BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP HCM GVHD: Cô Nguyễn Thị Mỹ Lệ PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM NHÓM 10 FAECAL STREPTOCOCCUS NHÓM 10 MỤC LỤC I KHÁI QUÁT VỀ FAECAL STREPTOCOCCUS II ĐỊNH TÍNH FAECAL STREPTOCOCCUS III PHÂN TÍCH BÀI BÁO NHÓM 10 I KHÁI QUÁT ĐẶC ĐIỂM VSV HỌC KHẢ NĂNG GÂY BỆNH TÍNH CHẤT SINH HÓA TÍNH CHẤT NUÔI CẤY NHÓM 10 ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC HÌNH THÁI NUÔI CẤY Đặc Điểm Chung ENZYME ĐỘC TỐ SINH HÓA KHÁNG NGUYÊN NHÓM 10 a/ HÌNH THÁI & TÍNH CHẤT  Cầu khuẩn  Đk 0,6-0,8 mm  Xếp chuỗi, đứng đôi đám  Đôi có vỏ, lông, không di động, không sinh nha bào, bắt màu gram (+) NHÓM 10 b/ TÍNH CHẤT NUÔI CẤY Streptococcus hiếu khí, kỵ khí tùy tiện Môi trường cần nhiều chất dinh dưỡng (máu, huyết thanh, đường,…) LỎNG THẠCH MÁU MÔI TRƯỜNG ĐẶC  Streptococcus ↑ tốt có CO2   To: 37 C Một số ↑ 10 - 40 C liên cầu khuẩn đường ruột NHÓM 10 MÔI TRƯỜNG Liên cầu dễ tạo chuỗi dài, không Các chuỗi liên cầu ngắn hơn, khuẩn Liên cầu phát triển tốt, làm gãy sau tạo thành hạt nhỏ hạt lạc tròn, tan máu hình thức a, b, Ã lắng xuống đáy môi xám lồi, bóng khô, màu tùy thuộc nhóm liên cầu trường Do sau 24h môi trường trở nên lắng cặn LỎNG ĐẶC THẠCH MÁU NHÓM 10 c/ KHÁNG NGUYÊN M: ĐẶC HIỆU TYPE C: ĐẶC HIỆU NHÓM Dựa vào kháng nguyên M xếp Dựa vào kháng nguyên C xếp liên cầu nhóm thành nhiều type liên cầu thành nhóm từ A, huyết khác B, C,…R KHÁNG P: Là nucleoprotein, có phản ứng T: NGUYÊN Là protein vách tế bào vi chéo với nucleoprotein tụ khuẩn, bị phá hủy nhiệt độ cầu pH acid Vỏ A hyaluronic: R: Là protein, nằm vách tế bào, Có liên cầu có vỏ có số type M liên cầu nhóm A nhóm A NHÓM 10 d/ ENZYME ĐỘC TỐ Enzyme Streptokinase Diphospho pyridine nucleotidase Streptodornase Hyaluronidase NHÓM 10 b) CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH Pha Loãng Mẫu Phân Lập Đếm Khuẩn Lạc Thử Phản Ứng Sinh Hóa  Thử Nghiệm Catalase  Thử Nghiệm Oxydase NHÓM 10 b) CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH -1 -2 -3 Mẫu pha loãng thập phân thành nồng độ phù hợp 10 , 10 , 10 Bước Cấy trải 0,1ml mẫu lên bề mặt môi trường chọn lọc Enterococus Agar, trải khắp Bước bề mặt đĩa que trải thủy tinh Lật ngược đĩa ủ 44 C ngày Đếm tất khuẩn lạc có màu hồng đến màu đỏ đậm, kích thước khoảng 0,5- Bước 3mm, có vòng không màu xung quanh khuẩn lạc NHÓM 10 b) CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH  Chọn khuẩn lạc đặc trưng chuyển qua TSA , ủ qua đêm 37 C Thử sinh hóa qua môi trường BHI 6,5% NaCl, BHI pH 9,6, thử nghiệm catalase, oxydase  Bước Enterococus phân có phản ứng catalase (-), oxydase (-), phát triển môi trường BHI 6,5% NaCl, BHI pH 9,6 NHÓM 10 THỬ NGHIỆM SINH HÓA FAECAL STREPTOCOCCUS THỬ NGHIỆM THỬ NGHIỆM CATALASE OXYDASE NHÓM 10 THỬ NGHIỆM CATALASE Nguyên tắc: Phát men catalase chuyển hóa lượng theo phương thức hô hấp với oxy chất nhận điện tử cuối vi khuẩn hiếu khí kỵ khí tùy ý KẾT QUẢ Lấy vi khuẩn vào que cấy nhúng vài giọt H2O2 PỨ (+): có bọt khí xuất PỨ(-): bọt khí xuất NHÓM 10 THỬ NGHIỆM CATALASE Phát vi sinh vật có hệ enzyme Mục catalase Đích Thử Nghiệm Thực Hiện • • • • Cơ Sở Catalase Sinh Hóa Lấy VSV từ MT nuôi cấy Catalase diện vi sinh vật hiếu khí kỵ khí Đặt VSV lên lam kính tùy ý: Nhỏ H2O2 30% H2O2 →H2O + O2 (bọt khí) Quan sát sau 1-2s NHÓM 10 THỬ NGHIỆM OXYDASE Nguyên tắc: Phát khả sinh enzym cytochrome oxidase vi khuẩn KẾT QUẢ Lấy VSV đặt lên giấy thấm, nhỏ thuốc thử TMPD PỨ (+): Sinh khối chuyển màu xanh PỨ(-): Sinh khối màu trắng NHÓM 10 THỬ NGHIỆM OXYDASE Phát vi sinh vật có hệ enzyme Mục oxydase Đích Thử Nghiệm Thực Hiện • • • Lấy VSV đặt lên giấy thấm Nhỏ thuốc thử TMPD Quan sát sau 30s Oxydase Cơ Sở Sinh Hóa + Cytochrom C khử + H + O2 → Cytochrom C oxi hóa + H2O Cytpchrom C oxi hóa + TMPD khử → TNPD oxi hóa (màu xanh) NHÓM 10 c) KẾT QUẢ Tính Toán TỶ LỆ MẬT ĐỘ KHẲNG ĐỊNH (CFU/g) NHÓM 10 III PHÂN TÍCH BÀI BÁO THE WORL D’ S FAVOURI TE NEWSPAPE R - Since 1992 FAECAL STREPTOCOCCUS Đôi cần phải xác Faecal Streptococcus sử dụng thị chất định nguồn nước bị nhiễm bẩn phân người hay phân gia súc để có biện pháp quản lý thích hợp lượng vệ sinh thực phẩm Khi người ta thường sử dụng tỉ lệ Fecal streptococcus coliform Fecal NHÓM 10 Số lượng VSV thị đầu người đầu gia súc TB mật độ cá thể/g phân Sinh vật Fecal coliform (10 ) Gà Fecal TB số cá thể cho ra/đầu.24 h streptococcus(10 ) Fecal coliform (10 ) Fecal streptococcus(10 ) Tỉ lệ FC/FS 1,3 3,4 240 620 0,4 Bò 0,23 1,3 5.400 31.000 0,2 Vịt 33,0 54,0 11.000 18.000 0,6 Người 13,0 3,0 2.000 450 4,4 Heo 3,3 84,0 8.900 230.000 0,04 Cừu 16,0 38,0 18.000 43.000 0,4 Gà Lôi 0,29 2,8 130 1.300 0,1 NHÓM 10 Số lượng VSV thị đầu người đầu gia súc Tỉ lệ FC/FS:  Của gia súc, gia cầm  Của người lớn  Nếu nằm khoảng từ - mẫu lấy cận khu vực nghi ngờ bị ô nhiễm phân suy nguồn