Đang tải... (xem toàn văn)
Cây hoa Huệ Hương (Polianthes tuberose L.) là cây hoa cắt cành thuộc nhóm thân thảo, thích cường độ ánh sáng cao và cho hoa quanh năm. Hoa Huệ Hương được nhập vào nước ta từ rất lâu. Cây hoa Huệ Hương được trồng phổ biến tại vùng Nam Trung Bộ đem lại thu nhập khá cao cho người trồng và chính là cây xóa đói giảm nghèo cho vùng chuyên canh loài cây này.Hiện nay, việc canh tác cây hoa Huệ thường chủ yếu được nhân giống bằng kỹ thuật nhân giống truyền thống, chủ yếu là lấy củ trồng. Với phương pháp nhân giống này dễ lây lan các mầm bệnh có sẵn trong củ, đặc biệt là bệnh virus làm giảm năng suất và phẩm chất hoa, khiến cho giống hoa này ngày càng thoái hóa.Trong những năm gần đây, bệnh hại trên cây hoa Huệ Hương xuất hiện nhiều, đặc biệt trong đó có một bệnh rất khó trị là bệnh chai bông. Tác nhân gây bệnh hiện vẫn chưa xác định được. Bệnh xuất hiện trên diện rộng làm ảnh hưởng đến năng suất và phẩm chất hoa. Bệnh không làm cho cây chết ngay nhưng làm cho chồi, củ, hoa kém phát triển, làm thất thu nguồn thu nhập của nông dân. Các triệu chứng bệnh do virus được mô tả bởi Horner và Person (1988), Chen và Chang (1998) gần giống các biểu hiện ở cây hoa Huệ Hương ở Nam Trung Bộ. Vấn đề đặt ra là làm thế nào để tạo nguồn giống sạch bệnh cung cấp cho nhân dân?Phương pháp nhân giống in vitro với rất nhiều ưu điểm, tạo được cây con trẻ hóa và sạch bệnh nên tiềm năng sinh trưởng, phát triển và năng suất cao, khắc phục được nhược điểm của phương pháp nhân giống truyền thống, khôi phục lại phẩm chất vốn có của giống. Đồng thời hệ số nhân của phương pháp nhân giống này cao đáp ứng được nhu cầu về số lượng giống có chất lượng cao, ổn định đáp ứng được nhu cầu sản xuất trên quy mô rộng. Cho đến nay kĩ thuật nuôi cấy mô đã được nghiên cứu ứng dụng rất có hiệu quả trong việc nhân giống hàng loạt các loại cây trồng tạo ngân hàng cây giống sạch bệnh, khỏe mạnh cho năng suất cao, phẩm chất tốt cung cấp cho sản xuất.2. Mục đích nghiên cứuXác định được ảnh hưởng của các chất đều hòa sinh trưởng thực vật lên quá trình phát sinh hình thái trong quy trình nhân giống cây hoa Huệ Hương bằng kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào, làm cơ sở cho việc hình thành quy trình nhân giống in vitro cây hoa Huệ Hương, góp phần giải quyết những khó khăn của thực tiễn sản xuất hoa.
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC KỸ THUẬT CÔNG NGHỆ TP HCM Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC THỰC VẬT Giảng viên hướng dẫn: Th.S Trịnh Thị Lan Anh i BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO Sinh viên thực MSSV: 0811110049 : Lê Ngọc Mỹ Lớp: 08CSH2 TP Hồ Chí Minh, 2011 MỤC LỤC MỤC LỤC ii DANH MỤC BẢNG ii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT v LỜI MỞ ĐẦU CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 41 4.1 Kết luận .42 4.2 Đề nghị 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO 43 PHỤ LỤC 47 DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Khảo sát ảnh hưởng HgCl 0,1% mức thời gian khác đến hiệu ii khử trùng mẫu cấy BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO 28 Bảng 2.2 Khảo sát ảnh hưởng việc kết hợp HgCl 0,1% Ca(OCl)2 15% đến hiệu khử trùng mẫu cấy 29 Bảng 2.3 Khảo sát ảnh hưởng kinetin lên khả phát sinh hình thái mẫu cấy 29 Bảng 2.4 Khảo sát ảnh hưởng BA đến khả phát sinh hình thái mẫu nuôi cấy 29 Bảng 2.5 Khảo sát ảnh hưởng kết hợp BA auxin khác lên khả phát sinh hình thái mẫu cấy 30 Bảng 3.1 Ảnh hưởng HgCl2 0,1% mức thời gian khác đến hiệu khử trùng mẫu cấy sau tuần nuôi cấy 32 Bảng 3.2 Ảnh hưởng việc kết hợp HgCl2 0,1% 15 phút Ca(OCl)2 15% đến hiệu khử trùng mẫu sau tuần nuôi cấy 33 Bảng 3.3 Ảnh hưởng kinetin lên khả phát sinh hình thái mẫu cấy sau tuần nuôi cấy 35 iii BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO Bảng 3.4 Ảnh hưởng ảnh hưởng BA đến khả phát sinh hình thái mẫu nuôi cấy sau tuần nuôi cấy 37 Bảng 3.5 Ảnh hưởng kết hợp BA auxin khác lên khả phát sinh hình thái mẫu cấy sau tuần nuôi cấy 40 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Polianthes tuberose L 13 Hình 2.1 