VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC - KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Đề tài: Phân lập nấm mốc chịu nhiệt, chịu pH thấp Người hướng dẫn: PGS Vũ Nguyên Thành Sinh viên: Lê Thu Thảo Niên khóa: K19 – Lớp 1203 - CNSH Hà Nội - 2016 Style Definition: TOC 1: Space Before: pt, Line spacing: 1.5 lines, Tab stops: 6.1", Right,Leader: … + Not at 6.33" Style Definition: TOC 3: Font: (Default) Times New Roman, 14 pt, Bold, French (France), Do not check spelling or grammar, Justified, Indent: Left: 0", Line spacing: 1.5 lines, Tab stops: 6.1", Right,Leader: … Style Definition: TOC 2: Font: (Default) Times New Roman, 14 pt, Vietnamese (Vietnam), Do not check spelling or grammar, Justified, Space Before: pt, Line spacing: 1.5 lines, Tab stops: 6.1", Right,Leader: … Viện Đại học Mở Hà Nội Khoa Công Nghệ Sinh Học Viện Đại học Mở Hà NộiKhoa Công Nghệ Sinh Học LỜI CẢM ƠN Tôi xin trân trọng cảm ơn PGS.TS Vũ Nguyên Thành dành thời gian công sức tận tình hướng dẫn định hướng cho suốt trình nghiên cứu giúp hoàn thành luận văn Tôi xin trân trọng cảm ơncác anh, chị bạn Trung tâm Vi sinh vật Công nghiệp, Viện Công nghiệp Thực phẩm tạo điều kiện, giúp đỡ bảo suốt thời gian làm thí nghiệm Trung tâm Tôi xin trân trọng cảm ơn thầy, cô khoa Công Nghệ Sinh Học dạy bảo tôi, cho kiến thức kinh nghiệm bổ ích suốt trình học tập Cuối cùng, xin dành lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình, người thân bạn bè bên tôi, cho nguồn động lực, chia sẻ giúp hoàn thành tốt trình học tập nghiên cứu Formatted: Border: Top: (Thin-thick small gap, Auto, pt Line width) Lê Thu Thảo-K19-1203 Viện Đại học Mở Hà Nội Khoa Công Nghệ Sinh Học Viện Đại học Mở Hà NộiKhoa Công Nghệ Sinh Học Formatted: TOC MỤC LỤC MỞ ĐẦU Formatted: Font: Bold, Font color: Black, Do not check spelling or grammar PHẦN TỔNG QUAN Formatted: Justified 1.1LIGNOCELLULOSE Formatted: Tab stops: Not at 0.46" 1.1.1.Cellulose Formatted: Justified 1.1.2.Hemicellulose 1.2 ENZYME THỦY PHÂN LIGNOCELLULOSE 1.2.1 ENZYME THủY PHÂN CELLULOSE 1.2.2 ENZYME THỦY PHÂNHEMICELLULOSE…………………………….…………………… ……11 1.3 VI SINH VẬT THỦY PHÂN LIGNOCELLULOSES 13 Formatted: Normal Formatted: Justified 1.4 ỨNG DỤNG CỦA ENZYME THỦY PHÂN LIGNOCELLULOSE TRONG SẢN XUẤT THỨC ĂN CHĂN NUÔI 15 1.5 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG NƯỚC VỀ ỨNG DỤNG XYLANASE CHO CHĂN NUÔI 17 PHẦN 2.VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 ĐỐI TƯỢNG 19 2.2 HÓA CHẤT, TRANG THIẾT BỊ MÁY MÓC 19 2.2.1.Hoá chất thiết bị 19 2.2.2 Máy móc thiết bị 22 2.2.3.Môi trường phân lập, nuôi cấy chiết enzyme 22 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.3.1.Phương pháp phân lập mẫu môi trường Czapek pH 2.0 giấy Formatted: Tab stops: Not at 0.76" lọc 23 2.3.2.Phương pháp nuôi cấy chiết enzyme 23 2.3.3.Xác định hoạt tính enzyme 24 2.3.3.1 Phương pháp đục lỗ thạch………………………………………………24 Lê Thu Thảo-K19-1203 Formatted: Border: Top: (Thin-thick small gap, Auto, pt Line width) Viện Đại học Mở Hà Nội Khoa Công Nghệ Sinh Học Viện Đại học Mở Hà NộiKhoa Công Nghệ Sinh Học 2.3.3.2 Phương pháp xác định hoạt tính enzyme theo phương pháp DNS……………………………………………………… …………………24 Formatted: Normal 2.3.3.3 Xác định khả bền nhiệt enzyme chất CMC Xylan 25 2.3.5.Phương pháp điện di protein SDS-PAGE Formatted: Tab stops: Not at 0.76" 26 2.3.6 Phương pháp điện di Zymogram 27 2.3.7 Tách chiết DNA tổng số 28 2.3.8 PCR fingerprinting 29 2.3.9 Định tên chủng nấm mốc dựa vào phương pháp đọc trình tự rDNA 30 PHẦN KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 31 Formatted: Justified 3.1 KẾT QUẢ PHÂN LẬP 31 3.2 QUAN SÁT HÌNH THÁI KHUẨN LẠC, HÌNH THÁI TẾ BÀO 33 3.3 PHÂN TÍCH ENZYME BẰNG PHƯƠNG PHÁP DNS 34 3.5.1 Điện di SDS-PAGE 4140 3.5.2 Đánh giá hàm lượng protein 4241 3.5.3 Điện di Zymogram 4342 3.6 PHÂN NHÓM ĐỊNH TÊN BẰNG KĨ THUẬT FINGER-PRINTING 4443 3.7 ĐỊNH TÊN CÁC CHỦNG NẤM MỐC DỰA VÀO PHƯƠNG PHÁP ĐỌC TRÌNH TỰ RDNA 4645 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4947 Formatted: Justified KẾT LUẬN 4947 TÀI LIỆU THAM KHẢO 5048 MỞ ĐẦU Formatted: Centered PHẦN TỔNG QUAN 1.1 LIGNOCELLULOSE Lê Thu Thảo-K19-1203 Formatted: Border: Top: (Thin-thick small gap, Auto, pt Line width) Viện Đại học Mở Hà Nội Khoa Công Nghệ Sinh Học Viện Đại học Mở Hà NộiKhoa Công Nghệ Sinh Học 1.1.1 CELLULOSE 1.1.2 HEMICELLULOSE 1.2 ENZYMETHỦYPHÂN LIGNOCELLULOSE 1.1.3 ENZYME THủY PHÂN CELLULOSE 1.1.4 ENZYME THủY PHÂN HEMICELLULOSES 11 1.2 VI SINH VẬT THỦY