NHỮNG NGUYÊN LIỆU CÓ KHẢ NĂNG CHIẾT XUẤT TANIN Ở VIỆT NAM Tổng quan tanin 1.1 Định nghĩa Tanin hợp chất phenolic có trọng lượng phân tử cao, có chứa nhóm hydroxyl nhóm chức khác (như carboxyl), có khả tạo phức với protein phân tử lớn khác điều kiện môi trường đặc biệt Khái niệm tanin không bao gồm chất phenol đơn giản hay gặp với tanin như: acid gallic, catechin, acid clorogenic… Chúng gọi pseudotanin 1.2 Phân loại tanin 1.2.1 Tanin thủy phân (tanin pyrogallic) Tanin thủy phân ester đường (hoặc polyol) với nhiều phân tử acid phenolic.Phân tử đường thường glucose Acid phenolic acid gallic (galotaunin) hay acid hexahydroxydiphenic (HHDP) dẫn xuất oxy hóa acid dehydrohexahydroxydiphenic (DHHDP), acid chebulic (elagitannin) Tanin thủy phân thường có hàm lượng thấp Khi thủy phân chúng tạo thành acid gallic, epigallic đường Một số tác giả chia tanin thủy phân thành nhóm: Taragallotanin (nhân acid gallic acid quinic) Caffetanin (nhân acid caffeic acid quinic) 1.2.2 Tanin ngưng tụ (Proanthocyanidin-PA) Tanin ngưng tụ oligomer hay polymer đơn vị flavonoid (flavan-3-ol) nối với dây nối C-C không bị cắt thủy phân, catechin, epicatechin chất tương tự Khái niệm “proanthocyanidin” phản ứng xúc tác acid oxy hóa tạo anthocyanidin màu đỏ đun nóng PA dung dịch cồn acid PA chứa từ 2-50 nhiều đơn vị flavonoid Các PA polimer có cấu trúc phức hợp đơn vị flavonoid khác số nhóm bề mặt thay đổi liên kết flavin 1.3 Chiết xuất Tanin thường chiết với hỗn hợp nước hay aceton (thích hợp 70% aceton30% nước aceton hạn chế tanin tủa với protein) Thường tránh dùng methanol gây methanol hóa galoyl Hiệu suất tối đa thu chiết tanin dược liệu tươi dược liệu bảo quản lạnh, hay làm khô áp suất thấp dược liệu khô, phần tanin kết hợp không thuận nghịch với polymer khác Sau cất loại aceton, loại sắc tố lipid khỏi dung dịch nước cách chiết dung môi (như diclomethan) Sau dung dịch nước chiết ethyl acetat để tách proanthocyanidin dimeric hầu hết galotanin Các proanthocyanidin polymeric galotanin có trọng lượng phân tử cao lại pha nước Sử dụng phương pháp sắc ký thích hợp để thu hợp chất tinh khiết Kỹ thuật hay sử dụng kỹ thuật lọc gel, sau dùng phương pháp sắc ký lỏng cao áp pha ngược Khi tinh chế tanin cần loại hợp chất phenolic có trọng lượng phân tử thấp sắc tố dịch chiết thô; tinh chế nhiều loại tanin dựa vào hấp phụ Sephadex LH-20 1.4 Tính chất tanin 1.4.1 Tính chất chung  Tanin hợp chất ologomeric với nhiều đơn vị cấu trúc nhiều nhóm phenolic tự Trọng lượng phân tử từ 500 tới 20000  Tanin tan nước tạo dung dịch keo Tan cồn aceton  Tanin phản ứng với sắt (III) clorid Tanin tạo tủa với muối kim loại nặng gelatin dựa vào tính chất để tách tanin  Tạo phức với: protein, tinh bột, cellulose, muối khoáng 1.4.2 Tính chất tanin thủy phân  Bị thủy phân môi trường kiềm nhẹ, acid nhẹ, nước nóng hay enzym (tanase) tạo thành carbohydrat acid phenolic 1.4.3 Tính chất tanin ngưng tụ  Khó tan nước tanin thủy phân  Dưới tác dụng acid enzym dễ tạo thành chất đỏ tanin hay phlobaphen Phlobaphen tan nước sản phẩn trùng hiệp hóa kèm theo oxy hóa Phlobaphen đặc trưng số dược liệu canh ki na, vỏ quế…  Khi cất khô, cho pyrocatechin chủ yếu; cho tủa màu xanh đậm với muối sắt III, tủa với nước brom  Các sắc tố anthocyanidin có màu thay đổi từ hồng, đỏ tươi, đỏ, màu hoa cà, tím, màu xanh da trời hoa, lá, quả, nước rượu vang Chúng tạo nên vị se rượu vang  Không bị thủy phân điều kiện acid nhẹ, kiềm nhẹ, enzym hay nước nóng  Có thể tan hay không tan dung môi hữu cơ- nước tùy thuộc cấu trúc hóa học bậc polymer hóa 1.5 Phương pháp phân tích tanin 1.5.1 Định tính  Với muối sắt, galotanin elagitanin cho màu