Hoa Huệ Hương 26 Hình 2.2 Củ hoa Huệ Hương 26 Hình 3.1 Mẫu phát sinh hình thái môi trường MS + 30g/l saccaroza + g/l agar + 2mg/l Kinetin 36 Hình 3.2 Mẫu phát sinh hình thái môi trường MS + 30g/l saccaroza + g/l agar iv + 4mg/l BA BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO 39 Hình 3.3 Mẫu phát sinh hình thái môi trường MS + 30g/l saccaroza + g/l agar + 0,25mg/l IBA + 4mg/l BA 41 Hình 3.4 Mẫu phát sinh hình thái môi trường MS + 30g/l saccaroza + g/l agar + 0,25mg/l 2,4D + 4mg/l BA 41 Hình 3.5 Mẫu phát sinh hình thái môi trường MS + 30g/l saccaroza + g/l agar + 0,25mg/l α-NAA + 4mg/l BA 42 Hình 3.6 Mẫu phát sinh hình thái môi trường MS + 30g/l saccaroza + g/l agar + 0,25mg/l IAA + 4mg/l BA 42 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT v BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO MS: BA: IBA: α-NAA: 2,4-D: Murashige and Skoog, 1962 Benzyl adenin Indol butyric acid α-naphtyl acetic acid 2,4 diclorophenoxy acetic acid IAA: Indol acetic acid vi BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO LỜI MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Cây hoa Huệ Hương (Polianthes tuberose L.) hoa cắt cành thuộc nhóm thân thảo, thích cường độ ánh sáng cao cho hoa quanh năm Hoa Huệ Hương nhập vào nước ta từ lâu Cây hoa Huệ Hương trồng phổ biến vùng Nam Trung Bộ đem lại thu nhập cao cho người trồng xóa đói giảm nghèo cho vùng chuyên canh loài Hiện nay, việc canh tác hoa Huệ thường chủ yếu nhân giống kỹ thuật nhân giống truyền thống, chủ yếu lấy củ trồng Với phương pháp nhân giống dễ lây lan mầm bệnh có sẵn củ, đặc biệt bệnh virus làm giảm suất phẩm chất hoa, khiến cho giống hoa ngày thoái hóa Trong năm gần đây, bệnh hại hoa Huệ Hương xuất nhiều, đặc biệt có bệnh khó trị bệnh chai Tác nhân gây bệnh chưa xác định Bệnh xuất diện rộng làm ảnh hưởng đến suất phẩm chất hoa Bệnh không làm cho chết làm cho chồi, củ, hoa phát triển, làm thất thu nguồn thu nhập nông dân Các triệu chứng bệnh virus mô tả Horner Person (1988), Chen Chang (1998) gần giống biểu hoa Huệ Hương Nam Trung Bộ Vấn đề đặt làm để tạo nguồn giống bệnh cung cấp cho nhân dân? Phương pháp nhân giống in vitro với nhiều ưu điểm, tạo trẻ hóa bệnh nên tiềm sinh trưởng, phát triển suất cao, khắc phục nhược điểm phương pháp nhân giống truyền thống, khôi phục lại phẩm chất vốn có giống Đồng thời hệ số nhân phương pháp nhân giống cao đáp ứng nhu cầu số lượng giống có chất lượng cao, ổn định đáp ứng nhu cầu sản xuất quy mô rộng Cho đến kĩ thuật nuôi cấy mô nghiên cứu ứng dụng có hiệu việc nhân giống hàng loạt loại trồng tạo ngân hàng giống bệnh, khỏe mạnh cho suất cao, phẩm chất tốt cung cấp cho sản xuất Mục đích nghiên cứu BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO Xác định ảnh hưởng chất hòa sinh trưởng thực vật lên trình phát sinh hình thái quy trình nhân giống hoa Huệ Hương kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào, làm sở cho việc hình thành quy trình nhân giống in vitro hoa Huệ Hương, góp phần giải khó khăn thực tiễn sản xuất hoa Đối tượng phạm vi nghiên cứu Cây hoa Huệ Hương đối tượng sản xuất giống phương pháp nuôi cấy mô nước ta Xuất phát từ yêu cầu khó khăn thực tiễn, nhằm khắc phục tượng chai hoa Huệ Hương, giống hoa Huệ quý mang lại hiệu cao cho nông dân Trên sở đó, việc nghiên cứu xây dựng quy trình nhân giống in vitro hoa Huệ tiến hành thử nghiệm Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Đề tài đưa minh chứng tác động phương pháp khử trùng đến tỷ lệ sống mẫu cây, tác động chất điều tiết sinh trưởng đến khả phát sinh hình thái Kết nghiên cứu đề tài sử dụng nghiên cứu nuôi cấy mô tế bào hoa Góp phần sản xuất giống có hiệu cao, chất lượng tốt, ứng dụng vào sản xuất góp phần nâng cao hiệu kinh tế ngành sản xuất hoa Huệ Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật đến trình phát sinh hình thái mầm ngủ củ hoa Huệ Hương Sử dụng chất điều hòa sinh trưởng thực vật như: kinetin, BA, IBA, α-NAA, 2,4-D, IAA CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Nhân giống kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào Là phương pháp nuôi cấy mô tế