BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ QUỲNH GIANG THIẾT LẬP CHẤT CHUẨN (2–CLOROPHENYL)DIPHENYLMETHANOL LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI 2016 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ QUỲNH GIANG THIẾT LẬP CHẤT CHUẨN (2–CLOROPHENYL)DIPHENYLMETHANOL LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: KIỂM NGHIỆM THUỐC & ĐỘC CHẤT MÃ SỐ: 60720410 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Đoàn Cao Sơn HÀ NỘI 2016 Lời cảm ơn Với lòng biết ơn sâu sắc, xin gửi lời cảm ơn đến PGS.TS Đoàn Cao Sơn – Viện trưởng Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương, người thày trực tiếp hướng dẫn tạo điều kiện mặt cho suốt trình thực luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn tới ThS Nguyễn Văn Giang thầy cô Bộ môn Công nghiệp dược - Trường Đại học Dược Hà nội tận tình bảo để tiến hành thực nghiệm hoàn thiện luận văn Cũng nhân đây, xin gửi lời cảm ơn chân thành tri ân sâu sắc thầy cô trường Đại học Dược Hà nội, đặc biệt thầy cô Bộ môn Hóa Phân tích độc chất, người dành trọn tâm huyết tri thức để giảng dạy cho suốt trình học tập trường Cảm ơn ThS Tạ Mạnh Hùng, TS Trần Hồng Anh – Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương, TS Sameer G Navalgund – Hội đồng Dược điển Mỹ có nhiều góp ý trực tiếp cho luận văn Xin cảm ơn ThS Lê Thị Thu toàn thể đồng nghiệp Viện Kiểm nghiệm Thuốc Trung ương giúp đỡ phối hợp với trình thực thực Cuối cùng, xin cảm ơn gia đình, bạn bè cổ vũ, đỡ động viên để hoàn thành hoàn thành khóa học Hà Nội, ngày 23 tháng 03 năm 2016 DS Nguyễn Thị Quỳnh Giang MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN 1.1 (2–CLOROPHENYL)DIPHENYLMETHANOL 1.2 TẠP CHẤT VÀ KIỂM SOÁT TẠP CHẤT TRONG THUỐC 1.3 XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 1.4 QUI TRÌNH ĐIỀU CHẾ (2-CLOROPHENYL)DIPHENYLMETHANOL 1.5 CHẤT CHUẨN VÀ QUI TRÌNH THIẾT LẬP CHẤT CHUẨN 1.5.1 Khái quát chất chuẩn 1.5.2 Qui trình thiết lập chất chuẩn hóa học 12 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 16 2.1.1 Nguyên liệu 16 2.1.2 Dung môi, hóa chất, chất chuẩn 16 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.2.1 Xây dựng thẩm định phương pháp phân tích 17 2.2.2 Điều chế nguyên liệu 19 2.2.3 Thiết lập chất chuẩn 21 2.2.4 Kiểm tra tạp chất clotrimazol 22 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 23 3.1 XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 23 3.1.1 Xây dựng tiêu chuẩn chất lượng quy trình phân tích 23 3.1.2 Thẩm định phương pháp phân tích 25 3.1.2.1 Định tính 25 3.1.2.2 Định lượng 25 3.1.2.3 Tạp chất liên quan 39 3.2 3.2.1 CHUẨN BỊ NGUYÊN LIỆU THIẾT LẬP CHUẨN 49 Điều chế (2-clorophenyl)diphenylmethanol 49 Xác định cấu trúc sản phẩm phân tích phổ 52 3.2.2 3.2.2.1 Phổ hồng ngoại (IR) 52 3.2.2.2 Phổ khối (MS) 52 3.2.2.3 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) 52 3.3 THIẾT LẬP CHẤT CHUẨN (2-CLOROPHENYL) DIPHENYLMETHANOL 54 3.3.1 Xây dựng quy trình thiết lập chất đối chiếu 54 3.3.2 Kiểm tra chất lượng nguyên liệu sau tinh chế (NC1.2015) 54 3.3.3 Đóng lọ 58 3.3.4 Đánh giá đồng trình đóng gói 58 3.3.5 Kết đánh giá bán thành phẩm 59 3.3.6 Kiểm tra độ ổn định 62 3.4 KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG NGUYÊN LIỆU CLOTRIMAZOL 64 CHƯƠNG BÀN LUẬN 67 4.1 Tính hiệu kinh tế, xã hội 67 4.2 Quy trình điều chế nguyên liệu 68 4.3 Xác định