Đang tải... (xem toàn văn)
Bacillus cereus và các loài bacillus khác
BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP TP HỒ CHÍ MINH VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC – THỰC PHẨM MÔN: VI SINH THỰC PHẨM BACILLUS CEREUS VÀ CÁC LOÀI BACILLUS KHÁC Lớp: DHTP7A GVHD: Ths Đào Hồng Hà TP HCM, 26 tháng năm 2013 Danh sách nhóm Bảng phân chia công việc Bacillus cereus Giới thiệu hình thái, đặc tính + bệnh vsv gây Phân lập, nhận dạng + quan hệ với thực phẩm + tổng kết Giới thiệu hình thái, đặc tính + bệnh vsv gây Phân lập, nhận dạng + quan hệ với thực phẩm + tổng kết Giới thiệu hình thái, đặc tính + bệnh vsv gây Phân lập, nhận dạng + quan hệ với thực phẩm + tổng kết Giới thiệu hình thái, đặc tính + bệnh vsv gây Phân lập, nhận dạng + quan hệ với thực phẩm + tổng kết Giới thiệu hình thái, đặc tính + bệnh vsv gây Phân lập, nhận dạng + quan hệ với thực phẩm + tổng kết Bacillus subtilis Bacillus thuringiensis Bacillus pumilis Bacillus mensentericus Phần 1: BACILLUS CEREUS Giới thiệu Một báo cáo trước vụ ngộ độc thực phẩm với vi khuẩn Bacillus spp thực vào năm 1906 Lubenau mô tả đợt bùng phát viện điều dưỡng nơi 300 bệnh nhân nhân viên mắc triệu chứng bệnh tiêu chảy, đau bụng nôn mửa Xuất bào tử vi khuẩn bữa ăn sau tiến hành phân lập thịt viên Mặc dù Lubenau đặt tên sinh vật Bacillus peptonificans, đặc tính ông mô tả giống với chủng B cereus Sau đó, bào tử hiếu khí tiếp tục liên quan đến số dịch bệnh châu Âu vào năm 1936 1943, chúng bị nghi ngờ gây 117 367 trường hợp điều tra Ủy BanY tế Stockholm Bacillus cereus không kết luận chắn chắn nguyên nhân gây ngộ độc thực phẩm năm 1950, sau nguyên tắc phân loại giống làm rõ.Hauge mô tả bốn dịch bệnh Na Uy liên quan đến 600 người Các xe thực phẩm chứa nước sốt vani chuẩn bị trước ngày bảo quản nhiệt độ phòng trước ăn Mẫu nước sốt sau kiểm tra chứa từ 2,5* 10^7 đến 11*10^8 B cereus ml Báo cáo nhiều người châu Âu mô tả bệnh này, bật triệu chứng tiêu chảy Bây xác định ,B cereus nguyên nhân gây hai loại bệnh bệnh thực phẩm: loại tương đối khởi phát muộn, "hội chứng tiêu chảy “và khởi phát nhanh, "hội chứng nôn” mô tả lần vào năm 1971 Anh Từ năm 1975 số loài vi khuẩn Bacillus khác có liên quan với bệnh từ thực phẩm Trong giai đoạn này, phép kiểm tra không tìm thấy mầm thực phẩm thừa / mẫu lâm sàng phát số lượng lớn vi khuẩn Bacillus spp Ít phổ biến so với bùng phát loài đặc trưng B cereus,chúng thường liên quan chặt chẽ đến loài B licheniformis B pumilis B subtilis B thuringiensis báo cáo nguyên nhân gây đợt bùng phát Canada Nhìn chung, báo cáo phần lớn trường hợp bệnh thực phẩm Bacillus spp Ở Anh thấp nhiều so với vi khuẩn Salmonella Kể từ năm 1992 có tới 10 dịch bệnh năm liên quan đến tổng số 67 trường hợp Số liệu thống kê cho thấy đánh giá thấp mức độ thực so với vi khuẩn Salmonella từ liệu đến từ ổ dịch mà ước tính trường hợp lẻ tẻ Trong số khu vực nước Bắc Âu sinh vật dường có tầm quan trọng lớn nhiều.Nó chiếm 33% tổng số vụ ngộ độc thực phẩm vi khuẩn Na Uy từ năm 1988 đến năm 1993, 47% Iceland (1985-1992), 22% Phần Lan (1992) 8,5% Hà Lan (1991) Tại Đan Mạch, Anh xứ Wales, Nhật Bản, Hoa Kỳ Canada số dao động khoảng 0,7 5,0% Hình thái đặc tính Các Bacillus vi khuẩn _Gram dương Hình 1: Hình ảnh nhuộm gramvi khuẩn Bacillus cereus _ Trực khuẩn _Hiếu khí _Bào tử dạng ovan có khả sinh nha bào _Có thể di chuyển lông roi Mặc dù vậy, có vài trường hợp lại Gram âm có biến đổi đa dạng Phân loại chúng phức tạp sửa đổi nhiều lần năm gần đây.Chúng chứa khoảng 80 loài, loại gây ngộ độc thực phẩm thường vi khuẩn Bacillus cereus, số loài có liên quan chặt chẽ với B cereus Bacillus subtilis Bacillus cereus loài kị khí tùy tiện với tế bào thực vật lớn,thường chuỗi từ1,0 mm 3,0-5,0 mm Nó phát triển nhiệt độ khoảng từ 8-55 C, tối ưu khoảng 28-35 C, khả chịu đựng rõ rệt độ pH thấp (tối thiểu 5,0-6,0, tùy thuộc vào acidulant) hoạt độ nước (tối thiểu ~0.95) Bào tử trung tâm, hình dạng elip không gây sưng túi bào tử.Vì bào tử, B cereus có khả phân bố rộng rãi môi trường phân lập từ đất, nước thực vật Sự phổ biến nghĩa thành phần phổ biến hệ sinh vật tạm thời ruột người Các bào tử cho thấy khả chịu biến đổi nhiệt; ghi nhận giá trị D 95 C khoảng đệm phosphate từ phút đến 36 phút.Sức chịu đựng dường thay đổi theo chủng huyết Tại Anh, giản đồ kiểu huyết dựa kháng nguyên(H) roi đưa ra, dựa tập hợp 29 dính kết kháng huyết tăng lên chống lại chủng bùng phát dịch bệnh phân lập từ thực phẩm Trong khoảng 90% dịch bệnh type huyết sinh vật gây bệnh môi trường phân lập phân loại khoảng nửa môi