nước bị ô nhiễm phân người gia súc NHÓM 10 Số lượng VSV thị đầu người đầu gia súc Để suy luận đạt tin cậy, cần thỏa điều kiện:  pH mẫu phải từ - để bảo đảm ảnh hưởng xấu đến nhóm VK  Mỗi mẫu phải đếm lần  Mẫu phải lấy nơi cách nguồn ô nhiễm không 24 h  o Chỉ cá thể Fecal coliform phát phép thử 44 C dùng để tính tỉ lệ FC/FS NHÓM 10 Loại số lượng VSV nước thải sinh hoạt chưa xử lý Sinh vật Số lượng cá thể/mL Tổng coliform 10 - 10 Fecal coliform 10 - 10 Fecal streptococci 10 - 10 Enterococci 10 - 10 Salmonella 10 - 10 Pseudomonas aeroginosa 10 - 10 Clostrium perfringens 10 - 10 Trứng ký sinh trùng 10 Vi rút đường ruột 10 - 10 -2 - 10 Thank You ! GVHD: Cô Nguyễn Thị Mỹ Lệ [...]... nhận điện tử cuối cùng ở các vi khuẩn hiếu khí và kỵ khí tùy ý KẾT QUẢ Lấy một ít vi khuẩn vào que cấy và nhúng vài giọt H2O2 PỨ (+): có bọt khí xuất hiện PỨ(-): không có bọt khí xuất hiện NHÓM 10 THỬ NGHIỆM CATALASE Phát hiện các vi sinh vật có hệ enzyme Mục catalase Đích Thử Nghiệm Thực Hiện • • • • Cơ Sở Catalase Sinh Hóa Lấy VSV từ MT nuôi cấy Catalase hiện diện ở các vi sinh vật hiếu khí và kỵ khí... Nguyên tắc: Phát hiện khả năng sinh enzym cytochrome oxidase của vi khuẩn KẾT QUẢ Lấy VSV đặt lên giấy thấm, nhỏ thuốc thử TMPD PỨ (+): Sinh khối chuyển màu xanh PỨ(-): Sinh khối vẫn màu trắng NHÓM 10 THỬ NGHIỆM OXYDASE Phát hiện các vi sinh vật có hệ enzyme Mục oxydase Đích Thử Nghiệm Thực Hiện • • • Lấy VSV đặt lên giấy thấm Nhỏ thuốc thử TMPD Quan sát sau 30s Oxydase Cơ Sở Sinh Hóa + Cytochrom C khử... chuỗi, không di động, không sinh bào tử, bắt màu G (+) tốt trong điều kiện Kỵ Khí, tiết bacteriocin trong quá trình tăng trưởng nước, thực phẩm,… Ở người, chúng sống chủ yếu trong đường tiêu hóa NHÓM 10 2 TÍNH CHẤT SINH HÓA Không có catalase và cytochrom C ↑ được trong MT 6,4% NaCl; 0 pH 9,6; nhiệt độ 44 C PP xác định mật độ: Đếm khuẩn lạc hoặc MPN Faecal FaecalStreptococcus Streptococcus NHÓM 10 3 TÍNH... TÍCH BÀI BÁO THE WORL D’ S FAVOURI TE NEWSPAPE R - Since 1992 FAECAL STREPTOCOCCUS Đôi khi chúng ta cần phải xác Faecal Streptococcus được sử dụng như là chỉ thị chất định là nguồn nước bị nhiễm bẩn bởi phân người hay phân gia súc để có những biện pháp quản lý thích hợp lượng vệ sinh của thực phẩm Khi đó người ta thường sử dụng tỉ lệ Fecal streptococcus coliform trên Fecal NHÓM 10 Số lượng các VSV chỉ... NATRI Faecal Streptococcus lên MT KHẲNG ĐỊNH Bile Esculine