cấu trúc, nhận dạng nguyên liệu 68 4.4 Xây dựng thẩm định phương pháp phân tích 69 4.5 Thiết lập chất chuẩn DĐVN 71 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 73 TÀI LIỆU THAM KHẢO Danh mục ký hiệu, chữ viết tắt: ARS ASEAN Reference Standards ASEAN Association of Southeast Asian Nations DAD Diod array detector DSC Differential scanning calorimetry EPCRS European Pharmacopoeia Reference Standards GC Gas chromatography HL Hàm lượng HPLC High performance liquid chromatography ICRS International Chemical Reference Substances LOD Loss on drying NIST National Institute of Standards and Technology nt Nguyên trạng RSD Relative standard deviation SKD Sắc kí đồ TB Trung bình TGA Thermal gravimetric analysis TLC Thin layer chromatography TLCC-CĐC Thiết lập chất chuẩn chất đối chiếu USPRS United States Pharmacopeia reference standard UV-VIS Ultraviolet–visible spectroscopy VKNTTW Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương WHO World Health Organization Danh mục bảng, biểu: Bảng 2.1: Các tiêu thẩm định cho phép thử 18 Bảng 3.2: Kết thẩm định độ đặc hiệu 26 Bảng 3.3: Kết khảo sát độ thích hợp hệ thống 29 Bảng 3.4: Cách pha dung dịch thẩm định độ tuyến tính 30 Bảng 3.5: Kết khảo sát độ tuyến tính 31 Bảng 3.6: Cách chuẩn bị dung dịch thẩm định độ 32 Bảng 3.7: Kết khảo sát độ 32 Bảng 3.8: Kết khảo sát độ lặp lại 34 Bảng 3.9: Kết thẩm định độ xác trung gian 35 Bảng 3.10: Kết đánh giá độ tái lặp theo t-Test 36 Bảng 3.11: Kết khảo sát độ ổn định dung dịch chuẩn 37 Bảng 3.12: Kết khảo sát độ ổn định dung dịch thử 37 Bảng 3.13: Kết định lượng cột khác 38 Bảng 3.14: Kết khảo sát độ thích hợp hệ thống 42 Bảng 3.15: Giới hạn phát tạp imidazole 43 Bảng 3.16: Giới hạn phát tạp triphenylmethanol 44 Bảng 3.17: Giới hạn phát tạp clotrimazol 45 Bảng 3.18: Giới hạn phát clotrimazol tạp A 45 Bảng 3.19: Kết đánh giá hệ số đáp ứng tạp chất 47 Bảng 3.20: Kết đánh giá độ ổn định dung dịch đối chiếu 48 Bảng 3.21: Bảng theo dõi độ ổn định kết tạp chất dung dịch thử 48 Bảng 3.22: Kết đánh giá qui trình điều chế 50 Bảng 3.23: Bảng kết theo dõi độ ổn định nguyên liệu 51 Bảng 3.24: Kết xác định hàm lượng nước 55 Bảng 3.25: Hệ thống sắc kí xác định tạp chất liên quan 55 Bảng 3.26: Kết xác định tạp chất nguyên liệu 56 Bảng 3.27: Kết định lượng nguyên liệu 57 Bảng 3.28: Kết đánh giá đồng hàm lượng 59 Bảng 3.29: Kết đánh giá thành phẩm 60 Bảng 3.30: Bảng kết T-test 60 Bảng 3.31: Tập hợp kết khoa thử nghiệm 61 Bảng 3.32: Kết theo dõi độ ổn định hàm lượng chất chuẩn 62 Bảng 3.33: Kết theo dõi độ ổn định tạp chất 63 Bảng 3.34: Kết xác định giới hạn tạp A clotrimazol 65 Bảng 4.35: Bảng tóm tắt kết thẩm định định lượng 70 Bảng 4.36: Tóm tắt kết thẩm định xác định tạp chất liên quan 71 Danh mục hình vẽ, đồ thị: Hình 1.1: Công thức cấu tạo (2-clorophenyl)diphenylmethanol Hình 1.2: Sơ đồ điều chế (2-clorophenyl)diphenylmethanol Hình 2.3: Sơ đồ phản ứng điều chế (2-clorophenyl)diphenylmethanol 20 Hình 3.4: Sắc kí đồ m u trắng, m u thử, m u chuẩn, m u hỗn hợp 27 Hình 3.5: Kết xác định độ tinh khiết pic clotrimazol tạp A 27 Hình 3.6: Kết chồng phổ UV pic clotrimazol tạp A 28 Hình 3.7: Sắc kí đồ dung dịch phân giải 29 Hình 3.8: Đồ thị biểu diễn mối tương quan diện tích pic nồng độ 31 Hình 3.9: Sắc k đồ thẩm định độ đặc hiệu 41 Hình 3.10: Sắc kí đồ dung dịch đối chiếu dung dịch phân giải 42 Hình 