ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ Hồ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA NGUYỄN ĐỨC LƯỢNG (Chủ biên) PHAN THỊ HUYỄN - NGUYỄN n h t u y ế t ٠ THÍ NGHIỆM CÔNG NGHỆ SINH HỌC TẬP THỈ NGHIỆM VI SINH VẬT HỌC NHÀ XUẤT BÀN ^‫ = ^ ؛‬D Ạ I HQC Q٧tfc GIA TP Hổ CHÍ MINH ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP H CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA N gu yễn Đức LưỢng (Chủ biên) Phan Thị Huyền ٠Nguyễn Ánh Tuyết THÍ NGHIỆM CÔNG NGHỆ SINH HỌC TẬP / THÍ NGHIỆM VI SINH VẬT HỌC (Tái lần thứ nhất) ĨPƯ٠ ữl‫؛‬oTậí '5 H Ư J 10020452 NHÀ XUẤT BẢN ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HỒ CHÍ MINH - 2006 GT.02.SV(V7) :12‫ﺱ‬ 1.2006‫ﺭ‬75٠11 ĐHOG.HCM-OÍB SV.GT.594-06 (T) MỤC LỤC LƠỈNÓỈDẢIỈ Chương ĩ : NHỮNG NGƯYẺN TẮC c BẢN CỬA PHÒNG rHÍ NGHIỆM Bài : Bài 2: 2.1 2.2 VI SINH VẬT HỌC 11 Nội qui phòng thi nghiệm vi sinh vật học 11 Những dụng cụ١ trang thiết bị cUa phOng thi nghiệm vi sinh vật học 12 Các dụng cụ thòng thường 12 Kinh hiển vi loại 15 Chương 2.- CHUA n bị m ò i TRƯỜNG VÀ ĐIỂU KIỆNNGHIÊN c ứ u VI SINH VẬT 20 Bài ٠ 3: Chuá’n bị dụng cụ nuOi cấy 3.1 xư ‫ ﺭﺩﺍ‬dụng cụ 32‫ﺀ‬Bao gói dụng cụ 3.3 Khứ trUng dụng cụ Bài 4: Chuẩn bị môi trường nuôi cấy dùng cho nghiên ،ứu vi sinh vật học 4.1 Chuâ.n bị nguyên vật liệu 4.2 Lam mồi trường 4.3 Diều chinh pH cUa mồi trường 4.4 Phân phối môi trương vào dụng cụ chứa 4.5 Vô khuẩn môi trường 4.6 Làm thạch nghiêng, thạch dứng thạch dĩa 4.7 Báo quản kiểm tra môi trường 4.8 Chuấn bi mỏi trương nuOi cấy dUng nhừng nghiên cứu sinh ly, sinh hóa cUa vi sinh vật, Chương 3: PHƯƠNG PHÁP PHÂN LẬP, BẢO QUẢN GIỐNG ١ ^ SINH VẬT Bài 5: 5.1 5.2 5.3 5.4 Phương phấp phân lập giống vi sinh vật Chuẩn bị tang siirh pha loãng mẫu Câ'y mẫu u mẫu Phổt chọn khuẩn lạc dặc trưng Kiếm tra tinh khiết cUa giống vi sinh vật Bai 6: Phương pháp bảo quản giOng vi sinh vật Chương 4: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN Bài 7: 7.1 7.2 7.3 7.4 7.5 cưu HÌNH THÁI VI SINH VẬT Nghiên cứu hình thai vi khuẩn Nhuộm Gram Nhuộm bào tử Nhuộm,vỏ nhầy Nhuộm tiên mao Nhuộm thế' ấ'n nhập 20 20 21 22 27 27 27 27 27 28 28 29 29 30 30 30 30 32 32 34 36 38 39 41 43 44 45 Bài 8: Nghén cứu hinh thái nảm m١ea Ba‫ ؛‬Nghièn cứu hinh thai nấm 8ỢÍÌ Giống Aspergillus 9.1 Giống Penicillium9.2 Giống Alternaria9.3 Giống Fusarium9.4 Giống Cladosporium9.5 Ba‫ ؛‬Nghỉén cứu hinh tha! tảo :10 Bai 11: Nghièn cứu hlnh thai xạ hhuỉán Chương 5: CAC PHƯƠNG PHÁP KIEm tra SỐ> lương \ ٦ SINH ^Ậ.1' Bà! 12: Xác định trực tiep sỗ' lượng tế b٤٥o bà‫؛‬ng buOng đ٠ẽni h(')ng ‫ ا‬٠ ‫ا‬٧ Bai 13: xac định gian tiep sO' lượng tie ba.0 bàmg cach đỉếnn so lưưug cáo khuan ‫ﻋﺎ‬.،0 phat tr‫؛‬è'n trẽn mồ‫ ؛‬trường thacbì Nguvèn tồc13.1 each t 13.2‫؛‬èn banh Gachdèni13.3 Bài 14: D.inh lương vi S i n h vảt bàng phươmg pjbap doí dọ quang Vật l 14.1‫؛‬du،،g cu n١ôỉ trường :nuĩối cay Ọu١ Cách t 14.2‫^؛‬n hanh Chitơng 6: PHIÍƠNG PHAP NGHIEN cưu ;SI,NH LV SIJNH HOA VI SINH VẢT Bai 15: Cac thi nghiéin k‫؛‬ng lííío siiih khOi cua vi sjnh v(،t:e'm ira kha n٥ 49 so :9 50 51 53 53 55 5‫؟‬ 59 60 62 62 62 64 65 66 ‫؛ﻉ‬6 68 68 Bài 16: Các thi nghiệm kiem tra kha nànỉg phiảỉ;i gtiai c;ổc hop clìàt hữu co khOng chưa n‫؛‬tơ cua vi sinh vặt 69 Qua trinh lèn men rượu {Ethanoh 16.1 69 Qua trinh men lactic16.2 72 Qua trinh men butvric16.3 73 Qua trinh lèn men acetic 16.4 75 Quá trinh phần g 16.5‫؛‬a‫ ؛‬cellulose 76 Ba‫ ؛‬cac thi nghiệm kiếm tra kha nầaig p :17‫؛‬hàn gia‫ ؛‬cắc hợp chat hừu chứa n it cUa vi sinh vật 77 Qua trinh amonium hỏa protein 17.1 77 Qua trinh amoniUm hOa urea 17.2 '٠ 79 Qua trinh nitrate hóa17.3 80 Qua trinh phản nitrate hOa sa 17.4 Bai 18: Phưmtg phap phân lập va nuOi ca'y cồc nhóm vi sinh vật tham gia vảo chuyến hOa cac chat khoáng 32 Vi sinh vột tham gia vầo chuyen h0)a ca(c hợR) chả.t luư hu۶ nh 18.1 32 Vi sinh vạt tham gia vảo chuyến hOa cd.c hợ 18.2‫ﺇ‬p cha'‫ ؛‬phospho 39 Vi khuẩũi sát18.3 ‫ﺍﻭ‬ Vi khuấEi silicate18.4 92 Chưaì g ٢ PHƯƠNG PHAP NGHIEN cưu khả n n g tạo sả n PHẤM bậc hai ١ơ SINH VẠT 91 BJi 19: Phương pháp nghièn cứu tổng hợp chất khắng sinh ٧ ‫ ؛‬sinh vật 1 ‫ ﻭ‬Nguyèn tẩc lỡ.2 Nguyèn liệu, dụng cụ hóa chất 19.3 Cach tiến hhnh Bai 29: Phương phdp nghièn cứu tổng hợp chất kích thích sinh trương ĩhực vật B;i، 21; Phương phap nghièn cứu tổng hợp acidamin vi sinhvật Bài 22: Phương phap nghiên cứu tổng hợp vitamin B12ơ vi sinh vật Chương ‫ﻻ‬.' PHƯƠNG PHAP NGHIEN cưu VA t h u n h ậ n sin h khối VI SINH v Ạt Bin 23 Thu ،،hjn sinh kho'‫ ؛‬nà'm men banh mi Bài 21 Thu nhạn sinh kho'‫ ؛‬thuO'c trừ sâu sinh học Ba، 25 Thu nhdn sinh kho'‫ ؛‬phan sinh học Chương 9: PHƯƠNG PHAP THU NHẬN VA XAC ĐỊNH HOẠT TINH ENZYM TI, '١٦ SINH V.