bào môi trường dinh dưỡng nhân tạo điều kiện vô trùng tái sinh chúng thành BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO Nhân giống kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào phương pháp bổ sung cho kỹ thuật nhân giống truyền thống nhiều kỹ thuật tiến bộ, khắc phục hạn chế phương pháp nhân giống truyền thống 1.2 Lịch sử nuôi cấy mô tế bào thực vật Năm 1838, sở nghiên cứu độc lập, hai nhà bác học người Đức Schleiden Schwamn khởi xướng học thuyết tế bào Học thuyết cho tế bào đơn vị cấu trúc chức sinh vật, có khả tồn độc lập Gottlibe Haberlandt người đề xuất phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật vào năm 1902 để chứng minh học thuyết tính toàn tế bào Theo ông tế bào thể mang toàn hệ thống di truyền cần thiết đầy đủ thông tin sinh vật đó, gặp điều kiện thích hợp, tế bào phát triển thành thể hoàn chỉnh Ông tiến hành thí nghiệm với tế bào khí khổng tế bào biệt hóa chức khác không thành công Điều giảm tin tưởng nhà khoa học phương pháp nuôi cấy mô tế bào thời gian dài Đến năm 1922 học trò Gottlibe Haberlandt Kotte Robbinss làm lại thí nghiệm ông Họ lấy đỉnh sinh trưởng rễ hòa thảo nuôi cấy môi trường có khoáng, đường, đầu rễ sinh trưởng mạnh tạo hệ rễ nhỏ rễ phụ Tuy nhiên sinh trưởng tồn thời gian chuyển sang môi trường Năm 1934, bắt đầu giai đoạn thứ lịch sử nuôi cấy mô tế bào thực vật White nuôi cấy thành công rễ cà chua môi trường lỏng có chứa đường, muối khoáng, dịch chiết nấm men Các thí nghiệm ông thay dịch chiết nấm men hỗn hợp vitamin nhóm B : thiamin (B1), nicotinic acid (B3), pyridioxin (B6) Sau lâu Went Thimann tìm chất kích thích sinh trưởng IAA Năm năm sau Gautheret thông báo tái sinh cà rốt, lần phát triển mô sẹo không bị giới hạn Bằng cách thêm IAA vào môi trường nuôi cấy, ông kích thích phát triển mô biệt hóa vết cắt bề mặt mẫu cấy vô trùng Sau người ta thấy callus trực tiếp nuôi cấy vô thời hạn Đến năm 1948, Steward xác nhận tác dụng nước dừa mô sẹo cà rốt Trong thời gian nhiều chất sinh trưởng thuộc nhóm auxin tổng hợp naphthylacetiic acid (NAA), 2,4-Diclophenoxyacetic acid (2,4D) Nhiều tác giả nhận BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO thấy với nước dừa, NAA 2,4 D giúp tạo mô sẹo gây phân chia tế bào thành công nhiều đối tượng thực vật trước khó nuôi cấy Năm 1955, Miller Skoog xác định vai trò chất kích thích sinh trưởng 6-Furfuryl aminopurin (kinetin) Việc phát chất kích thích sinh trưởng, vitamin nước dừa bước tiến quan trọng giai đoạn thứ Năm 1957, Miller Skoog công bố kết nghiên cứu ảnh hưởng tỷ lệ auxin/kinetin môi trường nuôi cấy hình thành quan, tỷ lệ auxin/kinetin thấp, mô sẹo có khuynh hướng tạo chồi, ngược lại tỷ lệ auxin/kinetin tăng, mô sẹo có khuynh hướng tạo rễ Hiện nay, kết quan sát thấy nhiều loại khác đóng góp nhiều vào việc điều khiển trình sinh trưởng, phát triển phát sinh quan mô tế bào nuôi cấy Thành công Miller Skoog mở đầu cho giai đoạn thứ ba lịch sử nuôi cấy mô tế bào thực vật Những thành công sở bùng nổ ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô tế báo thực vật sản xuất Morel Martin phát triển kỹ thuật nuôi cấy đỉnh sinh trưởng để tạo giống bệnh khoai lang hoa lan Chính hai nhà khoa học mở đầu cho hướng nuôi cấy mô tế bào thực vật, vi nhân giống Từ năm 1960, hướng trên, nuôi cấy bao phấn hạt phấn, nuôi cấy tế bào đơn tế bào trần phát triển mạnh Các kỷ thuật lai soma dung hợp tế bào trần kỷ thuật chuyển gen phát triển thu thành tựu đáng kể Chúng ta bước vào giai đoạn thứ nuôi cấy mô tế bào thực vật Đó giai đoạn nuôi cấy mô tế bào ứng dụng mạnh mẽ vào thực tiễn chọn giống, sản xuất chất thứ cấp có hoạt tính sinh học vao nghiên cứu lý luận di truyền thực vật bậc cao 1.3 Cơ sở lý luận nuôi cấy mô tế bào thực vật Cơ sở lý luận phương pháp nuôi cấy mô tế bào in vitro học thuyết tính toàn (totipotence) tế bào Theo Haberlandt G (1902), nhà thực vật người Đức, tất tế bào mang toàn lượng thông tin di truyền thể, gặp điều kiện thích hợp, tế bào có khả tái sinh phát triển thành cá thể hoàn chỉnh Thực tế chứng minh khả tái sinh thể thực vật hoàn chỉnh từ tế bào riêng rẽ Hàng trăm loài trồng