3.11: Đồ thị biểu diễn mối tương quan nồng độ tạp chất diện tích píc đáp ứng 46 Hình 3.12: Sơ đồ phản ứng điều chế clotrimazol tạp A 49 Hình 3.13: Phổ IR (2-clorophenyl)diphenylmethanol 52 Hình 3.14: Phổ MS (2-clorophenyl)diphenylmethanol 52 Hình 3.15 Phổ 1H-NMR (2-clorophenyl)diphenylmethanol 53 Hình 3.16: Phổ 13C-NMR (2-clorophenyl)diphenylmethanol 53 Hình 3.17: Kết phân tích DSC (2-clorophenyl)diphenylmethanol 55 Hình 3.18: Sắc kí đồ xác định tạp chất liên quan nguyên liệu 57 Hình 3.19: SKĐ định lượng nguyên liệu (2-clorophenyl)diphenylmethanol 58 Hình 3.20: SKĐ xác định giới hạn clotrimazol tạp A Clotrimazol 66 ĐẶT VẤN ĐỀ Clotrimazol sử dụng rộng rãi để điều trị nấm với nhiều dạng bào chế khác kem bôi da, viên đặt âm đạo, dung dịch dùng ngoài, viên ngậm, [1],[15] Từ năm 2010 đến năm 2015, có khoảng 130 số đăng kí lưu hành Việt Nam công ty nước sản xuất nhập từ nước Để kiểm soát chất lượng nguyên liệu chế phẩm chứa hoạt chất này, bên cạnh chất chuẩn clotrimazol, Dược điển Việt Nam IV, Dược điển Mỹ 38, Dược điển Anh 2014 nhiều Dược điển hành khác qui định phải sử dụng chất chuẩn tạp (2-clorophenyl)diphenylmethanol (tên gọi khác: clotrimazol tạp A, 2-clorotritanol) để kiểm tra tiêu tạp chất [2],[12],[13],[15] Tuy nhiên, chất chuẩn tạp chất chưa thiết lập Việt Nam [19],[20] Khi muốn sử dụng, phải nhập từ nước với giá thành cao nhiều so với chất chuẩn hoạt chất thông thường, đồng thời nhiều thời gian thủ tục nhập phức tạp, đơn hàng nhỏ lẻ nên khó đặt hàng Vì vậy, Viện Kiểm nghiệm Thuốc Trung ương - với vai trò hai đơn vị có đủ lực có nhiệm vụ thiết lập chất chuẩn theo qui định Bộ Y tế cần tiến hành thiết lập chất chuẩn tạp (2clorophenyl)diphenylmethanol cách sử dụng điều kiện khả thi Việt Nam Từ đó, đảm bảo tính sẵn có để đáp ứng nhu cầu sử dụng chất chuẩn tạp kiểm tra chất lượng dược phẩm công ty sản xuất đơn vị nghiên cứu, kiểm nghiệm nước Đề tài "Thiết lập chất chuẩn (2-Clorophenyl)diphenylmethanol" với mục tiêu: Thiết lập 150 lọ (50 mg/lọ) chất chuẩn (2-Clorophenyl)diphenylmethanol đạt yêu cầu chất chuẩn Dược điển Việt Nam Độ không đảm bảo đo mở rộng: U = ± 0,30%, với hệ số phủ k = độ tin cậy 95% 3.3.6 Kiểm tra độ ổn định Chuẩn Dược điển Việt Nam (2-clorophenyl)diphenylmethanol SKS: 0116330.01được kiểm tra độ ổn định sau tháng với tiêu định lượng tạp chất liên quan theo qui trình xây dựng Định lượng: lọ chất chuẩn clotrimazol tạp A lấy ngẫu nhiên, định lượng song song với chuẩn Clotrimazol tạp A USPRS, Lot: J2M033, hàm lượng: 0,99 mg/mg (nguyên trạng) Mỗi lọ tiến hành định lượng mẫu thử, Yêu cầu: Độ lệch hàm lượng so với hàm lượng công bố CoA phải không 1,0% Bảng 3.32: Kết theo dõi độ ổn định hàm lượng chất chuẩn Mô tả Chuẩn Thử Thử Thử Thử Thử Thử Khối lượng (mg) 5,06 25,02 25,17 25,19 24,98 25,03 25,22 3682439 3665203 3701865 3700239 3663275 3665206 3699483 3683426 3686702 3692550 3689184 3676627 99,57 99,96 99,84 99,67 99,53 99,70 Diện tích píc (mAu.s) TB RSD (%) HL - nt (%) 3685154,7 0,15 Trung bình 99,71% (n = 6, RSD = 0,2%) 62 Hàm lượng lượng chuẩn DĐVN (2-clorophenyl)diphenylmethanol SKS: 0116330.01 99,71% (nguyên trạng), lệch 0,03% so với hàm lượng công bố chứng Tạp chất liên quan Lấy ngẫu nhiên lọ chuẩn DĐVN (2-clorophenyl)diphenylmethanol SKS: 0116330.01, tiến hành phép thử tạp chất liên quan lọ theo qui trình Kết cho thấy tổng diện tích píc tạp chất