^T Bui 26: Phương phap fhu nhíịn chè' phà'n١ enzyme vi sinh vẶt tho từ phương phdp nuO‫ ؛‬c.a'v be mat Bí'11 27: Phương phap thu nhận cho' phOm enzyme vi sinh vặt tho từ phương phap nuOl cd'y chim Bi'،، 28: Thu nhdn che'phả'm enzyme ban tinh khio't Ba، '29: cac phươíig phap kiOm tra h.ạt tinh enzyme vi sinh v.t 29.1 Phương phap kiO'm tra hoạt tinh amylase 29.2 Phương phap kiOm tra hoạt tinh protease 29.3 Phương phap kiOm tra hoạttinh cellulase 29.4 Phương pháp kiOm tra hoạt tinh urease 29.5 Phương pháp kiOm tra hoạt tinh pectinase 94 94 94 95 96 97 98 103 103 105 105 108 108 110 111 112 112 115 121 124 126 Chương 10: PHƯƠNG PHÁP KIEm tra s ổ ^ SINH VẬT GÀY BỆNH 130 Bài 30: Phương phap kiếm tra Escherichia coli cắc collform khác 30.1 Phương phap xac định colifonn Exoli 30.2 Phat h‫ ﺇ‬ện nhanh cỏ mặt cUa E.coỉi thực phẩm đống lạnh íkhOng kế cac loai ^áp xác) phương phap MUG Bai 31; Phương phap kiẻ.m tra Salmonella Bai 32; Phương phap kiếm tra Shigella Bài 33; Phưỉmg phấp kiếm tra Vibrio cholerac Bai 34: Phương phap kié'm tra Vibrio parahaeniolyticus Bai 35: Phương phap kiẻ.m tra Aeỉvnionas hydrophila B a ‫ﺇ‬: Phương phap kiem tra Ycrsiiiia enterocolitica 130 131 134 143 160 164 171 176 181 Bài 37: Phương pháp kiểm tra Listeria Bài 38: Phương pháp kiểm tra Staphylococcus aureus 00.1 Đêm khuán lạc thạch đìa - phương pháp cấy gạt 38.2 Phương pháp MPN Bài 39: Phương pháp kiểm tra enterotoxin tạo vi khuẩn Staphylococcus Bài 40: Phương pháp kiểm tra Bacillus cereus Bài 41; Phương pháp kiểm tra Clostridium botulinum Bài 42: Phương pháp kiểm tra Clostridium pcrfriiigens Bài 43: Phương pháp kiếm tra Campylobacter 187 193 194 197 197 204 209 214 217 Chương 11: PHƯƠNG PHÁP NÂNG CAO CHẤT LƯỢNG GIỐNG VI SINH VẬT 229 Bài Bài Bài Bài Bài 44: 45: 46: 47: 48: Phương pháp huấn luyện thích nghi Phương pháp lai Phương pháp gây đột biến bàng tác nhân hóa học Phương pháp gây đột biến tác nhân vật lỷ Thí nghiệm biến nạp d vi sinh vật Chương 12: PHƯƠNG PHÁP PHÂN LOẠI MỘT s ố VI SINH VẬT THƯỜNG SƯ DỰNG TRONG CÔNG NGHỆ SINH HỌC Bài 49: Phân loại số vi khuẩn 49 ĩ Phần loại Pseudonumas 49.2 Phân loại Aceíoòacíer 49.3 Phản loạỉ Vỉòno 49.4 Phân loại Spirillum 49.5 Phân loại ProiGus 49.6 Phân loại Sa/mo?ií٠//o 49.7 Phần ìoãi Rhizobiuni 49.8 Phân loại Azotobacter 49.9 Phản loạỉ BeỤerinckia 49.10 Phân loại Aeoíomanas 49.11 Phân loại Shigella 49.12 Phân loại Brevibacterỉum 49.13 Phân loại Streptococcus 49.14 Phân loại Leconostoc 49.15 Phân loại Lactobacillus 49.16 Phân loại Bacillus 49.17 Phân loại Clostridium 49.18 Phân loại Mycobacterium Bài 50: Phâni loại số nấm men 50.1 Khóa phân loại nấm men đến giống cũa Lodder 50.2 Khóa phân loại nấm men đến giống Kudriavtxev 50.3 Khóa phân loại nấm men đến giống Phương Tâm Phương 229 230 231 231 232 234 234 234 240 241 242 243 43^‫؛‬ 244 244 244 245 245 246 247 249 249 250 252 259 260 262 265 266 50.4 KhOa phân loạ‫ ؛‬các loài nấm men 50.5 Khóa phân loại loài nấm men giống Saccharomyces 50.0 KhOa phân loại cắc loài nấm men giống phụ Saccharomyces Bai 51: Phânloạimộtsốxạ'khuấ'n 51.1 KhOa phân loại xạ khuẩn cUa Krassilnikov 51.2 KhOa phân loại xạ khuầ'n cUa Waksman Bài 52: Phán loại số nấm mốc 52.1 KhOa phân loại nấm thường gặp 52.2 Bang phân loại dến nhOm 52,5 GiOng Pcìiicillium 269 290 291 292 292 307 321 321 355 373 Chương 13: MỘT SỐ MÒI TRƯỜNG NUÔI CẤY VI SINH VẬT THƯỜNG SỬ DỤNG 405 A Mồi trường nuôi cấy vi khuẩn B Môi trường nuối cấy nấm men c Môi trường nuOi cấy nấm mồ'c (nấm sợi) D Mói trường nuồi cấy xạ khuẩn E Môi trưởng nuõỉ cấy tá 405 44‫ﺁﻉ‬ 446 447 448 Chương 14: DUNG DỊCH VẢ THƯỐC THƯ 449 Chư'ơng 15: CẮC CHẤT NHUỘM MÀU 460 TAi l iệ u THAM KHÀO 463 LỜI NÓI ĐẦU Vi sinh udt học môn khoa học nghìên cứa oề qui luật cUa gìới sinh odt \)ô cUng nhồ bé Cdng nghệ oi sinh odt học Id khoa học Ung dụng cdc qui luật odo ‫ ﺍ ﺅ ﺝ‬sống od la t ٣ong ndm hudng phdt t ٣lển rdt mạnh cUa cdng nghệ sinh học THÍ NGHIỆM VI SINH VẶT HỌC đuợc blèn ,'soạn nhdm glUp sinh olên, cdn ks thudt ngdnh sinh oật học١ cdng nghệ 'thực p ١١,dm od cdng nghệ sinh học: Những k5 ndng thục ^^dnh co bdn oè ol sinh odt học*١ K5 ndng oè cOng nghệ ol sinh oật to n g phOng thl nghiệm Bao gồm todn k5 thudt: pldn Idp, phdn loạl٠ tu^iền cÍLọn, glữ ^ổngi " Cdc phương phdp nghlèn cứu thu nhận sàn phdm bdc 1, bậc 2; - Các phương phdp kiềm t ٣ a qud t ٣ lnh t٣ ao dổl chdt ol sinh oật‫؛‬ - Các phương phdp ddnh gia chdt lượng sdn pl^dm cUa ol sinh od٤ Đáỵ tập tai liệu THÍ NGHIỆM CÔNG NGHỆ SINH HQC t ٣ ong Chương trtnh ddo tqo k5 sư ngdnh cdng nglLệ sinh hqc T٣ ường Đạl hqc Bdch khoa-B ql h‫ ؟