đen tạo tủa  Tanin ngưng tụ cho màu hồng với kali iodua  Elagitanin cho màu hồng chuyển sang màu tía sau xanh da trời với hỗn hợp thuốc thử acid nitric acid acetic  Tanin ngưng tụ màu đỏ với vanilin HCl 1.5.2 Định lượng Có thể thực theo phương pháp sau:  Phương pháp so màu với thuốc thử Folin  Phương pháp trọng lượng: Đo trọng lượng với Ytebi (Yb)  Phương pháp bột da  Phương pháp oxy hóa  Phương pháp tạo tủa với đồng acetat, protein PVP  Phương pháp khuếch tán ánh sáng gốc tự 1.6 Tác dụng công dụng 1.6.1 Tác dụng sinh học  Khả tạo tủa với protein đóng góp vào tác dụng chữa tiêu chảy, tác dụng chống chảy máu thuốc có hàm lượng tanin cao  Tanin kết tủa với kim loại nặng alcaloid nên dùng để chữa ngộ độc kim loại nặng alcaloid  Tác dụng ức chế sinh ung thư tanin chủ yếu khả kết hợp tanin với chất gây ung thư  Tanin nồng độ cao ức chế hoạt động enzym, nồng độ thấp lại kích thích hoạt tính enzym  Tanin tham gia vào trình trao đổi chất trình oxy hóa khử Tanin có tác dụng kháng khuẩn nên có tác dụng bảo vệ  Các hợp chất tanin có tác dụng giảm đau chỗ làm giảm tác dụng đầu dây thần kinh trung ương (ức chế diệt vi khuẩn); cầm máu tác dụng làm se hệ mao mạch; có tác dụng chữa trĩ, viêm miệng họng  Tanin uống để trị phải loại trừ khỏi đường tiêu hóa cách dùng thuốc nhuận tràng  Một số tác dụng dược liệu chứa tanin: - Quả hồng (Nhật Bản): Nước ép điều trị cao huyết áp ngăn ngừa chứng đột quỵ Quả hồng chín có tác dụng làm săn se Uống dịch chiết tanin thô hồng làm ức chế đáng kể đột quỵ bất ngờ - Tanin chiết xuất từ vỏ tống quán sủi đỏ ức chế 1,2-dimethylhydrazin gây khối u ruột kết - Tanin chiết xuất từ vỏ Terminalia arjuna có tác dụng ức chế virus HSV-2 in vitro - Tanin có thành phần chó đẻ cưa (Geraniin) dùng để điều trị viêm gan virus ức chế tín hiệu điều khiển proteinkinase, hay ức chế tương tác HBVenhacer I yếu tố dịch mã tế bào - Thành phần polyphenol có tác dụng chống oxy hóa chè xanh có tác dụng ức chế nhiều loại tế bào khác có liên quan đến trình sinh ung thư  Đối với động vật nhai lại, tanin có số tác dụng định ức chế hấp thu thức ăn động vật Tác dụng thay đổi phụ thuộc vào hàm lượng loại tanin hấp thu, khả động vật chế thải độc 1.6.2 Hoạt tính sinh học tanin sản phẩm phân hủy tanin  Tanin thủy phân có hoạt tính sinh học thấp theo đường uống có khả tạo phức với protein nên có độ tan thấp chất béo  Tanin thủy phân tồn ruột độ pH trung tính kiềm pH acid Mức độ thủy phân phụ thuộc hoàn toàn vào hệ vi sinh vật ruột Acid gallic epigallic có tác dụng độc với gan Do vậy, dùng tanin với liều cao thời gian dài gây tổn thương cho gan 1.6.3 Tương tác sinh dược học tanin  Một số tác giả chứng minh, tác dụng chống oxy hóa chè xanh chè đen bị hoàn toàn thêm sữa vào chè  Tuyệt đối tránh đồ uống có hàm lượng tanin cao dùng thuốc chữa bệnh alcaloid  Không nên kê đơn thuốc có hàm lượng tanin cao với vị thuốc có alcaloid cao, đặc biệt dạng cao lỏng hỗn hợp Một số dược liệu chứa hàm lượng tanin cao 2.1 Cau (Areca catechu): 220- 500000 ppm Hạt cau non tỷ lệ tanin 70% chín 15- 20% 2.2 Long nha thảo (Agnmonia eupatona): 50000- 80000 ppm 2.3 Chè (Camelia sinensis): 20% tanin có tác dụng làm săn da, sát khuẩn mạnh  Tanin chè hỗn hợp catechin dẫn xuất có tác dụng vitamin P  Lá chè: 90000-130000 ppm 2.4 Sồi (Quercus infectoria): 400000- 700000 ppm 2.5 Sồi trắng (Quercus alba): 78500- 200000 ppm 2.6 Ngũ bội tử: Ngũ bội tử Âu: 50- 70% tanin 2.7 Ổi (Psidium guyava): Búp non chứa 8- 9% tanin 2.8 Măng cụt (Garcinia mangostana): Vỏ chứa 8% tanin 2.9 Một số khác chứa tanin: Chiêu liêu (Terminalia nigrovenunosa), Cây bàng (Terminalia catappa), Cây sim (Rhodomyrtus tomentosa)…