nhỏ lần diện tích píc đối chiếu Như vậy, chuẩn DĐVN (2-clorophenyl)diphenylmethanol SKS: 0116330.01 đạt yêu cầu tạp chất liên quan Diện tích píc trung bình dung dịch đối chiếu: 370845,7mAu.s Bảng 3.33: Kết theo dõi độ ổn định tạp chất Tạp Thời gian lưu (phút) Diện tích píc tạp (mAu.s) Thử Thử Thử 25,02 mg 25,06 mg 24,99 mg 23339 7562 6750 3,7 7,8 34921 34923 34737 12,6 1853 2330 14,2 2817 2225 2565 14,8 6081 5697 5597 16,1 10070 10137 9150 22,5 2353 3739 6139 24,6 3183 4019 3305 82764 (0,11%) 70155 (0,09%) 70573 (0,10%) Tổng Kết luận: chuẩn DĐVN (2-clorophenyl)diphenylmethanol SKS: 0116330.01 ổn định đến thời điểm kiểm tra 63 3.4 KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG NGUYÊN LIỆU CLOTRIMAZOL Chất chuẩn DĐVN (2-clorophenyl)diphenylmethanol SKS: 0116330.01 sử dụng để kiểm tra tiêu giới hạn clotrimazol tạp A chất chuẩn dược diển Việt Nam clotrimazol, số kiểm soát 0110271.01 theo protocol thiết lập chất chuẩn clotrimazol số 071.01 với qui trình sau: Cột sắc kí: C18, 250 x 4,6mm, 5µm (Gemini) Detector: UV/bước sóng 254nm Tốc độ dòng: 1,5 ml/phút Thể tích tiêm sắc kí: 20 µl Dung dịch KH2PO4: Hòa tan 4,35 g KH2PO4 1000 ml nước Pha động: chuẩn bị hỗn hợp methanol dung dịch KH2PO4 theo tỉ lệ 75:25 Dung dịch chuẩn gốc: hòa tan 12,5 mg Clotrimazol tạp A chuẩn 10 ml methanol, thêm 6,25 ml dung dịch KH2PO4 thêm methanol vừa đủ 25,0 ml Dung dịch chuẩn: Pha loãng 5,0ml dung dịch chuẩn gốc với pha động thành 50,0ml dung dịch Dung dịch phân giải: Hút ml dung dịch chuẩn gốc vào bình định mức 25 ml có chứa mg clotrimazol, thêm pha động vừa đủ thể tích Dung dịch thử: Cân 0,10 g mẫu thử clotrimazol vào bình định mức 10 ml, hòa tan ml methanol, thêm 2,5 ml dung dịch KH2PO4, thêm pha động vừa đủ thể tích Yêu cầu hệ sắc kí: Hệ số phân giải píc clotrimazol tạp A pic clotrimazol không nhỏ 1,9 Giá trị RSD diện tích lần tiêm lặp lại dung dịch chuẩn không lớn 2,0% Giới hạn: Hàm lượng Clotrimazol tạp A không lớn 0,5% Kết so sánh với kết tạp chất sử dụng chất chuẩn Clotrimazol related compound A USPRS, số lô: I1D166 Kết thu sau: 64 Dung dịch chuẩn tạp: Khối lượng chuẩn tạp A: 12,51 (mg) Thể tích pha loãng: 250 ml Diện tích píc chuẩn (mAu.s): 99783 99720 99322 TB: 99608 Bảng 3.34: Kết xác định giới hạn tạp A clotrimazol Mô tả Thử Thử Thử Khối lượng (mg) 100,05 100,00 100,07 Diện tích píc tạp A (mAu.s) 7595 7077 6496 Hàm lượng tạp A (%) 0,04 0,04 0,03 0,04% Trung bình Kết sử dụng chuẩn clotrimazol tạp A USPRS, số lô: I1D166, hàm lượng: 0,99 mg/mg – nguyên trạng: Hàm lượng clotrimazol tạp A: 0,03% Như vậy, hàm lượng clotrimazol tạp A có chuẩn DĐVN clotrimazol, số kiểm soát 0110271.01 không khác sử dụng chuẩn clotrimazol tạp A USPRS (số lô: I1D166) sử dụng chất chuẩn dược điển Việt Nam (2clorophenyl)diphenylmethanol SKS: 0116330.01 phân tích 65 3.0 0.75 2.5 0.50 /8.742 mAU 254nm,4nm (1.00) mAU 254nm,4nm (1.00) 1.00 /1.960 2.0 0.25 1.5 0.00 /1.804 /1.950 1.0 -0.25 0.5 -0.50 -0.75 0.0 -1.00 -0.5 -1.25 0.0 2.5 5.0 10.0 7.5 12.5 15.0 1.0 2.