BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI TRẦN XUÂN TRƢỜNG 1101560 NGHIÊN CỨU SẢN PHẨM TẠO THÀNH TRONG QUÁ TRÌNH TẠO TRẦM SỬ DỤNG CHẾ PHẨM SINH HỌC TK1 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ HÀ NỘI – 2016 BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI TRẦN XUÂN TRƢỜNG 1101560 NGHIÊN CỨU SẢN PHẨM TẠO THÀNH TRONG QUÁ TRÌNH TẠO TRẦM SỬ DỤNG CHẾ PHẨM SINH HỌC TK1 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ Người hướng dẫn: PGS.TS Nguyễn Viết Thân Nơi thực hiện: Bộ môn Dƣợc Liệu HÀ NỘI - 2016 LỜI CẢM ƠN Trong trình học tập nghiên cứu để hoàn thành khóa luận tốt nghiệp này, nhận nhiều giúp đỡ quý báu thầy, cô giáo, đồng nghiệp bạn bè Trước hết, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Viết Thân tận tình hướng dẫn, bảo tạo điều kiện giúp đỡ trình học tập thực đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn DS Nguyễn Thanh Tùng, thầy cô giáo, anh chị kỹ thuật viên Bộ môn Dược liệu tận tình giúp đỡ tạo điều kiện cho trình thực khóa luận Cho phép gửi lời cảm ơn tới Ban giám hiệu nhà trường, phòng Đào tạo phòng Quản lý khoa học, thầy cô giáo trường trang bị kiến thức tận tình giúp đỡ thời gian học tập trường Cuối xin cảm ơn gia đình, bạn bè người thân tạo điều kiện cho trình nghiên cứu khoa học Hà Nội, ngày 12 tháng năm 2016 Sinh viên Trần Xuân Trường MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng Tổng quan trầm hƣơng 1.1 Nguồn gốc, thành phần Trầm hương : 1.1.1 Nguồn gốc Trầm hương : 1.1.2 Thành phần hóa học trầm hương : 1.1.3 Phân loại Trầm hương: 1.2 Phương pháp tạo Trầm hương: 1.2.1 Cơ sở lý luận việc kiến tạo trầm: 1.2.2 Các phương pháp cấy tạo trầm: .6 1.3 Chế phẩm tạo trầm: 1.4 Công dụng giá trị kinh tế trầm hương: 1.4.1 Giá trị Trầm hương: 1.4.2 Công dụng Trầm hương: 10 1.5 Các phương pháp chiết tách tinh dầu trầm hương: 11 1.6 Hiện trạng trồng Dó bầu nước ta nay: 13 Chƣơng Đối tƣợng phƣơng pháp nghiên cứu .15 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị: .15 2.1.1 Nguyên liệu: 15 2.1.2 Thiết bị: 17 2.1.3 Hóa chất sử dụng: 17 2.2 Nội dung nghiên cứu: 17 2.3 Phương pháp nghiên cứu: 17 2.3.1 Xác định tỷ lệ khối lượng sản phẩm tạo thành phần gỗ thân cành Dó bầu qua giai đoạn tạo trầm: 17 2.3.2 Nghiên cứu đặc điểm hiển vi nguyên liệu: .18 2.3.3 Nghiên cứu hàm lượng thành phần hóa học sản phẩm tạo thành: 18 Chƣơng 3: Thực nghiệm, kết 20 3.1 Đánh giá lượng sản phẩm tạo thành trình tạo trầm qua giai đoạn: 20 3.2 Nghiên cứu đặc điểm hiển vi sản phẩm tạo thành trình tạo trầm Dó bầu: 21 3.3 Nghiên cứu hàm lượng thành phần hóa học sản phẩm tạo thành: 25 3.3.1 Sắc kí lớp mỏng: 26 3.3.2 Sắc ký khí: .30 Bàn luận 31 Kết luận đề nghị 32 Danh mục ký hiệu, chữ viết tắt - SKLM : Sắc kí lớp mỏng - SKK : Sắc kí khí - GC/MS : Sắc kí khí kết hợp khối phổ Danh mục bảng Bảng Nội dung Bảng giá Trầm hương (2005) Bảng đánh giá lượng sản phẩm tạo thành Trang 9-10 20 trình tạo trầm sau tháng Bảng đánh giá lượng sản phẩm tạo thành 20 trình tạo trầm sau 16 tháng Bảng đánh giá lượng sản phẩm tạo thành 21 trình tạo trầm sau 24 tháng Bảng kết phân tích thành phần dịch Dó bầu phương pháp GC-MS 30 Danh mục hình vẽ, đồ thị Hình Nội dung Sản phẩm tạo thành từ Dó bầu phương pháp khoan Trang lỗ cấy Nấm Mẫu Dó bầu tạo trầm xử lý chế phẩm sinh học TK1 sau 8 tháng Sơ đồ chiết xuất tinh