trường Chúng khả liên kết hai loài khác B.cereus gây ngộ độc thực phẩm huyết Một số liên kết với hai triệu chứng, nghiên cứu từ 200 ổ dịch bệnh triệu chứng gây nôn mửa từ khắp nơi giới, huyết loại có khả chịu nhiệt cao so với loại huyết khác, chúng phân lập từ thực phẩm liên quan, mẫu phân lập từ mẫu chất nôn 63,5% trường hợp B cereus hình thành bào tử chất dinh dưỡng khan môi trường có sẵn chúng nảy mầm thành tế bào thực vật Bào tử có vỏ bền làm keratin Các triệu Bào tử B.cereus chứng bệnh lâm sàn: Vi khuẩn Bacillus cereus phân bố nhiều tự nhiên, nhiễm vào loại thức ăn qua đêm hay trữ lạnh lâu, thường gây ngộ độc thực phẩm Độc tố: vi khuẩn sản sinh loại độc tố • Độc tố gây tiêu chảy (Type 1): Diarrhoed toxin Vi khuẩn sản sinh độc tố thịt , rauquả, gia vị Bản chất loại protein gây hủy hoại biểu bì niêm mạc ruột gây tiêuchảy nguy hiểm đến tính mạng • Độc tố gây nôn mửa (Type 2): emetic toxin Vi khuẩn nhiễm gạo, cơm nguội, đậucác loại Bản chất độc tố phospholipit có tính ổn định cao không bị phân hủy nhiệt độ cao dịch dày Ngoài vi khuẩn có enzyme hemolyzin protein gây độc mạnh gây chếtngười Độc tố trung hòa cholesterol huyết góp phần chosự phát triển vi khuẩn 3.1 Triệu chứng nôn mửa: Tính chất/ hoạt động Mô tả 105-108 tb/g thực phẩm Liều nhiễm độc Số lượng tế bào B.cereus: Khối lượng độc tố 12-32µg/kg Nhiệt độ thích hợp 25-30oC Thời gian ủ bệnh 30 phút – tiếng Khoảng thời gian mang bệnh 6-24h Loại thực phẩm thường gặp Cơm, mì ống, phở, đậu … Tên độc tố Cereulide 3.2 Triệu chứng tiêu chảy: Tính chất/ hoạt động Mô tả Liều nhiễm độc 105 tb/g / ml Độc tố sản sinh Trong ruột non Loại độc tố Amin Thời gian ủ bệnh 8-16 tiếng Khoảng thời gian mang bệnh 12-24h Triệu chứng thường gặp Đau bụng dải dẳng, buồn nôn Phân lập nhận dạng 4.1 Truyền thống: Nhóm phương pháp dựa đặc điểm phát triển vi sinh vật môitrường đặc trưng đặc điểm sinh lí, sinh hoá chủng, loài vi sinh vật khác Ưu điểm: Thao tác đơn giản, dễ làm, đầu tư dụng cụ, thiết bị đắt tiền Nhược điểm: - Độ nhạy không cao - Yêu cầu kĩ thao tác cao -Tốn nhiều nhân công - Thời gian phân tích thường kéo dài 4.1.1 Định lượng B.cereus phương pháp đếm khuẩn lạc: -Trải 0.1ml độ pha loãng lên môi trường thạch ủ 24h 300C -MYP: B.cereus không lên men mannitol, tạo lecithinase kháng polymicin nên khuẩn lạc B.cereus có màu hồng eosin, bao quanh vùng có tủa, chứng tỏ lecithinase tạo thành -MOSSE: khuẩn lạc to, màu hồng, xung quanh có vòng sáng -Chọn từ khuẩn lạc (+) cấy sang thạch nghiên chuẩn bị cho phản ứng khẳng địnhB.cereus Các phản ứng khẳng định: Nhuộm Gram: Cấy ria khuẩn lạc chọn từ môi trường MYP/MOSSEL sang ống thạch dinh dưỡng ủ 30oC/ 24h nhuộm Gram quan sát kính hiển vi tế bào nhuộm vật kính 100X nhúng dầu Các bước nhuộm Gram: -Chọn phiến kính sạch, vẽ lên kính vòng tròn, đường kính 2cm vị trí tương ứng với vòng tròn, mặt lại nhỏ vài giọt nước cất thành giọt lớn chuyển sinh khối khuẩn lạc vào giọt nước kính que cấy vòng khuấy nhẹ đầu que cấy để dungdịch huyền phù đồng bôi khu vực vòng tròn để yên cho vệt bôi khô đưa phiến kính vị trí cạnh vệt bôi qua lại lửa đèn cồn/đèn Bunsen để cố định vệt bôi (tránh để vệt bôi tiếp xúc trực tiếp với lửa) -Kết thúc qui trình nhuộm, quan sát kính hiển vi cho ta thấy tế bào nhuộm Gram (+) có màu xanh tía, tế bào nhuộm Gram (-) có màu đỏ hồng B.cereus trực khuẩn lớn, Gram (+), thường kết hợp với thành dạng chuỗi; bào tử hình bầu dục, dạng bào tử nang -Dùng que cấy vòng chuyển lượng sinh khối chủng thử nghiệm ống thạch dinh dưỡng vào 0.5ml BPW vô trùng Tạo huyền phù hóa dịch cho phản ứng sinh hóa phía sau 4.1.2 Định lượng B.cereus phương pháp MPN 10g mẫu vô trùng đồng với 90ml dd đệm phosphat máy dập mẫu DD mẫu pha loãng 10-1 Pha loãng mẫu 10-2, 10-3, 10-4 Chọn nồng độ pha loãng thích hợp Hút 0.1ml dịch pha loãng cho vào đĩa MYP ( nồng độ hai đĩa) Ủ 300C 24-48 Chọn đếm đĩa có từ 15-150 khuẩn lạc đặc trưng Bacillus areus (dẹt, đường kính 2-3 mm, bờ hình cưa, màu đỏ hồng, xung quanh có vòng đục) Chuyển khuẩn lạc nghi ngờ lên môi trường phục hồi TSA Ủ 300C qua đêm Tiến hành thử nghiệm sinh hóa Do có hình thái đặc trưng môi trường thạch chọn lọc như: MannitoEgg-YolkPolymycin (MYP), Cereus Selective Agar (MOSSEL), Polymicin Elgelb MannitolBromothym ol Blue Agar (PEMBA), nên B.cereus phát định lượng môi trường Khuẩn lạc B.cereus MYPKhuẩn lạc B.cereus Bacara Khuẩn lạc B.Cereus PEMBA B cereus thạch MYP Phản ứng sinh hóa: • Thử nghiệm lên men glucose: Cấy vi khuẩn vào 3ml canh Phenol Red Glucose Broth ủ 35 0C/ 24h, kị khí lắc mạnh ống nghiệm,quan