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 Dung dịch đối chiếu mAU 254nm4nm (1.00) Clotrimazol/10.274 3.0 20.0 17.5 Mẫu trắng Clotrimazol A/8.733 /4.890 /1.574 /2.149/1.949 0.0 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 Mẫu thử Hình 3.20: SKĐ xác định giới hạn clotrimazol tạp A Clotrimazol 66 10.0 CHƯƠNG BÀN LUẬN 4.1 Tính hiệu kinh tế, xã hội Lần Việt Nam thực việc thiết lập chất chuẩn (2clorophenyl)diphenylmethanol (clotrimazol tạp A) đạt yêu cầu để đưa vào danh mục chất chuẩn Dược điển Việt Nam, đảm bảo tính sẵn có giá thành hợp lí, phục vụ cho công tác nghiên cứu hay kiểm tra chất lượng nguyên liệu clotrimazol chế phẩm chứa hoạt chất Đặc biệt, công ty sản xuất nước, việc có sẵn nguồn chất chuẩn clotrimazol tạp A tạo thuận lợi cho công tác nghiên cứu phát triển sản phẩm, xây dựng tiêu chuẩn chất lượng, tăng cường kiểm soát tạp chất, nâng cao chất lượng dược phẩm Đối với đơn vị kiểm nghiệm hay nghiên cứu, việc dễ dàng tiếp cận nguồn chất chuẩn góp phần nâng cao lực hoạt động, thực phép thử tạp chất cần phải có tạp chuẩn thực Cho dù sản phẩm sản xuất nước hay nhập theo tiêu chuẩn chất lượng khác Dược điển Việt Nam, Dược điển Anh, Dược điển Mỹ, tiêu chuẩn sở,… Chất chuẩn (2-clorophenyl)diphenylmethanol thiết lập đưa thị trường Việt Nam có giá thành dự kiến 400000VNĐ/ lọ 50 mg, rẻ nhiều so với chất chuẩn nhập khẩu, giúp tiết kiệm chi phí cho đơn vị sử dụng Lần đầu tiên, tạp chuẩn thiết lập đạt tiêu chuẩn chất chuẩn Dược điển Việt Nam với đầy đủ bước thực theo qui trình chuẩn từ chuẩn bị đánh giá nguyên liệu, đóng gói, đánh giá liên phòng thử nghiệm, theo dõi độ ổn định,…tại phòng thử nghiệm đạt tiêu chuẩn đơn vị thiết lập chuẩn theo qui định GLP, ISO/IEC 17025 tiền đánh giá WHO Sử dụng nguồn nguyên liệu tự điều chế chỗ để thiết lập chuẩn Qui trình điều chế đánh giá độ ổn định khối lượng sản phẩm sau mẻ điều chế Đồng thời, có nghiên cứu để đánh giá độ đồng độ ổn định nguyên liệu sau tinh chế Từ đó, đảm bảo nguồn cung ứng nguyên liệu có 67 chất lượng có nhu cầu thiết lập chất chuẩn (2-clorophenyl)diphenylmethanol lô Thêm vào đó, việc tự điều chế nguyên liệu tạo thuận lợi cho trình xây dựng thẩm định phương pháp phân tích dự đoán số tạp chất xuất nguyên liệu (2- clorophenyl)diphenylmethanol Qui trình phân tích xây dựng thẩm định theo hướng dẫn thẩm định phương pháp phân tích, đặc biệt qui trình dành cho phân tích thiết lập chuẩn nên trình thẩm định tiến hành chặt chẽ so với đối tượng thông thường đánh giá độ đặc hiệu, độ ổn định, độ thô,… Là nghiên cứu mở đầu cho hướng nghiên cứu thiết lập tạp chuẩn đạt theo tiêu chuẩn chất chuẩn Dược điển Việt Nam 4.2 Quy trình điều chế nguyên liệu Tiến hành điều chế tạp chất (2-clorophenyl)diphenylmethanol theo qui trình đơn giản, dễ thực với điều kiện dung môi, hóa chất, thiết bị người có phòng thử nghiệm Sản phẩm thu có hàm có hàm lượng cao (> 99%), tạp chất ( 0,05 Độ tuyến tính 1,000 R > 0,998 0,8% % Y < 2,0% 80% đến 120% nồng độ định lượng Kết thực nghiệm Độ thích hợp hệ thống Độ (độ thu hồi) Độ lặp lại Khoảng xác định 70 Bảng 4.36: Tóm tắt kết thẩm định xác định tạp chất liên quan Chỉ tiêu thẩm đinh Kết Tính đặc hiệu Giới hạn chấp nhận Các píc tạp chất tách riêng rẽ Đạt khỏi píc clotrimazol tạp A Độ thích hợp hệ 1,175 T ≤ 2,0 thống 13427 N ≥ 5000 5,633 R ≥ 3,0 0,2% RSD ≤ 2,0% (diện tích) 0,1% RSD ≤ 1,0% (thời gian lưu) < 0,01 µg/ml Kết thực nghiệm LOD 4.5 Thiết lập chất chuẩn DĐVN Quá trình thiết lập chất chuẩn Dược điển Việt Nam (2- clorophenyl)diphenylmethanol thực theo thủ tục thiết lập hiệu chuẩn chất chuẩn VKN/TT/21.20, bổ sung vào danh mục chất chuẩn Việt Nam Nguyên liệu sau điều chế phân tích kiểm tra chất lượng độ ổn định đảm bảo đạt tiêu chuẩn