BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN HÓA HỌC MAI HÙNG THANH TÙNG NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA HAI LOÀI KHỔ SÂM MỀM (BRUCEA MOLLIS WALL EX KURZ) VÀ CƠM RƯỢU TRÁI HẸP (GLYCOSMIS STENOCARPA (DRAKE) GUILLAUM) Ở VIỆT NAM LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC HÀ NỘI - 2012 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN HÓA HỌC MAI HÙNG THANH TÙNG NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA HAI LOÀI KHỔ SÂM MỀM (BRUCEA MOLLIS WALL EX KURZ) VÀ CƠM RƯỢU TRÁI HẸP (GLYCOSMIS STENOCARPA (DRAKE) GUILLAUM) Ở VIỆT NAM Chuyên ngành: Hóa Hữu Mã số : 62.44.27.01 LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS NGUYỄN MẠNH CƯỜNG GS.TS YOUNG HO KIM HÀ NỘI - 2012 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan: Đây công trình nghiên cứu riêng Các số liệu kết thu luận án hoàn toàn trung thực chưa công bố công trình khác Tác giả luận án Mai Hùng Thanh Tùng LỜI CẢM ƠN Luận án hoàn thành Viện Hóa học, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam Với lòng biết ơn chân thành sâu sắc nhất, xin bày tỏ lòng biết ơn tới PGS.TS Nguyễn Mạnh Cường GS.TS Young Ho Kim người thầy hướng dẫn tận tình tạo điều kiện giúp đỡ thời gian thực luận án Tôi xin trân trọng cảm ơn quan tâm giúp đỡ Ban lãnh đạo Viện Hóa học Viện Hóa học hợp chất thiên nhiên, đặc biệt PGS.TS Phạm Quốc Long, Viện trưởng Viện Hóa học hợp chất thiên nhiên, người tạo điều kiện giúp đỡ hoàn thành luận án Tôi xin trân trọng cảm ơn Ban lãnh đạo trường Cao đẳng công nghiệp Tuy Hòa giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho thời gian làm luận án Tôi xin chân thành cảm ơn TS Đỗ Thị Thảo anh chị Tổ Thử nghiệm sinh học, Viện Công nghệ sinh học, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam giúp đỡ tạo điều kiện cho hoàn thành nghiên cứu hoạt tính sinh học Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn tới tập thể cán Phòng Hoạt chất sinh học, Viện Hóa học hợp chất thiên nhiên giúp đỡ nhiệt tình suốt thời gian thực luận án Cuối cùng, xin chân thành cảm ơn đến gia đình bạn bè cổ vũ, động viên hoàn thành tốt luận án Tôi xin trân trọng cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2012 Tác giả luận án Mai Hùng Thanh Tùng MỤC LỤC Trang Danh mục hình luận án DM1 Danh mục bảng luận án DM2 Danh mục ký hiệu, chữ viết tắt DM3 MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu chi Brucea (Sầu đâu) 1.1.1 Sơ lược chi Brucea 1.1.2 Thành phần hóa học chi Brucea 1.1.2.1 Tình hình nghiên cứu nước 1.1.2.2 Tình hình nghiên cứu giới 1.1.2.2.1 Lớp chất quassinoit 1.1.2.2.2 Lớp chất ancaloit 1.1.2.2.3 Lớp chất tritecpenoit steroit 1.1.2.2.4 Lớp chất flavonoit 1.1.2.2.5 Lớp chất axít béo loại khác 1.1.3 Hoạt tính sinh học loài thuộc chi Brucea 12 1.1.3.1 Hoạt tính chống sốt rét 12 1.1.3.2 Hoạt tính kháng u ung thư 13 1.1.3.3 Hoạt tính kháng virus TMV (Tobacco Mosaic Virus) 13 1.1.3.4 Hoạt tính chống tiểu đường 13 1.1.3.5 Hoạt tính kháng ký sinh trùng mũi khoan 14 1.1.3.6 Hoạt tính kháng amíp 14 1.1.3.7 Các hoạt tính khác 14 1.1.4 Sơ lược lớp chất quassinoit 