sát độ đục (sự phát triển) Nếu môi trường từ đỏ sang vàng chứng tỏ có sinh acid glucose điều kiện kị khí Kết thử nghiệm lên men glucose • Thử nghiệm khả khử nitrate: Cấy vi khuẩn vào 5ml canh trường Nitrate Broth ủ 35 0C/24h, bổ sung vài giọt thuốc thử nitrate, có màu cam xuất 10 phút chứng tỏ nitrate bị khử thành nitrit Ống B C có bổ sung thuốc thử alpha-naphthylamine sulfanilic acid Ống B cho kết dương tính (nitrate bị khử thành nitrite ), Ống C cho kết âm tínhvới nitrite • Thử nghiệm VP: Cấy vi khuần môi trường MR-VP ủ 48h, nhiệt độ 370C bổ sung thuốc thử (α-Napthol) vào môi trường, lắc nhẹ Có loại thuốc thử VP thích hợp trường hợp là: •Thuốc thử Barritt: gồm dung dịch A 5% α-naphthol cồn tuyệt đối, dung dịch B 40% KOH NaOH •Thuốc thử Koblentz: gồm dung dịch A 5% α-naphthol cồn 95%, dung dịch B 0.3% creatine, 40% KOH NaOH Khi sử dụng loại thuốc thử thành phần, trước tiên nhỏ giọt dung dịch A, sau đónhỏ giọt dung dịch B, bổ sung 1ml thuốc thử vào ống môi trường Lắc nhẹ ống phút để oxi hóa acetoin Đọc kết sau 20 phút, chậm 4h Tạo phức hồng (+) • Thử nghiệm khả thủy phân tyrosine: Cấy vi khuẩn vào thạch nghiêng tyrosine, ủ 35 0C/48h xuất khoảng trống xung quanh khuẩn lạc (chứng tỏ tyrosine bị phân hủy) • Thử nghiệm kháng Lysozyme: Cấy vi khuẩn vào môi trường Nutrient Broth chứa 0.001% lysozyme, thực tương tự với môi trường không chứa lysozyme, ủ 350C/24h kiểm tra tăng trưởng môi trường Những ống có kết âm tính ủ thêm 24h kết luận vi khuẩn có kháng lysozme hay không Dựa vào bảng để khẳng định dòng chọn B.cereus hay không Các thử nghiệm phân biệt loài Bacillus nhóm I: 10 Các sắn non chứa vi sinh vật axenic tự thu cách nuôi cấy mô Ba bình chứa 400 ml dung dịch Murashige & Skoog (Murashige & Skoog, 1962) ba bình với nước cất tiệt trùng chuẩn bị Cây sắn chuyển qua bình tiêm chủng 108 CFU ml-1 B pumilus MAIIIM4a Mẫu chứa sắn không tiêm kiểm soát Sau ngày sắn tách thành thân, rễ và mô cắt thành đoạn khoảng cm2 Mỗi phần mô sắn cố định giải pháp Karnovksy đượcđiều chỉnh (Kitajima & Leite, 1999) mẫu giữ mức 8ºC qua đêm Các mẫu rửa lần với đệm cacodylate (0,05M) 10 phút ngâm 1% OsO4 (trong 0,05 M đệm cacodylate, pH 7.2) Các mảnh sắn rửa năm lần, 15 phút đổi nước cất lần Các mẫu bị loại nước dãy ethanol (30, 50, 70, 90 100%), 15 phút thay đổi tăng nồng độ ethanol lần Lặp lặp lại ba lần Cuối cùng, nguyên liệu sắn đạt điểm khô, máy bắn mực vàng phun lên bề mặt kiểm tra cách sử dụng trường phát xạ quét kính hiển vi điện tử (SEM) (LEO Hợp tác Zeiss / Leica, Oberkochem, Đức) Tất thí nghiệm thực ba lần Theo sàng lọc kháng nấm, cho thấy tính kháng nấm mạnh mẽ vi khuẩn Bacillus pumilus MAIIIM4a nên lựa chọn để nghiên cứu sâu hơn, bao gồm đặc tính chất chuyển hóa Do dòng nuôi chất lỏng PD (khoai tây-dextrose) trung bình ủ shaker (150 rpm) 28°C 72 Vào cuối giai đoạn này, chúng ly tâm 10.000×g phút 500 mL sử dụng để chiết với hexane (200 ml), diclometan (200 ml) ethyl acetate (200 ml) Các giai đoạn hữu tương ứng thu thập làm khô với natri sunfat bốc hơi, sau chất chiết xuất dầu thô đạt được: mg từ khai thác hexane, mg từ việc khai thác dichloromethane mg chiết xuất ethyl acetate Quét phân tích hiển vi điện tử cho thấy B pumilus MAIIIM4a có lợi nhiễm mô lá, thân rễ sắn Tuy nhiên, phân bố loài tùy theo môi trường sống Quần thể B pumilus MAIIIM4a thân rễ sắn thể hình Trang 47 Phần lớn tế bào B pumilus MAIIIM4a xâm chiếm nội bào gian bào mô sắn Hoạt động kháng nấm (tỷ lệ phần trăm ức chế chống lại P aphanidermatum) B pumilus MAIIIM4a cao: 54% Phân tích TLC sơ B pumilus MAIIIM4a tách thành ethyl acetate 10 phần thu được, khai thác hexane có hai số thập phân (Bảng 3) Các bioautography thực dành cho chiết xuất ethyl acetate Khu ức chế rõ ràng Rf 0,62, 0,56 0,42 cho B pumilus MAIIIM4a chiết xuất quan sát P aphanidermatum, cho thấy hợp chất chịu trách nhiệm hoạt tính kháng nấm mạnh mẽ apolar Dữ liệu đo phổ khối lượng chứng thực cho việc xác định hợp chất hoạt tính sinh học một lipopeptide, pumilacidin, đặc tính B pumilus Đây lần mà endophytic B pumilus mô tả nhà sản xuất pumilacidin 3.4 Bacillus pumilus phân lập từ môi trường ven biển Cochin, Ấn Độ 3.4.1 Đặc tính sinh hóa phân tử vi khuẩn Bacillus pumilus phân lập từ môi trường ven biển Cochin, Ấn Độ Trong nghiên cứu này, chủng vi khuẩn Bacillus phân lập từ môi trường ven biển Cochin, Ấn Độ xác định phương pháp hóa sinh thông thường, phân tích acid béo methyl ester (FAME) 16S rDNA phần trình tự Phân tích liệu cho thấy vi khuẩn Bacillus Trang 48 pumilus loài chiếm ưu khu vực nghiên cứu B cereus B sphaericus B pumilus phân lập đặc trưng cách độc quyền mồi nước PCR (AP-PCR), kháng sinh biến hình màng PCR cho biết gen độc tố liên kết với vi khuẩn Bacillus spp Tất phân lập B pumilus làm sinh hóa giống nhau, protease lipase hoạt động cao độ nhạy thống với kháng sinh thử nghiệm nghiên cứu Một chủng B pumilus nuôi dưỡng gen cereulide synthetase cesB B cereus mà phân biệt từ phần tách chủng sinh hóa AP-PCR Báo cáo nghiên cứu này, lần đầu tiên, diện gen độc gây nôn cesB B pumilus Các vi khuẩn Gram dương, hiếu khí, vi khuẩn hình que endospore vi khuẩn giống Bacillus sinh vật đại diện rộng rãi đất Do khả chúng để tạo thành bào tử chịu loạt điều kiện môi trường thay đổi, vi khuẩn Bacillus spp thích nghi dễ dàng với môi trường sống khác Sinh lý đa dạng vi khuẩn Bacillus spp yêu cầu xét nghiệm sinh hóa phức tạp cho nhận dạng chúng Những lợi ích phân tích sắc ký toàn mặt nghiêng tế bào acid béo methyl ester (FAME) làm cho kỹ thuật đủ nhạy cảm đáng tin cậy cho nhóm vi khuẩn Bacillus cấp loài Hơn nữa, kỹ thuật dựa axit nucleic 16S rDNA gyrase B (gyrB) phân tích trình tự chứng minh có giá trị to lớn cho phát sinh loài phân tích vi khuẩn Dựa 16S rDNA phân tích trình tự, nhóm xác định loài Bacillus, nhóm (nhóm B subitilis) bao gồm B amyloliquefaciens, B subtilis B pumilus Một số loài vi khuẩn Bacillus sống môi trường biển ven biển, khó để phân loại chúng với môi trường sống địa Cùng với B cereus B subtilis, B pumilus coi thành phần cộng đồng vi khuẩn biển Gần đây, B pumilus báo cáo loài vi khuẩn Bacillus chủ yếu thứ hai tàu vũ trụ Vi khuẩn có độ bền cao với điều kiện môi trường khắc nghiệt cần không cần chất dinh dưỡng, khô, chiếu xạ, H2O2 chất tẩy hóa học Vai trò sinh thái B pumilus nhấn mạnh thực tế chúng sản xuất hợp chất đối kháng với mầm bệnh nấm vi khuẩn Do đó, B pumilus mối quan tâm nghiên cứu đáng kể để hiểu đa dạng sinh lý nó, quan hệ di truyền với vi khuẩn Bacillus spp khác diện yếu tố sinh độc tố Trong báo cáo nghiên cứu này, mô tả i) vi khuẩn Bacillus spp bị cô lập xác định từ mẫu môi trường phương pháp thông thường, FAME trình tự rDNA 16S Trang 49 ii) tiếp tục kiểu hình đặc tính di truyền B pumilus, nhóm Bacillus chủ yếu vi khuẩn vùng ven biển nghiên cứu 3.4.2 Sự cách ly đặc tính sinh hóa vi khuẩn Bacillus Nước biển, trầm tích, thủy sản thu nhận từ Cochin, bờ Tây biển Ấn Độ xử lý để phân lập loài vi khuẩn Bacillus Mẫu cá, động vật có vỏ trầm tích đồng muối phosphate buffered (PBS 0,05 M, pH 7,2), pha loãng môi trường lây lan cấy môi trường thạch dinh dưỡng với 50% nước biển 100 vi lít mẫu nước biển lan truyền trực tiếp mạ môi trường ủ 30oC 24-48 h Đĩa thạch tinh bảo quản -80ºC môi trường dinh dưỡng có chứa 30% glycerol Để nhận dạng phân loại, phân lập phải chịu loạt xét nghiệm sinh hóa, bao gồm giảm nitrat, tăng trưởng kỵ khí, sản xuất khí đốt từ đường, Voges-Proskauer (VP), tăng trưởng nồng độ NaCl khác nhau, nhiệt độ phạm vi pH, suy thoái tinh bột, casein, urê, gelatin, chitin, sản xuất axit từ arabinose, mannitol, xylose, glucose, lactose, sử dụng citrate hoạt động DNase Sản xuất enzym ngoại bào cụ thể caseinase, chitinase, protease, phosphatase kiềm, gelatinase lipase nghiên cứu theo Nghị định thư mô tả Smibert Krieg Thử nghiệm kháng sinh nhạy cảm Sự ức chế chủng B pumilus kháng sinh khác thử nghiệm theo tiêu chuẩn đĩa khuếch tán kỹ thuật Các vi khuẩn cấy phát triển nước dinh dưỡng qua đêm mạ thạch Muller Hinton (Hi-Media, Mumbai) Các đĩa kháng sinh sau với nồng độ ghi ngoặc đơn sử dụng: amoxicillin (25 mcg), penicillin (10 mg), ciprofloxacin (5 mcg), gentamycin (10 mg), cotrimaxazole (25 mcg), chloramphenicol (30 mcg), bacitracin (8 mg), tetracycline (30 mcg), kanamycin (30 mcg), erythromycin (15 mcg), vancomycin (30 mcg) Đặc tính B pumilus Mười sáu chủng phân lập B pumilus từ nguồn khác (Bảng 2) trưng bày thuộc tính kiểu hình thống (Bảng 3) Thử nghiệm sinh lý cho thấy nhận sản xuất protease lipase không thấy amylase, phosphatase, DNase, gelatinase chitinase Một phần trình tự 16S rDNA (≈ 500 bp) B pumilus xác định nghiên cứu cho thấy 99-100% tương đồng với B pumilus trình tự 16S rDNA Ngân hàng gen Tính nhạy cảm với kháng sinh B pumilus đồng Tất 16 phân lập bị ức chế amoxicillin, ciprofloxacin, gentamycin, cotrimaxazole, chloramphenicol, bacitracin, tetracycline, kanamycin, erythromycin, vancomycin Tất chủng biểu tính kháng với penicillin Trang 50 3.5 Kiểu AP-PCR phân lập Mồi ngẫu nhiên CRA 22, mà mang lại 4-10 dải băng với B pumilus, lựa chọn để gõ dòng phân lập AP-PCR Việc phân tích dấu vân tay AP-PCR cho thấy không đồng Trang 51 B pumilus cô lập với 10 mẫu khác (Hình 1) Mặc dù tổng thể di truyền có đa dạng này, gần đồng thu chủng NIOB 485 NIOB 525 (từ cua), chủng NIOB111 (cá) NIOB 426 (từ trầm tích), chủng NIOB096 (từ cua) NIOB169 (từ cá), chủng NIOB163 (từ cá) NIOB431 (từ biển) 3.5.1 Phát gen synthetase cereulide B pumilus phương pháp PCR Một cô lập B pumilus NIOB 133 phân lập từ cá cửa sông mang lại 635 bp amplicon với cesB nhắm mục tiêu mồi EM1-f EM1-r (Hình 2) Các sản phẩm cesB PCR giải trình tự phân tích trình tự nucleotide sản phẩm PCR cho thấy 96% tương đồng với trình tự tương ứng cesB B cereus (GenBank nhập không DQ889676), trình tự amino acid cho thấy 92% tương đồng với vài bất xứng hợp amino acid (Hình 3) Dòng tiêu cực CESA PCR sử dụng mồi CER1 EMT1 Trang 52 Nhận dạng bệnh đột chổi VK B pumilus: Chồi bị biến dạng, co cụm, màu nâu phân đoạn cành chùm hoa ngắn nhỏ lại, nhìn xa dạng chổi Các hoa bị bệnh phát triển khả đậu trái Cành bị bệnh không phát triển, thoái hóa dần khô chết Lá cành bị biến dạng không mở mà xoăn nhỏ lại, bên có lớp lông tơ Bệnh nặng gây chết Quan hệ với thực phẩm Gần đây, pumilacidin-sản phẩm B pumilus liên quan đến trường hợp ngộ độc thực phẩm Một nghiên cứu Brophy Knoop báo cáo thử nghiệm cảm ứng ruột lợn guinea, số hợp chất sản xuất B pumilus báo cáo độc hại chuột, tế bào có nhân điển hình người Ngoài ra, người ta phát B pumilus tác nhân gây ngộ độc thực phẩm, vi khuẩn phát gạo tạo chất độc pumilacidin (From et al., 2007) Các triệu chứng hậu nhiễm trùng bao gồm chóng mặt, đau đầu, ớn lạnh, đau lưng, đau bụng, tiêu chảy Hơn nữa, năm 2007, báo cáo tổng kết nghiên cứu công bố kết luận chủng vi khuẩn Bacillus pumilus làm phát triển tổn thương da hình thái tương tự bệnh vi khuẩn Bacillus anthracis Tổng kết - B pumilus bào tử-ngoại trừ đột biến ATCC 7061-nói chung cho thấy khả chịu áp lực môi trường, bao gồmtiếp xúcánh sáng cực tím, khô hạn, diện chất oxy - hóa hydrogen peroxide Một chủng B pumilus phân lập từ tôm sú tìm thấy, có khả chịu mặn cao ức chế phát triển tác nhân gây bệnh hàng hải, bao gồm vi khuẩn Vibrio alginolyticus , liên kết với Bacillus pumilus GB34 sử dụng thành phần hoạt chất thuốc diệt nấm nông nghiệp Tăng trưởng vi khuẩn rễ ngăn cản Rhizoctonia Fusarium từ bào tử nảy D Bacillus mensentericus Giới thiệu,đặc điểm hình thái,đặc tính Bacillus Mensentericus: Trang 53 Các vi sinh vật phân hủy chất hữu chứa N thường gọi vi sinh vật thối rửa,trong số vi khuẩn đóng vai trò quan trọng.Vi khuẩn thối rửa hiếu khí,kỵ khí tạo thành không tạo thành bào tử.Chúng thể ưa ấm,ưa nhiệt ưa lạnh.Đa số chúng nhạy cảm với độ axit hàm lượng NaCl môi trường.Trong có loại trực khuẩn thường gặp Bacillus mensentericus Bacillus mensentericus: trực khuẩn chuyển động có tiên mao xung quanh , bào tử hình bầu dục,trực khuẩn kết thành chuỗi dài,ngắn khác tạo tế bào đứng riêng rẽ.Chúng có hoạt lực protease cao,bào tử chịu nhiệt độ lớn.Trực khuẩn gần giống Bacillus subtilus có dạng mảnh dài ngắn(3-10)x (0,5-0,6)Mm.Khi phân giải protid chứa S tạo thành H2S.Tế bào Bacillus mensentericus không bị phình to mang bào tử.Khuẩn lạc thường bám chặt vào môi trưởng thạch có dính vào môi trường Loại Bacillus mensentericus tìm thấy tất loại đồ hộp,loại thường không độc,hiếu khí,có nha bào phát triển nhanh nhiệt độ 37 Nha bào bị phá hủy 100 Phân loại:gồm có loại Bacillus mensentericus Fuscus Bacillus Mensentericus Niger Bacillus Mensentericus sinh trưởng phát triển tốt nhiệt độ tối ưu là36-45,tối đa khoảng 5055Khi pH đạt giá trị 4,5-5 ngừng phát triển.Nó có hoạt tính amylase protase hẳn Bacillus Subtilis lên men đường lại hơn.Loại trực khuẩn thường phổ biến tự nhiên,chúng lây nhiễm vả làm hư hỏng thực phẩm.Ngoài sinh loại hợp chất có hoạt tính kháng lại số vi khuẩn khác Bacillusmensentericus(gây bện khoai tây),các vi khuẩn có khả lên men đường glucose sinh bào tử phát triển bột bột bị ẩm.Nếu bột bị nhiễm vi khuẩn đem chế biến gây tượng kéo sợi gọi bệnh sợi dính Bột tinh bột sản phẩm loại ngũ cốc(lúa,lúa mì,lúa mạch),một số loại củ(khoai mì) số loại đậu.Bản chất bột sản phẩm có hàm lượng ẩm thấp.Vì bột tinh bột bảo quản tốt có khả vi sinh vật xâm nhập phát triển Quá trình nhiễm vi sinh vật bột tinh bột xảy độ ẩm chúng vượt giới hạn.Lúc hoạt động enzym có sản phẩm thủy phân tinh bột thành glucose giúp cho vi sinh vật phát triển.Sự phát triển mạnh mẽ vi sinh vật nhanh chóng lảm hư hỏng thực phẩm Vì thế,bột tinh bột sản phẩm cần trì mức ẩm tối thiểu để không cho ẩm xâm nhập Bao bì có khả chống thẩm thấu ẩm vật liệu cần thiết bảo quản.Ngoài kho chứa cần lưu ý không để bị ngập ẩm ướt Ảnh hưởng vi sinh vật số sản phẩm bột tinh bột bảo quản Bột mì: Nếu bảo quản không tốt bột mì bị vón cục,một số vi sinh vật có khả sử dụng đường glucose phát triển Trang 54 Bánh mì: Hệ vi sinh vật bánh mì bắt nguồn từ nguồn bột mì, từ men bánh mì tạp nhiễm.Khi nhào bột số thành phần hệ vi sinh vật phát triển,đặc biệt men bánh mì hoạt đọng lên men tạo cồn sinh CO2 làm nở bột nhào.Khi định hình đem nướng nhiều vi sinh vật bị chết tác dụng nhiệt độ cao Được làm từ bột mì hòa với nước muối lên men men bánh mì nướng nhiệt độ 180200.Khi nướng bánh,các vi sinh vật vỏ bánh chết ruột bánh nóng dần lên nhung không 95-98 nên tế bào sinh dưỡng vi sinh vật bị chết bào tử chúng sống.Những bào tử trực khuẩn khoai tây phát triển thành tế bào làm hỏng bánh mì mà người ta gọi bệnh khoai tây Hư hỏng bánh vi sinh vật: Trong trình bảo quản,vận chuyển thường bị nhiễm vi sinh vật từ bên vào.Đó nguyên nhân gây hư hỏng bánh mì Bệnh nhớt ruột bánh mì trực khuẩn khoai tây gây ra.Trong bột mì đặc biệt bột mì loại loại xấu có lẫn bào tử nướng bánh chúng không bị chết sau nẩy mầm phát triển gây hỏng bánh.Kết ruộ bánh bị nhớt dính,thẫm màu có mùi khó chịu Bánh mì bệnh khoai tây không dùng để ăn,nếu bị nhẹ làm thức ăn gia súc,bị nặng đốt chôn.Các trực khuẩn phát triển tốt pH=6.5-7,còn pH=4.5-5 chúng tạm thời bị ngừng phát triển.Vì ta áp dụng biện pháp thích hợp nâng cao độ axit cho bột nhào để kìm hãm trực khuẩn Quan hệ với thực phẩm Thuộc nhóm vi khuẩn gây độc thịt, hệ vsv đất Là vi khuẩn hiếu khí gây lên men pectin Là vi sinh vật phân giải hiếu khí chất pectin theo giai đoạn : thủy phân yếm khí pectin sản phẩm thủy phân bị oxy hóa tạo thành CO2 H2O Thuộc hệ vsv gây thối rữa: Trực khuẩn có tiên mao xung quanh, cho bào tử hình bầu dục, tế bào không lớn thường xếp thành chuỗi, hình thành H2S phân giải protit Tác nhân trình lên men với dưa chuột, dưa gang muối chua Trong cá đông lạnh: tồn dạng tiềm sinh Trang 55 Cá hộp: cá hộp có chất béo protein, phần tử vây quanh vi khuẩn bảo vệ vi khuẩn khỏi bị chết gia nhiệt Thuộc hệ vsv thịt,gây thối thịt,hoat động bề mặt thịt Có hoạt tính proteaza cao, tiết enzyme proteaza làm phân giải protein tới sản phẩm có mùi hôi thối NH 3, indola, scatola, mercaptan Có sản phẩm lên men, ban đầu acid hữu ức chế vi khuẩn gây thối rữa phát triển, môi trường acid, nấm mốc dễ phát triển hoạt động mạnh tạo thành NH kiềm nitrua, chất trung hòa môi trường acid, tạo điều kiện cho vi khuẩn gây thối rữa phát triển Hệ vsv thịt muối Thịt hộp : trình trùng, bào tử không bị tiêu diệt bào tử chưa qua gia nhiệt nảy mầm 1-2 ngày Nếu qua gia nhiệt cao nảy mầm 370C, sau 20-27 ngày Có xúc xích Nồng độ NaCl làm vi khuẩn ngừng phát triển 10-15% Vi khuẩn tạo nhờn nước đường Có đường thô Vi khuẩn xâm nhập vào đường cát trắng từ siro qua khâu đóng gói, tẩy màu, bảo quản Ngay từ chưa thu hoạch, củ khoai tây, củ sắn, bắp ngô,… bị nhiễm vsv từ đất Vi khuẩn gây hư hỏng trình bảo quản chế biến ngô thành bột gluco tinh khiết Trong giai đoạn bảo quản tinh bột sản xuất gluco mật tinh bột dễ bị vsv phá hoại Tinh bột ướt cho vi khuẩn phát triển, kết tinh bột bị chua đổi màu Vi khuẩn xâm nhập vào dây chuyền công nghệ từ nguyên liệu , nước rửa có khả phát triển công đoạn tinh bột ướt, đặc biệt trình kín Không gây lên men đường sữa, vi khuẩn sinh bào tử, có khả sinh enzyme phân giải protein sữa tạo pepton biến chúng thành acid tự do, NH3 Pepton làm sữa đắng NH3 làm sữa có phản ứng kiềm.vi khuẩn chịu nhiệt tốt nên hình thành sữa phát triển gây hư hỏng sữa Màng nguyên sinh chất chứa 55-75% toàn lipit có tế bào Vi khuẩn Bacillus Mesentericus thường có hệ vi sinh ngũ cốc Nếu nồng độ bào tử vượt 1000 tế bào / g gọi bệnh xảy mức độ bánh mì Mức độ bệnh xảy bánh sau nướng, số lượng đáng kể lại vi khuẩn Căn bệnh phổ biến bột màu trắng suốt mùa hè thực thể sau 24-48 sau nướng, sản phẩm có tay người tiêu dùng Mặc dù vi khuẩn Trang 56 gây mức độ bệnh bị bất hoạt nhiệt độ cao, bào tử kháng nhiệt độ nấu ăn thông thường bình thường Sau làm mát bào tử nhân với tốc độ cao Enzyme sản xuất vi khuẩn phân hủy dây chuyền từ protein lõi bánh mì, biến thành khối keo nâu Đồng thời, lõi có mùi thối, bẻ bánh Khi bệnh nâng cao quan sát thấy dây mỏng xảy vi khuẩn enzyme phân giải protein để làm suy giảm gluten kéo dài thành sợi Sau tinh bột thủy giảm hàm lượng tinh bột 64-16% Căn bệnh phổ biến mùa hè, bánh mì mát mẻ từ 45 oC đến 25oC (sự phát triển tối ưu vi khuẩn Hoạt động vi khuẩn thức ăn thay đổi