làm nguyên liệu để thiết lập chất chuẩn Dược điển Việt Nam Quá trình đóng gói thực buồng đóng chuẩn chuyên dụng có kiểm soát điều kiện nhiệt độ, độ ẩm nạp khí nitơ tinh khiết Sau đóng gói, tiến hành kiểm tra đồng lô sản xuất với tiêu hàm lượng nước định lượng Kết cho thấy hàm lượng nguyên trạng đồng lọ lô với giá trị RSD 0,7% (< 1,0%) Đánh giá liên phòng thử nghiệm để xác định giá trị hàm lượng công bố chứng chất chuẩn tiến hành độc lập phòng thử nghiệm, kết xử lí thống kê cho giá trị hàm lượng chuẩn Dược điển Việt Nam (2-clorophenyl)diphenylmethanol SKS: 0116330.01 99,74% C19H15ClO (nguyên trạng) 71 Sau kết thông qua Hội đồng chất chuẩn Dược điển Việt nam, chất chuẩn dán nhãn, nhập kho, bảo quản phân phối, đồng thời tiến hành kiểm tra định kì để đảm bảo độ ổn định chất chuẩn 72 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Qua thời gian nghiên cứu triển khai thực nghiệm, đạt mục tiêu đề tài đề ra, với kết cụ thể sau: - Xây dựng thẩm định qui trình phân tích theo hướng dẫn ASEAN ICH, xác định qui trình phù hợp để sử dụng kiểm tra chất lượng nguyên liệu, đánh giá liên phòng đánh giá độ ổn định chất chuẩn - Tiến hành điều chế 40 g (3 lô) nguyên liệu (2- clorophenyl)diphenylmethanol đạt tiêu chuẩn chất lượng để sử dụng để làm nguyên liệu thiết lập chất chuẩn, hiệu suất khoảng 45% Qui trình đơn giản dễ thực với điều kiện dung môi hóa chất thiết bị người có phòng thử nghiệm Sản phẩm sau tinh chế theo dõi độ ổn định để đảm bảo hàm lượng chất chuẩn sau thiết lập không thay đổi trình bảo quản, phân phối sử dụng Qui trình điều chế đánh giá phù hợp để sử dụng cung ứng nguyên liệu có nhu cầu thiết lập lô chuẩn DĐVN (2-clorophenyl)diphenylmethanol - Thiết lập liệu chuẩn nhận dạng (2- clorophenyl)diphenylmethanol, xác, khoa học bao gồm: phổ IR, phổ MS, phổ NMR - Thiết lập 150 lọ chất chuẩn đạt tiêu chuẩn chất chuẩn Dược điển Việt Nam, đóng gói 50 mg/lọ, chất chuẩn bổ sung vào danh mục chất chuẩn Việt Nam Đảm bảo tính sẵn có để cung ứng cho công ty, đơn vị nghiên cứu kiểm nghiệm, góp phần nâng cao chất lượng dược phẩm thị trường lực đơn vị kiểm, tăng cường quản lí chất lượng nguyên liệu clotrimazol chế phẩm chứa hoạt chất thị trường dược phẩm Việt Nam 73 - Kết đề tài có giá trị ứng dụng thực tiễn, chất chuẩn Dược điển Việt Nam (2-clorophenyl)diphenylmethanol, số kiểm soát: 0116330.01 có giá thành rẻ nhiều so với tạp chuẩn nhập từ nước ngoài, giúp tiết kiệm chi phí, thời gian cho đơn vị sử dụng - Là nghiên cứu mở đầu cho hướng nghiên cứu thiết lập tạp chuẩn thiếu Việt Nam KIẾN NGHỊ - Tiếp tục kiểm tra định kì, theo dõi độ ổn định chất chuẩn sau thiết lập, phân phối sử dụng - Tiếp tục hoàn thiện để sử dụng hướng nghiên cứu đề tài để nghiên cứu thiết lập tạp chuẩn khác, đáp ứng nhu cầu cấp thiết tạp chuẩn Việt Nam 74 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt: Bộ Y tế (2015), Dược thư quốc gia Việt Nam, tr 452, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, Hà nội Bộ y tế (2009),"Clotrimazol", "Phụ lục 2.5", Dược điển Việt Nam IV (bản offline) Nguyễn Đức Tuấn (2015), “Kiểm nghiệm tạp chất liên quan”, Hội thảo kiểm nghiệm tạp chất dược phẩm, Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương tháng 11/2015, tr Viện Kiểm nghiệm Thuốc Trung ương (2014),"Thủ tục thiết lập hiệu chuẩn chất chuẩn", Các thủ tục hệ thống quản l Tiếng Anh: ASEAN (2012), Asean