dầu phương pháp cất kéo nước 12 Sơ đồ chiết xuất tinh dầu phương pháp CO2 lỏng siêu tới 13 hạn Gỗ thân cành Dó bầu xử lý chế phẩm sinh học 15 TK1 sau tháng Gỗ thân cành Dó bầu xử lý chế phẩm sinh học 16 TK1 sau 16 tháng Gỗ thân cành Dó bầu xử lý chế phẩm sinh học 16 TK1 sau 24 tháng Vi phẫu gỗ thân Dó bầu mẫu tháng chưa chiết xuất 22 (chưa nhuộm xanh methylen) Vi phẫu gỗ thân Dó bầu mẫu tháng chưa chiết xuất (đã 22 nhuộm xanh methylen) 10 Vi phẫu gỗ thân Dó bầu mẫu 16 tháng chưa chiết xuất 23 (chưa nhuộm xanh methylen) 11 Vi phẫu gỗ thân Dó bầu mẫu 16 tháng chưa chiết xuất (đã 23 nhuộm xanh methylen) 12 Vi phẫu gỗ thân Dó bầu mẫu 24 tháng chưa chiết xuất (đã 24 nhuộm xanh methylen) 13 Vi phẫu gỗ thân Dó bầu mẫu chiết xuất (đã nhuộm 24 xanh methylen) 14 Sắc ký đồ dịch chiết mẫu Trầm hương bước sóng 27 254nm với hệ dung môi Toluen – Ethylacetat – Acid formic (6 : : 0,5) 15 Sắc ký đồ dịch chiết mẫu Trầm hương bước sóng 28 365nm với hệ dung môi Toluen – Ethylacetat – Acid formic (6 : : 0,5) 16 Sắc ký đồ dịch chiết mẫu Trầm hương màu thuốc thử Vanilin/Ethanol/H2SO4 với hệ dung môi Toluen – Ethylacetat – Acid formic (6 : : 0,5) 29 ĐẶT VẤN ĐỀ Trầm hương sản phẩm lấy từ Dó bầu Trầm hương loại dược liệu quý, khai thác sử dụng từ lâu đời với nhiều công dụng y học cổ truyền, tập tục tín ngưỡng tôn giáo, để làm đẹp, trang trí…Trầm hương mang lại giá trị kinh tế lớn, ngày nhà khoa học không ngừng tìm cách để tạo Trầm từ Dó bầu Hiện diện tích trồng Dó bầu Việt Nam lớn, có số chế phẩm coi có khả thúc đẩy trình tạo trầm Tuy nhiên, hiệu chế phẩm sản phẩm tạo thành chưa nghiên cứu nhiều Theo yêu cầu Cục Quản lý Y Dược học Cổ truyền việc đánh giá tính khả thi trình tạo trầm Công ty Cổ phần Dó bầu Hương Quảng Nam, thực đề tài “ Nghiên cứu sản phẩm tạo thành trình tạo trầm sử dụng chế phẩm sinh học TK1” với mục tiêu: - Xác định sản phẩm tạo thành trầm trình tạo trầm - Thành phần hóa học sản phẩm tạo thành 32 Kết luận đề nghị Qua thời gian thực đề tài “ Nghiên cứu sản phẩm tạo thành trình tạo trầm sử dụng chế phẩm sinh học TK1 ” thu kết sau: Tỷ lệ khối lượng phần tạo trầm thân cành Dó bầu sử dụng chế phẩm sinh học TK1 qua giai đoạn theo chiều ngang có xu hướng giảm Quá trình tạo trầm vừa diễn theo chiều ngang thân cành vừa diễn theo chiều dọc thân Bằng phương pháp nghiên cứu hiển vi xác định phần tạo trầm Dó bầu sử dụng chế phẩm TK1 hình thành nên sản phẩm có khả cho tinh dầu Trầm Các sản phẩm có màu vàng nhạt màu đen, phân bố mạch gỗ Thành phần hóa học phần hóa trầm Dó bầu qua giai đoạn tạo trầm sử dụng chế phẩm TK1 không khác nhiều xác định thành phần Ester acid béo (Ethyl oleate) Đề nghị Cần nghiên cứu thêm hiệu trình tạo trầm sử dụng chế phẩm TK1 với thời gian dài Cần nghiên cứu thêm ứng dụng tinh dầu Trầm xây dựng tiêu chuẩn đánh giá chất lượng tinh dầu Trầm 33 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Nguyễn Tiến Bân (1997), Cẩm nang tra cứu nhận biết họ thực vật hạt kín Việt Nam, NXB Nông Nghiệp TS Nguyễn Ngọc Hạnh KS Mai Thành Chí (2006), Nghiên cứu quy trình công nghệ chiết xuất tinh dầu tiêu trầm CO2 lỏng siêu tới hạn sản xuất piperine từ phế phẩm tiêu Võ Văn Chi Nguyễn Hiền (1991), Trầm Hương, NXB Khoa học Kỹ thuật Đại học Dược Hà Nội ( 2006), Dược học cổ truyền, NXB Y học, tr.224 Hội đồng Dược Điển Việt Nam (2002), Dược điển