nhân giống qui mô thương mại 10 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO Bảng 3.5 Ảnh hưởng kết hợp BA auxin khác lên khả phát sinh hình thái mẫu cấy sau tuần nuôi cấy Nghiệm thức Nồng độ BA (mg/l) Nồng độ auxin (mg/l) A0 A1 A2 A3 A4 0,25 αNAA 0,25 IAA 0,25 IBA 0,25 2,4D Tỷ lệ Tỷ lệ Tỷ lệ mẫu mẫu mẫu tạo cảm ứng tạo chồi protocorm (%) (%) (%) 68,33 65,83 2,50 88,33 80,83 7,50 87,50 76,67 10,83 76,67 59,17 17,50 80,00 71,67 8,33 Hình thái mẫu tái sinh Chồi mập, xanh, phát triển tốt Protocorm màu xanh, có đường kính 2,5 mm Từ kết bảng 3.5, nhận thấy: Khi bổ sung auxin vào môi trường nuôi cấy, kết hợp auxin cytokinin BA (nghiệm thức A1 đến A4) có tác động tích cực đến phát sinh hình thái mẫu so với trường hợp có BA (nghiệm thức A0) Các nghiệm thức bổ sung auxin α-NAA, IAA, IBA, 2,4D có tỷ lệ mẫu phát sinh hình thái, tỷ lệ mẫu tạo protocorm tỷ lệ mẫu tạo chồi cao nghiệm thức đối chứng (nghiệm thức A0) Như vậy, việc bổ sung loại auxin vào môi trường làm tăng hiệu kích thích mẫu phát sinh hình thái Tuy vậy, nghiệm thức bổ sung IBA có tỷ lệ phát sinh hình thái cao nghiệm thức A0 lại có tỷ lệ mẫu tạo chồi thấp Trên môi trường MS có 4mg/l BA, nghiệm thức bổ sung loại auxin khác cho kết khác Điều chứng tỏ hiệu auxin khác việc kích thích mẫu phát sinh hình thái khác Tất nghiệm thức bổ sung auxin có tỷ lệ mẫu phát sinh hình thái cao nghiệm thức A (không bổ sung auxin) Trong loại auxin bổ sung vào môi trường nuôi cấy nghiệm thức bổ sung 0,25mg/l α-NAA có tỷ lệ mẫu phát sinh hình thái cao 88,33%, đó, bổ sung 0,25mg/l IBA lại cho kết thấp, tỷ lệ mẫu phát sinh hình thái nghiệm thức đạt 76,67% 39 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO Các nghiệm thức bổ sung auxin có số mẫu phát sinh theo hướng tạo rễ vậy, rễ tạo thành ít, ngắn yếu Qua quan sát, nhận thấy chồi tái sinh nghiệm thức có hình thái tốt, xanh mập, cao chồi cao so với chồi nghiệm thức đối chứng Trong đó, bổ sung thêm 0,25mg/l IBA (nghiệm thức A 3) có tỷ lệ mẫu phát sinh hình thái cao nghiệm thức đối chứng (nghiệm thức A 0) tỷ lệ mẫu tạo chồi lại thấp (59,17%) Hình 3.3 Mẫu phát sinh hình thái Hình 3.4 Mẫu phát sinh hình thái môi trường MS + 30g/l saccaroza + 9g/lmôi trường MS + 30g/l saccaroza + 9g/l agar + 0,25mg/l IBA + 4mg/l BA agar + 0,25mg/l 2,4D + 4mg/l BA 40 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO Hình 3.5 Mẫu phát sinh hình thái Hình 3.6 Mẫu phát sinh hình thái môi trường MS + 30g/l saccaroza + 9g/l môi trường MS + 30g/l saccaroza agar + 0,25mg/l + 9g/l agar + 0,25mg/l IAA + 4mg/l α-NAA + 4mg/l BA BA Qua thí nghiệm này, với mục tiêu nhân giống in vitro, nhận định rằng: việc kết hợp 4mg/l BA + 0,25mg/l α-NAA (nghiệm thức A1) có ảnh hưởng tốt đến phát sinh hình thái mẫu cấy với tỷ lệ mẫu phát sinh hình thái 83,33%, tỷ lệ mẫu tạo protocorm 7,5%, tỷ lệ mẫu tạo chồi đồng thời tạo protocorm 80,83% CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 41 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO 4.1 Kết luận Thí nghiệm Xác định phương pháp khử trùng tốt mẫu nuôi cấy phần đỉnh mắt ngủ tách từ củ hoa Huệ Hương Thí nghiệm 1.1 Khảo sát ảnh hưởng HgCl 0,1% mức thời gian khác đến hiệu khử trùng mẫu Trong thí nghiệm, khử trùng HgCl 0,1% 15 phút nghiệm thức có hiệu tốt thí nghiệm Tỷ lệ sống cao đạt 45,83% tỷ lệ mẫu nhiễm chết 54,17% Thí nghiệm 1.2 Khảo sát ảnh hưởng việc kết hợp HgCl 0,1% 15 phút Ca(OCl)2 15% đến hiệu khử trùng mẫu cấy Phương pháp khử trùng mẫu tốt mắt ngủ củ hoa huệ dùng HgCl 0,1% 15 phút kết hợp với Ca(OCl) 15% 20 phút Với chế độ khử trùng tỷ lệ mẫu sống đạt cao 58,33% Thí nghiệm Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật lên tới trình phát sinh hình thái mẫu cấy Thí nghiệm 2.1 Khảo sát ảnh hưởng kinetin lên khả phát sinh hình thái mẫu cấy Kinentin cytokinin tổng hợp sử dụng chủ yếu kỹ thuật nuôi cấy mô Trong thí nghiệm này, nồng độ 3mg/l kinetin tối ưu nhất, tỷ lệ mẫu cảm ứng 54,17% tạo chồi 46,67% Thí nghiệm 2.2 Khảo sát ảnh hưởng BA lên khả phát sinh hình thái mẫu cấy BA cytokinin tổng hợp có tác dụng kích thích hình thành, sinh trưởng phát triển chồi Sau