BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ HOA TỔNG HỢP VÀ THỬ HOẠT TÍNH KHÁNG TẾ BÀO UNG THƢ CỦA MỘT SỐ DẪN CHẤT 6-DIETHYLAMINO-2-ARYL-4QUINAZOLINON LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC HÀ NỘI 2016 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ HOA TỔNG HỢP VÀ THỬ HOẠT TÍNH KHÁNG TẾ BÀO UNG THƢ CỦA MỘT SỐ DẪN CHẤT 6-DIETHYLAMINO-2-ARYL-4QUINAZOLINON LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ DƢỢC PHẨM VÀ BÀO CHẾ MÃ SỐ: 60720402 Ngƣời hƣớng dẫn khoa học : TS Văn Thị Mỹ Huệ TS Lê Nguyễn Thành HÀ NỘI 2016 LỜI CẢM ƠN Em xin bày tỏ lòng biết ơn TS Văn Thị Mỹ Huệ TS Lê Nguyễn Thành, ngƣời thầy tận tụy hƣớng dẫn giúp đỡ em trình thực luận văn Em xin cảm ơn giúp đỡ nhiệt tình của: TS Nguyễn Minh Hằng, TS Cao Bích Huệ, Ths Trần Hữu Giáp, cử nhân Nguyễn Anh Dũng, cử nhân Hà Thị Thoa, cử nhân Nguyễn Thị Tú Oanh (Trung tâm nghiên cứu phát triển thuốc - Viện Hoá sinh biển - Viện Hàn lâm khoa học công nghệ Việt Nam), thầy cô môn Hoá hữu thầy cô môn, phòng ban, thƣ viện trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội Cuối xin chân thành cảm ơn bố mẹ, chị gái, em gái bạn bè, đồng nghiệp động viên, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt trình học tập nghiên cứu vừa qua Hà Nội, ngày 30 tháng 03 năm 2016 Học viên Nguyễn Thị Hoa MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 HỢP CHẤT QUINAZOLINON VÀ TÁC DỤNG SINH HỌC 2 1.1.1 Tác dụng chống ung thƣ 1.1.2 Các tác dụng khác 10 1.2 PHƢƠNG PHÁP TỔNG HỢP DẪN CHẤT 2-ARYL-4QUINAZOLINON CHƢƠNG 2: NGUYÊN VẬT LIỆU, THIẾT BỊ, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 18 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU, HÓA CHẤT, DUNG MÔI 18 2.2 THIẾT BỊ THÍ NGHIỆM 19 2.3 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 20 2.3.1 Tổng hợp hóa học 20 2.3.2 Thử hoạt tính kháng tế bào ung thƣ 20 2.4 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.4.1 Phƣơng pháp tổng hợp dẫn chất 6-diethylamino-2-aryl-4- 20 quinazolinon 2.4.2 Phƣơng pháp tinh chế xác định cấu trúc 20 2.4.3 Phƣơng pháp xác định hoạt tính kháng tế bào ung thƣ 21 CHƢƠNG 3: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 24 TỔNG HỢP HÓA HỌC 24 3.1 3.1.1 Tổng hợp dẫn chất trung gian 2-amino-5diethylaminobenzamid 3.1.2 Tổng hợp dẫn chất 6-diethylamino-2aryl-4-quinazolinon 25 26 3.2 KIỂM TRA ĐỘ TINH KHIẾT, KHẲNG ĐỊNH CẤU TRÚC 36 3.3 THỬ HOẠT TÍNH KHÁNG TẾ BÀO UNG THƢ CHƢƠNG 4: BÀN LUẬN 47 50 4.1 VỀ TỔNG HỢP HÓA HỌC 50 4.2 VỀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC 52 4.2.1 Phổ hồng ngoại (IR) 52 4.2.2 Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân proton (1H-NMR) 53 4.2.3 Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân 13C (13C-NMR) 56 4.2.4 Phổ khối lƣợng (MS) 57 4.3 VỀ THỬ HOẠT TÍNH KHÁNG TẾ BÀO UNG THƢ KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 