Guidelines for validation and analytical procedures Bernard A Olsen (2012), Impurities in Drug substances and Drug products - A USP approach, U.S Pharmacopeial Convention, pp 9-15 Committee on Asean reference substances (2005), Guidelines for the establishment, handling, storage and use of Asean reference substances David C Browne (2009), “Reference-Standard Material Qualification”, Pharmaceutical Technology, 33(4), pp 66-73 Grant A McNaughton-Smith, J Ford Burns, Jonathan W Stocker et al (2008), "Novel Inhibitors of the Gardos Channel for the Treatment of Sickle Cell Disease", Journal of Medicinal Chemistry 51, pp 976–982 10 Hoogerheide, B E Wyka (1982), "Chlotrimazole", Analytical Profiles of Drug Substances 11, pp 225-255 11 John H McB Miller (2007), Pharmaceutical Reference Standards, QLC training seminar, Tanzania 5-7/12/2007, WHO/European Directorate for the Quality of Drug and Healthcare 12 Pharmaceuticals and Medical Devices Agency - Japan (2014), Japanese Pharmacopoeia 16th Edition, pp.199, 667 13 The British Pharmacopoeia Commission (2014), "Clotrimazole cream", "Clotrimazole Pessaries", "Clotrimazole", British Pharmacopoeia 2014 (offline edition) 14 U.S Pharmacopeial Convention (2013), Training on Establishment of reference substance, Health system strengthening project sponsored by the Global Fund, National Institute of Drug Quality control, Hanoi 15 U.S Pharmacopeial Convention (2015), "Clotrimazole", "Clotrimazole Cream", "Clotrimazole "Clotrimazole Vaginal Lotion", Inserts", "Clotrimazole "Clotrimazole Topical and Solution", Betamethasone Dipropionate Cream", “Impurities in drug substances and drug product”, "Validation of compendial procedures", United States Pharmacopeia 38 (USB flash drive) 16 U.S Pharmacopeial Convention(2015), “Clotrimazol related compound A Safe Date Sheet”, pp 17 Vivek Borhade , Sulabha Pathak, Shobhona Sharma et al (2012), "Clotrimazole Preformulation nanoemulsion studies, for malaria formulation chemotherapy design and Part I: physicochemical evaluation", International Journal of Pharmaceutics 431, pp 138 - 148 18 WHO (2001), General guidelines for the establishment, maintenance and distribution of chemical reference substance Internet: 19 Viện Kiểm nghiệm Thuốc Trung ương (2015), Danh mục chất chuẩn Viện Kiểm nghiệm thuốc TW cập nhật ngày 02/03/2016 20 Viện Kiểm nghiệm Thuốc thành phố Hồ Chí Minh (2015), Danh mục chất đối chiếu VKN thuốc TP.HCM, ngày 30/3/2016 [...]... tác thiết lập chuẩn đang được đẩy mạnh và đặc biệt, thiết lập chất chuẩn là tạp chất đang là hướng nghiên cứu và phát triển mới tại Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương 1.5.2 Qui trình thiết lập chất chuẩn hóa học Theo hướng dẫn của WHO và ASEAN, quy trình thiết lập chất chuẩn bao gồm các hướng dẫn cụ thể để thiết lập chất chuẩn phù hợp với mục đích sử dụng Về cơ bản, quá trình trình thiết lập chất chuẩn. .. như chuẩn Quốc tế (ICRS), chuẩn Dược điển Mỹ (USPRS), chuẩn Dược điển châu Âu (EPCRS), chất chuẩn do Viện tiêu chuẩn và công nghệ quốc gia Mỹ (NIST) thiết lập - Chuẩn thứ cấp: chuẩn có giá trị được ấn định bằng cách so sánh với chuẩn gốc của cùng một đại lượng Ví dụ như chuẩn Asean (ARS), chuẩn Dược điển Việt Nam, chuẩn làm việc, 10 Nguồn chất chuẩn thường sử dụng ở Việt Nam: Hiện nay, các chất chuẩn. .. vị có chức năng thiết lập chuẩn