KĨ THUẬT KÍNH HIỂN VI ĐỒNG TIÊU VÀ ỨNG DỤNG Dương Hồng Cúc Trần Minh Sự Nguyễn Thị Sương I LỊCH SỬ KÍNH HIỂN VI Kính hiển vi Antoni van Leeuwenhoek Kính hiển vi Robert Hook • Frederik Zernike(1888-1966) phát minh kính hiển vi tương phản pha, nhờ đó, quan sát vật thể sống suốt không màu, xoắn thể gây bệnh giang mai mà không cần cố định, nhuộm màu Kính hiển vi quang học hình ảnh aspergillus quan sát kính hiển vi quang học Cấu tạo kính hiển vi quang học Kính hiển vi huỳnh quang hình ảnh huỳnh quang tế bào não chuột II KÍNH HIỂN VI ĐỒNG TIÊU • • • • Giới thiệu kính hiển vi đồng tiêu Kính hiển vi đồng tiêu quét đồng tiêu đĩa quay Ưu nhược điểm kính hiển vi đồng tiêu Ứng dụng kính hiển vi đồng tiêu nghiên cứu sinh học Giới thiệu kính hiển vi đồng tiêu Kính hiển vi đồng tiêu Kính hiển vi đồng tiêu quét Sơ đồ kính hiển vi đồng tiêu quét Sơ đồ kính hiển vi đồng tiêu quét (a) kính hiển vi huỳnh quang (b) Kính hiển vi đồng tiêu đĩa quay Sơ đồ khv đồng tiêu đĩa quay Sơ đồ kính hiển vi đồng tiêu đĩa quay Sơ đồ xoắn ốc Archimedes (a) modem thủy tinh (b) đĩa quay Hình ảnh chụp sợi actin ( xanh) protein connexin (cam) tim chuột A Hình chụp từ kính hiển vi huỳnh quang thông thường B Hình chụp từ kính hiển vi đồng tiêu Ưu – nhược điểm kính hiển vi đồng tiêu Ưu điểm: -KHV đồng tiêu có khả chụp loạt ảnh lớp khác theo chiều sâu mẫu để xây dựng lại cấu trúc chiều; -KHV đồng tiêu quét điểm: cung cấp ảnh hai chiều ba chiều với độ phân giải cực cao -So với KHV điện tử: giá thành thấp mà khả quan sát gần tương đương • - Nhược điểm KHV đồng tiêu quét : cần nhiều thời gian để quét mặt phẳng tiêu điểmkhi quan sát trình động, không chụp ảnh đủ nhanh để ghi lại trình - KHV đồng tiêu quét: dùng ánh sáng laser cường độ cao để chiếu sáng tiêu điểm, nên tẩy fluorochrome quan sát, giới hạn số lượng ảnh thu - KHV đồng tiêu đĩa quay: kích thuớc lỗ cố định phải phù hợp với độ phóng đại vật kính,nên thuờng thiết kế để sử dụng với vật kính 63x 100x hữu dụng cần quan sát tiêu mô độ phóng đại thấp 5 Ứng dụng khv đồng tiêu sinh hoc • Chụp cộng hưởng Ứng dụng chụp hoạt động co hay số chuyển động khác Sợi co rút • Nghiên cứu hình thái học tế bào mô Nhu mô ruột • Ứng dụng y học Chụp mô bệnh, chẩn đoán bệnh trước điều trị Não bệnh nhân alzheimer Các tế bào ung thư da kết nối actin (xanh lá) - loại protein cấu trúc xương • Nghiên cứu phôi động vật Phôi cá ngựa hình thành sau 22h thụ tinh • Các ứng dụng khác nghiên cứu tế bào, DNA, sinh học phân tử, v.v [...]...2 Kính hiển vi đồng tiêu quét Sơ đồ kính hiển vi đồng tiêu quét Sơ đồ kính hiển vi đồng tiêu quét (a) và kính hiển vi huỳnh quang (b) 3 Kính hiển vi đồng tiêu đĩa quay Sơ đồ khv đồng tiêu đĩa quay Sơ đồ kính hiển vi đồng tiêu đĩa quay Sơ đồ xoắn ốc Archimedes (a) và modem thủy tinh (b) đĩa quay Hình ảnh chụp các sợi actin ( xanh) và protein connexin (cam) trong tim chuột A Hình chụp từ kính hiển vi. .. từ kính hiển vi đồng tiêu 4 Ưu – nhược điểm của kính hiển vi đồng tiêu Ưu điểm: -KHV đồng tiêu có khả năng chụp một loạt ảnh của các lớp khác nhau theo chiều sâu của mẫu để xây dựng lại cấu trúc 3 chiều; -KHV đồng tiêu quét điểm: có thể cung cấp ảnh hai chiều và ba chiều với độ phân giải cực cao -So với KHV điện tử: giá thành thấp hơn mà khả năng quan sát gần tương đương • - Nhược điểm KHV đồng tiêu. .. quét từng mặt phẳng tiêu điểmkhi quan sát một quá trình động, không chụp ảnh đủ nhanh để ghi lại được quá trình đó - KHV đồng tiêu quét: dùng ánh sáng laser cường độ cao để chiếu sáng mỗi tiêu điểm, nên có thể tẩy các fluorochrome đang được quan sát, vì vậy giới hạn số lượng ảnh có thể thu được - KHV đồng tiêu đĩa quay: kích thuớc lỗ cố định và phải phù hợp với độ phóng đại của vật kính, nên nó thuờng... được - KHV đồng tiêu đĩa quay: kích thuớc lỗ cố định và phải phù hợp với độ phóng đại của vật kính, nên nó thuờng được thiết kế để sử dụng với vật kính 63x hoặc 100x và nó ít hữu dụng hơn khi cần quan sát các tiêu bản mô ở độ phóng đại thấp 5 Ứng dụng khv đồng tiêu trong sinh hoc • Chụp cộng hưởng Ứng dụng khi chụp hoạt động co cơ hay một số chuyển động khác Sợi cơ co rút • Nghiên cứu hình thái học tế