PHÂN LIGNOCELLULOSES 13 1.3 ỨNG DỤNG CỦA ENZYME THỦY PHÂN LIGNOCELLULOSE TRONG SẢN XUẤT THỨC ĂN CHĂN NUÔI 15 1.4 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG NƯỚC Về ỨNG DỤNG XYLANASE CHO CHĂN NUÔI 17 PHẦN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 ĐỐI TƯỢNG 19 2.2 HÓA CHẤT, TRANG THIẾT BỊ MÁY MÓC 19 2.2.1.Hoá chất thiết bị 19 2.2.2 Máy móc thiết bị 22 2.2.3 Môi trường phân lập, nuôi cấy chiết enzyme 22 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.3.1 Phương pháp phân lập mẫu môi trường Czapek pH 2.0 giấy lọc 23 2.3.2 Phương pháp nuôi cấy chiết enzyme 23 2.3.3 Xác định hoạt tính enzyme 24 2.3.3.3 Xác định khả bền nhiệt enzyme chất CMC Xylan 25 2.3.5 Phương pháp điện di protein SDS-PAGE 26 2.3.6 Phương pháp điện di Zymogram 27 2.3.7 Tách chiết DNA tổng số 28 Formatted: Border: Top: (Thin-thick small gap, Auto, pt Line width) Lê Thu Thảo-K19-1203 Viện Đại học Mở Hà Nội Khoa Công Nghệ Sinh Học Viện Đại học Mở Hà NộiKhoa Công Nghệ Sinh Học 2.3.8 PCR fingerprinting 29 2.3.9 Định tên chủng nấm mốc dựa vào phương pháp đọc trình tự rDNA 30 PHẦN KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 31 3.1 KẾT QUẢ PHÂN LẬP 31 3.2 QUAN SÁT HÌNH THÁI KHUẨN LẠC, HÌNH THÁI TẾ BÀO 33 3.3 PHÂN TÍCH ENZYME BẰNG PHƯƠNG PHÁP DNS 34 3.5.1 Điện di SDS-PAGE 41 3.5.2 Đánh giá hàm lượng protein 42 3.5.3 Điện di Zymogram 43 3.6 PHÂN NHÓM ĐỊNH TÊN BẰNG KĨ THUẬT FINGER-PRINTING 44 3.7 ĐỊNH TÊN CÁC CHỦNG NẤM MỐC DỰA VÀO PHƯƠNG PHÁP ĐỌC TRÌNH TỰ RDNA 46 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 49 KẾT LUẬN 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO 50 Formatted: Border: Top: (Thin-thick small gap, Auto, pt Line width) Lê Thu Thảo-K19-1203 Viện Đại học Mở Hà Nội Khoa Công Nghệ Sinh Học Viện Đại học Mở Hà NộiKhoa Công Nghệ Sinh Học DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Thành phần lignocellulose rác thải phế phụ liệunông nghiệp phổ biến [5] 445 Bảng 1.3: Một số enzym hemicellulase phân loại chúng vào họ GH CE 111112 Bảng 3.1:Danh sách chủng nấm mốc chịu nhiệt pH phân lập 313134 Bảng II-2: Tổng hợp hoạt tính enzyme CMCaseở pH 3.0, pH 5.0 pH 7.0 21 chủng nấm mốc phân lập 605761 Bảng II-3: Tổng hợp hoạt tính enzyme Xylanaseở pH 3.0, pH 5.0 pH 7.0 21 chủng nấm mốc phân lập 615863 Bảng II-4: Khả bền nhiệt chủng nấm mốc chịu nhiệt phân lập 635964 Formatted: Border: Top: (Thin-thick small gap, Auto, pt Line width) Lê Thu Thảo-K19-1203 Viện Đại học Mở Hà Nội Khoa Công Nghệ Sinh Học Viện Đại học Mở Hà NộiKhoa Công Nghệ Sinh Học DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Cấu trúc thành tế bào thực vật 223 Hình 1.2: Cấu trúc phân tử cellulose (Christiane Laine 2005) 556 Hình 1.3: Mô hình Fringed fibrillar mô hình chuỗi gập 667 Hình 1.4: Cấu trúc arabino-4-O-methylglucuronoxylan gỗ mềm (Christiane Laine 2005) 889 Hình 1.5: Cấu trúc O-acetyl-4-O-methylglucurono-ß-D-xylan gỗ cứng (Christiane Laine 2005) 889 Hình 1.2: Hoạt động xúc tác cellulase chất cellulose 101012 Hình 3.1: Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng LPH 206 333337 Hình 3.2: Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng LPH 219 333337 Hình 3.3: Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng LPH 201 333337 Hình 3.4: Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng LPH 160 343437 Hình 3.5: Hoạt tính CMCase chủng nấm mốc chịu nhiệt 353539 Hình 3.6: Hoạt tính Xylanase chủng nấm mốc chịu nhiệt 373640 Hình 3.7: Khả bền nhiệt enzyme CMCase từ chủng phân lập 393841 Hình 3.8:Khả bền nhiệt enzyme Xylanase từ chủng phân lập 403942 Hình 3.9:Ảnh điện di SDS-PAGE 21 chủng nấm mốc chịu nhiệt 414044 Hình 3.10: Hàm lượng protein(µg/ml) 424145 Hình 3.11: Ảnh điện di Zymogram CMCase 434246 Hình 3.12: Ảnh diện di Zymogram xylanase 444347 Hình 3.13: Phổ fingerprinting chủng nấm mốc phân lập 464448 Hình 3.14: Cây phả hệ xây dựng dựa trình tự ITS chủng phân lập loài liên quan 484650 Formatted: Border: Top: (Thin-thick small gap, Auto, pt Line width) Lê Thu Thảo-K19-1203 Viện Đại học Mở Hà Nội Khoa Công Nghệ Sinh Học Viện Đại học Mở Hà NộiKhoa Công Nghệ Sinh Học Hình II.1: Đường kính vòng thủy phân 21 chủng nấm mốc vị trí giếng tương ứng với chủng từ LPH 195÷LPH 219, (-) đối chứng âm: nước cất, (+) đối chứng dương: Cellulase Novozyme 595661 Formatted: Left Formatted: Border: Top: (Thin-thick small gap, Auto, pt Line width) Lê Thu Thảo-K19-1203 Viện Đại học Mở Hà Nội Khoa Công Nghệ Sinh Học Viện Đại học Mở Hà NộiKhoa Công Nghệ Sinh Học DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT TRONG LUẬN VĂN APS BSA CBD CBM CMC DNA DNS DP dNTPs EDTA FPU GH ITS IU kDa MDa OD PCR PDA rDNA SDS-PAGE Ammonium persulfate Bovine Serum Albumin Cellulose binding domain Cellulose binding module Carboxylmethyl cellulose Deoxyribonucleic Acid 3,5 Dinitrosalicylic acid Degree of Polymerization Deoxyribonucleotide triphosphates Ethylene Diamine Tetra Acetic acid Filter Paper Unit Glycoside hydrolase Internal transcribed spacer International unit KiloDalton MegaDalton Opical Density Polymerase Chain Reaction Potato dextrose agar Ribosomal Deoxyribonucleic Acid Sodium Dodecyl Sulphate - Polyacrylamide Gel Electrophorosis Formatted: Border: Top: (Thin-thick small gap, Auto, pt Line width) Lê Thu Thảo-K19-1203 Viện Đại học Mở Hà Nội Khoa Công Nghệ Sinh Học Formatted: Border: Bottom: (Thick-thin small gap, Auto, pt Line width, From text: pt Border spacing: ), Tab stops: 6.1", Right + Not at 6.5" TÀI LIỆU THAM KHẢO Luận án tiến sĩ sinh học Nghiên cứu vi sinh vật phân giải xenluloza phân hủy rác thải hiếu khí ứng dụng, 2001 Sản xuất khí đốt (biogas) kỹ thuật lên men kỵ khí, Ngô Kế Sương, Nguyễn Lân Dũng Nxb Giáo Dục, 1997 Giáo trình Công nghệ vi sinh vật xử lý chất thải, PGS TS Lê Gia Hy Nxb Giáo dục Việt Nam, 2010.Quyền Đình Thi (2010), “Nghiên cứu sản xuất ứng dụng chế phẩm đa enzyme có chất lượng cao từ vi sinh vật tái tổ hợp nhằm nâng cao hiệu sử dụng thức ăn chăn nuôi”, Báo cáo tổng hợp kết khoa học công nghệ đề tài Giáo trình Quản lý xử lý chất thải rắn, Ths Lê Minh Thành, khoa Kỹ thuật công nghệmôi trường, Đại học An Giang Tài liệu tiếng anh Emzyme in industry, Wolfgang Aehele, Armand S, Drouillard S, Schülein M, Henrissat B, Driguez H(1997) “A bifunctionalized fluorogenic tetrasaccharide as a substrate to study cellulases”, The Journal of Biological Chemistry, 272(5), pp 27092713 Bayer EA, Chanzy H, Lamed R, Shoham Y (1998), “Cellulose, cellulases and cellulosome”, Current Opinion in Structural Biology, 8(5), pp 548–557 Boraston A, Bray M, Brun E, Creagh A.L, Gilkes N.R, Guarna M.M, Jervis E, Johnson P, Kormos J, McIntosh L (1997), “The structure and function of cellulose-blinding domains” In: Claeyssens M., Nerinckx W., Piens K (eds) Tricel 97, “Carbohydrases from Genetics and Properties of Cellulases 19 Trichoderma reesei and other microoganisms”, Ghent Belgium, Cambridge, UK, pp: 139 Formatted: Border: Top: (Thin-thick small gap, Auto, pt Line width) Lê Thu Thảo-K19-1203 50 Viện Đại học Mở Hà Nội Khoa Công Nghệ Sinh Học Bhat MK, Bhat S (1997), “Cellulose degrading enzymes and their Formatted: Border: Bottom: (Thick-thin small gap, Auto, pt Line width, From text: pt Border spacing: ), Tab stops: 6.1", Right + Not at 6.5" potential industrial applications”, Biotechnology Advances, 15(3-4), pp 583-620 Connerton I, Cummings N, Harris G.W, Debeire P and Breton C (1999), “A single domain thermophilic xylanase can bind insoluble xylan: evidence for surface aromatic clusters”, Biochimica et Biophysica Acta, 1433, pp 110–121 10.Cave I.D, Walker J.C.F, “Stiffness of wood in fast-grown plantation softwoods: the influence of microfibril angle”, Forest Prod J, 44 (5), pp 43-48 11 Shallom D, ShohamY(2003), “Microbial hemicellulase”, Current Opinion in Microbiology, 6(3), pp 219–228 12.Mehdi Dashtban,1,2 Heidi Bioconversion of Schraft,2 and Wensheng Lignocellulosic Residues; Qin “Fungal Opportunities & Perspectives” Int J Biol Sci 2009; 5(6): 578–595 13 Gibson LJ (2013) The hierarchical structure and mechanics of plant materials Journal of the Royal Society Interface (76): 2749–2766 14 Howard R.L, Abotsi E, Jansen van Rensburg E.L and Howard S (2003), “Lignocellulose biotechnology: issues of bioconversion and enzyme production”, African Journal of Biotechnology, 2(12), pp 602-619 15.Mikio K, Kenichiro T and Takasawa S(1987), Production of cellulases by a thermophilic fungus Thermoascus aurantiacus A-131, Agric Biol Chem, 51, pp 647–654 16 Mandels M (1975), Microbial sources of cellulase, Biotechnol Bioeng Symp, 5, pp 81-105 17 Paul L H., Nielsen J., Patrick A S and Maxwell G S (1977), Purification and Properties of a Cellulase from Aspergillus niger, Biochemical Journal, 165, pp.33-44 Formatted: Border: Top: (Thin-thick small gap, Auto, pt Line width) Lê Thu Thảo-K19-1203 51 Viện Đại học Mở Hà Nội Khoa Công Nghệ Sinh Học 18.Salar and K.R Aneja (2007), Thermophilic Fungi: Taxonomy and Formatted: Border: Bottom: (Thick-thin small gap, Auto, pt Line width, From text: pt Border spacing: ), Tab stops: 6.1", Right + Not at 6.5" Biogeography, Journal of Agricultural Technology, 3(1), pp 77-107 19 Roberfroid M B (1997), Health benefits of non-digestible oligosaccharides, Advances in Experimental Medicine and Biology, 427, pp 211–219 20.J Moon R, Martini A, Nairn J, Simonsenf J and Youngblood J(2011), “Cellulose nanomaterials review: structure, properties and nanocomposites”, Chem Soc Rev., 40, 3941–3994 21.Sandgren M, Stahlberg J, Mitchinson C (2005), “Structural and biochemical studies of GH family 12 cellulases: improved thermal stability, and ligand complexes”, Prog Biophys Mol Biol, 89 (3), pp 246-291 22.Sjöström, E (1993), Wood Chemistry: Fundamentals and Applications, 2nd edition, Academic Press, San Diego, CA, USA Formatted: Border: Top: (Thin-thick small gap, Auto, pt Line width) Lê Thu Thảo-K19-1203 52 Viện Đại học Mở Hà Nội Khoa Công Nghệ Sinh Học Formatted: Border: Bottom: (Thick-thin small gap, Auto, pt Line width, From text: pt Border spacing: ), Tab stops: 6.1", Right + Not at 6.5" Formatted: Border: Top: (Thin-thick small gap, Auto, pt Line width) Lê Thu Thảo-K19-1203 53 PHỤ LỤC I- Trình tự vùng ITS, mã trình tự so sánh độ tương đồng 18 chủng nấm mốc đọc trình tự LPH 198 ITS5-ITS4 ITS5 VT1201 AGTTGCAAGACTCCTAAACCATTGTAGACCTTACCTAACCGTTGCTTCGGTAGGCGGCGCCAGGGCCCCTACG GGCCCGCCAGCGTGTCCCCCGGCCCCCTTCGCGAGGGCGCCCGCCAGAGGCTCCAAACCATTCTCATATATAT AAGGCCTCTCTGAGTCTTCTATACTAAATGAGTCAAAACTTTCAACAATGGATCTCTTAGTTCTAGTATCGAT GAAGAACGTAGCGAAATACAATAAATAATATAAATTGTAGAATTCTATAAATCATTGAATCTTTGAACGTACA TTACGCCTACCAACATTCTAGTGGGTATACCTGTCCAAGCGTCATTTCGACTATCAAGCCCCGGGCTTATATT AGGGATCTACGGCTACCCATAGGCCTCGAAAACCAGTGGCGATGCCCGTTGTTACCCTGAGCGTAGTAGCAAC CACCTCGCTCAAGGCGTGCTCTAGGTCCCAGCCGTTAAACGGAAAGCAACCCCCCAAAGGTTGACCTCGGATT AGGTAGGAGGACCTGCTAAACTTAAGCATATCAATA Thielavia sp LPH 201 ITS5-ITS4 ITS5 VT1202 AGTTGCAAGACTCCTAAACCACTATAGACCTTACCTAATTGTTGCTTTAGCGGGCGGCGCTAGGGCCCCTACG GGCCCGCTAGTACGCCCCCCGGCCCCCCTCGCGGGGGCGCCCGTCGGAGGCTCTAAACCATTCTCGTATATAT AAGGCCTCTCTGAGTCTTCTATATTGAATGAGTCAAAACTTTTAACAACGGATCTCTTGGTTCTAGCATCGAT GAAGAACGTAGTGAAATACGATAAGTAATATGAATTGTAGAATTCTGTGAATCATCGAATCTTTGAACGTACA TTGCGCTCGCCGGCATTCTGGTGGGTATACCTATCCAAGCGTTATTTCGACCATCAAGCCCCAGGCTTGTGTT GGGGACCTGCGGCTGCCCGCAGGCCCCGAAAACCAGTGGCGGTGCCCGCTGTCACCCCGAGCGTAGTAGCAAC CACCTCGCTCAGGGCGTGCTCCGGGTCCCGGCCGTTAAACGGAAAGCAACCCCCCAAAGGTTGACCTCGGATC AGGTAGGAGGACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATAAGCGGAGGA Thielavia sp LPH 203 ITS5-ITS4 ITS5 VT1203 GACTCCTAAACTACTGTAGACCTTATTTAACCGTTGCTTCGGTGGGTAGCGCTAGGGCCCCTATAGGCCCACT AGCGCGCCCCTTGGCCCCCCTCGCGGGGGGCGTTCGCCGGAGGCTCTAAACCATTCTCGTATATAAAAGGCTT CTCTAAGTCTTTTATACTAAATGAGTTAAAACTTTTAACAATAGATCTCTTGGTTCTAGCATCGATAAAGAAT ATAGCGAAATACGATAAGTAATGTGAATTGTAGAATTCTATAAATCATCGAATCTTTGAATATACATTGCGTC TACTAGTATTCCAGTAGGTATACCTGTCTGAGCGTCATTTCGACTATCAAGCCTTAGGCTTGTATTGGGGACC TGTGGCTGCCTATAGGCCTCGAAAACTAGTGGCGGTGCCCGTTGTTACCCTGAGTATAGTAGCAACTACCTCG TTTAGGGCGTGCTCCGGGTCCTGGCTATTAAATGAAAAGCAACCCTTTAAAGGTTGACCTCGGATTAGGTAGG AGGATCCGCTGAACTTAAGCATATCA Thielavia sp LPH 205 ITS1-NL4 ITS1 VT1204 TTATAGAGTTGCAAGACTCCTAAACCACTATAGACCTTACCTAATTGTTGCTTTAGCGGGCGGCGCTAGGGCC CCTACGGGCCCGCTAGTACGCCCCCCGGCCCCCCTCGCGGGGGCGCCCGTCGGAGGCTCTAAACCATTCTCGT ATATATAAGGCCTCTCTGAGTCTTCTATATTGAATGAGTCAAAACTTTTAACAACGGATCTCTTGGTTCTAGC ATCGATGAAGAACGTAGTGAAATACGATAAGTAATATGAATTGTAGAATTCTGTGAATCATCGAATCTTTGAA CGTACATTGCGCTCGCCGGCATTCTGGTGGGTATACCTATCCAAGCGTTATTTCGACCATCAAGCCCCAGGCT TGTGTTGGGGACCTGCGGCTGCCCGCAGGCCCCGAAAACCAGTGGCGGTGCCCGCTGTCACCCCGAGCGTAGT Lê Thu Thảo-K19-1203 52 Formatted: Border: Top: (Thin-thick small gap, Auto, pt Line width) AGCAACCACCTCGCTCAGGGCGTGCTCCGGGTCCCGGCCGTTAAACGGAAAGCAACCCCCCAAAGGTTGACCT CGGATCAGGTAGGAGGACCCGCTGAACT Thielavia sp LPH 209 ITS5-ITS4 ITS5 VT1205 GACTCCTAAACCACTATAGACCTTACCTAACCGTTGCTTTGGTGGGCGGCACCAAGGCCCCCACAAGCCCGCC AGCGCGCCCCCCGGCCCCCCTCGCGAGGGCGCCCGCCGGAGGCTCCAAACCATTCTCGTATATATAAGGCCTC TCTGAGTCTTCTATACTGAATAAGTCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTAGTTCTAGTATCGATAAAGAATA TAGCGAAATACAATAAGTAATATGAATTATAGAATTCTATGAATCATCGAATCTTTGAACGTACATTGCGCCC ACCGGCATTCCGACGGGTATATCTGTCTAAGCGTCATTTCGACTATCAAGCCCTAGGCTTGTATTGGGGACCT ATAGCTACCCGCAGGCCCCGAAAACTAGTGGCGGTGCCCACTGTCACCCCAAGCGTAGTAGCAACCACCTTGC TTAGGGTGTGCTCCAGGTCCTAGCTGTTAAACGGAAAGCAACCCCCTAAAGGTTGACTTCGGATTAGGTAGAA GGACCTACTGAACTTAAGCATATCAATA Thielavia sp LPH 217 ITS5-ITS4 ITS5 