CHIẾT XUẤT CÁC POLYSACCHARIDE TỪ NẤM LINH CHI, NẤM HẦU THỦ NUÔI TRỒNG Ở VIỆT NAM VÀ THỬ HOẠT TÍNH KHÁNG OXY-HOÁ NGUYỄN CỬU KHOA, HOÀNG THỊ KIM DUNG I MỞ ĐẦU: Polysaccharide: Polysaccharide nhóm hợp chất có cấu trúc đại phân tử gồm monosaccharide liên kết với cầu nối glycoside Nhiều công trình nghiên cứu chứng minh hầu hết polysaccharide tách từ nấm polysaccharide liên kết với protein [2],[3],[4],[5] Các công trình nghiên cứu [2], [5] khẳng định polysaccharide chiết từ nấm Hầu Thủ điều trị hiệu bệnh ung thư thực quản, dày ung thư da mà làm tăng hệ miễn dịch chống lại ung thư phổi di Polysaccharide có hoạt tính dược lý rộng như: điều hòa hệ thống miễn nhiễm thể, có tác dụng chống phóng xạ, giải độc, nâng cao chức gan, tủy xương, máu, tăng sinh tổng hợp thành tố: DNA, RNA, protein, kéo dài tuổi thọ chống u ác tính Nấm Hầu Thủ giá trị thực phẩm-dược phẩm: Nấm Hầu Thủ có tên khoa học Hericium erinaceus, thường mọc hoang Bắc Mỹ Châu Á (Trung Quốc, Nhật Bản) nhiều loại gỗ sồi, dẻ loại rộng Quả thể Hầu Thủ có dạng hình cầu hay hình trứng, mọc riêng rẽ thành chùm có tua nấm dày đặc, rũ xuống Lúc già tua dài chuyển sang màu vàng Nấm Hầu Thủ non có màu trắng ngà, thịt màu trắng đến già nấm ngả sang màu vàng Việc nuôi trồng nấm phát triển gần 20 năm, sản lượng nuôi trồng giới khoảng 66.000 nấm tươi, thấp so với nhu cầu Ở nước ta nấm trồng thử nghiệm quy mô nhỏ Do đó, Hình 1,2 : Thể nấm Hầu Thủ nuôi trồng Tp.HCM khả phát triển nấm Hầu Thủ lớn Nấm Hầu Thủ loại thực phẩm bổ dưỡng, giàu khoáng vitamin Nó có tác dụng nâng cao khả miễn dịch, phục hồi niêm mạc dày, chữa loét ruột, nâng cao sức đề kháng với tình trạng thiếu oxy, làm giảm mỡ máu, tăng cường tuần hoàn máu, chống lão hóa, ức chế sinh trưởng tế bào ung thư [2],[5] Nấm Linh Chi: Linh Chi loại nấm gỗ có tên khoa học Ganoderma lucium Đây loại nấm có mũ đính bên, non thường có màu trắng sau thành màu vàng đến màu nâu nhạt Nấm Linh Chi có loại Thanh chi, Hồng chi, Hoàng chi, Bạch chi, Hắc chi, Từ chi [3],[4] Hình 3: Nấm Linh Chi (Ganoderma lucidum) QuảLIỆU thể nấmVÀ PHƯƠNG PHÁP: II NGUYÊN Nguyên liệu: Sấy khô 80oC, nghiền Linh 2.Chi cung85%, cấplọcbởi Chiết với EtOH Nấm Hầu Thủ nấm Trung tâm nghiên cứu Linh chi thuộc Công ty cổ phần Dược liệu TW2 Dịch lọcvà nấm Dược liệu Cặn Các loại thuốc thử sử dụng gồm thuốc thửo Mayer, Dragendorff, Chiết với nước nóng 100 C x 4giờ x lần, lọc Bouchardat… Phương pháp Polysaccharide Cặn Dịch lọc tách chiết phân đoạn ammonium oxalate 3%, Quy Được thực theo quy trình chiết táchChiết củavới giáo sư Mizuno[3] Thêm 5V EtOH trình tách chiết mô tả sơ đồ hình đun hoàn lưu 3h, lần, lọc Kết tủa Dịch lọc Dịch lọc Sấy chân không F1 Cặn Thêm 5V EtOH Kết tủa Chiết với NaOH 5%, 30oCx 12-30h, lọc Dịch lọc Dịch lọc Sấy chân không Cặn AcOH, pH 5-6, lọc F2 Kết tủa Dịch lọc Thêm 5V EtOH, lọc Sấy chân không Kết tủa Dịch lọc F3-1 Sấy chân không F3-2 Hình 1: Sơ đồ tách chiết polysaccharide nấm Linh chi nấm Hầu thủ Khảo sát số thành phần hóa học hữu nấm phương pháp hóa sơ thực vật [1], [7] Sử dụng thuốc thử khác để xác định diện cấu tử hữu có dịch chiết Xác định hàm lượng đường a/ Xác định hàm lượng đường tổng: phương pháp Phenol-H 2SO4 [1] b/ Xác định hàm lượng đường khử: theo phương pháp SchafferHartmann [1] Xác định tính kháng oxy hóa phân đoạn Polysaccharide phương pháp DPPH MDA [9], [10] III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Hàm lượng chất khô thu qua phân đoạn tách polysaccharide: Bảng 1: Hàm lượng chất khô thu