‬c Quổc gla thdnh phố Hồ Chl Minh Sách na‫ ﻻ‬cỏ tliể cd nỉ^ững sal sdt ìioặc không ááp ứng hỂt ^?èu cdu cUa người sử dụng, hy vọng nhận dược nìúểu ‫ ﺭﺩ‬kiến đóng góp cda bqn đqc Mọi ‫ ﺭﺩ‬kiển dồng góp xin gửi về: Bộ môn Công nghệ sinh học Trường Đạỉ học Bách khoa ·ẳĐại học Quốc gia TP Hồ Chi Minh 268 ‫ ﻵ‬Thường Klệt٠ Quận 10, TP HCM Tcl: 639 341 - 0913 742 766 Chủ bỉên PGS.TS Ngu‫ ﺓﻻ‬n Bức Lương Chương NHỮNG NGUYÊN TẮC bàn CÙA PHÒNG THÍ NGHIỆM VI SINH VẬT HỌC BÀ11: NỘI QUI PHÒNG THÍ NGHIỆM VI SINH VẬT HỌC Vi sinh vật sống có kích thước vô nhỏ bé mà mắt thường không thẻ thấy Bên cạnh giống, loài vi sinh vật có ích cho sống người nhừng giống, loài có khả gây bệnh có hại sức khỏe người Chính người làm thí nghiệm phòng thí nghiệm vi sinh cần phải tuân thủ qui tắc sau đáy: 1- Phái chuân bị cho mồi buối thí nghiệm cách đọc kỹ làm quen với qui tắc phương pháp có liên quan đến thí nghiệm, nhằm sử dụng thời gian cách hiệu đồng thời giảm thiểu tối đa rủi ro xảy làm thí nghiệm 2- Không án uống, hút thuốc, nói chuyện ồn tiến hành thí nghiệm 3- Phải mặc áo blouse phòng thí nghiệm, tuyệt đối không để môi trường hay vật phấm cổ vi sinh vật dấy lên quần áo, giấy tờ dụng cụ cá nhản Đồng thời cQng phải chủ ý bảo vệ da quần áo khỏi bị dính hóa chất thuốc nhuộm 4- Chi đem đồ vật cho phép vào phòng thí nghiệm, tài liệu hướng dẫn thực hành, sổ sách ghi chép, vật liệu thí nghiệm khác Tất thứ khác áữ khoầc túi xách, sách vớ phái đặt nơi qui định, cách xa nơi làm thí nghiệm 5“ Trước lúc bắt đầu làm thí nghiệm, phải sát trùng bề mặt bàn thí nghiệm hóa chất sát trùng đá chuẩn bị sẳn lau khô giấy vệ sinh Lặp lại công việc lần nừa sau đả hoàn thành thí nghiệm, Tất vật liệu hóa chất thí nghiệm tên vật liệu, hóa chất phải ghi xác tên người làm thí nghiệm, tên lớp học ngày làm thí nghiệm, dể tránh nhầm lần sứ dụng vứt bỏ vật liệu, hóa chất 7- Chú ý, phải thận trọng để không làm đổ, vỡ hư hóng trang thiết bị dụng cụ 8- Phái ý cẩn thận sử dụng đèn cồn Không đốt đèn cồn không sứ dụng Thao tác cấn thận tránh làm bỏng tay gây hỏa hoạn 9- Tất cá vật liệu bị nhiễm bẩn cần phải khử trùng trước vứt bỏ sử dụng lại Các vật liệu cần khử trùng phải đặt nơi qui định 10- Khi kết thúc thí nghiệm, cần phải vệ sinh thiết bị, dụng cụ sứ dụng theo qui trình phái xếp chúng vào nơi qui định 1 Sau lần làm thí nghiệm, phải rửa tay sè trước rời phòng thí nghiệm 12 Trong trường hợp có tai nạn hay bị thương, báo cho cán phòng thí nghiêm đê chữa chạy kịp thời Chương 14 450 R - F e r r o u s am m onium su lfate 1% Fe(NH )2(S )2 100 Nước cất 1g ml R9- N c m u ố i sin h lý form alin h ó a Dung dịch formaldehyde (36-38%) NaCl 8,5 ml Nước cất Hòa tan 8,5 g NaCl nguội đến n h iệt độ phòng Thêm ml lít lít nước cất Hấp tiệ t trùng 15 phút 121‘‘C Làm ml dung dịch formaldehyde K hông hấp tiệt trùng sau th êm formaldehyde RỈO- M ô i tr n g th ạch g el k h u ế c h tá n , 1,2% NaCl 8,5 g Natri barbital 8,0 g M erthiolate (kết tinh) 0,1 g Thạch Noble đặc biệt (Difco) 12,0 g lít Nước cất Hòa tan NaCl, natri barbital, m erthiolate 900 ml nước cất Điều chỉnh pH 7,4 với dung dịch HCl IN và/hay NaOH N Pha loăng tới lít T hêm thạch Noble Hơ nóng hỗn hợp thạch tủ Arnold Lọc tủ hơi, nóng, qua hai lớp giấy lọc loại sử dụng cho phân tích Cho th ể tích nhỏ (15-25 ml) vào lọ có vạch chia thể tích Không làm tan chảy lại môi trường hai lần R l l Đ ệ m G el-P h osp h ate G elatin g НагНР04 g Nước cất lít Đun nống nhẹ để hòa tan thành phần T iệt trùng 20 phút 121.