58 62 KẾT LUẬN 62 KIẾN NGHỊ 62 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT ATCC The American Type Culture Collection (Tổ chức tài nguyên tiêu chuẩn vật liệu sinh học Mỹ) ACE Angiotensin Converting Enzym (Enzym ức chế chuyển dạng angiotensin) H-NMR Proton nuclear magnetic resonance (Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân proton) 13 C-NMR Carbon-13 nuclear magnetic resonance (Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân carbon 13) CTCT Công thức cấu tạo CTPT Công thức phân tử EC50 Half maximal effective concentration (Nồng độ 50% có tác dụng tối đa) DMEM Dulbecco's Modified Eagle Medium (Môi trƣờng nuôi cấy tế bào ung thƣ) DMSO Dimethylsulfoxid EtOH Ethanol ESI Electron Spray Ionization (Ion hoá phun điện tử) HeLa Tế bào ung thƣ tử cung Hep-G2 Hepatocellular carcinoma (Tế bào ung thƣ gan) IC50 Half maximal inhibitory concentration (Nồng độ ức chế 50% phát triển tế bào ung thƣ thử nghiệm) IR Infrared spectrometry (Phổ hồng ngoại) J Hằng số tƣơng tác spin-spin (đơn vị Hz) KB Human epidermic carcinoma (Tế bào ung thƣ biểu mô) LU Human lung carcinoma (Tế bào ung thƣ phổi) MCF-7 Human breast carcinoma (Tế bào ung thƣ vú) OD Optical density (Mật độ quang học) MS Mass Spectrometry (Phổ khối lƣợng) MTT 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromid na Không có hoạt tính (not active) SKLM Sắc ký lớp mỏng T0nc Nhiệt độ nóng chảy δ (ppm) Độ dịch chuyển hoá học (phần triệu) DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU Tên bảng TT Trang Bảng 1.1 Tác dụng gây độc tế bào hợp chất III Bảng 1.2 Hoạt tính độc tế bào số dẫn xuất 2-aryl-4 quinazolinon (XIII) Bảng 2.1 Nguyên vật liệu dùng nghiên cứu 18 Bảng 3.1 Kết tổng hợp dẫn chất 7a-l 34 Bảng 3.2 Giá trị Rf Tnc dẫn chất 7a-l 36 Bảng 3.3 Số liệu phổ khối lƣợng 38 dẫn chất 7a-l Bảng 3.4 Số liệu phổ IR dẫn chất 7a-l 40 Bảng 3.5 Số liệu phổ 1H-NMR dẫn chất 7a-l 42 Bảng 3.6 Số liệu phổ 13C-NMR dẫn chất 7a-l 45 10 Bảng 3.7 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào 7a-l 48 dòng tế bào ung thƣ ngƣời 11 Bảng 4.1 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào chất 7a-l chuyển sang đơn vị µM 58 DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ Tên sơ đồ TT Sơ đồ 1.1 Phản ứng tổng hợp quinazolinon sử dụng sắt (III) Trang 13 clorid làm xúc tác Sơ đồ 1.2 Phản ứng tổng hợp 2-arylquinazolinon Yadong 13 Feng Sơ đồ 1.3 Phản ứng ngƣng tụ anthranilamid benzoylclorid 14 Sơ đồ 1.4 Phản ứng ngƣng tụ anthranilamid benzoyl clorid 14 cải tiến Sơ đồ 1.5 Phản ứng N-aryl benzamidin với cacbonat thơm 14 nghiên cứu Shunichi Aikawa Sơ đồ 1.6 Phản ứng tổng hợp quinazolinon Haoquan Li 15 Sơ đồ 1.7 Phản ứng tổng hợp Mann-Jen Hour cộng 15 Sơ đồ 1.8 Phản ứng tổng hợp Na Yeun Kim Cheol-Hong 16 Cheon Phản ứng tổng hợp Shingare Sơ đồ 1.9 10 Sơ đồ 1.10 Phản ứng tổng hợp