhiệt ñộ 500C bề mặt virus có lipid nên nhạy cảm với chất dung môi hoà tan mỡ ête, desoxycholat natri Ngoài ra, virus bị bất hoạt nhanh tia hồng ngoại Hình 1.2 : Hình ảnh virus viêm não Nhật Bản (Japanese Encephalitis Virus) Ổ chứa (reservoir) virus Mức ñộ cảm nhiễm loài ñộng vật ñối với virus VNNB khác Tỷ lệ kháng thể dương tính cao ñối với virus VNNB ñã ñược chứng minh súc vật lợn, ngựa, loài chim tỷ lệ dương tính thấp trâu, bò, dê, cừu, chó, khỉ Lợn chim vật chủ quan trọng dự trữ, nhân lên lan rộng virus VNNB, bò vật chủ quan trọng virus VNNB [...]... khả năng nhiễm virus viêm não Nhật Bản của một số loài muỗi Culex tại các tỉnh Tây Nguyên, 2006 - 2009 với các mục tiêu sau: 1 Xác ñịnh thành phần loài, phân bố của một số loài muỗi Culex ở các tỉnh thuộc khu vực Tây Nguyên 2 Phát hiện khả năng nhiễm virus viêm não Nhật Bản của các loài muỗi này 3 Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Nghiên cứu về muỗi Culex và vai trò truyền bệnh VNNB của chúng Khả năng. .. những năm trước ñây Song, số ñiểm ñiều tra chưa nhiều, số lượng loài ñã ñược xác ñịnh và sự phân bố của chúng chưa phản ảnh một cách ñầy ñủ của các loài muỗi thuộc giống Culex ở Tây Nguyên Vì vậy việc mở rộng diện ñiều tra nhằm thu thập và xác ñịnh ñược ñầy ñủ hơn thành phần loài, sự phân bố của chúng là thực sự cần thiết 11 1.2 Những nghiên cứu về virus viêm não Nhật Bản 1.2.1 Nghiên cứu về virus. .. năm 1993 các tác giả Đặng Tuấn Đạt, Nguyễn Ái Phương, Lý Thị Vi Hương và cộng sự ñã xác ñịnh có 41 loài muỗi thuộc phân họ Culicinae Trong ñó giống Aedes có 16 loài, Armigeres: 8 loài, Mansonia: 1 loài, Orthopodomya: 1 loài, Malaya: 1 loài, Toxorhynchites: 3 loài, Tripteroides: 2 loài và ñặc biệt giống Culex có 9 loài [3] Mặc dù ñã có một số công trình nghiên cứu về thành phần, phân bố của muỗi Culex. .. truyền virus VNNB qua vector ñược xác ñịnh bởi một số yếu tố: Vector có khả năng truyền bệnh phải là những loài muỗi cái có khả năng hút máu và trở thành muỗi bị nhiễm virus Vector ñó phải có ñiều kiện tốt ñể virus nhân lên trong nó với hiệu giá Hình 1.1: Muỗi Culex - vật trung gian truyền bệnh viêm não Nhật Bản cao Trên thế giới, hiện nay ñã biết 17 loài muỗi có khả năng truyền virus VNNB, trong ñó loài. .. tháng 5 - 9 - Số bệnh nhân có hội chứng viêm não phát hiện vào tháng 6,7 - Trong thời gian từ tháng 5 ñến tháng 9 ñã phân lập ñược 3 chủng viêm não Nhật Bản từ muỗi Culex tritaeniorhynchus Đồng thời tham khảo kết quả của các nghiên cứu trước ñó, các tác giả ñã khẳng ñịnh: Culex tritaeniorhynchus là một loài muỗi truyền bệnh VNNB ở Việt Nam [29] Từ năm 1975 ñến nay, khi bệnh viêm não Nhật Bản xảy ra ở... và sinh cảnh ña dạng, phức tạp, thành phần loài ñộng vật nói chung và côn trùng nói riêng rất phong phú và khả năng truyền bệnh của chúng rất ña dạng Đặc biệt tình hình bệnh VNNB ngày càng có xu hướng gia tăng Vì vậy, việc nghiên cứu vector và virus truyền bệnh VNNB cần ñược tiếp tục ở Tây Nguyên là ñiều cần thiết Do ñó, chúng tôi xây dựng và thực hiện ñề tài: Xác ñịnh thành phần loài, sự phân bố và. .. 1992; M.S Chang và CS., 1993… Những loài muỗi sau ñây ñã ñược xác ñịnh là vector của bệnh viêm não Nhật Bản và ñã ñược nhiều tác giả nghiên cứu: Culex gelidus Theobald, 1901 có thể truyền viêm não Nhật Bản ở Malaysia và Thái Lan Theobald 1901, ñã thu thập loài muỗi này ở Taipang, Perak, Malaya and Quilon, Travancore, Ấn Độ và ñặt tên là Culex cuneatus Năm 1907, Theobald thu thập ñược ở Ấn Độ và Sarawak... Song tất cả các phân lập virus từ muỗi ñều không thành công Năm 1971, tiếp tục tìm hiểu vai trò truyền bệnh VNNB của muỗi ở nước ta Nhầm xác ñịnh sự liên quan giữa các loài muỗi và dịch tễ bệnh viêm não ở thực ñịa (tại xã M.T, huyện Từ Liêm - Hà Nội và xã H.T, huyện Việt Yên, tỉnh Hà Bắc) cũng như sự cảm thụ của chúng trong thực nghiệm Kết quả nghiên cứu ñã rút ra nhận xét: - Muỗi Culex tritaeniorhynchus... và nước ngọt ñọng trên ñất và ở những dụng cụ nhân tạo chứa nước ở vùng ven biển Muỗi cái chủ yếu hút máu các loài chim và lợn, nhưng sẵn sàng ñốt người (Harbach, 1988) [32] 1.1.2 Tình hình nghiên cứu ở Việt Nam và khu vực Tây Nguyên Đã có một số công trình nghiên cứu về khu hệ, sinh thái, dịch tễ học của muỗi Culicinae, vector của một số bệnh nguy hiểm như bệnh giun chỉ, sốt xuất huyết, viêm não Nhật. .. viêm não Nhật Bản của các tác giả: Vũ Thị Phan, và CS, 1975; Vũ Đức Hương và CS.,1984, 1992, 1996; Đỗ Sĩ Hiển và CS., 1992; Trần Tiến, 1992 Một số công trình ñi sâu nghiên cứu về ñặc ñiểm phân bố, sinh lý, sinh thái của muỗi truyền bệnh viêm não ở miền Bắc Việt Nam của các tác giả: Nguyễn Thị Bạch Ngọc, Trương Quang Học, Tạ Huy Thịnh và CS., 1993.v.v…ñã ñược công bố Những năm gần ñây, các công trình