С pH cuối = 6,2 R12- D u n g d ịc h G lycerin - M uối (đệm) Glycerin (loại dể thử) 100 ml K 2HPO (khan) 12,4 g KH 2PO (khan) 4g NaCl 4,2 g Nước cất 900 ml Hòa tan NaCl pha loãng đến 900 ml với nước Thêm glycerin phosphate Điều chỉnh pH 7,2 Hấp tiệt trùng 15 phút 121.C Đối với dung dịch glycerin 20% (nồng độ dôi), sử dụng 200 ml glycerin 800 ml nước cất R13- D u n g d ịc h H ippurate 1% N atri hippụrate 0,1 g Nước cất 10 ml Hòa tan ١ft٠ong nước cất lọc vô khuẩn qua m àng có đường kính lỗ 0,45 pm Bảo quản tủ lạnh hay theo thể tích 0,4 ml d - 20 C R14- A c id h y d ro ch lo ric N HCl (đậm đặc) 89 ml Thêm nướccất cho đủ lít R15- D u n g d ịc h cồ n - acid Ethanol (95%) 97 ml Thêm acid vào ethanol Không hít khói acid HCl đậm đặc ml D u n g d ịc h v t h u ố c t h 451 R 16 Thuỗ c th K o v a c s p-dimethylaminobenzaldehyde 5g isomyl alcohol (isopentyl) 75 ml HCl (đậm đặc) 25 ml Hòa tan p.dimethylaminobenzaldehyde isoamyl alcohol Thêm HCl từ từ Bảo quán ỏ 4‘C lọ thủy tinh màu hay lọ plastic Để test tạo thành indole, thêm 0,2-0,3 ml thuốc thứ v ml môi trường dịch thể tryptone có vi khuẩn cần xác định 24 tuổi Nếu có hình thành màu đỏ đậm bề mặt chứng tỏ test dương tính R17- M cF a rla n d N e p h e lo m e te r Chaẩn bị huyền phù barium sulfate sau: 1- 3u٠ng dịch sulfuric acid (hóa chất tinh khiết) 1% 2- 3u:ng dịch barium chloride (hóa châ't tinh khiết) 1% 3- Chuẩn bị 10 huyền phù chuẩn sau: Thêm (ml dung dịch barium chloride 1%) (ml dung dịch H S l%) 98 99 97 96 94 95 92 93 91 10 4Cho thể tích ml huyền phù chuẩn vào ống nghiệm nhỏ niêm kír ô)'ng nghiệm lại Lưu ý phải chọn ống nghiệm cho chúng đồng màu, đưèng‫ ؟‬kính bề dày thành ông R18- Dung‫ ؛‬d ịc h M e r c u r ic C h lo r id e 0,1% Thìy ngân chloride 1,0 g Nước cất lít R19- C h c h ỉ th ị M e th y l R e d Mrthyl red 0,10g Etiamol 95% 300 ml Nư^c cất thêm đến 500 ml Hòa ttan methyl red 300 ml ethanol Thêm nước cất để thể tích 500 ml Cho vàocrong bình nhỏ giọt R20- Dần k h o n g Hâp ítiệt trùng 30 phút 121.C Sử dụng bình chứa có nút bần, dầu chiếm khoảng V2 thể tích (của bình, từ 20-50 ml R21- D u ٢ig ٢ d ịc h N e u tr a l R e d Đỏ trung tính 0,2 g Etảauol tùy ý Niớc cất 100ml Hòa tan đỏ trung tính lượng nhỏ ethanol chứa bình đo thể tích dung tícl 1Ю0 ml Thêm nước cất để đạt tới vạch định 452 Chương 14 R22- T h u ố c th N in h y d r in Ninhydrin 3,6 g Acetone/butanol (hỗn hợp 1:1) 100 ml Hòa tan ninhydrin hoàn toàn bảo quản tủ lạnh R23- Thudfc th p h t h iệ n n itr ite A■ Thuốc thử acid sulfanilic: Acid sulfanilic 1g Acid acetic N 125 ml 5- Thudc thừ N‘(1-naphthyl) ethylenediamine N-(l-naphthyl) ethylenediamine dihydrochloride 0,25 g Acid acetic N " 200 ml C- Thuốc thử alpha-Naphthol alpha-Naphthol 1g Acid acetic N 200 ml Để chuẩn bị add acetic N, thêm 28,75 ml acid acetic báng vào 71,25 ml nước cất Bảo quản thuốc thử lọ màu nâu có nút thủy tinh Để tiến hành test này, thêm 0,1 - 0,5 ml thuốc thử Avà 0,1 - 0,5 ml thuốc thử в c (theo hướng dẫn phưcmg pháp) để vi sinh vật phát triển môi trường lỏng hay bán lỏng Sự hình thành màu đỏ tím với thuốc thử А в hay màu cam với thuốc thử А c chứng tỏ nitrate bị khử nitrite Do màu sình với thuôc thử A в mau phai biến vài phút, phải ghi nhận kết màu xuất Nếu tạo màu, test phát cố mặt nitrate thực cách thêm lượng nhỏ bụi kẽm Nếu màu xuất chứng tỏ nitrate không bị khử R 24- T h u ố c th o x id a s e t e s t N, N, N٠, N ٠-tetramethyl-p-phenylenediamine.2HCl g Nước cất 100 ml pH = 5,5 Cho thuốc thử vừa pha trực tiếp vào vi khuẩn phát triển môi trường thạch đĩa hay thạch nghiêng Các khuẩn lạc dương tính cho oxidase có màu hồng từ từ chuyển sang màu tím Sử dụng vi khuẩn tương đối tuổi cho test Sử dụng dung dịch vừa pha, nhựng dung dịcl) bảo quản đến ngày bóng tôl điều kiện lạnh sử dụng dược Test tiến hành cách xát vi khuẩn lên giấy lọc có tẩm thuốc thử، Sử dụng dây cấy platin sát cho phản ứng dương tính giả Hay cách khác, cho dung dịch N, N, N', N’-tetramethyl-p-phenylenediamine hydrochloride 1% trực tiếp vào thạch đĩa hay thạch nghiêng có chứa vi khuẩn Để giữ vi khuẩn, thực cấy chuyền phút Thuốc thử độc vi sinh vật R25- D u n g d ịc h p e p t o n e 0,1% d ù n g đ ể p h a lo ã n g m ẫ u Peptone 1g Nước cất lít Hấp tiệt trùng 15 phiịt 121.C pH cuôi = 7,0 ± ,2 453 D ung d ịcb th u ố c th R26- D u n g d ịc h g e la t in a s e 5% Gelatinase 5g Nước cất 100 g Cho gelatinase vào nước cất Ly tâm 10 phút 500 rpm vô khuẩn phương pháp lọc qua màng lọc cổ đường kính lỗ 0,45 fim Rót thể tích 100 ml vào lọ R27- Đ ệ m s a lin e p h o s p h a te 0,02 