phân đoạn tách chiết Phân đoạn Hàm lượng thu Hàm lượng thu nấm Linh Chi (%) nấm Hầu Thủ (%) F1 11,63 4,25 F2 17,52 1,60 F3-1 9,0 0,77 F3-2 24,70 15,73 Kết khảo sát số thành phần hóa học hữu nấm Bảng 2: Thành phần hóa học có nấm Hầu Thủ nấm Linh Chi Các thành phần hữu Phân tích dung Các hợp dịch chất tan kiềm dịch ether Phân tích dung dịch ether Kết luận Hầu Thủ Linh Chi Antraglycosid Không Không Flavonoid Không Không Acid béo Có Không Alcaloid acid dịch Không Có Tinh dầu Có Có Carotenoid Có Không Phytosterol Có Có Steroid Có Có Antraglycosid Không Không Không Không Tannin Không Không Alcaloid Có Có Anthocyanosid Không Không Saponin Steroid Có Không Saponin Triterpen Không Có Các hợp chất tan Flavonoid dịch cồn Nhận xét: Trong nấm Hầu Thủ Linh Chi có chứa thành phần acid béo, tinh dầu, carotenoid, phytosterol, steroid, alkaloid, saponin steroid, acid hữu cơ, saponin triterpen Kết phân tích cho thấy nấm Linh Chi nuôi trồng quận 12 có thành phần hữu tương tự nấm Linh Chi nuôi trồng Nhật Bản, Hàn Quốc Đà Lạt Kết xác định hàm lượng đường a/ Kết xác định hàm lượng đường tổng Chúng tiến hành phân tích hàm lượng đường tổng cách đo quang phổ kế phân đoạn tách chiết Đo cường độ hấp thụ máy quang phổ DR-2000 bước sóng 490nm Kết đo ghi nhận bảng Bảng 3: Hàm lượng đường tổng phân đoạn nấm Các phân đoạn tách chiết Hàm lượng đường tổng Nấm khô Hàm lượng đường nấm Linh Chi (%) 0,33 2.30 0.48 0.22 0.29 Hàm lượng đường nấm Hầu Thủ (%) 0.88 3.23 1.13 0.43 0.33 F1 F2 F3-1 F32 Nhận xét: theo tài liệu công bố mà thu thập lần có số liệu hàm lượng đường tổng phân đoạn thu nấm Hầu Thủ Tổng hàm lượng đường phân đoạn thu nấm Linh Chi Việt Nam so với tài liệu nước công bố thấp so với nấm Nhật Bản Hàm lượng đường tổng nấm Linh Chi cao hàm lượng đường tổng nấm Hầu Thủ b/ Kết xác định hàm lượng đường khử Chúng tiến hành xác định hàm lượng đường khử phân đoạn tách chiết Kết ghi nhận bảng Bảng 4: Hàm lượng đường khử phân đoạn nấm Các phân đoạn tách chiết Hàm lượng đường khử Nấm khô Hàm lượng đường nấm Linh Chi (%) 8.85 9.48 6.12 Hàm lượng đường nấm Hầu Thủ (%) 11.57 7.43 2.70 29.03 13.58 F1 F2 F3-1 F3-2 4.67 2.72 Nhận xét: Hàm lượng đường khử nấm Hầu Thủ cao hàm lượng đường khử nấm Linh Chi Kết khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa in vitro Các mẫu khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa in vitro thực phân đoạn F1, F2, F3-1, F3-2 nấm Linh Chi nấm Hầu Thủ Kết ghi nhận bảng bảng Bảng 5: Hoạt tính kháng oxy hóa mẫu thử nghiệm DPPH so sánh với Vitamin C Mẫu Đối chứng Vitamin C Hầu Thủ Nồng độ (µg/ml) Hoạt tính kháng oxy hóa (%) 2.5 25.3 25 94.6 100 97.25 500 5.25 F1 1000 6.03 2000 8.93 F2 500 5.87 1000 9.01 2000 11.28 500 0.55 F3-1 1000 5.25 2000 7.19 Linh Chi 500 F3-2 1000 2000 500 F1 1000 2000 500 F2 1000 2000 500 F3-1 1000 2000 500 F3-2 1000 2000 0.82 1.88 2.77 2.51 5.32 8.22 3.37 8.46 13.63 4.31 6.97 11.51 4.23 6.42 10.10 Bảng 6: Hoạt tính kháng oxy hóa mẫu thử nghiệm định lượng MDA Mẫu Nồng độ (µg/ml) Hoạt tính kháng oxy hóa (%) Đối chứng 500 F1 1000 2000 500 F2 1000 Hầu Thủ 2000 500 F3-1 1000 2000 500 F3-2 1000 2000 500 3.09 F1 Linh Chi 1000 2000 500 F2 1000 2000 F3-1 500 1000 2000 500 F3-2 1000 2000 24.33 40.82 0 0 0 0 Nhận xét: - Mẫu Linh Chi thể tác động kháng oxy hóa in vitro hai thử nghiệm DPPH MDA - Mẫu F1của nấm Linh Chi có hoạt tính kháng oxy hóa in vitro thử nghiệm MDA - Các mẫu lại có hoạt tính kháng oxy hóa thử nghiệm DPPH gần hoạt tính kháng oxy hóa thử nghiệm MDA - Hoạt tính kháng oxy hóa mẫu thử thấp so với vitamin C TÀI LIỆU THAM KHẢO Lâm Thị Kim Châu, Nguyễn Thượng Lệch, Văn Đức Chín, Thực tập lớn sinh hóa, Tủ sách khoa học Đại học Khoa học Tự Nhiên Cun Zhuang, Takashi Mizuno et al., Biotech Biochem., 57 (6), 901906, 1993 Takashi Mizuno, Eri Suzuki, Kohjimaki & Hideo Tamaki, Fractination, Chemical Modification and Antitumor Activity of Water – Insoluble Polysaccharides of the Fungi Bodies of Ganoderma lucidum, 1985 4 TS Lê Xuân Thám, Nấm Linh Chi nguồn dược liệu quý Việt Nam, NXB Mũi Cà mau, 1998 Yi-Wei Chang and Ting-Jang Lu, Journal of Food and drug Analysis, Pages 59-67, 2004 Trần Đình Toại, Vũ Ngọc Bản, Lê Cẩm Tú, Nguyễn Thanh Hạnh, Tạp chí hóa học tập 2, trang 258-262, tháng năm 2005 TS Nguyễn Kim Phi Phụng, Các phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ, Tủ sách ĐHKHTN TS Lê Xuân Thám, Nấm công nghệ chuyển hóa môi trường I Nấm tua (Nấm đầu khỉ, nấm đầu rồng,… Henry Jay Forman and Alberto Boveris, Superoxide radical and hydrogen peroxid in mito chondria In “Free radicals in biology” vol 5, edited by W A Pryor, Acad Press, NewYork, 1982 10 Võ Duy Huấn, Study on the saponin composition of Vietnamese medicinal plant: Polycias fruticosa and Achyran theo aspera Luân văn tốt nghiệp thạc sĩ trường Đại học Hirosima, Nhật Bản, 2/1998, page 9-24 SUMMARY EXTRACTION OF POLYSACCHARIDES FROM VIETNAMESE GANODERMA LUCIDUM AND HERICIUM ERINACEUS AND ANTIOXIDANT ASSAY OF THEM From Vietnamese Ganoderma lucidum and Hericium erinaceus, we extracted hot-water soluble polysaccharides by the method of Prof Mizuno and determined some chemical constituents presenting in both such as alkaloid, carotenoid, steroid….In addition, we determined total sugar content and tested the antioxidant ability of these polysaccharides by using MDA and DPPH method [9], [10] Địa chỉ: Nguyễn Cửu Khoa, Hoàng Thị Kim Dung Viện Công nghệ Hóa học – Viện Khoa Học Công Nghệ Việt Nam [...]... Thám, Nấm Linh Chi nguồn dược liệu quý ở Việt Nam, NXB Mũi Cà mau, 1998 5 Yi-Wei Chang and Ting-Jang Lu, Journal of Food and drug Analysis, Pages 59-67, 2004 6 Trần Đình Toại, Vũ Ngọc Bản, Lê Cẩm Tú, Nguyễn Thanh Hạnh, Tạp chí hóa học tập 2, trang 258-262, tháng 5 năm 2005 7 TS Nguyễn Kim Phi Phụng, Các phương pháp cô lập các hợp chất hữu cơ, Tủ sách ĐHKHTN 8 TS Lê Xuân Thám, Nấm trong công nghệ và chuyển... TS Lê Xuân Thám, Nấm trong công nghệ và chuyển hóa môi trường I Nấm tua (Nấm đầu khỉ, nấm đầu rồng,… 9 Henry Jay Forman and Alberto Boveris, Superoxide radical and hydrogen peroxid in mito chondria In “Free radicals in biology” vol 5, edited by W A Pryor, Acad Press, NewYork, 1982 10 Võ Duy Huấn, Study on the saponin composition of Vietnamese medicinal plant: Polycias fruticosa and Achyran theo aspera... aspera Luân văn tốt nghiệp thạc sĩ trường Đại học Hirosima, Nhật Bản, 2/1998, page 9-24 SUMMARY EXTRACTION OF POLYSACCHARIDES FROM VIETNAMESE GANODERMA LUCIDUM AND HERICIUM ERINACEUS AND ANTIOXIDANT ASSAY OF THEM From Vietnamese Ganoderma lucidum and Hericium erinaceus, we extracted hot-water soluble polysaccharides by the method of Prof Mizuno and determined some chemical constituents presenting in both... alkaloid, carotenoid, steroid….In addition, we determined total sugar content and tested the antioxidant ability of these polysaccharides by using MDA and DPPH method [9], [10] Địa chỉ: Nguyễn Cửu Khoa, Hoàng Thị Kim Dung Viện Công nghệ Hóa học – Viện Khoa Học và Công Nghệ Việt Nam