Wei cộng 16 11 Sơ đồ 1.11 Phản ứng tổng hợp Tiwari cộng 17 12 Sơ đồ 3.1 Tổng hợp 2-amino-5-(diethylamino)benzamid 24 13 Sơ đồ 3.2 Tổng hợp dẫn chất 6-diethylamino-2-aryl-4- 24 16 quinazolinon 14 Sơ đồ 3.3 Tổng hợp chất 7a 26 15 Sơ đồ 3.4 Tổng hợp chất 7b 27 16 Sơ đồ 3.5 Tổng hợp chất 7c 27 17 Sơ đồ 3.6 Tổng hợp chất 7d 28 18 Sơ đồ 3.7 Tổng hợp chất 7e 29 19 Sơ đồ 3.8 Tổng hợp chất 7f 29 20 Sơ đồ 3.9 Tổng hợp chất 7g 30 21 Sơ đồ 3.10 Tổng hợp chất 7h 31 22 Sơ đồ 3.11 Tổng hợp chất 7i 31 23 Sơ đồ 3.12 Tổng hợp chất 7j 32 24 Sơ đồ 3.13 Tổng hợp chất 7k 33 25 Sơ đồ 3.14 Tổng hợp chất 7l 33 Phụ lục 9.2: Phổ hồng ngoại chất 7i Phụ lục 9.3: Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H-NMR chất 7i Phụ lục 9.4: Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 13C-NMR chất 7i Phụ lục 10.1: Phổ khối lượng chất 7j Phụ lục 10.2: Phổ hồng ngoại chất 7j Phụ lục 10.3: Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H-NMR chất 7j Phụ lục 10.4: Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 13C-NMR chất 7j Phụ lục 11.1: Phổ khối lượng chất 7k Phụ lục 11.2: Phổ hồng ngoại chất 7k Phụ lục 11.3: Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H-NMR chất 7k Phụ lục 11.4: Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 13C-NMR chất 7k Phụ lục 12.1: Phổ khối lượng chất 7l Phụ lục 12.2: Phổ hồng ngoại chất 7l Phụ lục 12.3: Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H-NMR chất 7l Phụ lục 12.4: Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 13C-NMR chất 7l [...]... các hợp chất mới có tác dụng kháng tế bào ung thư và nghiên cứu mối liên quan cấu trúc-tác dụng của dãy chất 6-diethylaminoquinazolinon, luận văn: Tổng hợp và thử hoạt tính kháng tế bào ung thƣ của một số dẫn chất 6-diethylamino-2-aryl-4quinazolinon” được tiến hành với hai mục tiêu: 1 Tổng hợp được một số dẫn chất của 6-diethylamino-2-aryl-4quinazolinon 2 Thử hoạt tính gây độc tế bào của các dẫn chất. .. 2.3.2 Thử hoạt tính kháng tế bào ung thư Các dẫn chất 6-diethylamino-2-aryl-4-quinazolinon được thử tác dụng kháng tế bào ung thư trên 4 dòng tế bào ung thư: KB (Human epidermic carcinoma) - ung thư biểu mô; Hep-G2 (Hepatocellular carcinoma) - ung thư gan; LU (Human lung carcinoma) - ung thư phổi và MCF-7 (Human breast carcinoma) - ung thư vú 2.4 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.4.1 Phương pháp tổng hợp các dẫn. .. động, và như vậy sự chuyển đổi liên quan trực tiếp đến số lượng tế bào sống sót Dòng tế bào thử nghiệm: Các dòng tế bào ung thư ở người được cung cấp bởi ATCC gồm: - KB (Human epidermic carcinoma) - tế bào ung thư biểu mô - Hep - G2 (Hepatocellular carcinoma) - tế bào ung thư gan - LU (Human lung carcinoma) - tế bào ung thư phổi 21 - MCF-7 (Human breast carcinoma) - tế bào ung thư vú Chất chuẩn dƣơng tính: ... của nhóm nhà khoa học Đài Loan trên, nhiều