M Chuẩn bị sẵn dung dịch mono- disodium natri phosphate 0,2 M nước muối 8,5% pha loãng theo tỉ lệ 1:10: Dung dịch ĩ: Nh2HP 04 (khan) (mức thuốc thử) 28,4 g 85.0 NaCl (mức thuốc thử) lít Nước cất thêm đến Dung dịch 2: NaH2P 04 ٠H20 (mức thuốc thử) 27,6 g 85.0 NaCl (mức thuố٠c thử) lít Nước cất thêm đến Để có dung dịch đệm saline (0,85%) phosphate 0,02 м , pha loãng dung dịch chuẩn bị sẵn theo tỉ lệ 1:10 Ví dụ: ‘ Dung dịch sẵn 150 ml Nước cất 450 ml pH khoảng 8,2 ٠Dung dịch sẵn 210 mi Nước cất 90 ml pH khoảng 5,6 Sử dụng máy đo pH, chuẩn lại dung dịch pha loãng pH = 7,3 - 7,4 cách thêm khoảng 65 ml dung dịch đâ pha loảng Dùng dung dịch đệm saline phosphate 0,02 м để test tính mẫn cảm S.aureus lên lysostaphin Lưu ý: Không chuẩn dung dịch đệm saline phosphate 0,2 м pH = 7,3 - 7,4 pha loãng thành dung dịch 0,02M, gây giảm pH 0,25 Việc thêm nước muối sinh lý 0,85% sau điều chỉnh pH làm pH giảm 0,2 đơn vị R 28 D u n g d ịc h n c m u ố i s in h ỉý v ô k h u ẩ n 0,85% NaCl 8,5 g Nước cất lít Hòa tan 8,5 g NaCl nước Hấp tiệt trùng 121.C 15 phút Làm nguội đến nhiệt độ phòng R29- KOH 0,5% tr o n g N a C l 0,5% NaCl KOH Nước cất thêm đến 5g 5g lít R 30- D u n g d ịc h KOH 40% KOH 40 g Nước cất thêm đến 100 ml 454 Chương 14 R31- D u n g d ịc h n c m u ô i s in h lý v ô k h u ẩ n 0,5% NaCl 5g Nước cất Hòa tan muối nưởc Hấp tiệt trUng 121.C 15 phut lit R32- D u n g d ịc h b ả o q u n p h iế n k in h Chuẩn bị dung dịch acid acetic 1% Thêm ml glycerin vào 100 ml dung dịch R33- N c p h a lo ã n g N a C l 3% NaCl 30 g Nưởc cất lit Hấp tiệt trUng ỏ 121.C 15 phut pH cuối = 7,0 Sử dụng cOng thức dể chuẩn bị chất pha loãng mẵu dồng thòi mầu tráng phần tích V paraìiaemolyticuSí R 34 D u n g d ịc h N aC l 0,2 M NaCl 11,7 g Nưởc cất lit Cho vầo cắc binh chứa thích hợp Hấp tiệt trUng 121.Ctrong 15 phut R35- S o d iu m c itr a te 3,8% Natri citrate 38 g Nưởc cất lit Hòa tan 38 g natri citrate nư٥ c Hấp tiột trùng ٥ I21 ٧ c 15 phut Lầm nguội dến nhiột độ phbng bẩo quản ٥c R se - T h u ố c th N a tr l H lp p u r a te Natri hippurate 0.1 g Nư٥ c cất 10 ml Hồa tan nư٥ c cất l‫ ؟‬c vồ khuẩn qua mầng lọc cổ dường kinh 1‫ ﺝ‬lọc 0,45pm Bảo quản tU lạnh hay thể tlch 0,4 ml - 20.C R87- D u n g d ịc h N a H N NaOH 40 g Nước cất thèm dến Nếu sử dựng dung dịch NaOH 0.1 N thl chi dùng g NaOH Sử dựng dế điểu chỉnh pH m٥ i trường nu٥ i cấy R38- T e r g íto í A n ío n lc llt ٠ Thuíc thử nảy dân xuất natri sulfate 3,9-diethyl tridecanol-e, dược sử dựng dế lầm ư٥ t tạo nhữ tương chất diện phần !%' cắc ngầnh c٥ ng nghiộp dật, polymer lỏng, mủ cao su, da vồ dược phẩm Tergitol ٠7™ tốc nhần lảm ư٥ t mang diộn tích âm, dược sàn xuất bón thị trường R ٥ T r ito n X.IOO™ Thuốc thử lả nhãn hiệu đả dâng ký cho octylphenoxy polyethoxy ethanol, dược sử dụng lầm tấc nhân lầm ưdt, chất tẩy rửa, chất phân tốn, tạo nhu tương vệ sinh gia dụng công nghiệp, công nghiệp dệt, tẩy len, tấc nhắn tạo nhu tương cho cắc thuốc diệt côn trùng diệt cồ, Triton X'100 sẳn phẩm trung hòa vể diện dược sẳn xuất bốn trẽn thị trưồng 455 D ung dịch th u ố c th R40 Thuốc th te st VP (Voges-Prokauer) Dung dịch ĩ: Alpha-naphtol 5g 100 ml Cồn tuyệt dối Dung dich 2: 100 ml Nưởc cất thêm dến KOH 40 g Cho dung dịch vào cấc binh nhỏ giọt VP test: nhiệt độ phbng, lấy ml dịch chứa vi khuẩn 4S gidtuổi vào ống nghiệm thêm 0,6 ml dung dịch 0,2 ml dung dịch Lắc sau thêm dung dịch Dê tâng cưởng tốc độ phản ứng, thêm vài tinh thể creatine vầo hỗn hợp Bọc kết sau kế' từ thêm thuốc thử Nếu cố mầu hồng eosin xuất thi test lả dương tinh V R41- Huyết tương (dạng khan dể test coagulase) Huyết tương dạng dOng khô có bổn sẵn thị trường (như cùa Difco hay BBL Becton Dickinson, ) R42-Dung dịch acid HCl 0,5% HCl đặc R43- Dung dịch H 2SO 11,3 ml K s c 1‫ﺓﺛﺎ‬ 1000 ml 1% H 2SO4 đậm đặc 500 ml 2,93 m.l R44 Ether cổn Ethanol ether 10 ml Ethanol 957( 10 ml R45- Iodine đậm độc Iodine ٦١٤ 20 g KI Nước cất 100 ml H٥a tan trườc icdlne vào KI rỗi m٥ i hba vầo 20 ml nư٥ c- Sau đó, hba tan tất cồ vầo lượng nu'٥ c c٥ n lại R46" Dung dịch Lug.1 Iodine tinh thể Ig KI 2‫؛‬ Nư٥ c cất thèm dến 300 ml N‫؛‬hiền KI cối vdi 6-10 ml nước cất Thêm iodine tinh thể vằo nghiển cho dến hòa tan hoần toần Cho dung dịch nghiển vằo cốc dong thêm nưức cất dến 300 ml Baoquản lọ mầu vả vbng 30 ngày trưởc sử dụng R47- Dung dịch Soudan III Soudan III 0,05 g Ethanol 96% 100 ml Nưóc cất thèm dến 100 ml R48- Dung dịch tin h b ộ t 0,1% 1% Tinh bột 0,1 g Chương 14 466 Trộn tinh bột với khoảng 10 ml nước cất, thêm tiếp 80 ml nước cất sôi, khuấy đều, để nguội, thêm nước cất đến 100 mi Đòi với dung dịch tinh bột tiêu chuẩn v/f sử dụng g tinh bột Nếu sử dụng dung dịch tinh bột % đệm phosphate 0,05 M, pH= ,0 , sử dụng lượng tinh bột g thay nước cất dung dịch đệm phosphate 0,05 M, pH = 6,0 Để bảo quản, thêm g natri benzoexan R49- D u n g d ịc h io d in e 0.02% KI 2g Iodine 0,26 g Nước cất thêm đến 100 ml Hòa tan g KI ml nước cất, thêm 0,25 g iodine, lắc cho tan, thêm nước cất đến 100 ml R50- D u n g d ịc h io d in e p h a lo ã n g Iodine 1g KI 2g Nước cất thêm đến 300 ml Hòa tan g iodine ml dung dịch có chứa g KI, thêm nước cất đến 300 ml Khi sử dụng, pha loãng dung dịch 150 lần R 51 Thuo'c th đ n g I 200 g (356 g) N82804 khan (hoặc N82804 IOH2O) 20 g NaHCOa НагСОз khan (hoặc tinh thể) 25 g (50 g) Muối seignet 25 g Nước cất lít Hòa tan N82804 600 ml nước cất sôi Chuẩn bị 100 ml dung dịch có chứa 25 g muối seignet Cho hai dung dịch vào bình định mức lít Thêm NaHCOa Na2C03 vào, lắc cho hòa tan thêm nước cất đến vạch Lọc, cần thiết Bảo quản 30 37٥c Nếu có tinh thể xuất thời gian bảo quản, đun nhẹ nồi cách thủy trước đem dùng R52- Thuô'c th đ n g II CUSO4.5H2O 15 g H 2SO4 đậm đặc - giọt Nưức cất thêm đến 100 ml Hòa tan CUSO4.5 H O nước cất, thêm 1-2 giọt H 2SO4 đậm đặc, thêm nước cất đến 100 ml R53- T h u ố c th a r s e n o m o ly b d e n Ammonium molybdate H 2S O đậm đặc Dung dịch chứa g N a H A s H O Nước cất 25 g 31 ml 25 ml 400 ml D ung dịch th ố c th 457 Hòa tan ammonium molybdate 400 ml nước cất thèm 31 ml H^so^ dậm dặc) trộn lẫn với 25 ml dung dịch cO chứa g Na2HA،s04 7H20 ٠ bảo quản lọ mầu nâu 30 37('c 24-48 h, 55٧ c 25 phut R54" D u n g d ịc h h e m o g lo b in b iế n tin h 2% Urea Hemoglobin 36 g 2g Acid boric 6,184 g Dung dịch NaOH 0,1 N ml 0.292 g 4,4 ml Nacl Dung dịch CaCl2 ()/( Nước câ't khoảng 200 ml Chuẩn bị dung dịch acid boric M: hOa tan acid boric NaCl vào nướCj cho vào binh định mức 100 ml, thêm nưức cất cho dê'n vạch Trộn hemoglobin với 50 ml nước cất, cho vào ống dong 100 ml, thèm urea dung dịch NaOH vào thêm nước cất cho dến vạch 80 ml Giữ nhiệt độ phOng h, thêm 10 ml dung dịch acid boric M, lắc cẩn thận thêm 4,4 ml dung dịch CaCl^ 57c Điều chỉnh pH gia trị theo yêu cầu dung dịch NaOH N hay HCl N Thêm nưởc cất dến vạch 100 ml R 55 D u n g d ịc h c a s e in 2% Casein hòa tan 2g Dung dịch dệm thích hợp 100 ml Cho casein vào cốc 100 ml, thêm dung dịch dệm có pH xác định, dun cách thUy cO khuâ'y dều cho dến hOa tan hoần toàn, làm lạnh, thêm dung dịch dệm dến 90 ml Diều chinh pH giá trị theo yêu cầu dung dịch NaOH N hay HCl N Thêm dung dịch dệm dê'n vạch 100 ml Nếu casein hòa tan thl sứ dụng casein khOng hòa tan hay casein tự diều chê' từ sữa Cân g cho vào cốc 100 ml Thêm 30 ml dung dịch NaOH 0,1 N, dun cẩch thUy khuá.y dều cho dê'n hòa tan hoàn toàn, dế nguội Cho từ tư dung dịch HCl 0,1 N vảo khuâ.y liên tục dể diều chinh pH gia trị cần thiết Nếu sứ dụng dung dịch dệm phosphate thi cố thế' dUng dung dịch có tinh acid cUa hệ dung dịch dệm nầy (chẳng hạn KH 2PO/ị) đế' diều chỉnh pH Cho vầo binh định mdc 100 ml, thêm dung dịch dệm dê'n vạch 100 ml Kiểm tra lại pH Các dung dịch dệm thưởng dược sử dụng la Tris-HCl 0,05M, dệm phosphate 1/15M, dệm citrate, R56- ThuôC t h F o lin - C i.c a lt e u Na2WO4.2 H.2O Dung dịch acid phosphoric 85%, 100 g Na2MoOf2H20 HCl dặc Dung dịch brome 25 g 100 ml vài giọt 50 ml LI2SO 150 g Nưóc cất thêm dến lit Cho vào bình cầu đáy tròn dung tích lít (có ống sinh hàn có bầu) Na2W04 2H 20, Na2Mo04.2H20 , dung dịch acid phosphoric 85%, HCl đặc 700 ml nước cất Lắp ống sinh hàn, nối với dòng nước lạnh, đun 10 bếp điện Cho L Ì2S O 50 ml nước cất vài giọt brcme vào bình, lắc đều, đun tiếp 15 phút để loại brome thừa Làm lạnh thêm nước cất đến lít, lọc Thuốc thứ phải màu xanh Bảo quản lạnh, lọ màu nâu Nếu thuốc thử lại có màu xanh, cho vào bình cầu, thêm vài giọt brome đun 15 phút 458 Chươnsỉ 14 R57- Dung dịch tyrosine chuẩn ^mol/ml Tyrosine tinh khiết 18,12 mg Dung dịch HCl 0,2 N 100 ml Hòa tan tyrosine vào dung dịch HCl 0,2 N, cho vào bình định mức 100 ml thêm dung dịch HCl 0,2 N vào vạch R58 Dung dịch casein 