tiến hành thí nghiệm, cho thấy 4mg/l BA nồng độ tối ưu thí nghiệm này, tỷ lệ mẫu cảm ứng 73,33% tỷ lệ tạo chồi 66,67% Thí nghiệm 2.3 Khảo sát ảnh hưởng BA với auxin khác lên khả phát sinh hình thái mẫu cấy Môi trường tối ưu cho mẫu phát sinh hình thái môi trường MS + 30 g/l saccaroza + g/l agar + 4mg/l BA + 0,25mg/l α-NAA Trên môi trường này, mẫu phát sinh hình thái đạt 88,33%, tỷ lệ mẫu tái sinh tạo chồi đạt cao 80,83% 42 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO 4.2 Đề nghị Vì thời gian thực có hạn nên em xin đề nghị: - Tiếp tục tiến hành nghiên cứu giai đoạn nhân nhanh, giai đoạn then chốt quy trình nhân giống in vitro Nó có ý nghĩa tạo hiệu kinh tế cao, thực mục tiêu nhân nhanh giống cho sản xuất nghiên cứu cho chuyển gen, lai tạo giống - Tiến hành nghiên cứu giai đoạn tạo hoàn chỉnh, nuôi cấy mô, in vitro sau kết thúc giai đoạn sống dị dưỡng ống nghiệm chuyển sang sống tự dưỡng tự nhiên cần có rễ khỏe, hoàn chỉnh giúp có khả hút nước dinh dưỡng tốt, làm tiền đề cho sinh trưởng phát triển sau - Thực giai đoạn đưa vườn ươm giai đoạn cuối trình nhân giống in vitro Giai đoạn có tính chất định đến khả ứng dụng kỹ thuật nhân giống in vitro nhân giống trồng TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt [1] Tạ Như Thục Anh (2002), Nghiên cứu công nghệ nhân nhanh trinh nữ hoàng cung, Luận văn Thạc sĩ khoa học, Đại học Khoa học tự nhiên – Đại học quốc gia Hà Nội [2] Lê Trần Bình (1997), Công nghệ sinh học thực vật cải tiến trồng, Nhà xuất Nông nghiệp Hà nội 43 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO [3] Lê Trần Bình, Hồ Hữu Nhị, Lê Thị Muội (1997), Công nghệ sinh học thực vật cải tiến giống trồng, Giáo trình Cao học Nông nghiệp, Nhà xuất Nông nghiệp Hà nội, Hà Nội [4] Võ Văn Chi, Dương Đức Tiến (1978), Phân loại thực vật, Nhà xuất Đại học Trung học chuyên nghiệp Hà Nội [5] Phạm Văn Hiển, Nguyễn Văn Thuận, Phạm Kim Mãn (1988), “Kết bước đầu nghiên cứu di thực Dioscorea floribunđa”, Tạp chí dược học, số 1, trang -10 [6] Nguyễn Xuân Linh (1998), Hoa Kỹ thuật trồng hoa, Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội [7] Đinh Thế Lộc, Đặng Văn Đông, Công nghệ trồng hoa cho thu nhập cao, NXB Lao động – xã hội [8] Nguyễn Đức Lượng, Lê Thị Thủy Tiên (2002), Công nghệ tế bào, Nhà xuất Đại học quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh [9] Đinh Thị Phòng, Nguyễn Thị Lý Anh (2007), Công nghệ nuôi cấy mô, Nhà xuất Nông nghiệp [10] Chu Bá Phúc, Lê Huy Hàm, Nguyễn Khánh Vân, Đỗ Năng Vịnh (1999), Áp dụng phương pháp nuôi cấy mô để nhân nhanh loại hồng môn, báo cáo khoa học Hội nghị Công nghệ sinh học toàn quốc năm 1999, Hà Nội [11] Mai Thị Tân, Nguyễn Quang Thạch, Hoàng Minh Tấn cộng (1993), “Phục tráng khoai tây Thường Tín phương pháp nuôi cấy đỉnh sinh trưởng”, Kết nghiên cứu khoa học, Nhà xuất nông nghiệp, Hà nội (trang 90 - 95) [12] Nguyễn Thị Phương Thảo (1998), Nghiên cứu nhân giống in vitro hoa loa kèn, Luận văn Thạc sĩ nông nghiệp, Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội [13] Nguyễn Quang Thạch (2001), Công nghệ sinh học trồng trọt, Giáo trình sau đại học [14] Nguyễn Quang Thạch (chủ biên), Nguyễn Thị Lý Anh, Nguyễn Thị Phương Thảo (2004) , Giáo trình Công nghệ sinh học nông nghiệp, NXB Nông Nghiệp, Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội [15] Nguyễn Quang Thạch, Hoàng Minh Tấn (2000), Giáo trình Sinh lý thực vật, NXB Nông Nghiệp, Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội 44 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO [16] Huỳnh Thị Huế Trang, Lê Hồng Giang, Nguyễn Bảo Toàn (2007), “Phục hồi giống hoa huệ trắng (Polianthes tuberosa Linn) nhiễm bệnh chai nuôi cấy phân sinh mô chồi”, Báo cáo khoa học, Hội nghị khoa học – Công nghệ sinh học thực vật công tác nhân giống chọn tạo giống hoa, 2007 [17] Đặng Phương Trâm (2005), Giáo trình kỹ thuật trồng hoa cảnh, Đại học Cần Thơ [18] Nguyễn Huy Trí (2000), Trồng hoa cảnh gia đình, Nhà xuất Lao Động [19] Nguyễn Văn Uyển (2000), Những phương pháp công nghệ sinh học thực vật, Tập 1, NXB Nông nghiệp [20] Đỗ Năng Vịnh (2005), Công nghệ tế bào thực vật