VT1206 GACCTTACCTAACCGTTGCTTCGGTGGGCGGCGCCAGGGCCCCTACAGGCCTACTAACGCGCCCCCCGGCCCC CCTCGCGAGGGCGCCCGCCAAAGGCTCTAAACCATTCTCATATATACAAGGCCTCTCTAAGTCTTCTATACTG AATAAGTCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTAGTTCTAGCATCGATAAAGAACGTAGCGAAATGCAATAAGT AATATAAATTGCAGAATTCTATAAATTATCGAATCTTTAAACGTACATTGCGCCTACTAGCATTCCAGTGGGC ATACCTATCCAAACGTCATTTCGACTATCAAGCCCCGAGCTTGTATTAAGGACCTACGGCTACCTATAGGCCC CGAAAACCAATAGCGGTACCCACTATCACCCTGAGCGTAATAGCAACCACCTCGC Thielavia sp LPH 218 ITS5-ITS4 ITS5VT1207 GACTCCTAAACCATTGTAGACCTTACCTAACCGTTGCTTCGGTAGGCGGCGCCAGGGCCCCTACGGGCCCGCC AGCGTGTCCCCCGGCCCCCTTCGCGAGGGCGCCCGCCAGAGGCTCCAAACCATTCTCATATATATAAGGCCTC TCTGAGTCTTCTATACTAAATGAGTCAAAACTTTCAACAATGGATCTCTTAGTTCTAGTATCGATGAAGAACG TAGCGAAATACAATAAATAATATAAATTGTAGAATTCTATAAATCATTGAATCTTTGAACGTACATTACGCCT ACCAACATTCTAGTGGGTATACCTGTCCAAGCGTCATTTCGACTATCAAGCCCCGGGCTTATATTAGGGATCT ACGGCTACCCATAGGCCTCGAAAACCAGTGGCGATGCCCGTTGTTACCCTGAGCGTAGTAGCAACCACCTCGC TCAAGGCGTGCTCTAGGTCCCAGCCGTTAAACGGAAAGCAACCCCCCAAAGGTTGACCTCGGATTAGGTAGGA GGACCTGCTAAACTTAAGCATATCA Thielavia sp LPH 219 ITS5-ITS4 ITS5 VT1209 ACTCCTAAACTACTGTGGACCTTACCTAACCGTTGCTTCGGCGGGCAGCGCCAGGGCCCCCACAGGCCCGCTA GCGCGCCCCCCGGCCCCCCTCGCGGGGACGTCCGCCGGAGGCTCCAAACCATTCTCGCATGCACAAGGCCTCT CTGAGTCTTCTGTACTGAATGAGTCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGC AGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCG CCGGCATTCCGGCGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTTCGACCATCAAGCCCCGGGCTTGTGTTGGGGACCTG CGGCTGCCCGCAGGCCCCGAAAACCAGTGGCGGTGCCCGCTGTCACCCCGAGCGTAGTAGCAACCACCTCGCT CAGGGCGTGCTCCGGGTCCCGGCCGTTAAACGGAAAGCAACCCCCCAAAGGTTGACCTCGGATCAGGTAGGAG GACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATA Thielavia sp Lê Thu Thảo-K19-1203 Formatted: Border: Top: (Thin-thick small gap, Auto, pt Line width) 52 LPH 204 3-S5 ITS5-LR1 LR1 VT1286 ACCTTATCTAAGGTCAACCTTTAGAGGGTTGCTTTCCGTTGAACGGCTAGGACCTAGAGTACGCCCTAAGTAA GGTAGTTGCTACTATGCTTAGGGTAATAGTAGGCACTACTACTAGTTTTTAGAGCCTATAAGTAGCTATAGGT CCCTAATATAAGCCTAAGGCTTAATAGTTGAAATAACGCTTAGATAGGTATATCTATTAGAATACTAATAGGT GTAATATATATTTAAAGATTCGATAATTTATAGAATTCTACAATTTATATTACTTATTGTATTTTGCTATATT CTTTATCGATACTAGAACTAAAAGATCTATTGTTAAAAGTTTTAACTTATTTAGTATAAAAGACTTAGAGAGG CCTTTTATATATAAGAATAGTTTAGAGCCTCTAACGAGTACCCCTATAAAGGGGGCTAGGGGGCACGCTAGCG AGCCTATAGGGGCCTTAGCACCGTCTACTAAAGCAACGGTTAGGTAAGGTCTATAGTAGTTTAGGAGTCTTAT AACTCTATAATAATCCCTCTACTAGTTCACTAACGGAGACCTTGTTACGA 10 LPH 207 ITS5-LR1 LR1 VT1287 CTTTTAGAGAGTTGCTTTCCGTTTAATGGCTAGGACCTAGAGCACGCCCTAAGCAAGGTGGTTGCTACTACGT TCGGGGTGATAGTAGGTACCGCTACTGGTTTTTAGGGCCTACAAATAGCTATAGGTCCCTAATACAAGCCTAG GGCTTGATAGTCGAAATGACGCTTGGACAAGTATACCCGCTAGAATACTAGTAAGCGCAATGTACGTTCAAAG ATTCGATAATTTATAGAATTCTACAATTCACATTACTTATCGTATTTCGCTACGTTCTTTATCGATATTAGAA CCAAGAGATCTATTGTTAAAAGTTTTAACTTATTTAGTATAGAAGACTCAGAGAGGCCTTATATATACGAGAA TAGTTTGGAGCCTCCGGCGGACGCCCCCGTAAGGGGGGCCAGGGGGCACACTAGCGAGCCTATAGGGGCCCTA GCGCCGCCCACCGAAGCAACGGTTAGGTAAGGTCTACAGTGGTTTAGGAGTCTTACAACTCTATAATGATCCC TC 11 LPH 206 SR6R-LR1 LR1 VT1288 TCAACCTTTAGAAGGTTGCTTTCCGTTTAATAGCCAAGACCTAGAGTATACCCTAAGCGAGGTGGTTGCTACT ATACTCGAGGTAATAGTGGGTACTACTACTAGTTTTCAGGGCCTACGGATAGCTATAAGTCCCTAATATAAGC CTAGAGCTTGATAGTCGAAATGACACTTAGACAAGTATACCCGCTAGAATACTAGCGGGCGTAATGTATATTT AAAGATTCGATGATTCACGGAATTCTACAATTTATATTATTTATCGTATTTCGCTATATTCTTCATCGATACT AAAACCAAGAGATCCGTTGTTGAAAGTTTTGACTTATTTAGTATAGAAGACTCAGAGAGGCCTTATATATACA AGAATAGTTTAGAGCCTTCGGCGGGCGCCCCTGCGAAGGGGGCTAGGGGGCACGCTAGCGGGCCTATAGAGGC CCTAGCGCTACCTACCGAAGCAACGGTTAGGTAAGGTCCACAGTAGTTTAGGAGTCTTGCAACTCTGTAATAA TCCCTCCGCTAGTTCACTAACAGAGACCTTGTTACGACTTTT 12 LPH 211 SR6R-LR1 LR1 VT1289 GGTCAACCTTTGGGGGGTTGCTTTCCATTTAACGGCTAGGACCCAGAGTATGCTCTGAGCGAGGTGGTTGCTA CTACGCTCGGGGTAATAGTGGGTACCGCTACTGGTTTTCGAGGCCTATAGGTAGCCGTAGGTCCCTAATATAA GCCCGGGGCTTAATAGTCGAAATGACGCTTAGATAGGTATACTCGCCGGAATGCTGGTGGGCGCAATGTACGT TTAAAGATTCGATGATTTACGGAATTCTGCAATTTATATTACTTATCGCATTTCGCTATATTCTTCATCGATA CTAGAACTAAGAGATCCGTTGTTGAAAGTTTTGACTTATTTAGTATAGAAGACTCAGAGAGGCCTTGTATATA CGAGAATAGTTTAGAGCCTTCGGTAGGCGCCCCCGCGAGGGGGGCTAGGGGGCGCGCTAGCGGGCCTGTGGGG GCCCTGGCGTCGCCCACCGAAGCAACGGTTAGGTAAGGTCCACAGTAGTTTAGGAGTCTTGCAACTCTGTAAT GATCCCTCCGCTGGTTCACCAACGGAGACCTTGTTAC 13 LPH 195 ITS1F-ITS4 ITS1FVT1302 CATTACAGAGTTGCAAGACTCCCAAACCACTGTGGACCTTACCTAACCGTTGCTTCGGCGGGCGGCGCCAGGG CCCCCACGGGCCCGCCAGCGCGCCCCCCGGCCCCCCTCGCGGGGGCGCCCGCCGGAGGCTCCAAACCATTCTC GCATGCACAAGGCCTCTCTGAGTCTTCTGTACTGAATGAGTCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTG GCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTG Lê Thu Thảo-K19-1203 52 Formatted: Border: Top: (Thin-thick small gap, Auto, pt Line width) AACGCACATTGCGCCCGCCGGCATTCCGGCGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTTCGACCATCAAGCCCCGGG CTTGTGTTGGGGACCTGCGGCTGCCCGCAGGCCCCGAAAACCAGTGGCGGTGCCCGCTGTCACCCCGAGCGTA GTAGCAACCACCTCGCTCAGGGCGTGCTCCGGGTCCCGGCCGTTAAACGGAAAGCAACCCCCCAAAGGTTGAC CTCGGATCAGGTAGGAGGACCCGCTGAACTTAAGCATATCAA 14 LPH 197 ITS1F-ITS4 ITS1F VT1303 TCATTACAGAGTTGCAAGACTCCCAAACCACTGTGGACCTTACCTAACCGTTGCTTCGGCGGGCGGCGCCAGG GCCCCCACGGGCCCGCCAGCGCGCCCCCCGGCCCCCCTCGCGGGGGCGCCCGCCGGAGGCTCCAAACCATTCT CGCATGCACAAGGCCTCTCTGAGTCTTCTGTACTGAATGAGTCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCT GGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTT GAACGCACATTGCGCCCGCCGGCATTCCGGCGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTTCGACCATCAAGCCCCGG GCTTGTGTTGGGGACCTGCGGCTGCCCGCAGGCCCCGAAAACCAGTGGCGGTGCCCGCTGTCACCCCGAGCGT AGTAGCAACCACCTCGCTCAGGGCGTGCTCCGGGTCCCGGCCGTTAAACGGAAAGCAACCCCCCAAAGGTTGA CCTCGGATCAGGTAGGAGGACCCGCTGAACTTAAGCATATC 15 LPH 200 ITS1F-ITS4 ITS1F VT1304 ATTACAGAGTTGCAAGACTCCCAAACCACTGTGGACCTTACCTAACCGTTGCTTCGGCGGGCGGCGCCAGGGC CCCCACGGGCCCGCCAGCGCGCCCCCCGGCCCCCCTCGCGGGGGCGCCCGCCGGAGGCTCCAAACCATTCTCG CATGCACAAGGCCTCTCTGAGTCTTCTGTACTGAATGAGTCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGG CATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGA ACGCACATTGCGCCCGCCGGCATTCCGGCGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTTCGACCATCAAGCCCCGGGC TTGTGTTGGGGACCTGCGGCTGCCCGCAGGCCCCGAAAACCAGTGGCGGTGCCCGCTGTCACCCCGAGCGTAG TAGCAACCACCTCGCTCAGGGCGTGCTCCGGGTCCCGGCCGTTAAACGGAAAGCAACCCCCCAAAGGTTGACC TCGGATCAGGTAGGAGGACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATA 16 LPH 202 ITS1F-ITS4 ITS1F VT1305 CAGAGTTGCAAGACTCCCAAACCACTGTGGACCTTACCTAACCGTTGCTTCGGCGGGCGGCGCCAGGGCCCCC ACGGGCCCGCCAGCGCGCCCCCCGGCCCCCCTCGCGGGGGGCGCCCGCCGGAGGCTCCAAACCATTCTCGCAT GCAAAAGGCCTCTCTGAGTCTTCTGTACTGAATGAGTCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCAT CGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGAACG CACATTGCGCCCGCCGGCATTCCGGCGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTTCGACCATCAAGCCCCGGGCTTG TGTTGGGGACCTGCGGCTGCCCGCAGGCCCCGAAAACCAGTGGCGGTGCCCGCTGTCACCCCGAGCGTAGTAG CAACCACCTCGCTCAGGGCGTGCTCCGGGTCCCGGCCGTTAAACGGAAAGCAACCCCCCAAAGGTTGACCTCG GATCAGGTAGGAGGACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATAA 17 LPH 208 ITS1F-ITS4 ITS1F VT1306 ATTACAGAGTTGCAAGACTCCCAAACCACTGTGGACCTTACCTAACCGTTGCTTCGGCGGGCGGCGCCAGGGC CCCCACGGGCCCGCCAGCGCGCCCCCCGGCCCCCCTCGCGGGGGCGCCCGCCGGAGGCTCCAAACCATTCTCG CATGCACAAGGCCTCTCTGAGTCTTCTGTACTGAATGAGTCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGG CATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGA ACGCACATTGCGCCCGCCGGCATTCCGGCGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTTCGACCATCAAGCCCCGGGC TTGTGTTGGGGACCTGCGGCTGCCCGCAGGCCCCGAAAACCAGTGGCGGTGCCCGCTGTCACCCCGAGCGTAG TAGCAACCACCTCGCTCAGGGCGTGCTCCGGGTCCCGGCCGTTAAACGGAAAGCAACCCCCCAAAGGTTGACC TCGGATCAGGTAGGAGGACCCGCTGAACTTAAGCATATCAAT 18 LPH 210 ITS1F-ITS4 ITS1F VT1307 Lê Thu Thảo-K19-1203 Formatted: Border: Top: (Thin-thick small gap, Auto, pt Line width) 52 ATTACAGAGTTGCAAGACTCCCAAACCACTGTGGACCTTACCTAACCGTTGCTTCGGCGGGCGGCGCCAGGGC CCCCACGGGCCCGCCAGCGCGCCCCCCGGCCCCCCTCGCGGGGGCGCCCGCCGGAGGCTCCAAACCATTCTCG CATGCACAAGGCCTCTCTGAGTCTTCTGTACTGAATGAGTCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGG CATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGA ACGCACATTGCGCCCGCCGGCATTCCGGCGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTTCGACCATCAAGCCCCGGGC TTGTGTTGGGGACCTGCGGCTGCCCGCAGGCCCCGAAAACCAGTGGCGGTGCCCGCTGTCACCCCGAGCGTAG TAGCAACCACCTCGCTCAGGGCGTGCTCCGGGTCCCGGCCGTTAAACGGAAAGCAACCCCCCAAAGGTTGACC TCGGATCAGGTAGGAGGACCCGCTGAACTTAAGCATATCAA 19 LPH 214 ITS1F-ITS4 ITS1F VT1308 ATTACAGAGTTGCAAGACTCCCAAACCACTGTGGACCTTACCTAACCGTTGCTTCGGCGGGCGGCGCCAGGGC CCCCACGGGCCCGCCAGCGCGCCCCCCGGCCCCCCTCGCGGGGGGCGCCCGCCGGAGGCTCCAAACCATTCTC GCATGCAAAAGGCCTCTCTGAGTCTTCTGTACTGAATGAGTCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTG GCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTG AACGCACATTGCGCCCGCCGGCATTCCGGCGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTTCGACCATCAAGCCCCGGG CTTGTGTTGGGGACCTGCGGCTGCCCGCAGGCCCCGAAAACCAGTGGCGGTGCCCGCTGTCACCCCGAGCGTA GTAGCAACCACCTCGCTCAGGGCGTGCTCCGGGTCCCGGCCGTTAAACGGAAAGCAACCCCCCAAAGGTTGAC CTCGGATCAGGTAGGAGGACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATA 20 LPH 212 ITS1F-NL4 