kết quả về tác dụng kháng ung thư của các hợp chất quinazolinon cũng đã được báo cáo Năm 2005, Voelter và cộng sự đã tổng hợp dãy hợp chất 2-aryl-7fluoro-6-(methylpiperazin)-4(3H)quinazolinon (IV) Các hợp chất này được thử tác dụng kháng ung thư trên các dòng tế bào ung thư phổi (H460), ung thư vú MCF-7 và ung thư thần kinh (SF-268) Hợp chất IVa thể hiện hoạt. .. hóa học của các hợp chất tổng hợp được như: phổ hồng ngoại (IR), phổ cộng hưởng từ hạt nhân (1H-NMR và 13C-NMR), phổ khối lượng (MS) 2.4.3 Phương pháp xác định hoạt tính kháng tế bào ung thư Thực hiện tại phòng Hóa sinh ứng dụng - Viện hóa học – Viện Hàn lâm khoa học và công nghệ Việt Nam Thử hoạt tính kháng tế bào ung thư của các dẫn chất tổng hợp được theo phương pháp MTT là phép thử độ độc tế bào chuẩn... điều trị ung thư Hợp chất IXa thể hiện hoạt tính ức chế tankyrase I và II với nồng độ nM [26] (Hình 1.9) 6 Hình 1.9: Các dẫn chất 2-arylquinazolinon (IX) El-Azab và cộng sự đã tổng hợp dãy chất 6-cloro-2-p-tolyl-quinazolinon trong đó có hợp chất X thể hiện hoạt tính độc tế bào trên nhiều dòng tế bào ung thư như ung thư thận (IC50 = 4,07 μM), ung thư thần kinh (IC50 = 7,41 μM), ung thư tử cung (IC50... triển của các dòng tế bào ung thư máu thử nghiệm với giá trị IC50 từ 0,30 - 10,10 µM, tuy nhiên không có tác dụng trên một số dòng tế bào ung thư gan và ung thư phổi Các hợp chất IIa-c với nhóm thế -OH, -OCH3 và –OCF3 cho hoạt tính kháng tế bào ung thư cao nhất [22] (Hình 1.3) Hình 1.3: Các hợp chất 6-pyrrolidinyl-4-quinazolinon (II) Năm 2011, nhóm nghiên cứu trên từ Đài Loan tiếp tục công bố hoạt tính. .. hoạt tính trên cả 3 dòng tế bào thử nghiệm, trong khi đó hợp chất IVb chỉ có tác dụng trên tế bào ung thư phổi (H460) [3] (Hình 1.4) 4 Hình 1.4: Các hợp chất 2-aryl-7-fluoro-6-(methylpiperazin)4(3H)quinazolinon (IV) Các nhà khoa học Ba Lan và Đức đã nghiên cứu dãy hợp chất quinazolinon (V) và thử hoạt tính gây độc tế bào trên 12 dòng tế bào ung thư Hợp chất Va có tác dụng tốt nhất trong dãy hợp chất. .. độc tế bào của hợp chất 2-(naphthalen-1-yl)-6-pyrrolidin-1-yl-3H3 quinazolin-4-on (III) trên các dòng tế bào ung thư người như ung thư di căn (M21, 375S2), ung thư phổi (CH27), ung thư vòm họng (HSC3), ung thư biểu mô (A431) Kết quả cho thấy hợp chất này có hoạt tính sinh học cao trên 4 dòng tế bào ung thư với các giá trị IC50 ở khoảng nanomol: 33-83 nM [34] (Bảng 1.1) Năm 2014, hợp chất này được thử. .. được thử nghiệm trên tế bào ung thư não di căn và có tác dụng tốt trên nhiều dòng tế bào ung thư di căn não người và chuột với IC50 từ 40-80 nM Hợp chất (III) tác động lên chu trình tế bào, can thiệp vào giai đoạn G2/M [22] Bảng 1.1: Tác dụng gây độc tế bào của hợp chất III Giá trị IC50 (nM) TB ung thư di căn (M21): 33 nM TB ung thư phổi: 53 nM TB ung thư vòm họng: 41 nM TB ung thư biểu bì : 83 nM Bên