ứng dụng, Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội [21] Nguyễn Thị Thanh Y (2009), Nghiên cứu xây dựng quy trình nhân giống in vitro hoa Huệ Hương (Polianthes tuberose L.), Luận văn thạc sĩ nông nghiệp, Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội [22] Vũ Văn Vụ (1999), Sinh lý thực vật ứng dụng, Nhà xuất Giáo dục, Hà nội Tài liệu tiếng Anh [23] Bajaj P.S (1997), High-tech and micropagation, Publ Spriger, Berlin [24] Bhojwani S.S., Razdan, M.K (1983), Plant tissue culture – Theory and practice, Elsevier Academic Publ., Amsterdam [25] Chaturvedi, H.C., Sinha, M (1979), “Mass propagation of discorea floribunda by tissue culture”, Ext Bull No6 NBRI Lucknow, India [26] Chen CC, Chang CA (1998), “Characterization of a polyvirus causing mild mosaic on tuberose”, Plant Dis 82: 45 – 49 [27] Chin- Chil Chen, Tom Hsiang, Fen-lan Chiang and Chin-An Chang, Molecular Characterization of Tuberose mild mosaic virus and preparation of its antiserum to the coat protein expressed in bacteria 45 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO [28] D’Amato, F (1997), “Cytogenetics of differentiation in tissue anh cell cultures” In: Applied and Fundamental Aspects of plant cell, tissue and organ culture Eds.J.Reinert and Y.P.S Bajaj, Spriger-Verlag, Berlin, pp 343-357 [29] Debergh P.C and Zimmeiman P.H (1991), Micropagation-Techniques and Application, Kenwer Academi Pube [30] Horner MB, Person MN (1988), “Purification and electron microscopy studies of a probable polyvirus from polianthes tuberose L.”, J Phytopathol, 122: 261- 266 [31] Hu and Wang (1983), In Evans et al 177, 277 [32] Kozai T, Smith MAL (1995), “Environmental control in plant tissue culture – general introduction and overview” In: Aitken-Christie J, Kozai T, Smith ML (eds) Automation and Environmental Control in Plant Tissue Culture Kluwer Academic Publisher, Dordrecht – Boston – London, pp 301 – 318 [33] Limasset and Cornel (1949), C.R.Acad.Sci Paris 228, 1888-1890 [34] Morel and Martin (1952), C.R.Acad,Sci: 235, 1324 - 1325 [35] Murashige, T., and R.Skoog (1962), “A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures” Physiol Plant 15: 473-479 [36] Murashige, T., Serpa, M., Jones, J.B (1974), “Colonal multiplication of Gerbera through tissue culture” Hortcience, 9, 175-180 [37] Murashige, T., (1980), “Plant growth substances in commercial uses of tissue culture” In: Plant growth Substances 1979, ed by F.Skoog Springer- Verlag, Berlin Heidelberg New York, pp 426 – 434 [38] Narayanaswamy S (1997), “Regenneration of plants from tissue cultures” In: applied and Fundamental aspects of plants cell, tissue and Organ culture Eds.J.Reinert and Y.P.S Bajaj Springer – Verlag, Berlin Heidelberg New York, pp 179 – 145 [39] Nickell, L.G (1973), “Test-tube Approaches to by pass sexx”, Hawaiian Planters Record 58, pp 239 – 314 [40] Saurabh Kulshrestha, Arpna Mehra, Vipin Hallan, Gaurav Raikhy, Raja Ram, Molecular envidence for occurrence of Tuberose mild mottle virus infecting tuberose ( Polianthes tuberosa) in India 46 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO [41] Shad, R.R., Dalal, K.C (1980), “Propagation of liquorice by axillary bud cultures”, In: Plant tissue culture Genetic Manipulatin and somatic Hybridisation of plant cells Eds.P.S.Rao, M.R.Heble and MS Chadha Bhabha Atomic Research Centre, Bombay [42] Staritsky, G (1970), “Tissue culture of the oil palm (Elaeis guineensis Jacq) as a tool for its vegetative propagation”, Euphytica, 288 – 292 Tài liệu Internet [43] http://en.wikipedia.org/wiki/Special:Search/Polianthes-tuberose [44] http://www.rauhoaquavietnam.vn [45] http://thuviensinhhoc.com/Baigiang/PLTV/index.html PHỤ LỤC Kết xử lý số liệu Thí nghiệm 1.1 Ảnh hưởng HgCl2 0,1% đến hiệu khử trùng mẫu cấy BALANCED ANOVA FOR VARIATE NHIEM FILE TN1 10/ 8/** 18:11 PAGE THIET KE HOAN TOAN NGAU NHIEN VARIATE V003 NHIEM TY LE MAU NHIEM LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 9169.79 1833.96 660.21 0.000 * RESIDUAL 12 33.3342 2.77785 * TOTAL (CORRECTED) 17 9203.12 541.360 