Việt Nam, Tập 3, tr.494495 Từ Hữu Hùng (1998), Tìm hiểu Quế ( Cinnamomum cassia Blueme) Trầm ( Aquilaria crassna Pierre) trồng Lâm trường Chúc A Huyện Hương Khê, tỉnh Hà Tĩnh, Đại học Dược Hà Nội Nguyễn Hồng Lam (1995), đề tài cấp Bộ Lâm nghiệp : Nghiên cứu thăm dò biện pháp kỹ thuật tạo Trầm hương loài Dó trầm, Trung tâm nghiên cứu Lâm đặc sản - Viện Khoa học Lâm nghiệp Việt Nam Đỗ Tất Lợi (2004), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà XB Y học, tr.435-436 PGS.TS Nguyễn Huy Sơn Báo cáo kết đề tài: Nghiên cứu đánh giá thực trạng phát triển bền vững Dó trầm (Aquilarria spp.) TT Nghiên cứu Lâm sản gỗ 10 Nguyễn Huy Sơn Lê Văn Thành Thực trạng phát triển Dó trầm, Trầm hương tinh dầu Trầm nước ta nay, Viện khoa học Lâm nghiệp Việt Nam 34 11 Nguyễn Thị Tâm (2003), Những tinh dầu lưu hành thị trường, NXB Khoa học Kĩ thuật, tr.7-8 12 Nguyễn Viết Thân (2004, 2007), Những thuốc, vị thuốc thường dùng, NXB Y học, tr.176, 193 13 Th.S Nguyễn Ngọc Thanh (2009), Nghiên cứu công nghệ chiết tách Concret Trầm hương từ Dó Aquilaria Spp, phương pháp CO2 siêu tới hạn phục vụ xuất 14 Nguyễn Đình Trinh (2010), Khóa luận tốt nghiệp Đại học: Phương pháp cấy tạo trầm Dó bầu, Đại học Công nghệ Thành phố Hồ Chí Minh 15 Viện Dược liệu (2003), Cây thuốc động vật làm thuốc việt nam, Tập 2, Nhà XB khoa học kỹ thuật, tr.1002 16 Viện khoa học công nghệ Việt Nam (2007), Sách đỏ, Tập 2, NXB khoa học tự nhiên công nghệ 17 XN.Điều tra thiết kế Lâm – Nông nghiệp (2002), Báo cáo tổng kết đề tài nghiên cứu xác định phương pháp tạo trầm tác nhân vi sinh Dó bầu ( Aquilaria crasssna ) TÀI LIỆU INTERNET 18 hoitramhuongvietnam.org 19 tramhuongvietnam.vn TÀI LIỆU NƯỚC NGOÀI 20 Chen H cộng (2011), "Comparison of Compositions and Antimicrobial Activities of Essential Oils from Chemically Stimulated Agarwood, Wild Agarwood and Healthy Aquilaria sinensis (Lour.) Gilg Trees." 21 Ishihara M., Tsuneya T Uneyama K (1993), "Fragrant sesquiterpenes from agarwooD" 35 22 Ueda J cộng (2006)), "“ New sesquiterpene from Vietnamese agarwoodand its induction effect on brain-derived neurotrophicfactor mRNA expression in vitro ” 36 Phụ lục Mẫu Dó bầu không tạo trầm: Hình 17 - Bảng kết quả, Đồ thị Sắc ký đồ dịch chiết mẫu trắng đo bước sóng 254nm 37 Mẫu Dó bầu tháng tuổi Hình 18 - Bảng kết quả, Đồ thị Sắc ký đồ dịch chiết Dó bầu tạo trầm tháng (1) đo bước sóng 254nm 38 Hình 19 - Bảng kết quả, Đồ thị Sắc ký đồ dịch chiết Dó bầu tạo trầm tháng (2) đo bước sóng 254nm 39 Hình 20 - Bảng kết quả, Đồ thị Sắc ký đồ dịch chiết Dó bầu tạo trầm tháng (3) đo bước sóng 254nm 40 Mẫu Dó bầu 16 tháng: Hình 21- Bảng kết quả, Đồ thị Sắc ký đồ dịch chiết Dó bầu tạo trầm 16 tháng (1) đo bước sóng 254nm 41 Hình 22 - Bảng kết quả, Đồ thị Sắc ký đồ dịch chiết Dó bầu tạo trầm 16 tháng (2) đo bước sóng 254nm 42 Hình 23 - Bảng kết quả, Đồ thị Sắc ký đồ dịch chiết Dó bầu tạo trầm 16 tháng (3) đo bước sóng 254nm 43 Mẫu Dó bầu 24 tháng: Hình 24 - Bảng kết quả, Đồ thị Sắc ký đồ dịch chiết Dó bầu tạo trầm 24 tháng (1) đo bước sóng 254nm 44 Hình 25 - Bảng kết quả, Đồ thị Sắc ký đồ dịch chiết Dó bầu tạo trầm 24 tháng (2) đo bước sóng 254nm 45 Hình 26 - Bảng kết quả, Đồ thị Sắc ký đồ dịch chiết Dó bầu tạo trầm 24 tháng (3) đo bước sóng 254nm 46 Hình 27 –Sắc ký đồ dịch chiết mẫu tạo trầm sử dụng hệ thống GC-MS: