VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Đề tài: Phân lập, tuyển chọn định tên nấm men Moniliella có khả sinh tổng hợp erythritol cao Người hướng dẫn : PGS.TS VŨ NGUYÊN THÀNH Sinh viên : PHÙNG THỊ NGỌC HÂN Niên khóa : K18 -Lớp 11.01 - KS.CNSH Hà Nội - 2015 Viện Đại Học Mở Hà Nội Khoa Công Nghệ Sinh Học LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu Khóa luận trung thực Tôi xin cam đoan, giúp đỡ cho việc thực Khóa luận cám ơn thông tin trích dẫn Khóa luận ghi rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày 25 tháng 05 năm 2015 Sinh viên Phùng Thị Ngọc Hân Phùng Thị Ngọc Hân ii Lớp: 11.01 Viện Đại Học Mở Hà Nội Khoa Công Nghệ Sinh Học LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình học tập nghiên cứu, em nhận nhiều giúp đỡ, bảo, động viên thầy cô, gia đình bạn bè Lời em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS TS Vũ Nguyên Thành, người tận tình hướng dẫn, bảo,tạo điều kiện giúp em thực khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới tập thể cán Trung tâm Vi sinh vật, Viện Công nghiệp Thực phẩm nhiệt tình giúp đỡ, tạo điều kiện để em hoàn thành tốt công việc Qua đây, em xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô khoa công nghệ sinh học, Viện Đại Học Mở Hà Nội tận tình dạy dỗ chúng em suốt năm học qua Cuối cùng, em xin dành lời cảm ơn chân thành đến gia đình, người thân, bạn bè người động viên, khích lệ em đường học tập, làm quen với công tác nghiên cứu khoa học Hà Nội, Ngày 25 tháng năm 2015 Sinh viên Phùng Thị Ngọc Hân Phùng Thị Ngọc Hân iii Lớp: 11.01 Viện Đại Học Mở Hà Nội Khoa Công Nghệ Sinh Học DANH SÁCH KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Bp: Base pair (cặp bazơ) ITS: Internal transcribed spacer PCR: Polymerase chain reaction (kỹ thuật phản ứng chuỗi polymerase) dNTPs: Deoxyribonucleotide triphosphat DNA: Deoxyribonucleic Acid rDNA: Ribosomal Deoxyribonucleic Acid Phùng Thị Ngọc Hân iv Lớp: 11.01 Viện Đại Học Mở Hà Nội Khoa Công Nghệ Sinh Học DANH MỤC BẢNG Bảng Đặc điểm số loại đường 11 Bảng Kết phân nhóm hình thái 26 Bảng Ký hiệu chủng phổ fingerprinting 28 Bảng Kết phân nhóm 30 chủng fingerprinting 29 Bảng Kết tuyển chọn khả sinh polyol chủng nấm men Moniliella 34 Phùng Thị Ngọc Hân v Lớp: 11.01 Viện Đại Học Mở Hà Nội Khoa Công Nghệ Sinh Học DANH MỤC HÌNH Hình Cây phả hệ mô tả mối quan hệ loài thuộc chi Moniliella Phylloporia pectinata sử dụng nhóm Mã số GenBank trình tự rDNA đưa sau tên loài Thanh chèn tương ứng 5% khác biệt trình tự Hình Hình ảnh tế bào Moniliella suaveolens CBS 120.63 (trái) Moniliella acetoabuten CBS 169.66 (phải).(Nguồn www.mycobank.org) Hình Cấu trúc hóa học erythritol Hình Hình ảnh đường Erythritol Hình Độ loại đường lấy sucrose làm chuẩn 10 Hình Hoa ngũ sắc (Lantana camara) 24 Hình Khuẩn lạc tế bào chủng TBY 5326.3 malt-glucose 2°Bx sau ngày nuôi cấy (thanh chèn tương ứng 10µm) 25 Hình Khuẩn lạc tế bào chủng TBY 5101.1 malt-glucose 2°Bx sau ngày nuôi cấy (thanh chèn tương ứng 10µm) 25 Hình Khuẩn lạc tế bào chủng TBY 5325.1 malt-glucose 2°Bx sau ngày nuôi cấy (thanh chèn tương ứng 10µm) 25 Hình 10 Phổ fingerprinting 30 chủng nấm men phân lập 28 Hình 11 Vị trí chủng đại diện phân lập thuộc chi Moniliella Mã số GenBank trình tự rDNA sau tên loài (thanh chèn tương ứng 2% khác biệt trình tự) Phylloporia pectinata R.Coveny 113 sử dụng nhóm 30 Hình 12 Sắc kí đồ sản phẩm polyols TBY 5100.1 thuộc loài Moniliella sp1 32 Hình 13 Sắc kí đồ sản phẩm polyols TBY 5105.1 thuộc loài M spathulata 33 Phùng Thị Ngọc Hân vi Lớp: 11.01 Viện Đại Học Mở Hà Nội Khoa Công Nghệ Sinh Học MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN ii LỜI CẢM ƠN iii DANH SÁCH KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT iv DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH vi MỤC LỤC vi MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ NẤM MEN MONILIELLA 1.1.1 Giới thiệu chung nấm men Moniliella 1.1.2 Đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh sản Moniliella 1.1.3 Phương pháp phân loại nấm men 1.1.4 Tình hình nghiên cứu ứng dụng Moniliella Việt Nam giới 1.2 ERYTHRITOL 1.2.1 Cấu trúc, tính chất hóa học 1.2.2 Ứng dụng erythritol công nghiệp 11 1.2.3 Tình hình sản xuất erythritol Việt Nam giới 12 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 ĐỐI TƯỢNG 15 2.2 HÓA CHẤT, DỤNG CỤ, TRANG THIẾT BỊ MÁY MÓC 15 2.2.1 Hóa chất 15 2.2.2 Dụng cụ trang thiết bị, máy móc 15 2.3 THÀNH PHẦN MÔI TRƯỜNG SỬ DỤNG TRONG NGHIÊN CỨU 16 2.3.1 Môi trường làm giàu có nồng độ đường cao 16 2.3.2 Môi trường malt-glucose 2°Bx có axit lactic 1‰ 16 2.3.3 Môi trường malt-glucose 2°Bx axit lactic 16 2.3.4 Môi trường GYU 17 2.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 Phùng Thị Ngọc Hân vii Lớp: 11.01 Viện Đại Học Mở Hà Nội Khoa Công Nghệ Sinh Học 2.4.1 Phương pháp phân lập 18 2.4.2 Phương pháp làm giữ giống 18 2.4.3 Quan sát hình thái khuẩn lạc, tế bào 18 2.4.4 Phương pháp tách chiết DNA tế bào nấm men 19 2.4.5 Phương pháp tinh chế DNA 19 2.4.6 Phương pháp tiến hành phản ứng PCR finger printing 19 2.4.7 Phương pháp điện di 20 2.4.8 Nhuộm gel đọc kết 20 2.4.9 Phương pháp phân loại nấm men dựa vào đọc trình tự rDNA 20 2.4.10 Tuyển chọn chủng có khả chuyển hóa glucose thành erythritol 21 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 23 3.1 KẾT QUẢ PHÂN LẬP 23 3.2 QUAN SÁT HÌNH THÁI, KHUẨN LẠC, TẾ BÀO 24 3.3 PHÂN NHÓM BẰNG KỸ THUẬT FINGERPRINTING 27 3.4 ĐỊNH TÊN MỘT SỐ CHỦNG NẤM MEN DỰA VÀO GIẢI TRÌNH TỰ rDNA 29 3.5 TUYỂN CHỌN NHỮNG CHỦNG NẤM MEN MONILIELLA CÓ KHẢ NĂNG CHUYỂN HÓA GLUCOSE THÀNH ERYTHRITOL 31 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 36 TÀI LIỆU THAM KHẢO 37 PHỤ LỤC Phùng Thị Ngọc Hân viii Lớp: 11.01 Viện Đại Học Mở Hà Nội Khoa Công Nghệ Sinh Học MỞ ĐẦU Trước thập kỷ 1980 mà thực phấm chức bắt đầu phát triển rộng rãi, Cerestar bắt đầu nghiên cứu sản xuất loại đường mới, calo để sử dụng từ quy trình lên men liên tục có Erythritol Erythritol loại đường chức bốn cacbon cho phép sử dụng phụ gia thực phẩm Mỹ nhiều nước giới Nó phát vào năm 1848 nhà hóa học người Anh John Stenhouse Những tính chất độc đáo riêng không chứa calo không làm tăng lượng đường máu tạo hội cho Erythritol tiếp thị cách nhanh chóng chất có nguồn gốc tự nhiên nhiều nước gới [1],[19] Erythritol sản xuất thông qua đường Vi sinh vật Trong tự nhiên, Một số chủng nấm có khả sinh erythritol nấm men Moniliella, Pichia, Candida, Trigonopsis, Auriobasidium, Psedozyma, Trichosporon Yarrowia [3] Trong Moniliella nhóm đối tượng đặc biệt quan tâm hiệu suất chuyển hóa đường để tạo Erythritol tương đối cao Nấm men Moniliella phát vào khoảng đầu kỷ 20, nhóm nấm men có sắc tố đen thuộc Basidiomycota, có khả lên men đường, tổng hợp polyol đặc biệt erythritol glycerol, nhóm vi sinh vật có nhiều đặc điểm có lợi sử dụng quy mô công nghiệp khả chịu áp suất thẩm thấu cao, trình lên men đơn giản Nhằm mục đích tuyển chọn chủng Moniliella phân lập Việt Nam có khả chuyển hóa glucose thành erythritol, sở cho việc ứng dụng sản xuất công nghiệp Chúng tiến hành nghiên cứu đề tài “Phân lập, tuyển chọn định tên nấm men Moniliella có khả sinh tổng hợp erythritol cao” Phùng Thị Ngọc Hân Lớp: 11.01 Viện Đại Học Mở Hà Nội Khoa Công Nghệ Sinh Học CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ NẤM MEN MONILIELLA 1.1.1 Giới thiệu chung nấm men Moniliella Con người biết đến nấm men Moniliella vào khoảng đầu kỉ 20 nhóm phân loại không đồng nhất, thành tế bào có melanine sinh sản phương thức nảy chồi Tuy nhiên, nấm men Moniliella loại nấm khó để nhận dạng, hiểu biết chúng chưa hoàn chỉnh [2] Trước nấm men Moniliella chi đặc biệt mặt phân loại, tiến hóa giới nấm Chi Moniliella lần miêu tả năm 1966 với hai loài M acetoabutens M tomentosa (Stolk & Dakin, 1966) Tiếp theo hai loài M suaveolens M mellis, miêu tả von Arx (1972) Rao & de Hoog (1975) Sau tổ hợp Moniliella pollinis đề nghị cho M tomentosa var Pollinis dựa khác biệt đáng kể thành phần G+C (De Hoog & Gueho, 1984) Năm 2009, Rosa cộng cho Moniliella Trichosporonoides (Haskins & Spencer, 1967) xếp vào chi bốn tổ hợp loài M megachiliensis, M nigrescens, M oedocephalis, M spathulata loài M fonsecae đề nghị (Rosa et al, 2009) Gần đây, ba loài công bố M carnis, M dehoogii (Thanh et al, 2012) M byzovii (Thanh et al, 2013) Năm 2014, Wang cộng phân tích dựa trình tự sáu gen bao gồm tiểu đơn vị nhỏ (18S), DNA ribosome (rDNA), đoạn D1/D2 rDNA 26S, vùng ITS bao gồm rDNA 5.8S, hai tiểu đơn vị RNA polymerase II (RPB1 RPB2) nhân tố dịch mã 1-α (EF1-α) Các nhà phân tích đề nghị Moniliellomycetes Malasseziomycetes hai lớp Ustilaginomycotina, chúng có mối quan hệ họ hàng với Ustilaginomycetes, Exobasidiomycetes Và xếp theo trật tự: lớp Moniliellomycetes, Moniliellales, họ Moniliellaceae, chi Moniliella [10] Như chi Moniliella gồm 12 loài: Moniliella acetoabutens Stolk & Dakin (1966) Moniliella byzovii Thanh, Hien & Thom (2013) Moniliella carnis Thanh, Hai, Hien, Takashima & Lachance (2012) Moniliella dehoogii Thanh, Hai, Hien, Takashima & Lachance (2012) Phùng Thị Ngọc Hân Lớp: 11.01 STT KH chủng Nguồn Địa phân điểm lấy lập mẫu KH Hình PCR thái Finger Seq ITS D1/D2 Tên loài Sing erythritol Diễn Lợi 36 TBY Hoa - Diễn 5105.2 Ngũ Sắc Châu - - - - - - - B560 + - - B553 + - + - - - - - - - - - + - + - - - - - - Moniliella spathulata Nghệ An Diễn Lợi 37 TBY Hoa - Diễn 5105.3 Ngũ Sắc Châu - Moniliella spathulata Nghệ An Diễn Lợi 38 TBY Hoa - Diễn 5105.4 Ngũ Sắc Châu - Moniliella sp1 Nghệ An Diễn Lợi 39 TBY Hoa - Diễn 5106.1 Ngũ Sắc Châu - B553 Moniliella dehoogii Nghệ An Diễn Lợi 40 TBY Hoa - Diễn 5106.2 Ngũ Sắc Châu - Moniliella spathulata Nghệ An Diễn Lợi 41 TBY Hoa - Diễn 5106.3 Ngũ Sắc Châu - Moniliella spathulata Nghệ An Diễn Lợi 42 TBY Hoa - Diễn 5106.4 Ngũ Sắc Châu - Moniliella dehoogii Nghệ An 43 44 45 Vườn hoa TBY Hoa 5223.1 Ngũ sắc TBY Hoa 5223.2 Ngũ sắc TBY Hoa Vườn hoa 5223.3 Ngũ sắc hà đông- hà đông- B566 B566 Hà Nội Vườn hoa hà đôngHà Nội Phùng Thị Ngọc Hân Moniliella spathulata Có Moniliella spathulata Moniliella spathulata Lớp: 11.01 STT KH chủng Nguồn Địa phân điểm lấy lập mẫu KH Hình PCR thái B575 + - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - + - - - - - - - - - - - Finger Seq ITS D1/D2 Tên loài Sing erythritol Hà Nội 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 Vườn hoa TBY Hoa 5223.4 Ngũ sắc TBY Hoa 5223.5 Ngũ sắc TBY Hoa 5257.2 Ngũ sắc TBY Hoa 5257.3 Ngũ sắc TBY Hoa 5258.1 Ngũ sắc TBY Hoa 5258.2 Ngũ sắc TBY Hoa 5258.3 Ngũ sắc TBY Hoa 5259.1 Ngũ sắc TBY Hoa 5261.1 Ngũ sắc TBY Hoa 5261.2 Ngũ sắc TBY Hoa 5261.3 Ngũ sắc TBY Hoa Vườn hoa 5262.1 Ngũ sắc hà đông- hà đôngHà Nội Vườn hoa hà đôngHà Nội Vườn hoa hà đôngHà Nội Vườn hoa hà đôngHà Nội Vườn hoa hà đôngHà Nội Vườn hoa hà đôngHà Nội Vườn hoa hà đôngHà Nội Vườn hoa hà đôngHà Nội Vườn hoa hà đông- B565 Hà Nội Vườn hoa hà đôngHà Nội Vườn hoa hà đôngHà Nội Phùng Thị Ngọc Hân Moniliella spathulata Moniliella spathulata Moniliella spathulata Moniliella spathulata Moniliella spathulata Moniliella spathulata Moniliella spathulata Moniliella spathulata Moniliella spathulata Có Moniliella spathulata Moniliella spathulata Moniliella spathulata Lớp: 11.01 STT KH chủng Nguồn Địa phân điểm lấy lập mẫu KH Hình PCR thái Finger Seq ITS D1/D2 Tên loài Sing erythritol Hà Nội 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 Vườn hoa TBY Hoa 5263.1 Ngũ sắc TBY Hoa 5263.2 Ngũ sắc TBY Hoa 5263.3 Ngũ sắc TBY Hoa 5264.1 Ngũ sắc TBY Hoa 5265.1 Ngũ sắc TBY Hoa 5265.2 Ngũ sắc TBY Hoa 5265.3 Ngũ sắc TBY Hoa 5270.1 Ngũ sắc TBY Hoa 5270.2 Ngũ sắc TBY Hoa 5271.1 Ngũ sắc TBY Hoa 5273.1 Ngũ sắc TBY Hoa Vườn hoa 5273.2 Ngũ sắc hà đông- hà đông- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - + - - - - - - - - - - - Hà Nội Vườn hoa hà đôngHà Nội Vườn hoa hà đôngHà Nội Vườn hoa hà đôngHà Nội Vườn hoa hà đôngHà Nội Vườn hoa hà đôngHà Nội Vườn hoa hà đôngHà Nội Vườn hoa hà đôngHà Nội Vườn hoa hà đông- B577 Hà Nội Vườn hoa hà đôngHà Nội Vườn hoa hà đôngHà Nội Phùng Thị Ngọc Hân Moniliella spathulata Moniliella spathulata Moniliella spathulata Moniliella spathulata Moniliella spathulata Moniliella spathulata Moniliella spathulata Moniliella spathulata Moniliella spathulata Moniliella spathulata Moniliella spathulata Moniliella spathulata Lớp: 11.01 STT KH chủng Nguồn Địa phân điểm lấy lập mẫu KH Hình PCR thái Finger Seq ITS D1/D2 Tên loài Sing erythritol Hà Nội 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 Vườn hoa TBY Hoa 5273.3 Ngũ sắc TBY Hoa 5274.1 Ngũ sắc TBY Hoa 5274.2 Ngũ sắc TBY Hoa 5275.1 Ngũ sắc TBY Hoa 5275.2 Ngũ sắc TBY Hoa 5279.2 Ngũ sắc TBY Hoa 5279.3 Ngũ sắc TBY Hoa 5281.1 Ngũ sắc TBY Hoa 5281.2 Ngũ sắc TBY Hoa 5281.3 Ngũ sắc TBY Hoa 5281.4 Ngũ sắc TBY Hoa Vườn hoa 5288.1 Ngũ sắc hà đông- hà đông- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - + - - - - - - - - - - - - - - Hà Nội Vườn hoa hà đôngHà Nội Vườn hoa hà đôngHà Nội Vườn hoa hà đôngHà Nội Vườn hoa hà đôngHà Nội Vườn hoa hà đôngHà Nội Vườn hoa hà đôngHà Nội Vườn hoa hà đông- B578 Hà Nội Vườn hoa hà đôngHà Nội Vườn hoa hà đôngHà Nội Vườn hoa hà đôngHà Nội Phùng Thị Ngọc Hân Moniliella spathulata Moniliella spathulata Moniliella spathulata Moniliella spathulata Moniliella spathulata Moniliella spathulata Moniliella spathulata Moniliella spathulata Moniliella spathulata Moniliella spathulata Moniliella spathulata Moniliella spathulata Lớp: 11.01 STT KH chủng Nguồn Địa phân điểm lấy lập mẫu KH Hình PCR thái Finger Seq ITS D1/D2 Tên loài Sing erythritol Hà Nội 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 TBY Hoa 5288.3 Ngũ sắc TBY Hoa 5289.3 Ngũ sắc TBY Hoa 5290.3 Ngũ sắc TBY Hoa 5291.1 Ngũ sắc TBY Hoa 5291.2 Ngũ sắc TBY Hoa 5291.3 Ngũ sắc TBY Hoa 5295.1 Ngũ sắc TBY Hoa 5295.3 Ngũ sắc TBY Hoa 5298.1 Ngũ sắc TBY Hoa 5303.1 Ngũ sắc Vườn hoa hà đông- - - - - - - - - - + - + - - - - - - + - + - - - - - - + - - - - - Hà Nội Vườn hoa hà đôngHà Nội Vườn hoa hà đôngHà Nội Vườn hoa hà đông- B573 B573 Hà Nội Vườn hoa hà đôngHà Nội Vườn hoa hà đôngHà Nội Vườn hoa hà đông- B579 B579 Hà Nội Vườn hoa hà đôngHà Nội Vườn hoa hà đôngHà Nội Vườn hoa hà đông- B564 Hà Nội Moniliella spathulata Moniliella spathulata Moniliella spathulata Moniliella spathulata Có Moniliella spathulata Moniliella spathulata Moniliella spathulata Có Moniliella spathulata Moniliella spathulata Moniliella spathulata Chúc 92 TBY Hoa 5307.1 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Phùng Thị Ngọc Hân Lớp: 11.01 STT KH chủng Nguồn Địa phân điểm lấy lập mẫu KH Hình PCR thái Finger Seq ITS D1/D2 Tên loài Sing erythritol Chúc 93 TBY Hoa 5311.1 Ngũ sắc SơnChương - - - - - - - - - - - - - - - - - - + - - - - - mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 94 TBY Hoa 5312.1 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 95 TBY Hoa 5312.2 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 96 TBY Hoa 5312.3 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 97 TBY Hoa 5315.1 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 98 TBY Hoa 5315.2 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 99 TBY Hoa 5315.3 Ngũ sắc SơnChương B574 mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội 100 TBY Hoa Chúc Phùng Thị Ngọc Hân Moniliella Lớp: 11.01 STT KH chủng 5316.1 Nguồn Địa phân điểm lấy lập mẫu Ngũ sắc Sơn- KH Hình PCR thái Finger Seq ITS D1/D2 Tên loài Sing erythritol spathulata Chương mỹ- Hà Nội Chúc 101 TBY Hoa 5317.1 Ngũ sắc SơnChương - - - - - - - - - - - - - - - - - - + - - mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 102 TBY Hoa 5317.2 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 103 TBY Hoa 5318.1 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 104 TBY Hoa 5318.2 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 105 TBY Hoa 5318.3 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 106 TBY Hoa 5319.2 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội 107 TBY Hoa Chúc 5320.1 Ngũ sắc Sơn- Phùng Thị Ngọc Hân B571 Moniliella spathulata Lớp: 11.01 STT KH chủng Nguồn Địa phân điểm lấy lập mẫu KH Hình PCR thái Finger Seq ITS D1/D2 Tên loài Sing erythritol Chương mỹ- Hà Nội Chúc 108 TBY Hoa 5320.2 Ngũ sắc SơnChương - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 109 TBY Hoa 5320.3 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 110 TBY Hoa 5320.4 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 111 TBY Hoa 5321.1 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 112 TBY Hoa 5321.2 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 113 TBY Hoa 5322.1 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội 114 TBY Hoa 5322.2 Ngũ sắc Chúc SơnChương Phùng Thị Ngọc Hân Moniliella spathulata Lớp: 11.01 STT KH chủng Nguồn Địa phân điểm lấy lập mẫu KH Hình PCR thái B568 + - - - - - - - - - - - B 561 + - - B562 + - - - - - Finger Seq ITS D1/D2 Tên loài Sing erythritol mỹ- Hà Nội Chúc 115 TBY Hoa 5325.1 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Có Nội Chúc 116 TBY Hoa 5325.3 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 117 TBY Hoa 5326.1 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 118 TBY Hoa 5326.2 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 119 TBY Hoa 5326.3 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella dehoogii Nội Chúc 120 TBY Hoa 5326.4 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella dehoogii Nội Chúc 121 TBY Hoa Sơn- 5327.1 Ngũ sắc Chương Moniliella spathulata mỹ- Hà Phùng Thị Ngọc Hân Lớp: 11.01 STT KH chủng Nguồn Địa phân điểm lấy lập mẫu KH Hình PCR thái Finger Seq ITS D1/D2 Tên loài Sing erythritol Nội Chúc 122 TBY Hoa 5327.2 Ngũ sắc SơnChương - - - - - - + - - - - - - - - - - - - - - mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 123 TBY Hoa 5327.3 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 124 TBY Hoa 5328.1 Ngũ sắc SơnChương B569 mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 125 TBY Hoa 5328.2 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 126 TBY Hoa 5328.3 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 127 TBY Hoa 5328.4 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 128 TBY Hoa 5329.1 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Phùng Thị Ngọc Hân Lớp: 11.01 STT KH chủng Nguồn Địa phân điểm lấy lập mẫu KH Hình PCR thái Finger Seq ITS D1/D2 Tên loài Sing erythritol Chúc 129 TBY Hoa 5330.1 Ngũ sắc SơnChương - - - - - - - - - - - - - - - - - - + - - - - - mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 130 TBY Hoa 5331.1 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 131 TBY Hoa 5331.2 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 132 TBY Hoa 5332.1 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 133 TBY Hoa 5332.2 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 134 TBY Hoa 5332.4 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 135 TBY Hoa 5333.1 Ngũ sắc SơnChương B572 mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội 136 TBY Hoa Chúc Phùng Thị Ngọc Hân Moniliella Lớp: 11.01 STT KH chủng 5333.2 Nguồn Địa phân điểm lấy lập mẫu Ngũ sắc Sơn- KH Hình PCR thái Finger Seq ITS D1/D2 Tên loài Sing erythritol spathulata Chương mỹ- Hà Nội Chúc 137 TBY Hoa 5333.3 Ngũ sắc SơnChương - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 138 TBY Hoa 5333.4 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 139 TBY Hoa 5334.2 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 140 TBY Hoa 5334.3 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 141 TBY Hoa 5335.1 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 142 TBY Hoa 5337.1 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội 143 TBY Hoa Chúc 5337.2 Ngũ sắc Sơn- Phùng Thị Ngọc Hân Moniliella spathulata Lớp: 11.01 STT KH chủng Nguồn Địa phân điểm lấy lập mẫu KH Hình PCR thái Finger Seq ITS D1/D2 Tên loài Sing erythritol Chương mỹ- Hà Nội Chúc 144 TBY Hoa 5337.3 Ngũ sắc SơnChương - - - - - - + - - - - - - - - - - - + - - mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 145 TBY Hoa 5337.4 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 146 TBY Hoa 5338.1 Ngũ sắc SơnChương B563 mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 147 TBY Hoa 5338.2 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 148 TBY Hoa 5339.1 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 149 TBY Hoa 5339.2 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội 150 TBY Hoa 5339.3 Ngũ sắc Chúc SơnChương Phùng Thị Ngọc Hân B570 Moniliella spathulata Có Lớp: 11.01 STT KH chủng Nguồn Địa phân điểm lấy lập mẫu KH Hình PCR thái Finger Seq ITS D1/D2 Tên loài Sing erythritol mỹ- Hà Nội Chúc 151 TBY Hoa 5340.1 Ngũ sắc SơnChương - - - - - - - - - - - - + - + - - - - - - mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 152 TBY Hoa 5340.2 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 153 TBY Hoa 5344.1 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 154 TBY Hoa 5344.2 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 155 TBY Hoa 5345.1 Ngũ sắc SơnChương B567 B567 mỹ- Hà Moniliella spathulata Có Nội Chúc 156 TBY Hoa 5345.2 Ngũ sắc SơnChương mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 157 TBY Hoa Sơn- 5346.2 Ngũ sắc Chương Moniliella spathulata mỹ- Hà Phùng Thị Ngọc Hân Lớp: 11.01 STT KH chủng Nguồn Địa phân điểm lấy lập mẫu KH Hình PCR thái Finger Seq ITS D1/D2 Tên loài Sing erythritol Nội Chúc 158 TBY Hoa 5347.1 Ngũ sắc SơnChương - - - + - - - - - - - - mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 159 TBY 5360.1 Hoa Sơn- chưa Chương biết tên mỹ- Hà B576 Moniliella spathulata Có Nội Chúc 160 TBY 5360.2 Hoa Sơn- chưa Chương biết tên mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Chúc 161 TBY 5360.3 Hoa Sơn- chưa Chương biết tên mỹ- Hà Moniliella spathulata Nội Phùng Thị Ngọc Hân Lớp: 11.01 [...]... chồi có tách ra khỏi tế bào mẹ hay không nhằm phân biệt các chủng khác nhau • Khả năng sinh bào tử: Sử dụng môi trường tạo bào tử, theo dõi thời gian sinh bào tử, hình dạng, số lượng bào tử trong nang, khả năng phá vỡ nang Dựa vào các đặc điểm sinh lý, sinh hóa: Sử dụng các kiểm tra về sinh lý sinh hóa như: khả năng lên men đường, khả năng đồng hóa đường và các hợp chất nitơ, khả năng tạo màng, khả năng. .. pháp phân loại truyền thống dựa vào các đặc điểm về hình thái, sinh lý, sinh hóa để phân loại nấm men [1] Dựa vào đặc điểm hình thái tế bào nấm men: nấm men là cơ thể đơn bào nhưng rất đa dạng về hình thái tế bào Thông thường tế bào nấm men có hình elip, hình cầu, một số có hình kéo dài dạng que, đôi khi có hình quả chanh Vì vậy, dựa vào sự khác nhau về hình thái ta có thể sơ bộ phân loại các giống nấm. .. lý thì công nghệ lên men sử dụng các chủng vi sinh vật có khả năng chuyển hóa tinh bột, đường thành các polyols trong đó có Erythritol đang là một trong những hướng đi nghiêm túc và có nhiều triển vọng Vì vậy, Vi sinh vật đóng vai trò hết sức quan trọng trọng và quyết đinh hiệu suất của quá trình lên men Một số chủng nấm có khả năng sinh erythritol đã được công bố như nấm men Moniliella, Pichia, Candida,... đã có một số nghiên cứu bước đầu về tuyển chọn những chủng Moniliella phân lập tại Việt Nam có khả năng chuyển hóa glucose thành erythritol Kết quả cho thấy, hầu hết các chủng đều Phùng Thị Ngọc Hân 13 Lớp: 11.01 Viện Đại Học Mở Hà Nội Khoa Công Nghệ Sinh Học có khả năng sinh erythritol, chỉ một vài chủng không có Hai chủng sinh erythritol cao nhất là TBY 348 thuộc loài M carnis với tỷ lệ phần trăm erythritol. .. nghệ sinh học CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1 KẾT QUẢ PHÂN LẬP Nấm men Moniliella thường phân bố ở những nơi nhiều dầu, mỡ như thớt gỗ, đất có dầu, mỡ, miệng chai dầu ăn… hoặc những nới có nồng độ đường cao như hoa, mứt, ô mai, hoa quả ngâm…Với mục đích nghiên cứu sự đa dạng của nhóm nấm men Moniliella phục vụ cho quá trình sàng lọc, tuyển chọn những chủng nấm men sinh erythritol cao Các... dàng phân lập được nấm men Moniliella hơn (116/150 mẫu) Tại Nghệ An số lượng mẫu hoa ngũ sắc phân lập được nấm men Moniliella vào mùa hè là (42/124 mẫu) Trong số các mẫu hoa ngũ sắc phân lập được thì hầu hết mỗi mẫu chỉ phân lập được 1 nhóm Moniliella chủ yếu là loài M spathulata, một vài mẫu khác có cả 2 nhóm Moniliella Hình 6 Hoa ngũ sắc (Lantana camara) Các chủng nấm men sau khi phân lập sẽ được phân. .. chất rắn, Moniliella có thể phát triển ở dạng sợi (de Hoog et al., 2011) và thích hợp với công nghệ sản xuất lên men bề mặt [2] Một số nghiên cứu về Moniliella phân lập tại Việt Nam được tiến hành tại Viện Công nghiệp Thực phẩm đã cho thấy tiềm năng ứng dụng trong công nghệ như khả năng chuyển hóa dầu thầu dầu thành tinh dầu đào, khả năng sinh một loại kháng sinh mới (zymocin), khả năng sinh lipase,... bào và DNA, và do đó bảo vệ tế bào chống lại các tác hại của các gốc tự do Erythritol có khả năng tiêu hóa đến 90% và được chuyển hóa hoàn toàn, có tiềm năng lớn nhờ khả năng chống oxy hóa trong cơ thể người Polysaccharide cũng có tác dụng như Phùng Thị Ngọc Hân 9 Lớp: 11.01 Viện Đại Học Mở Hà Nội Khoa Công Nghệ Sinh Học Erythritol là Mannitol Giống như những polysaccharide khác, Erthritol cũng có khả. .. đường và cao nấm men trong các bình schoot riêng ở 121°C trong 15 phút Để nguội (< 60°C) và hòa trộn dung dịch glucose, yeast extract, 10 ml urea 1% (cho 1000 ml) trong box cấy Lắc đều và phân phối vào các bình tam giác 100 ml bằng pipet có bông/ màng lọc Môi trường cần chuẩn bị cho mỗi lần dùng, không bảo quản để tránh nhiễm Tác dụng : Dùng làm môi trường kiểm tra khả năng sinh erythritol của nấm men Moniliella. .. lạc nghi ngờ là nấm men Moniliella được làm tiêu bản và soi dưới kính hiển vi quang học Chọn lấy các khuẩn lạc nấm men Moniliella đại diện tiến hành làm sạch và giữ giống 2.4.2 Phương pháp làm sạch và giữ giống Lấy một ít nấm men cần làm sạch và cấy ria lên đĩa petri chứa môi trường malt-glucose 2°Bx không có axit lactic, sau đó đem nuôi ở nhiệt độ 28- 30°C trong 2-3 ngày Khi thấy nấm men đã mọc mà không