tiêu thụ, gây rối loạn tiêu hóa Bacillus mesentericus (trực khuẩn khoai tây) 4.1 Lấy mẫu Số lượng mẫu: mẫu trường Thu thập mẫu: theo nguyên tắc chung Chuẩn bị mẫu để phân tích: lấy 25g mẫu thêm 225ml nước pepton đệm, sau tiến hành quy trình pha loãng 4.2 Kiểm tra trực khuẩn khoai tây Bột mì bị nhiễm trực khuẩn khoai tây đem làm bành mì bánh bị bệnh khoai tây, gọi bệnh sợi dính Trực khuẩn khoai tây có nha bào chịu đựng nhiệt độ cao, nhiệt độ không 100 oC vi khuẩn sống, ruột bánh mì Khi gặp nhiệt độ thích hợp vi khuẩn lại phát triển bánh mì, gây mùi khó chịu, bẻ bánh mì thấy ruột có sợi mạng nhện, bệnh ‘khoai tây’ Nhiệt độ 40oC thích hợp cho trực khuẩn khoai tây phát triển, bệnh thường phát triển vào mùa hè Tuy trực khuẩn khoai tây vi khuẩn gây bệnh cho người, bánh mì bị bệnh làm ảnh hưởng đến cảm quan không sử dụng Bởi để ngăn ngừa bánh mì bị hư hỏng trước sử dụng bột mì cần phải kiểm tra trực khuấn khoai tây Trang 57 4.3 Cách làm Phương pháp vi khuẩn Lấy 1g mẫu, cho vào bình có chứa sẵn 30ml nước vô khuẩn, lắc mạnh để hòa tan Đun cách thủy nhiệt độ 80oC 30 phút để diệt vi khuẩn nha bào Dùng ống hút vô khuẩn lấy dung dịch bình cấy vào môi trường thạch môi trường canh thang ủ ấm 24h 4.3.1 Trực khẩn khoai tây mọc thành váng nhăn nheo mặt môi trường canh thang, dịch thể suốt.Ở môi trường thạch khuẩn lạc nhăn nheo, màu xám sẫm, đem phết kính, nhuộm soi thấy trực khuẩn Gram (+) có nha bào Khi thử phản ứng sinh vật thấy phân giải glucose saccharose, sinh acid, không sinh hơi,không phân giải lactose 4.3.2 Phương pháp công nghệ Lấy 1200g bột mì, sau hòa với nước muối men để vào nhiệt độ 25-30 oC, bột nở ra.Chia khối bột thành ba phần trọng lượng nhau, vê thành bánh, nướng lò Sau bánh nguội, bọc bánh loại giấy ‘không thấm không khí’ ủ ấm 37 oC Qua 24h, 48h, 72h lấy bẻ đôi để tìm dấu hiệu bệnh khoai tây Trường hợp kiểm tra lần đầu (24h) có dấu bệnh khoai tây, chứng tỏ bột mì bị nhiễm nặng.Nếu kiểm tra lần thứ hai (48h) thấy dấu hiệu bệnh khoai tây, bột mì bị nhiễm trung bình.Và kiểm tra lần thứ ba (72h) thấy dấu hiệu bệnh khoai tây, bột mì coi bình thường Bột mì có trực khuẩn khoai tây không nên dùng để sản xuất bánh mì, mà nên dùng vào chế biến thực phẩm khác mì sợi Trường hợp cần phải sử dụng bột mì để làm bánh mì (vì chưa có loại bột mì tốt khác), bánh mì phải nặn nhỏ, trọng lượng bánh không 200gram.Bánh mì sau lấy lò phải để nguội phải sử dụng 24h Nếu hấp thu ẩm bảo quản không tốt bột mì bị vón cục, số vsv bào tử có khả sử dụng đường glucose (Bacillus mesentericus) phát triển Bánh mì làm từ bột mì hòa vs nước muối lên men men bánh mì , nướng nhiệt độ 220-250oC Bacillus mesentericus làm bánh mì ki bẻ có nhớt kéo thành Trang 58 Hình: Vi khuẩn Bacillus mesentericus gây bệnh khoai tây môi trường nuôi cấy nhìn kính hiển vi Các biện pháp khuyến cáo: Làm mát nhanh chóng bánh mì ăn chúng tươi Để làm giảm nồng độ 200 bào tử / g bột nhiễm trùng kết hợp bữa ăn chất lượng tốt Nhanh lên men tăng cường cách giảm giá trị pH 5,0-5,2 vi khuẩn nấm làm chậm lại nhiều, tương đương với độ pH bình thường 5,4-5,7 Càng dễ dàng thực cách thêm vào thức ăn giấm 0,5-1,0% (9% độ chua) so với bữa ăn Hiệu ứng tương tự Trang 59 thu cách sử dụng muối axit canxi hydrogen phosphate với tỷ lệ 227 g cho kg bột 45 (0,5% bột) Việc sử dụng chất ức chế vi khuẩn nấm, canxi propionate E 282 (cho sản phẩm lỏng với men) natri propionate (sản phẩm hóa chất lỏng), cách sử dụng tỷ lệ 142 g đến 45 kg bột (0,3% bột) Kết luận Bacillus mesentericus bình thường có bề mặt hạt ngũ cốc Bacillus Mesentericus hình que, vi khuẩn Gram dương, vi khuẩn di động bào tử tồn đất.Nó nghiên cứu bệnh nhiễm trùng đường hô hấp số rối loạn tiêu hóa Tài liệu tham khảo Trung tâm Quốc gia Thông tin Công nghệ sinh học (2008) Bacillus pumilus: Một sinh vật đất khắp nơi [tập tin liệu] Lấy từ http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genome/?term=bacillus% 20pumilus Hendrick C một, Johnson LK, Tomes NJ, Smiley BK, Giá JP Chèn Tn916 vào Bacillus pumilus pMGD302 plasmid chứng để chuyển plasmid kết hợp Plasmid Năm 1991; 26 (1) :1-9.Có sẵn tại: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/1658832 Pan J, Q Huang, Zhang Y gen nhân biểu serine protease có chức cạo lông từ vi khuẩn Bacillus pumilus Hiện vi sinh Năm 2004; 49 (3) :165-9 Có sẵn tại:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15386098 Trung tâm Quốc gia Thông tin Công nghệ sinh học (2008) Các chi tiết gen vi khuẩn Bacillus pumilus [dữ liệu tập tin] Lấy từ http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genome/genomes/440?subset = Zhang ZH, Tian W, Liu DY, et al Đặc tính pPZZ84 plasmid khó hiểu từ vi khuẩn Bacillus pumilus Plasmid Năm 2010; 64 (3) :200-3 Có sẵn tại:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20620162 Trần Linh Thước, Các phương pháo kiểm tra vi sinh vật nước thực phẩm Trang 60 Martin R Adam &Maurice O Moss (2008), Food Microbiology 3rd edition, University of Surrey, Guidford, UK Trang 61 [...]