0,1% Casein 0,1 g Dung dịch natri carbonate 100 ml Hòa tan casein dung dịch natri carbonate, đun nhẹ khuấy hòa tan R59- D ung dịch acỉd acetic 1% ethanol Acid acetic đặc Nước cất Ethanol 96% Hòa acid acetic đặc nước cất ethanol ml 49 ml 50 ml R 60 D u n g d ịc h g e la tin 2% Gelatin 2g Nước cất 15 - 20 ml Dung dịch đệm có pH thích hợp thêm đến 100 ml Ngâm gelatin cốc chứa 15 - 20 ml nước cất thời gian 30 phút Thêm 25 40 ml dung dịch đệm đun cách thủy có khuấy với đũa thủy tinh 70 - 80"C gelatin tan hoàn toàn Thêm dung dịch đệm đến 100 ml Bảo quản - ngày tủ lạnh Trước dùng, đun nóng nồi cách thủy 40'٠c R Ỉ- H ỗ n hỢp fo r m o l Dung dịch thymolphtalein 1% Dung dịch formol 407( Dung dịch NaOH 0,1 N Cho thymophtalein vào dung dịch formol, thêm vài có màu xanh nhạt, ml 50 ml vài giọt giọt dung dịch NaOH R 62 T h u ố c th N e s le r KI 10 g Hgl.i 15 g Dung dịch NaOH 50'/( 80 mlNước cất loại CO;^, thêm đến 500 ml Hòa tan 10 g KI 15 ml nước cất, thêm 15 g Hgl|^, khuấy cấn thận thêm 80 ml dung dịch NaOH 50% Khuấy đều, thêm nước cất vào dến 500 ml Để ngày đêm phòng, lọc qua thủy tinh, thu lấy phần dịch R63- T h u ô c th u p h e n m e n Phenol 5% Nước cat R64- D u n g d ịc h B a(O H )2 10 ml 25 ml FeCl.j 5% ml 10 % Ba(OH)2 10 g Nước cất thêm đến 100 ml 1g Nước cất thêm đến 100 ml R65- D u n g d ịc h K 2C r 2Ơ7 1% K2Cr207 D u n g d ịc h th u ố c thử 459 R66- D ung dịch AgNOa ammoniac AgNO, 10 g Thêm vài ml ammoniac Nước cất thêm đến 100 ml 60,6 ml Nước cất thêm đến lit 5g Nước cất thêm đến 100 ml 20 g Nước cất thêm đến 100 ml ml Dung dịch Puchsin (Sl) 10 ml R 68- D ung dịch H 2SO4 10% H2SO4 đặc R69- D ung dịch FeCla 5% FeCl3 R70- D ung dịch NaOH 20% NaOH R71- Thuôc th Crup Dung dịch H2SO4 37( R72- Thuôc th E hrlish p.dimethylaminobenzadehyde Rượu butyric HCl đậm đặc 5g 75 ml 25 ml R73- Thuố.c th hỗn hỢp A (kẽm - iodne " tinh bột) Znl2 g Dung dịch ZnCl2 207r 50 ml Tinh bột g Hòa tan tinh bột vào 10 ml nưởc, vừa hòa tan vừa bổ sung ZnClii vố dun cố khuấy cho ổến s‫؛‬ổi Hba tan Znlí 390 ml nước Báo quản lọ mằu, R 74 T h u ô c th G r iss I v II - Thuốc thử Griss I: Acid sulfunilic ٠ T ì ì u Ổc thử Grias II: Naphtylamine Nưức cất H٥ a tan naphtylamine trước 0,5 g Acid acetic N 0,5 g Acid acetic N 50 ml nước rối mdí bổ sung acid acetic 150 ml 150 ml R ٥- T h u ố c th B r u x ín Sruxin 0,2 g H 2SO dậmdặc 100 ml R 76- N ٥ c p e p to n e k iể m Peptone 10 g NaCl 10 g Nước câ't lit Điều chinh pH đế' hấp tiệt trùng xong thi dạt 3,5 ± 0,2 rót vào cẩc ô'ng nghiệm có nUt b;ần Hâ'p tiệt trUng 10 phut ‫ ة‬I21 c Hòa tan Na2Hp 04.7H2O, NaHsPO^.H^O, KCl, MgSO^.^H^O vầo 800 ml nưởc cất, thêm 2,7 ml z.mercaptoethanol, diều chỉnh pH 7,0 thêm nưởc cất dê'n ht k h Oing h ấ p t iệ t t r U n g ٧ Chương 15 CÁC CHẨT NHUỘM MÀU S l D u n g d ịc h n h u ộ m B a sic F u ch sin Basic Fuchsin 0.5 g Cồn 95% 20 ml Nước cất thêm đến 100 ml Hòa tan 0,5 g chất nhuộm Basic Fuchsin 20 ml cổn 95% Pha loãng đến 100 ml với nước cất Lọc, cần thiết, với giấy lọc Whatman số 31 để lọc bỏ phần chất nhuộm không tan 52- D u n g d ịc h th u ố c n h u ộ m B rillia n t G reen 1% Thuốc nhuộm Brilliant Green g Nước cất (vô khuẩn) 100 ml Hòa tan g thuốc nhuộm nước Pha loãng đến 100 ml Trước sử dụng, test tính độc tất mẻ thuốc nhuộm vi sinh vật dương tính âm tính biết 53- D u n g d ịc h th u ô c n h u ộ m B rom o creso l P u rp le 0,2% Thuốc nhuộm tím bromocresol 0,2 g Nước cất (vô khuẩn) Hòa tan 0.2 g thuốc nhuộm nước cất pha loãng đến 100 ml 100 ml 54- C a r b o lfu c h in 0,5% Carbol fuchsia 0,5 g Nước cất Hòa tan 0,5 g thuốc nhuộm nước cất pha loãng đến 100 ml 100ml 55- T h u ố c n h u ộ m C ry sta l V io let (cho vi khuẩn) Crystal violet cồn pha loảng Crytal violet (chất nhuộm chiếm 90% ) Ethanol (95%) Nước cất 2g 20 ml 80 ml Ammonium oxalate crystal violet (Hacker’s) (xem S6) Một hai dung dịch thường coi thích hợp cho nhuộm đơn để quan sát hình thái vi khuẩn kính hiển vi 56- T h u ô c n h u ộ m G ram (có b án sẵ n tr ê n th ị trư n g) Tím kết tinh Hucker “ Dung dịch A: Crystal violet (chất nhuộmchiê'm 90%') Ethanol 95% 2g 20 ml - Dung dicli B: Ammonium oxalate 0,8 g Nước cất 80 ml Trộn dung dịch A B lại với Bảo quản 24 giơ lọc qua giấy lọc thô Các c h ấ t nh uộm m àu 461 Gram’s iodine: Iodine 1g KI 2g Nước cất 300 ml Cho KI vào cối, thêm iodine nghiền chày - 10 