14 1.1.4.1 Giới thiệu 14 1.1.4.2 Phân lập xác định cấu trúc 15 1.1.4.3 Sinh tổng hợp quassinoit 16 1.1.4.4 Bán tổng hợp quassinoit 17 1.1.4.5 Tổng hợp toàn phần quassinoit 18 1.1.4.6 Hoạt tính sinh học lớp chất quassinoit 19 1.1.5 Loài Khổ sâm mềm (Brucea mollis Wall ex Kurz) 20 1.2 Chi Glycosmis 21 1.2.1 Đặc điểm hình thái phân bố 21 1.2.2 Sử dụng dân gian 22 1.2.3 Thành phần hóa học chi Glycosmis 23 1.2.3.1 Tecpenoit 23 1.2.3.2 Flavonoit 24 1.2.3.3 Cumarin 25 1.2.3.4 Ancaloit 25 1.2.3.5 Các ancaloit dạng amít chứa lưu huỳnh 25 1.2.3.6 Glycosid 26 1.2.4 Hoạt tính sinh học loài thuộc chi Glycosmis 27 1.2.5 Loài Cơm rượu trái hẹp (Glycosmis stenocarpa (Drake) Guillaum) 27 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.1 Đối tượng phương pháp nghiên cứu 30 2.1.1 Thu mẫu cây, xác định tên khoa học phương pháp xử lý mẫu 30 2.1.2 Phương pháp phân lập hợp chất từ dịch chiết 30 2.1.3 Các phương phương xác định cấu trúc hóa học hợp chất 30 2.1.3.1 Xác định điểm chảy góc quay cực 31 2.1.3.2 Phổ khối lượng (ESI-MS) phổ khối phân giải cao (HR-ESI-MS) 31 2.1.3.3 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 31 2.1.4 Phương pháp thử hoạt tính gây độc (ức chế) tế bào ung thư in vitro 31 2.1.4.1 Vật liệu 31 2.1.4.2 Phương pháp nuôi cấy tế bào in vitro 31 2.1.4.3 Phép thử sinh học xác định hoạt tính gây độc tế bào (cytotoxic assay) 31 2.2 Xử lí mẫu thực vật chiết tách 32 2.3 Hằng số vật lý kiện phổ hợp chất phân lập 40 2.4 Hoạt tính sinh học hợp chất phân lập 46 2.4.1 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào dòng tế bào ung thư KB 47 2.4.2 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào dòng tế bào ung thư LU-1 47 2.4.3 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào dòng tế bào ung thư LNCaP 48 2.4.4 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào dòng tế bào ung thư HL-60 48 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 50 3.1 Đánh giá tác dụng gây độc tế bào cặn chiết từ Khổ sâm mềm 50 3.2 Cấu trúc hợp chất phân lập 50 3.2.1 Cấu trúc hợp chất phân lập từ Khổ sâm mềm 50 3.2.2 Cấu trúc hợp chất phân lập từ thân rễ Khổ sâm mềm 74 3.2.3 Xác định tên khoa học Brucea mollis 108 3.2.4 Cấu trúc hợp chất phân lập từ rễ Cơm rượu trái hẹp 109 KẾT LUẬN 137 DANH MỤC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ TRONG KHUÔN KHỔ LUẬN ÁN TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC DM-1 DANH MỤC CÁC HÌNH TRONG LUẬN ÁN Trang Hình 1.1 Các khung lớp chất quassinoit Hình 1.2 Quassin 117 neoquassin 118 hai quassinoit 15 phân lập từ Quassia amara 16 Hình 1.3 Con đường sinh tổng hợp quassinoit 17 Hình 1.4 Bán tổng hợp bruceantin từ bruceoside A 18 Hình 1.5 Tổng hợp toàn phần bruceantin 19 Hình 1.6 Cây Khổ sâm mềm (Brucea mollis Wall ex Kurz) 21 Hình 1.7 Cây Cơm rượu trái hẹp (Glycosmis stenocarpa (Drake) Guillaum) 27 Hình 2.1 Sơ đồ phân đoạn cặn chiết từ Khổ sâm mềm 33 Hình 2.2 Sơ đồ phân lập chất từ Khổ sâm mềm 36 Hình 2.3 Sơ đồ phân lập chất từ thân rễ Khổ sâm mềm 38 Hình 2.4 Sơ đồ phân lập chất từ rễ Cơm rượu trái hẹp 39 Hình 2.5 Tác dụng ức chế tế bào ung thư KB hợp chất BM.19 nồng độ 20; 4; 0,8 mg/ml…………………………………… Hình 2.6 Tác dụng ức chế tế bào ung thư LNCaP hợp chất BM.17 nồng độ 20; 4; 0,8 mg/ml………………………………… Hình 2.7 47 48 Tác dụng ức chế tế bào ung thư HL-60 hợp chất BM.19 nồng độ 20; 4; 0,8 mg/ml………………………………… 49 Hình 3.1 Cấu trúc hóa học hợp chất BM.01 51 Hình 3.2 Cấu trúc hóa học hợp chất BM.02 52 Hình 3.3 Cấu trúc hóa học hợp chất BM.03 52 Hình 3.4 Cấu trúc hóa học hợp chất BM.04 52 Hình 3.5 Phổ 1H-NMR hợp chất BM.04 54 Hình 3.6 Phổ DEPT hợp chất BM.04 54 Hình 3.7 Cấu trúc hóa học hợp chất BM.05 56 DM-1 Hình 3.8 Phổ 1H-NMR hợp chất BM.05 56 Hình 3.9 Phổ DEPT hợp chất BM.05 57 Hình 3.10 Cấu trúc hóa học hợp chất BM.06 57 Hình 3.11 Cấu trúc hóa học hợp chất BM.07 58 Hình 3.12 Các tương tác HMBC NOESY hợp chất BM.08 60 Hình 3.13 Phổ 1H-NMR hợp chất BM.08 60 Hình 3.14 Phổ DEPT hợp chất BM.08 61 Hình 3.15 Phổ HSQC hợp chất BM.08 61 Hình 3.16 Phổ HMBC hợp chất BM.08 61 Hình 3.17 Phổ COSY hợp chất BM.08 62 Hình 3.18 Phổ NOESY hợp chất BM.08 62 Hình 3.19 Cấu trúc hóa học hợp chất BM.09 63 Hình 3.20 Phổ H-NMR hợp chất BM.09 63 Hình 3.21 Phổ DEPT hợp chất BM.09 63 Hình 3.22 Các tương tác phổ HMBC, COSY NOESY hợp chất BM.10 66 Hình 3.23 Phổ H-NMR hợp chất BM.10 66 Hình 3.24 Phổ DEPT hợp chất BM.10 67 Hình 3.25 Phổ HSQC hợp chất BM.10 67 Hình 3.26 Phổ HMBC hợp chất BM.10 67 Hình 3.27 Phổ COSY hợp chất BM.10 68 Hình 3.28 Phổ NOESY hợp chất BM.10 68 Hình 3.29 Phổ khối phân giải cao HR-ESI-MS hợp chất BM.10 68 Hình 3.30 Các tương tác HMBC hợp chất BM.11 69 Hình 3.31 Phổ 1H-NMR hợp chất BM.11 69 Hình 3.32 Phổ DEPT hợp chất BM.11 70 Hình 3.33 Các tương tác HMBC hợp chất BM.12 70 Hình 3.34 Phổ H-NMR hợp chất BM.12 71 Hình 3.35 Phổ 13C-NMR hợp chất BM.12 71 DM-1 Hình 3.36 Cấu trúc hóa học hợp chất BM.13 75 Hình 3.37 Cấu trúc hóa học hợp chất BM.14 75 Hình 3.38 Phổ 1H-NMR hợp chất BM.14 76 Hình 3.39 Phổ 13C-NMR hợp chất BM.14 76 Hình 3.40 Các tương tác phổ HMBC, COSY NOESY hợp chất BM.15 77 Hình 3.41 Phổ 1H-NMR hợp chất BM.15 80 Hình 3.42 Phổ DEPT hợp chất BM.15 80 Hình 3.43 Phổ HSQC hợp chất BM.15 80 Hình 3.44 Phổ HMBC hợp chất BM.15 81 Hình 3.45 Phổ COSY hợp chất BM.15 81 Hình 3.46 Phổ NOESY hợp chất BM.15 81 Hình 3.47 Các tương tác NOESY hợp chất BM.16 82 Hình 3.48 Phổ 1H-NMR hợp chất BM.16 83 Hình 3.49 Phổ DEPT hợp chất BM.16 84 Hình 3.50 Phổ HSQC hợp chất BM.16 84 Hình 3.51 Phổ HMBC hợp chất BM.16 84 Hình 3.52 Phổ COSY hợp chất BM.16 85 Hình 3.53 Phổ NOESY hợp chất BM.16 85 Hình 3.54 Các tương tác HMBC COSY hợp chất BM.17 86 Hình 3.55 Phổ 1H-NMR hợp chất BM.17 87 Hình 3.56 Phổ DEPT hợp chất BM.17 88 Hình 3.57 Phổ HSQC hợp chất BM.17 88 Hình 3.58 Phổ HMBC hợp chất BM.17 88 Hình 3.59 Phổ COSY hợp chất BM.17 89 Hình 3.60 Phổ NOESY hợp chất BM.17 89 Hình 3.61 Cấu trúc hóa học hợp chất BM.18 90 Hình 3.62 Phổ H-NMR hợp chất BM.18 91 Hình 3.63 Phổ DEPT hợp chất BM.18 91 DM-1 Hình 3.64 Các tương tác HMBC hợp chất BM.19 92 Hình 3.65 Phổ H-NMR hợp chất BM.19 94 Hình 3.66 Phổ DEPT hợp chất BM.19 94 Hình 3.67 Phổ HMBC hợp chất BM.19 94 Hình 3.68 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC hợp chất BM.20 95 Hình 3.69 Phổ 1H-NMR hợp chất BM.20 96 Hình 3.70 Phổ 13C-NMR hợp chất BM.20 96 Hình 3.71 Cấu trúc hóa học hợp chất BM.21 97 Hình 3.72 Phổ H-NMR hợp chất BM.21 98 Hình 3.73 Phổ DEPT hợp chất BM.21 98 Hình 3.74 Các tương tác HMBC, COSY, NOESY hợp chất BM.22 99 Hình 3.75 Phổ 1H-NMR hợp chất BM.22 101 Hình 3.76 Phổ DEPT hợp chất BM.22 101 Hình 3.77 Phổ HSQC hợp chất BM.22 102 Hình 3.78 Phổ HMBC hợp chất BM.22 102 Hình 3.79 Phổ COSY hợp chất BM.22 102 Hình 3.80 Phổ NOESY hợp chất BM.22 103 Hình 3.81 Phổ ESI-MS hợp chất BM.22 103 Hình 3.82 Cấu trúc hóa học hợp chất BM.23 104 Hình 3.83 Phổ 1H-NMR hợp chất BM.23 104 Hình 3.84 Phổ DEPT hợp chất BM.23 105 Hình 3.85 Phổ HSQC hợp chất BM.23 105 Hình 3.86 Phổ HMBC hợp chất BM.23 105 Hình 3.87 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC hợp chất GP.24 112 Hình 3.88 Phổ IR hợp chất GP.24 112 Hình 3.89 Phổ 1H-NMR hợp chất GP.24 112 Hình 3.90 Phổ DEPT hợp chất GP.24 113 Hình 3.91 Cấu trúc hóa học hợp chất GP.25 114 Hình 3.92 Phổ 1H-NMR hợp chất GP.25 115 DM-1 Hình 3.93 Phổ DEPT hợp chất GP.25 115 Hình 3.94 Phổ HSQC hợp chất GP.25 115 Hình 3.95 Phổ HMBC hợp chất GP.25 116 Hình 3.96 Phổ COSY hợp chất GP.25 116 Hình 3.97 Cấu trúc hóa học hợp chất GP.26 117 Hình 3.98 Phổ 1H-NMR hợp chất GP.26 118 Hình 3.99 Phổ DEPT hợp chất GP.26 119 Hình 3.100 Phổ HSQC hợp chất GP.26 119 Hình 3.101 Phổ HMBC hợp chất GP.26 120 Hình 3.102 Phổ COSY hợp chất GP.26 120 Hình 3.103 Phổ HR-ESI-MS hợp chất GP.26 121 Hình 3.104 Sơ đồ phân mảnh hợp chất GP.27 phổ ESI-MS 123 Hình 3.105 Các tương tác HMBC, COSY NOESY hợp chất GP.27 123 Hình 3.106 Phổ 1H-NMR hợp chất GP.27 124 Hình 3.107 Phổ DEPT hợp chất GP.27 124 Hình 3.108 Phổ HSQC hợp chất GP.27 124 Hình 3.109 Phổ HMBC hợp chất GP.27 125 Hình 3.110 Phổ COSY hợp chất GP.27 125 Hình 3.111 Phổ NOESY hợp chất GP.27 126 Hình 3.112 Phổ ESI-MS hợp chất GP.27 126 DM-2 DANH MỤC CÁC BẢNG TRONG LUẬN ÁN Trang Bảng 2.1 Kết thử hoạt tính hợp chất phân lập từ Khổ sâm mềm bốn dòng ung thư Bảng 2.2 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào ung thư KB hợp chất BM.06, BM.07, BM.10, BM.15, BM.17, BM.19, BM.22 Bảng 2.3 48 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào ung thư HL-60 hợp chất BM.06, BM.07, BM.10, BM.15, BM.17, BM.19, BM.22… Bảng 3.1 47 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào ung thư LNCaP hợp chất BM.06, BM.07, BM.10, BM.15, BM.17, BM.19, BM.22 Bảng 2.5 47 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào ung thư LU-1 hợp chất BM.06, BM.07, BM.10, BM.15, BM.17, BM.19, BM.22 Bảng 2.4 46 48 Kết thử độc tính tế bào cặn chiết từ Khổ sâm mềm (Brucea mollis Wall.ex Kurz) 50 Bảng 3.2 Số liệu phổ NMR hợp chất BM.04 53 Bảng 3.3 Số liệu phổ 13C-NMR hợp chất BM.05 chất tham khảo 55 Bảng 3.4 Số liệu phổ NMR hợp chất BM.06, BM.07 chất tham khảo 58 Bảng 3.5 Số liệu phổ NMR hợp chất BM.10 64 Bảng 3.6 Số liệu phổ NMR hợp chất BM.10 chất tham khảo 65 Bảng 3.7 Tổng hợp hợp chất phân lập từ Khổ sâm mềm 72 Bảng 3.8 Số liệu phổ H-NMR hợp chất BM.13 chất tham khảo 74 Bảng 3.9 Số liệu phổ NMR hợp chất BM.15 78 Bảng 3.10 Số liệu phổ NMR hợp chất BM.15 chất tham khảo 79 Bảng 3.11 Số liệu phổ NMR hợp chất BM.16 chất tham khảo 83 Bảng 3.12 Số liệu phổ NMR hợp chất BM.17 chất tham khảo 86 Bảng 3.13 Số liệu phổ NMR hợp chất BM.18 chất tham khảo 90 DM-2 Bảng 3.14 Số liệu phổ NMR hợp chất BM.19 chất tham khảo 93 Bảng 3.15 Số liệu phổ NMR hợp chất BM.20 95 Bảng 3.16 Số liệu phổ NMR hợp chất BM.21 chất tham khảo 97 Bảng 3.17 Số liệu phổ NMR hợp chất BM.22 100 Bảng 3.18 Tổng hợp hợp chất phân lập từ thân rễ Khổ sâm mềm 106 Bảng 3.19 Số liệu phổ NMR hợp chất GP.24 111 Bảng 3.20 Số liệu phổ NMR hợp chất GP.25 113 Bảng 3.21 Số liệu phổ NMR hợp chất GP.25 chất tham khảo 114 Bảng 3.22 Số liệu phổ NMR hợp chất GP.26 chất tham khảo 118 Bảng 3.23 Số liệu phổ NMR hợp chất GP.26 118 Bảng 3.24 Số liệu phổ NMR hợp chất GP.27 122 Bảng 3.25 Cấu trúc hợp chất phân lập từ rễ Cơm rượu trái hẹp 127 Bảng 3.26 Bảng tổng kết hợp chất phân lập từ Khổ sâm mềm (Brucea mollis Wall ex Kurz) Cơm rượu trái hẹp (Glycosmis stenocarpa (Drake) Guillaum) 129 DM-3 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT H-NMR 13 C- NMR DEPT Proton Nuclear Magnetic Phổ cộng hưởng từ hạt nhân Resonance Spectroscopy proton Carbon -13 Nuclear Magnetic Phổ cộng hưởng từ hạt nhân Resonance Spectroscopy cacbon 13 Distortionless Enhancement by Phổ DEPT Polarisation Transfer HMBC Heteronuclear Multiple Bond Phổ HMBC Correlation HSQC Heteronuclear Single Quantum Phổ HSQC Coherence NOESY Nuclear Overhauser Effect Phổ NOESY Spectroscopy H-1H-COSY H -1H - Correlation Phổ tương tác proton Spectroscopy ESI-MS HR-ESI-MS Electron Spray Ionization-Mass Phổ khối ion hóa phun mù Spectroscopy điện tử High Resolution Electron Phổ khối phân giải cao ion hóa Spray Ionization Mass phun mù điện tử Spectroscopy IR Infrared Spectroscopy Phổ hồng ngoại s Singlet d Doublet t Triplet q Quartet dd doublet doublet dt doublet triplet DM-3 b Broad m Multiplet J (Hz) Hằng số tương tác tính Hz δ (ppm) (ppm = part per million) Độ dịch chuyển hóa học tính ppm (phần triệu) CC Column Chromatography Sắc ký cột thường TLC Thin Layer Chromatography Sắc ký mỏng HS (%) Hiệu suất so với mẫu khô CTCT Công thức cấu tạo CTPT Công thức phân tử KB Human epidermoid carcinoma Ung thư biểu mô Hep-G2 Human hepatocellular Ung thư gan người carcinoma MCF-7 Adenocarcinoma Ung thư vú LU-1 Human lung carcinoma Ung thư phổi người LNCaP Human prostate Ung thư tiền liệt tuyến adenocarcinoma HL-60 Human promyelocytic Ung thư máu cấp tính leukemia IC50 Inhibitory concentration 50% Nồng độ ức chế tối thiểu 50% Mp Melting point Điểm chảy MeOH Metanol DMSO Dimethylsulfoxide Py Pyridin EtOAc Etyl axetat TMS Tetrametyl Silan BuOH Butanol MỞ ĐẦU Cho đến ngày dân số giới đạt bảy tỷ người, số lớn nhu cầu khám chữa bệnh tăng theo Trong tình trạng sử dụng thuốc bừa bãi không theo hướng dẫn bác sĩ dẫn đến kháng thuốc, đặc biệt nước phát triển vô tình tạo áp lực lớn ngành y tế giới phải cố gắng tìm loại thuốc Thiên nhiên kho thuốc khổng lồ, mà giới chưa khám phá hết Việt Nam có khí hậu nhiệt đới gió mùa, nóng ẩm, có