ITS1F VT1309 CAGAGTTGCAAGACTCCTAAACTACTGTGGACCTTACCTAACCGTTGCTTCGGTGGGCGACGCCAGGGCCCCC ACAGGCCCGCTAGCGCGCCCCCTAGCCCCCCTCGCGGGGGCGCCTACCGAAGGCTCTAAACTATTCTCGTATA TACAAGGCCTCTCTGAGTCTTCTATACTAAATAAGTCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTAGTTCTAGTATC GATGAAGAATATAGCGAAATGCGATAAGTAATATAAATTGCAGAATTCCGTAAATCATCGAATCTTTAAACGT ACATTGCGCCCACCAGCATTCCGGCGAGTATACCTATCTAAGCGTCATTTCGACTATTAAGCCCCGGGCTTAT ATTAGGGACCTACGGCTACCTATAGGCCTCGAAAACCAGTAGCGGTACCCACTATTACCCCGAGCGTAGTAGC AACCACCTCGCTCAGAGCATACTCTGGGTCCTAGCCGTTAAATGGAAAGCAACCCCCCAAAGGTTGACCTCGG ATCAGGTAGGAAGACCCGCTGAACTTAAGTATATCAATAAACAGAGGAAAAGAAACTAATAGGGATTGCCCTA GTAACGGCGAGTAAAGCGGCAATAGCTTAAATTTGAAATCTGGCTTCAGCCCGAGTTGTAATCTAGAGAGGAA GCTTTAGGCGCAGCGCCAACTGAGTCCCCTAGAACGGGGCGCTATAGAGGGTGAGAGCCCTATATAGTTGGAC GCCTAGCCTATATAAAGCTCCTTCGACAAGTCGAGTAGTTTAGGAATACTATTTAAAATAGAAGATAAA II-Tổng hợp kết sàng lọc Đường kính vòng thủy phân 21 chủng nấm mốc phân lập Formatted: Border: Top: (Thin-thick small gap, Auto, pt Line width) Lê Thu Thảo-K19-1203 52 Hình II.1 Đường kính vòng thủy phân 21 chủng nấm mốc vị trí giếng tương ứng với chủng từ LPH 195÷LPH 219, (-) đối chứng âm: nước cất, (+) đối chứng dương: Cellulase Novozyme Formatted: Border: Top: (Thin-thick small gap, Auto, pt Line width) Lê Thu Thảo-K19-1203 52 Formatted: English (United States) Bảng tổng hợp hoạt tính enzyme chủng phân lập Bảng II-2.Tổng hợp hoạt tính enzyme CMCaseở pH 3.0, pH 5.0 pH 7.0 21 chủng nấm mốc phân lập Rate STT Mẫu IU/ml(3) IU/ml(5) IU/ml(7) LPH 195 12.42 8.76 1.45 141.82 16.53 LPH 198 8.97 7.39 2.43 121.28 32.89 LPH 201 8.26 4.81 0.52 171.76 10.91 LPH 203 2.98 4.47 0.57 66.74 12.85 LPH 204 9.22 10.47 1.57 88.06 14.98 LPH 205 3.09 3.73 0.00 82.84 0.00 LPH 206 2.37 7.91 0.67 29.98 8.48 LPH 207 2.88 5.55 0.50 51.90 9.01 LPH 209 3.35 5.77 0.21 57.98 3.57 10 LPH 211 2.82 4.46 0.57 63.33 12.86 11 LPH 212 2.08 2.04 0.00 101.80 0.00 12 LPH 217 3.03 2.49 0.11 121.44 4.53 13 LPH 218 5.43 8.61 0.50 63.02 5.77 14 LPH219 8.16 8.47 0.52 96.25 6.09 15 LPH197 4.63 2.24 0.71 207.10 31.87 16 LPH 200 4.63 2.70 0.74 171.32 27.30 17 LPH 202 4.99 1.97 0.41 253.94 21.01 18 LPH 208 2.91 1.09 0.27 266.07 24.59 19 LPH 210 1.35 3.93 1.38 34.37 35.10 20 LPH 214 7.56 3.47 0.48 217.57 13.80 21 LPH 216 5.38 2.79 0.60 193.34 21.64 pH3/pH5 pH7/pH5 Formatted: Border: Top: (Thin-thick small gap, Auto, pt Line width) Lê Thu Thảo-K19-1203 52 Bảng II-3.Tổng hợp hoạt tính enzyme Xylanaseở pH 3.0, pH 5.0 pH 7.0 21 chủng nấm mốc phân lập IU/ml Rate Rate pH3/pH5 pH5/pH7 15.00 106.20 47.55 18.42 8.77 325.53 47.62 16.98 61.06 24.90 27.80 40.77 LPH 203 25.69 18.57 14.61 138.31 78.66 LPH 204 47.06 26.01 12.15 180.91 46.72 LPH 205 38.75 59.87 10.90 64.72 18.20 LPH 206 32.62 21.65 32.10 150.70 148.29 LPH 207 35.49 60.63 22.03 58.54 36.33 LPH 209 52.84 23.91 3.86 221.04 16.15 10 LPH 211 46.05 40.34 10.84 114.16 26.86 11 LPH 212 16.68 59.12 5.50 28.21 9.30 12 LPH 217 15.18 27.72 13.69 54.77 49.37 13 LPH 218 36.84 38.54 15.15 95.57 39.31 14 LPH219 30.73 32.16 16.82 95.57 52.29 15 LPH197 31.66 55.64 11.89 56.90 21.36 16 LPH 200 17.97 29.22 5.77 61.51 19.76 17 LPH 202 10.93 14.27 3.45 76.62 24.17 STT Mẫu LPH 195 33.51 31.56 LPH 198 59.97 LPH 201 (3) IU/ml(5) IU/ml(7) Formatted: Border: Top: (Thin-thick small gap, Auto, pt Line width) Lê Thu Thảo-K19-1203 52 18 LPH 208 11.71 17.34 0.57 67.55 3.31 19 LPH 210 10.26 24.19 5.19 42.42 21.45 20 LPH 214 22.42 20.21 7.05 110.93 34.87 21 LPH 216 25.22 40.35 11.72 62.50 29.04 Formatted: Border: Top: (Thin-thick small gap, Auto, pt Line width) Lê Thu Thảo-K19-1203 52 Bảng II-4.Khả bền nhiệt chủng nấm mốc chịu nhiệt phân lập IU/ml IU/ml IU/ml IU/ml (20) (70) Rate (20) (70) Rate Mẫu CMC CMC (70/20) Xylanase Xylanase (70/20) LPH 195 57.27 14.77 25.79 15.75 3.99 25.30 LPH 197 87.90 7.27 8.27 3.06 2.69 88.19 LPH 198 29.03 27.35 94.22 8.46 6.64 78.53 LPH 200 22.51 7.28 32.34 4.44 3.95 88.83 LPH 201 66.38 27.90 42.03 15.80 10.82 68.49 LPH 202 64.38 18.76 29.15 1.98 0.80 40.69 LPH 203 58.64 18.41 31.40 11.69 5.79 49.52 LPH 204 95.03 23.56 24.80 12.19 7.98 65.49 LPH 205 80.46 20.09 24.97 7.28 4.88 67.05 LPH 206 47.74 16.21 33.96 7.85 5.80 73.87 LPH 207 54.33 6.85 12.60 10.98 9.26 84.39 LPH 208 53.35 12.40 23.24 2.72 2.05 75.54 LPH 209 67.89 2.70 3.98 7.59 7.56 99.64 LPH 210 19.20 9.24 48.12 5.80 2.27 39.14 LPH 211 37.46 8.22 21.95 7.19 6.14 85.50 LPH 212 24.82 13.08 52.71 3.29 2.74 83.46 LPH 214 24.88 10.96 44.07 1.82 1.42 78.01 LPH 216 25.14 9.18 36.51 2.28 2.09 91.36 LPH 217 79.76 16.77 21.02 2.56 1.66 64.73 LPH 218 66.86 5.95 8.91 12.79 9.99 78.07 LPH 219 77.57 8.55 11.03 7.40 4.83 65.26 Formatted: Border: Top: (Thin-thick small gap, Auto, pt Line width) Lê Thu Thảo-K19-1203 52 Formatted: Border: Top: (Thin-thick small gap, Auto, pt Line width) Lê Thu Thảo-K19-1203 52 [...]