Agar men Glucose sinh acid làm Nó thủy phân Esculine → 6,7- đổi màu của chất chỉ thị pH hydroxycourmarin + Fe chất có màu nâu đen 3+ → hợp NHÓM 10 4 KHẢ NĂNG GÂY BỆNH 1970, Faecal Streptococus được biết đến như tác nhân gây nhiễm trùng trong cộng đồng và bệnh vi n: Nhiễm khuẩn đường tiết niệu và nhiễm trùng vết thương Nhiễm trùng hô hấp, hệ Vi m... HÀNH  Chọn ít nhất 5 khuẩn lạc đặc trưng chuyển qua TSA , ủ qua 0 đêm ở 37 C Thử sinh hóa qua môi trường BHI 6,5% NaCl, BHI pH 9,6, thử nghiệm catalase, oxydase  Bước 4 Enterococus phân có phản ứng catalase (-), oxydase (-), phát triển được trong môi trường BHI 6,5% NaCl, BHI pH 9,6 NHÓM 10 THỬ NGHIỆM SINH HÓA FAECAL STREPTOCOCCUS THỬ NGHIỆM THỬ NGHIỆM CATALASE OXYDASE NHÓM 10 THỬ NGHIỆM CATALASE... niệu và nhiễm trùng vết thương Nhiễm trùng hô hấp, hệ Vi m màng trong tim thần kinh TW, vi m khớp, vi m xoang NHÓM 10 II ĐỊNH TÍNH 3 2 1 QUY TRÌNH DỤNG CỤ, NGUYÊN THIẾT BỊ, TẮC M.TRƯỜNG, HÓA CHẤT PHÂN TÍCH NHÓM 10 1 NGUYÊN TẮC Khi được nuôi cấy trong môi trường Acid Natri chứa Triphenyl Tetrazolium Chloride (TTC): Faecal Streptococus có màu hồng đến màu đỏ đậm do sự khử Triphenyl Tetrazolium Chloride... sử dụng tỉ lệ Fecal streptococcus coliform trên Fecal NHÓM 10 Số lượng các VSV chỉ thị trên đầu người và đầu gia súc TB mật độ cá thể/g phân Sinh vật Fecal coliform 6 (10 ) Gà Fecal TB số cá thể cho ra/đầu.24 h 6 streptococcus( 10 ) Fecal coliform 6 (10 ) Fecal 6 streptococcus( 10 ) Tỉ lệ FC/FS 1,3 3,4 240 620 0,4 Bò 0,23 1,3 5.400 31.000 0,2 Vịt 33,0 54,0 11.000 18.000 0,6 Người 13,0 3,0 2.000 450 4,4... Để suy luận đạt tin cậy, cần thỏa điều kiện:  pH của mẫu phải từ 4 - 9 để bảo đảm không có ảnh hưởng xấu đến cả 2 nhóm VK này  Mỗi mẫu phải được đếm ít nhất 2 lần  Mẫu phải được lấy tại nơi cách nguồn ô nhiễm không quá 24 h  o Chỉ những cá thể Fecal coliform phát hiện ở phép thử ở 44 C mới được dùng để tính tỉ lệ FC/FS NHÓM 10 Loại và số lượng các VSV trong nước thải sinh hoạt chưa xử lý Sinh vật... inox Cân phân tích Đèn cồn Lò viba Pipette 1ml, 10ml Tủ ấm NHÓM 10 2 MÔI TRƯỜNG VÀ HÓA CHẤT MÔI TRƯỜNG HÓA CHẤT Tryptose Soy Agar (TSA) 0 0 Cồn 90 và 70 Enterococcus Agar DD creatine 0,5% Brain heart infusion (BHI) chứa 6,5% NaCl DD α-naphtol 5% Brain heart infusion (BHI) có pH 9,6 KOH 40% Tryptose Soya (TSB) HCl 10% NaOH 10% Thuốc thử catalase Que thử oxydase NHÓM 10 3 THỰC HÀNH a) Quy Trình Phân Tích