tại Việt Nam cần phải có nghiên cứu thiết lập các chất chuẩn là tạp chất bên cạnh các chất chuẩn hoạt chất Khi có nguồn chất chuẩn sẵn có, dễ tiếp cận với giá thành hợp lí sẽ mang lại hiệu quả kinh tế xã hội cao Tạo điều kiện cho các công ty trong nước đẩy mạnh sử dụng chuẩn tạp trong nghiên cứu phát triển sản phẩm, xây dựng tiêu chuẩn và kiểm 3 soát chất lượng Đối với... Trong các phép thử đó các tính chất của chất đối chiếu được so sánh với các tính chất của các chất cần thử Chất chuẩn phải có độ tinh khiết phù hợp với mục đích sử dụng [2] Theo Thủ tục thiết lập và hiệu chuẩn chất chuẩn của Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương, chất chuẩn được mô tả là vật liệu đủ đồng nhất và ổn định đối với một hoặc nhiều tính chất qui định, được thiết lập phù hợp với việc sử dụng dự... trúc, nhận dạng chất Sản phẩm điều chế được khẳng định cấu trúc bằng các phương pháp phân tích phổ hiện đại: phổ hồng ngoại (nén viên KBr), phổ khối (MS) với chế độ ESI-MS, phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H-NMR và 13C-NMR với chất chuẩn nội tetramethylsilan (TMS) 20 2.2.3 Thiết lập chất chuẩn - Xây dựng quy trình thiết lập chất chuẩn: theo VKN/TT/21.20 "Thủ tục thiết lập và hiệu chuẩn chất chuẩn" của Viện... làm khô trong bình hút ẩm trong 24 giờ [12] Để sử dụng cho thiết lập tạp chuẩn, thì nguyên liệu sử dụng phải tinh khiết và ổn định Theo qui định, độ tinh khiết của nguyên liệu cho tạp chuẩn phải lớn hơn 95% [18] 1.5 CHẤT CHUẨN VÀ QUI TRÌNH THIẾT LẬP CHẤT CHUẨN 1.5.1 Khái quát về chất chuẩn Khái niệm Theo Dược điển Việt Nam IV, chất chuẩn là chất đồng nhất đã được xác định là đúng để dùng trong các phép... lập chuẩn: tiến hành theo qui trình đã xây dựng tại phòng thử nghiệm đạt tiêu chuẩn ISO/IEC 17025 và GLP, có hồ sơ đầy đủ theo qui định trong "Thủ tục thiết lập và hiệu chuẩn chất chuẩn" - Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương 21 2.2.4 Kiểm tra tạp chất của clotrimazol Sử dụng chất chuẩn DĐVN (2-clorophenyl)diphenylmethanol đã thiết lập để kiểm tra chất lượng của nguyên liệu hoặc thành phẩm chứa hoạt chất. .. Hiệu chuẩn thiết bị, thẩm định phương pháp - Một số phép thử khác có hướng dẫn trong các chuyên luận riêng Phân loại chất chuẩn [4],[7],[8],[18] - Chất chuẩn gốc: Chất chuẩn được ấn định hoặc thừa nhận rộng rãi là có chất lượng đo lường cao nhất và giá trị của nó được chấp nhận mà không qui chiếu về các chất chuẩn khác của cùng đại lượng, trong tình huống cụ thể Một số chất chuẩn được coi là chuẩn. .. IV (chuẩn Dược điển Việt Nam) "Thủ tục thiết lập và hiệu chuẩn chất chuẩn" - VKN/TT/21.20 (2014) của Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương qui định, chuẩn Dược điển Việt Nam được đánh giá bởi ít nhất 2 khoa thử nghiệm, gồm khoa Thiết lập chất chuẩn & chất đối chiếu và một khoa thử nghiệm khác của Viện Kiểm nghiệm thuốc TW Theo hướng dẫn thực hiện Thông tư 22/2009/TT-BYT về đăng kí thuốc, chấp nhận các chất. .. chủ yếu tập trung vào xác định tạp chất trong nguyên liệu và thành phẩm chứa clotrimazol, chưa thấy có nghiên cứu để ứng dụng trong thiết lập chuẩn tạp chất (2-clorophenyl)diphenylmethanol Còn qui trình sản xuất chất chuẩn của các đơn vị cung cấp chuẩn tạp này trên thế giới là bảo mật, không thể tiếp cận Vì vậy, cần thiết phải tiến hành nghiên cứu để thiết lập tạp chuẩn này sử dụng nguồn nguyên liệu