giây Thêm ml nước nghiền, thêm ml nước nghiền Cho dung dịch vào lọ, rửa cối chày với lượng nước đủ để đạt thể tích 300 ml Hucker’s counterstain (dung dịch sẵn) Safranin о 2,5 g Ethanol 95% Thêm 10 ml dung dịch sẵn vào 90 ml nước cât S 7- Thuô'c nhuộm xanh m ethylene (Loeffler’s) - Dung dịch A Xanh methylene (chất nhuộm chiếm Ethanol 95% - Dung dịch В КОН loãng (0,01% (w/v)) (Khoảng viên KOH lít) Trộn А В lại với 0,3 g 30 ml 100 ml Thuốc nhuộm xanh methylene acid hóa Dung dịch A Xanh methylene Nước cất 0,02 g 100 ml Dung dịch В КН2РО4 (0,2 M) Dung dịch c К2НРО4 (0,2 M) 99,75 ml 0,25 ml Trộn dung dịch A, B c lại với pH cuôl phải đạt 4,6 S8 Thuốc nhuộm T h ia zin e R ed R (cho kỹ thuật khuếch tán ٠ enterotoxin s aureus) Hòa tan Thiazine Red R (màu số 14780), 0,1%, acid acetic S9- Thuôc nhuộm x an h m ethylene Klett Xanh methylene Ethanol 95% Nước cất 1g 10 ml 100 ml SIO - Thuôc nhuộm F u c h s in K lett Puchsin kiềm Ethanol 95% Nước cất 1g 10 ml 100 ml 100 ml Chươrg 15 S ll " M ự c Ẩ n Đ ộ Mực An Độ cO bán sẩn trèn thị trường; nêu chọn mực hạt nho la chọn mực hạt lớn Pha theo chi' dản cụ the' cOa nha sán xưâ't 512- M ực T àu Mực tàu g Nước cà't 90 ml Nghiền nát mực tàu trộn mực nước Hấp tiệt trUng ‫ ﺓ‬I21('c 15 fhut Dẻ' lắng hai tuần lấy phần trèn dem sư dụng, 513- T h u ố c n h u ộ m N ish iz a w a ٠ Dung ‫ ﺍ ﻻ‬0 ‫ﺍﺍ‬ A Acid tanic 5g FeClj 1,5 g Formalin ml NaOH ml Nước cồt 100 ml Cho acid tanic vào nước, khuấy tan dều víía lắc vừa bố' sung FeCl‫؛‬í, formalin NaOH theo thư tự, dựng lọ mồu Dung dịch chl bền khoảng ٠ Dung dìch B: AgNOS 2g Dung dịch NH,١ OH vài giọt Nước cầ't 100 ml HOa AgNO.-í vào nước cất lấy 10 ml cho vào cốc thUy tinh có dung tích 100 ml thêm giọt NH^OH (5-6 giọt) lắc dều cho dê'n thi dừng Cho dung dịch nầy vào 90 ml dung dịch AgNO;ỉ cOn lạỉ Bảo quản lọ màu 514- Thuô'c n h u ộ m L eifso n Dung dịch bào hòa cUa ammonium sulfate kali sulfate Acid tanic 20'/f Ethanol 951,5 Dung d‫ا‬ch bào hòa fuchsinZethanol %(/( Chi pha trưởc sứ dụng ml ml ‫ ؛؛‬ml 0.3 ml 515- Thuô'c n h u ộ m lụ c m a la c h ite 5% Lục malachite 5g Nước câ't 95 ml Cho lục malachite'vào nước, lắc dều Lọc bảo quán lọ mầu nâu s i e ThuôC n h u ộ m dỏ tr u n g tin h (Neutral Red) DO trung tinh 0,5 g Nước cất 100 ml HOa tan dO trung tinh nước câ't Lọc trưởc dem sử dụng (xem thêm R21) S17- Thuô'c n h u ộ m acJd fast c a rb o lfu c h sin Basic fuchsin 0.3 g Ethanol (9510,0 ( ‫ﺀ‬/‫ ك‬g Phenol ml Nước câ't 100 ml HOa basic fuchsin vào ethanol Cho phenol vào nước Trộn dung dịch lại với Dề' yen vài ngày Lọc trước sử dụng 463 TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Lân Dủng cộng sự, Một số phương pháp nghiên cửu ỉh sình vật học, tập II Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, 1976 Nguyền Lán Dùng cộng sự, Một sổ phương pháp nghiên cứu ui sinh vật học, tập III Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, 1978 Lê Duy Linh cộng Thực tập nhỏ vi sinh Tủ sách Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quòc gia thành phố Hồ Chí Minh, 1997 Trần Thanh Thúy, Hướng dần thực hành vi sinh vật học Nhà xuất bán Giáo dục, 1998 Trần Linh Thước cộng sự, Thực tập vi sinh năm IV Tủ sách Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia thành phố Hồ Chí Minh, 2000 John Hleyn et al, Microbiology Experiments: A Health Science Perspective, WCB Publishers, 1995 Jefferey M B et al, Biotechnology - A Laboratory Course Academic Press, second Edition, 1990 w Andrews et al, Manniial of food quality control Rev microbiological analysis, Food and Drug Administration, Washington, D.c, USA 1992 THÍ NGHIỆM CÔNG NGHỆ SINH HỌC TẬP II THÍ NGHIỆM VI SINH VẬT HỌC Nịỉuycn Đức Lượns (chủ biCn), Phan Thị Huyền, Nguyên Ảnh Tuyết NHẢ XUẤT liẢN ĐẠI HỌC QUỐC (HA TP H() CHÍ MINH Khu phô.6, Pluiííng Linh Ti'ung, QuCin Tliủ Điĩc, TP I1(’M ĐT: 7242181, 7242160 + (1421, 1422, 1423, 1425, 1426) F a x :7242194 E m ail: vnuhp@vnuhcm.edu.vn Chịu Irúrh lỉhìệní Ằuấí hàn PGS-TS NGUYỄN QUANG ĐIỂN Biên tập TRẦN VĂN THẮNG NGUYỄN HUỲNH Sứa in PHẠM VẤN THỊNH Trinh bày bìa TRƯƠNG NGỌC TUẤN Đơn vị liên kết TRƯỜNG ĐH BÁCH KHOA - ĐHQG TPHCM In 500 cuôn, khổ 19 X 27 cm Số đăng ký KHXB: 121-2006./CXB/75-11 Quyết định xuất số: 43 ngày 27/9/2006 Nhà Xuâ't ĐHQG TP Hồ Chí Minh In Xưởng in Đại học Bách khoa - ĐHQG TP.HCM Nộp lưu chiểu tháng 11 năm 2006