... nghĩa là có Bacillus cereus hoặc các loài bacillus khác trong mẫu thử có số lượng ít hơn giới hạn dưới của phép thử, hoặc cũng có thể do nhiễm loài vi sinh vật khác loài bacillus • Hình ảnh B có nghĩa là trong mẫu có chứa Bacillus cereus gây độc tố Cereulide (CRS) • Hình ảnh C chứng tỏ mẫu thử chứa Bacillus cereus không gây độc tố Cereulide (CRS), hoặc chứa các loài cùng chi bacillus khác (Bacillus thuringensis,... thêm vài ngày rồi kiểm tra lại B .cereus và các Bacillus khác cùng nhóm không tinh thể độc Cách tính kết quả: •Số tế bào B .cereus/ 1g mẫu dựa vào số khuẩn lạc mọc ở mỗi độ pha lõang và hiệu chỉnh bằng tỉ lệ khẳng định (phần trăm khuẩn lạc được xác nhận là B .cereus) .Ví dụ: số khuẩn lạc đếm được ở 13 độ pha lõang 10-4 là 65, có 4 trong 5 khuẩn lạc được chọn xác nhận là B .cereus (được kiểm tra bằng các phản.. .Bacillus cereus phân biệt với các loài khác trong Bacillus nhóm 1 như B.anthracis gây bệnh than cho người, B.thuringiensis tạo độc tố kết tinh gây bệnh cho côn trùng, B.mycoides, B.megaterium dựa vào các đặc tính sinh hóa Các khuẩn lạc được khẳng định dựa trên các thử nghiệm sinh hóa với các đặc điểm như lên men glucose, sinh acid trong điều kiện... đúng kĩ thuật, hoặc cũng có thể có các yếu tố khác ảnh hưởng đến như: hóa chất lạ, bộ kit bị hư hỏng… Do mồi có tính phát quang cho nên có thể đánh dấu chúng với các chất nhuộm khácnhau, nhờ thế để có thể nhân các đoạn khác nhau trong cùng một phản ứng PCR Tuy nhiên phương pháp này có hạn chế là phải tổng hợp các mẫu dò khác nhau cho các trình tự nhận biết khác nhau.[10] Các phương pháp định lượng bằng... chảy bao gồm các sản phẩm từ thịt, súp, rau, bánh tráng miệng và nước sốt Các loại thảo mộc và gia vị khô được sử dụng trong chế biến thực phẩm có thể là một nguồn quan trọng của B .cereus 25 TỔNG KẾT Bào tử và các tế bào sinh trưởng của Bacillus cereus xuất hiện một cách rộng rãi trong tự nhiên, đặc biệt là trong đất (trong đất có thể chứa 105 – 106 bào tử/g), nó có thể được tìm thấy trong các nguồn thực... việc nó kết hợp với các vi sinh vật khác và gây ra các triệu chứng ngộ độc mà ngay cả con người cũng không thể xác định được cách điều trị thì đây thực sự là một vấn đề nan giải, cho dù đó là các vi sinh vật như là Bacillus cereus, B .cereus, Salmonella, B Subtilis, hay B.haemolysis… Nếu chúng ta không biết cách bảo vệ những loại thức ăn mà mình sử dụng thì chính nó cũng sẽ gây ra vô vàn những bệnh lí... chính chúng ta cũng không biết Vì vậy, chúng ta cần phải biết cách phân lập và nhận dạng các loại vi sinh vật khác nhau một cách cơ bản nhất nhằm hạn chế đến mức thấp nhất quá trình gây ngộ độc thực phẩm nếu chúng xảy ra 26 Phần 2: Các chủng loại Bacillus khác A Bacillus Subtilis 1 Sơ lược về vi khuẩn Bacillus subtilis 1.1 Lịchsửpháthiện Bacillus họcNazi subtilis đượcpháthiệnđầutiêntrongphânngựanăm1941bởitổ... nguyên hoặc kháng thể, các cộng hợp tự do, cơ chất và chất phát màu tương ứng với enzyme sẽ được cho vô và màu sẽ xuất hiện trong các giếng thử Việc định lượng kháng thể hoặc kháng nguyên được thực hiện bằng cách đo mật độ quang giữa mẫu và chất chuẩn nhờ máy đọc ELISA 16 17 Gián tiếp: Xác Định Bacillus Cereus Bằng Phương Pháp Elisa Hai loại độc tố gây ra trúng độc thực phẩm do Bacillus cereus sinh ra là... thuringiensis sản xuất hai loại độc tố Các loại chính là Cry (tinh thể), nhiễm độc, mã hóa bằng cách khác nhau gen góc, và đây là cách loại khác nhau của Bt được phân loại Loại thứ hai là những Cyt (tiêu tế bào), nhiễm độc, có thể làm tăng thêm các độc tố Cry, nâng cao hiệu quả của kiểm soát côn trùng Hơn 50 của các gen mã hóa độc tố Cry hiện nay đã được giải trình tự và cho phép các độc tố được giao cho hơn... các chủng dương tính; c - : 90 – 100% các chủng âm tính; d - : Hầu hết các chủng âm tính • - - - + + + -(d) - Thử nghiệm tính di động: Phương pháp 1: Dùng que cấy vòng cấy dịch 24 giờ nuôi cấy thẳng vào giữa môi trường kiểm tra di động cho B .cereus Ủ ở 30 0C,từ 18-24h và kiểm tra dưới ánh đèn kiểu mọc dọc theo đường cấy Kết quả: loài di động mọc khuyếch tán vào môi trường theo hướng xa đường cấy, loài