hệ động thực vật đa dạng phong phú Đây tiềm to lớn mà cần phải tận dụng Hiện nay, tình trạng đốt phá rừng ngày gia tăng kiểm soát, đồng thời khí hậu thay đổi theo chiều hướng khắc nghiệt hơn, làm cho số lượng lớn loài suy thóai dần Nếu không nhanh chóng nghiên cứu bảo vệ nguồn gien mát to lớn loài người Ngày nay, hầu hết thuốc gia truyền sử dụng theo kinh nghiệm, phần lớn chưa chứng minh theo y học đại Thông thường người ta sử dụng dạng sắc lấy nước uống dạng cao, viên Đó hỗn hợp bao gồm nhiều thành phần khác nhau, có thành phần có khả làm tăng giảm hoạt tính độc tính thuốc Vì vậy, cần phải nghiên cứu xác định xác tác dụng thành phần hợp phần, từ tạo sở cho sử dụng tốt thuốc thuốc dân tộc Trong y học dân gian Khổ sâm mềm (Brucea mollis Wall ex Kurz) sử dụng để trị sốt rét, đau bụng, u nhọt, amíp, ghẻ lở [1] Trong chương trình hợp tác Việt Nam Hàn Quốc, nhằm phát loài thực vật có kháng ung thư, tác giả phát dịch chiết MeOH từ Khổ sâm mềm (Brucea mollis) có hoạt tính mạnh, ức chế tới 96% tế bào ung thư phổi người A549 [2] Cây Cơm rượu trái hẹp (Glycosmis stenocarpa (Drake) Guillaum) thu hái Việt Nam nghiên cứu từ năm 2004 Từ Cơm rượu trái hẹp phân lập số ancaloit murrayanin, murrayafoline A Trong đó, murrayafoline A có hoạt tính ức chế mạnh phát triển tế bào ung thư đại tràng thông qua đường Wnt/b-catenin [3] Nhằm mục đích sâu nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng dược lý hai này, lựa chọn đề tài: " Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học hai loài Khổ sâm mềm (Brucea mollis Wall ex Kurz) Cơm rượu trái hẹp (Glycosmis stenocarpa (Drake) Guillaum) Việt Nam'' với nội dung nghiên cứu sau: Nghiên cứu thành phần hóa học hai loài Đánh giá hoạt tính kháng ung thư số hợp chất phân lập CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu chi Brucea (Sầu đâu) 1.1.1 Sơ lược chi Brucea Chi Brucea (Sầu đâu) chi thuộc họ Simaroubaceae (Thanh Thất) với sáu loài (Brucea javanica, Brucea mollis var tonkinensis, Brucea guineensis, Brucea sumatrana, Brucea antidysenterica Brucea amarissima) phân bố vùng nhiệt đới phía đông bán cầu [4], [5] Ở Việt Nam, theo Phạm Hoàng Hộ, chi Brucea có ba loài gồm Brucea javanica, Brucea mollis Brucea mollis var tonkinensis [5].Trong đó, có hai loài sử dụng dân gian để làm thuốc Sầu đâu cứt chuột (Brucea javanica) Khổ sâm mềm (Brucea mollis) trị sốt rét, đau bụng, u nhọt Hai loài thường gặp vùng Lào Cai, Kom Tum, Lâm Đồng [1] Ở Trung Quốc, hai loài Brucea mollis Brucea javanica sử dụng thuốc thảo dược truyền thống hoạt tính chống ung thư chống sốt rét chúng [6] Gần đây, thuộc chi Brucea thu hút nhiều quan tâm nghiên cứu thành phần hóa học, phổ hoạt tính sinh học đa dạng chúng Các nghiên cứu hóa học chi Brucea phát nhiều hợp chất thuộc lớp chất quassinoit, ancaloit, tritecpenoit flavonoit 1.1.2 Thành phần hóa học chi Brucea 1.1.2.1 Tình hình nghiên cứu nước Ở nước, có ba công bố nghiên cứu hai loài chi Brucea B javanica B sumatrana Năm 1979, tác giả Ngô Văn Thu nghiên cứu hoạt tính chống sốt rét dịch chiết từ B sumatrana [7] Năm 1995, GS Trần Văn Sung cộng phân lập glycoside từ B javanica [8] Gần đây, 2009, GS Douglas Kinghorn, Đại học Ohio, Mỹ, phân lập năm tritecpenoit, hai quassinoit flavonolignan từ B javanica thu hái Việt Nam đánh giá hoạt tính gây độc tế bào chúng [9] 1.1.2.2 Tình hình nghiên cứu giới Cho đến nay, có năm loài sáu loài chi Brucea nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học giới gồm: B javanica, B mollis var tonkinensis, B sumatrana, B antidysenterica B amarissima Kể từ năm 1900, có 100 hợp chất hóa học tách từ chi Brucea, bao gồm lớp chất: quassinoit, ancaloit, tritecpenoit, flavonoit axít béo [674] Trong lớp chất quassinoit lớp chất chính, chiếm 50% hợp chất tách từ chi Cấu trúc hợp chất phần sau; tên hợp chất nguồn gốc tương ứng liệt kê Bảng 1.1 (trang 9) 1.1.2.2.1 Lớp chất quassinoit Các quassinoit lớp chất chi Brucea phát loài thuộc họ Simaroubaceae Cho đến nay, có khoảng 75 quassinoit (1-75), phân lập từ chi Brucea [10-45] tập trung nhiều loài B javanica Các quassinoit chủ yếu tách từ hạt cây, số quassinoit có hoạt tính sinh học lý thú Từ loài B javanica phân lập quassinoit: bruceantinol A 12, bruceene 16, bruceine H-J (24-26), bruceoside A-G (27-33), dehydrobruceine A 37 B 38, javanicolide A-D (41-44), javanicoside A-H (45-52), yadanzigan 57, yadanziolide B 58, C 59, S 60, yadanzioside A-O (61-75) Trong số chúng hợp chất yadanzigan 57 yadanzioside B 62, C 63, E 65, I 69 K 71, phát loài B amarissima, hợp chất yadanzioside M 73 tìm thấy loài B antidysenterica Các quassinoit bruceine A-G (17-23) javanicoside I-L (53-56) phân lập từ loài B amarissima Trong số chúng hợp chất bruceine A-G (17-23) tìm thấy loài B javanica Đặc biêt hợp chất brusatol 34 phát hai loài B sumatrana B javanica Một số quassinoit khung C-20 như: bruceantarin 9, bruceantin 10, bruceantinol 11, bruceantinoside A 13 B 14 tách từ loài B javanica Các quassinoit lại phân lập từ loài B antidysenterica 1.1.2.2.2 Lớp chất ancaloit Cho đến có 25 ancaloit (76-100) phân lập từ chi Brucea [6], [46-53], [...]... cây này, chúng tôi đã lựa chọn đề tài: " Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của hai loài Khổ sâm mềm (Brucea mollis Wall ex Kurz) và Cơm rượu trái hẹp (Glycosmis stenocarpa (Drake) Guillaum) ở Việt Nam' ' với nội dung nghiên cứu như sau: 1 Nghiên cứu thành phần hóa học của hai loài trên 2 Đánh giá hoạt tính kháng ung thư của một số hợp chất phân lập được 3 CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN 1.1 Giới... thành phần hóa học, bởi vì phổ hoạt tính sinh học đa dạng của chúng Các nghiên cứu hóa học về chi Brucea đã phát hiện ra nhiều hợp chất thuộc các lớp chất chính là quassinoit, ancaloit, tritecpenoit và flavonoit 1.1.2 Thành phần hóa học của chi Brucea 1.1.2.1 Tình hình nghiên cứu trong nước Ở trong nước, cho đến nay chỉ có ba công bố các nghiên cứu về hai loài trong chi Brucea là B javanica và B sumatrana... chuột (Brucea javanica) và Khổ sâm mềm (Brucea mollis) trị sốt rét, đau bụng, u nhọt Hai loài trên thường gặp ở vùng Lào Cai, Kom Tum, Lâm Đồng [1] Ở Trung Quốc, hai loài Brucea mollis và Brucea javanica cũng được sử