... at 6.5" 2.1 ĐỐI TƯỢNG Để ph c vụ ph n lập nấm mốc chịu nhiệt, chịu pH thấp, 70 mẫu có nguồn gốc từ rơm mục, gỗ mục, trấu mục, mùn cưa, các cơ chất trồng nấm như mùn cưa ủ, rơm ủ, bông ủ được lấy trên các địa bàn Hà Nội, Hải Dương, Hưng Yên, Bắc Giang, Vĩnh Ph c, Quảng Bình, … 2.2 HÓA CHẤT, TRANG THIẾT BỊ MÁY MÓC 2.2.1.Hoá chất và thiết bị Hóa chất dùng trong môi trường ph n lập, nuôi cấy và lên men... Xylanase: xylan 1% pha trong đệm Natri-citrate 0.05M pH 5 thanh trùng 121°C trong 15 ph t, bảo quản ở 4°C • Tiến hành Mẫu thí nghiệm: - Hút 0.2 ml cơ chở 4°C.geppendorf, giơ chở 4°C.g pH se ở đồ - Bpendorf, giơ chở 4°C.g pH se ở đồng thời 3 pH: pH 3.0, pH h hợp), cho enzyme ph n ứng với cơ chất ở 50°C trong 20 ph t - B trong 20 ph t.ở 4°C.g pH se ở đồng thời 3 pH: pH 3.0,0°C trong 5 ph t, làm l.g pH se ở đồng... với những đặc tính công nghệ mới luôn được quan tâm.Enzyme ứng dụng trong chăn nuôi cần đảm bảo khả năng chịu nhiệt của quá trình ép viên vàhoạt động pH thấp trong dịch dạ dày Xuất ph t từ những yêu cầu thực tiễn, chúng tôi tiến hành nghiên cứu đề tài Ph n lập các chủng nấm mốc chịu nhiệt, chịu pH thấp nhằm tìm kiếm các enzyme mới có khả năng ứng dụng trong chăn nuôi Formatted: Border: Top: (Thin-thick... PH N LIGNOCELLULOSE Ngày nay, hầu hết các rác thải công nông nghiệp đều là lignocelluloses là những chất khó bị ph n hủy, vì vậy để ph n hủy cấu trúc ph c tạp đó cần nhiều enzyme ngoại bào từ các vi sinh vật.Một trong số loài vi sinh vật có khả năng sinh enzyme ngoại bào đầy đủ và ưu việt trong việc thủy ph n lignocelluloses đang được quan tâm là nấm mốc chịu nhiệt Emzyme được tiết ra từ loài nấm mốc. .. hemicelluloses Để thủy ph n hiệu quả lignocellulose đòi hỏi một hệ thống các enzyme khác nhau hoạt động kết hợp Mỗi polymer bị thủy ph n bởi một số vi sinh vật sản xuất các enzyme hoạt động hỗ trợ nhau có thể kể đến vi khuẩn, nấm mốc, xạ khuẩn tuy nhiên có thể nói nấm mốc là nhóm vi sinh vật sinh hệ enzyme thủy ph n lignocellulose đầy đủ nhất trong hệ vi sinh vật có khả năng ph n giải lignocellulose... trùng 121°C/1 5ph t 2.3 PH ƠNG PH P NGHIÊN CỨU 2.3.1 Ph ơng ph p ph n lập mẫu ở môi trường Czapek pH 2.0 trên giấy lọc Mẫu sau khi lấy về được mã hóa tên, chuẩn bị ống Falcon, đĩa peptri, giấy lọc vô trùng (cắt giấy lọc sao cho vừa lòng đĩa, ngâm giấy trong môi trường Czapeck pH 2.0 khoảng 20 ph t, sau đó đổ dịch đi) Cân 2 g mẫu vào ống Falcon Đổ dung dịch rửa vào cho ngập mẫu, lắc đều, để 20 ph t rồi rót... khí có khả năng ph n giải cellulose Những năm đầu thế kỉ XX, G.Van Iterson ph n lập được các vi khuẩn hiếu khí có khả năng này Trong các vi khuẩn ph n giải cellulose, niêm vi khuẩn chiếm vị trí quan trọng, chủ yếu ở các giống Cytophaga,Sporocytophaga và Sorangium.Ngoài ra còn thấy các loài thuộc giống Cellvibrio cũng có khả năng ph n hủy cellulose.Trong điều kiện kị khí, các loài ưa nấm hoặc ưa nhiệt... ph n xylan trong một ph t bởi một ml enzyme ở pH 5, nhiệt độ 50°C.Mẫu blank: mỗi pH dùng một blank khác nhau Cho vào eppendorf 0.1 ml đệm ở từng pH 3.0, pH 5.0, pH 7.0 cộng với 0.2 ml cơ chất ở pH tương ứng Mẫu blank cũng được ủ ở 50 °C trong 60 ph t và tiếp tục các bước như trên 2.3.3.3 Xác định khả năng bền nhiệt của enzyme trên cơ chất CMC và Xylan Enzyme được pha loãng tới nồng độ thích hợp ở pH5 .0... chỉ thủy ph n cellobiose và dạng ng hòa tan của c cellodextrin tạoo thành D D-glucose Chúng không có khả năng ng th thủy ph n cellulose tự nhiên [8] Sự thủyy ph n cellulose là sự s kết hợp của cả 3 enzyme trên [[20].Trước tiên enzyme EG tấnn công vào giữa gi mạch cellulose và giảii ph ng các đầu cuối của chuỗi polysaccharides polysaccharides.Sau đó enzyme CBH tiếp tụcc ph n ccắt để tạo sản ph m cuốii... sử dụng enzyme xylanase bổ sung vào thức ăn cho chăn nuôi có tác dụng ph n giải xylan- một thành ph n trong nhóm NSP,có nhiều trong thức ăn của vật nuôigiúp các enzyme nội sinh có cơ hội tiếp xúc và ph n giải các chất dinh dưỡng như tinh bột, protein, chất béo Xylanase cũng có tác dụng ph n cắt xylan giải ph ng đường xylose và các ph n đoạn XOS (xylooligosaccharide), giảm độ nhớt của dịch ruột, tăng