dụng như là thuốc thảo dược truyền thống bởi vì hoạt tính chống ung thư và chống sốt rét của chúng [6] Gần đây, các cây thuộc chi Brucea đã thu hút nhiều sự quan tâm nghiên cứu về thành phần. .. (Brucea mollis Wall ex Kurz) được sử dụng để trị sốt rét, đau bụng, u nhọt, amíp, ghẻ lở [1] Trong chương trình hợp tác giữa Việt Nam và Hàn Quốc, nhằm phát hiện các loài thực vật có kháng ung thư, các tác giả đã phát hiện ra dịch chiết MeOH từ lá cây Khổ sâm mềm (Brucea mollis) có hoạt tính rất mạnh, ức chế tới 96% tế bào ung thư phổi người A549 [2] Cây Cơm rượu trái hẹp (Glycosmis stenocarpa (Drake) Guillaum). .. dụng ở dạng sắc lấy nước uống hoặc ở dạng cao, viên Đó là một hỗn hợp bao gồm nhiều thành phần khác nhau, có những thành phần có khả năng làm tăng hoặc giảm hoạt tính hoặc độc tính của thuốc Vì vậy, chúng ta cần phải nghiên cứu xác định chính xác tác dụng của từng thành phần hoặc các hợp phần, từ đó tạo cơ sở cho sử dụng tốt hơn cây thuốc và bài thuốc dân tộc Trong y học dân gian cây Khổ sâm mềm (Brucea. .. chất tham khảo 118 Bảng 3.23 Số liệu phổ NMR của hợp chất GP.26 118 Bảng 3.24 Số liệu phổ NMR của hợp chất GP.27 122 Bảng 3.25 Cấu trúc các hợp chất phân lập từ rễ cây Cơm rượu trái hẹp 127 Bảng 3.26 Bảng tổng kết các hợp chất được phân lập từ cây Khổ sâm mềm (Brucea mollis Wall ex Kurz) và cây Cơm rượu trái hẹp (Glycosmis stenocarpa (Drake) Guillaum) 129 DM-3 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC... Việt Nam đã được nghiên cứu từ năm 2004 Từ cây Cơm rượu trái hẹp đã phân lập được một số ancaloit như murrayanin, murrayafoline A Trong đó, murrayafoline A 2 có hoạt tính ức chế mạnh sự phát triển tế bào ung thư đại tràng thông qua con đường Wnt/b-catenin [3] Nhằm mục đích đi sâu nghiên cứu về thành phần hóa học và tác dụng dược lý của hai cây này, chúng tôi đã lựa chọn đề tài: " Nghiên cứu thành phần. .. hình nghiên cứu trên thế giới 4 Cho đến nay, đã có năm loài trong sáu loài chính của chi Brucea được nghiên cứu về thành phần hóa học và hoạt tính sinh học trên thế giới gồm: B javanica, B mollis var tonkinensis, B sumatrana, B antidysenterica và B amarissima Kể từ năm 1900, đã có hơn 100 hợp chất hóa học được tách ra từ chi Brucea, bao gồm các lớp chất: quassinoit, ancaloit, tritecpenoit, flavonoit và. .. Văn Thu nghiên cứu về hoạt tính chống sốt rét của các dịch chiết từ cây B sumatrana [7] Năm 1995, GS Trần Văn Sung và cộng sự đã phân lập được một glycoside mới từ lá cây B javanica [8] Gần đây, 2009, GS Douglas Kinghorn, Đại học Ohio, Mỹ, đã phân lập được năm tritecpenoit, hai quassinoit và một flavonolignan từ lá cây B javanica thu hái tại Việt Nam và đã đánh giá hoạt tính gây độc tế bào của chúng... LNCaP của các hợp chất BM.06, BM.07, BM.10, BM.15, BM.17, BM.19, BM.22 Bảng 2.5 47 Kết quả thử hoạt tính gây độc tế bào ung thư LU-1 của các hợp chất BM.06, BM.07, BM.10, BM.15, BM.17, BM.19, BM.22 Bảng 2.4 46 48 Kết quả thử độc tính tế bào các cặn chiết từ lá cây Khổ sâm mềm (Brucea mollis Wall. ex Kurz) 50 Bảng 3.2 Số liệu phổ NMR của hợp chất BM.04 53 Bảng 3.3 Số liệu phổ 13C-NMR của hợp