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SONG FILE TN1 10/ 8/** 18:11 PAGE THIET KE HOAN TOAN NGAU NHIEN VARIATE V004 SONG TY LE MAU SONG LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1794.79 358.958 206.76 0.000 * RESIDUAL 12 20.8336 1.73613 * TOTAL (CORRECTED) 17 1815.63 106.801 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CHET FILE TN1 10/ 8/** 18:11 PAGE 47 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO THIET KE HOAN TOAN NGAU NHIEN VARIATE V005 CHET TY LE MAU CHET LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 9075.00 1815.00 ****** 0.000 * RESIDUAL 12 12.4995 1.04163 * TOTAL (CORRECTED) 17 9087.50 534.559 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN1 10/ 8/** 18:11 PAGE THIET KE HOAN TOAN NGAU NHIEN MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS NHIEM SONG CHET 80.0000 15.8333 4.16667 66.6667 23.3333 10.0000 3 55.8333 27.5000 16.6667 36.6667 45.8333 17.5000 29.1667 28.3333 42.5000 14.1667 16.6667 69.1667 SE(N= 3) 0.962263 0.760730 0.589244 5%LSD 12DF 2.96506 2.34407 1.81566 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN1 10/ 8/** 18:11 PAGE THIET KE HOAN TOAN NGAU NHIEN F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ | (N= 18) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | NHIEM 18 47.083 23.267 1.6667 3.5 0.0000 SONG 18 26.250 10.334 1.3176 5.0 0.0000 CHET 18 26.667 23.121 1.0206 3.8 0.0000 Thí nghiệm 1.2 Ảnh hưởng HgCl2 0.1% Ca(OCl)2 15% đến hiệu khử trùng mẫu cấy BALANCED ANOVA FOR VARIATE NHIEM FILE TN2 10/ 8/** 18:14 PAGE THIET KE HOAN TOAN NGAU NHIEN VARIATE V003 NHIEM TY LE MAU NHIEM LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 773.333 193.333 154.67 0.000 * RESIDUAL 10 12.5000 1.25000 * TOTAL (CORRECTED) 14 785.833 56.1310 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SONG FILE TN2 10/ 8/** 18:14 PAGE THIET KE HOAN TOAN NGAU NHIEN VARIATE V004 SONG TY LE MAU SONG LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 2330.83 582.708 349.62 0.000 * RESIDUAL 10 16.6668 1.66668 * TOTAL (CORRECTED) 14 2347.50 167.679 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CHET FILE TN2 10/ 8/** 18:14 PAGE THIET KE HOAN TOAN NGAU NHIEN VARIATE V005 CHET TY LE MAU CHET LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER 48 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 4551.67 1137.92 682.75 0.000 * RESIDUAL 10 16.6667 1.66667 * TOTAL (CORRECTED) 14 4568.33 326.310 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN2 10/ 8/** 18:14 PAGE THIET KE HOAN TOAN NGAU NHIEN MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS NHIEM SONG CHET 36.6667 46.6667 16.6667 32.5000 49.1667 18.3333 3 24.1667 58.3333 17.5000 20.8333 42.5000 36.6667 17.5000 20.8333 61.6667 SE(N= 3) 0.645497 0.745358 0.745358 5%LSD 10DF 2.03398 2.34865 2.34865 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN2 10/ 8/** 18:14 PAGE THIET KE HOAN TOAN NGAU NHIEN F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ | (N= 15) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | NHIEM 15 26.333 7.4921 1.1180 4.2 0.0000 SONG 15 43.500 12.949 1.2910 3.0 0.0000 CHET 15 30.167 18.064 1.2910 4.3 0.0000 Thí nghiệm 2.1 Ảnh hưởng kinetin đến khả phát sinh hình thái BALANCED ANOVA FOR VARIATE PSHT FILE TN3 8/ 9/** 22:55 PAGE THIET KE HOAN TOAN NGAU NHIEN VARIATE V003 PSHT TY LE PHAT SINH HINH THAI LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 7836.46 1567.29 ****** 0.000 * RESIDUAL 12 16.6675 1.38896 * TOTAL (CORRECTED) 17 7853.13 461.949 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CHOI FILE TN3 8/ 9/** 22:55 PAGE THIET KE HOAN TOAN NGAU NHIEN VARIATE V004 CHOI TY LE TAO CHOI LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 5986.46 1197.29 862.04 0.000 * RESIDUAL 12 16.6668 1.38890 * TOTAL (CORRECTED) 17 6003.12 353.125 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN3 8/ 9/** 22:55 PAGE THIET KE HOAN TOAN NGAU NHIEN MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS PSHT CHOI 0.000000 0.000000 30.8333 25.8333 3 63.3333 55.8333 54.1667 46.6667 49 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO 51.6667 45.0000 47.5000 39.1667 SE(N= 3) 0.680430 0.680417 5%LSD 12DF 2.09664 2.09660 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN3 8/ 9/** 22:55 PAGE THIET KE HOAN TOAN NGAU NHIEN F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ | (N= 18) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | PSHT 18 41.250 21.493 1.1785 2.9 0.0000 CHOI 18 35.417 18.792 1.1785 3.3 0.0000 Thí nghiệm 2.2 Ảnh hưởng BA đến khả phát sinh hình thái BALANCED ANOVA FOR VARIATE PSHT FILE TN4 8/ 9/** 22:50 PAGE THIET KE HOAN TOAN NGAU NHIEN VARIATE V003 PSHT TY LE PHAT SINH HINH THAI LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 11419.4 2283.89 ****** 0.000 * RESIDUAL 12 16.6671 1.38892 * TOTAL (CORRECTED) 17 11436.1 672.712 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CHOI FILE TN4 8/ 9/** 22:50 PAGE THIET KE HOAN TOAN NGAU NHIEN VARIATE V004 CHOI TY LE TAO CHOI LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 9120.83 1824.17 ****** 0.000 * RESIDUAL 12 16.6679 1.38899 * TOTAL (CORRECTED) 17 9137.50 537.500 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN4 8/ 9/** 22:50 PAGE THIET KE HOAN TOAN NGAU NHIEN MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS PSHT CHOI 0.000000 0.000000 38.3333 18.3333 3 55.8333 32.5000 65.0000 48.3333 73.3333 66.6667 69.1667 54.1667 SE(N= 3) 0.680422 0.680439 5%LSD 12DF 2.09661 2.09667 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN4 8/ 9/** 22:50 PAGE THIET KE HOAN TOAN NGAU NHIEN F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ | (N= 18) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | PSHT 18 50.278 25.937 1.1785 2.3 0.0000 CHOI 18 36.667 23.184 1.1786 3.2 0.0000 Thí nghiệm 2.3 Ảnh hưởng BA va auxin đến khả phát sinh hình thái BALANCED ANOVA FOR VARIATE PSHT FILE TN5 8/ 9/** 22:58 50 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO PAGE THIET KE HOAN TOAN NGAU NHIEN VARIATE V003 PSHT TY LE PHAT SINH HINH THAI LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 818.333 204.583 163.67 0.000 * RESIDUAL 10 12.5001 1.25001 * TOTAL (CORRECTED) 14 830.833 59.3452 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CHOI FILE TN5 8/ 9/** 22:58 PAGE THIET KE HOAN TOAN NGAU NHIEN VARIATE V004 CHOI TY LE TAO CHOI LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 887.500 221.875 106.50 0.000 * RESIDUAL 10 20.8334 2.08334 * TOTAL (CORRECTED) 14 908.333 64.8810 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN5 8/ 9/** 22:58 PAGE THIET KE HOAN TOAN NGAU NHIEN MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS PSHT CHOI 68.3333 65.8333 88.3333 80.8333 3 87.5000 76.6667 76.6667 59.1667 80.0000 71.6667 SE(N= 3) 0.645499 0.833335 5%LSD 10DF 2.03399 2.62587 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN5 8/ 9/** 22:58 PAGE THIET KE HOAN TOAN NGAU NHIEN F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ | (N= 15) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | PSHT 15 80.167 7.7036 1.1180 1.4 0.0000 CHOI 15 70.833 8.0549 1.4434 2.0 0.0000 Thành phần môi trường dinh dưỡng MS (Murashige and Skoog, 1962) STT Tên khoa học I II Hàm lượng/l môi trường Các nguyên tố đa lượng NH4NO3 KNO3 CaCl2.2H2O MgSO4.7H2O KH2PO4 Các nguyên tố vi lượng H3PO3 MgSO4.4H2O ZnSO4.4H2O KI (g/l) 1,65 1,90 0,44 0,50 0,17 (mg/l) 6,20 22,30 8,60 0,83 51 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO III IV V MoO4.2H2O CoCl2.6H2O CuSO4.5H2O Các vitamin Glycin Thiamin HCl Pyridoxin Nicotin Inositol NaFeEDTA NaEDTA FeSO4.2H2O 0,25 0,025 0,025 (mg/l) 2,0 0,5 0,5 0,5 100 (mg/l) (g/l) 0,03725 0,02785 LỜI CAM ĐOAN Em xin cam đoan, khóa luận đề tài tác giả thực dựa sở nghiên cứu lý thuyết phần nghiên cứu thực nghiệm Tất số liệu, kết nghiên cứu trung thực Sinh viên thực Lê Ngọc Mỹ LỜI CÁM ƠN Trong tháng thực khóa luận tốt nghiệp em học điều thực tế từ lý thuyết học Có thêm kinh nghiệm bổ ích cho công việc sau Em xin chân thành cảm ơn: - Phòng Công nghệ sinh học, Trung tâm Ứng dụng tiến Khoa học Công nghệ - Sở Khoa học Công nghệ tỉnh Bình Định nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt thời gian thực tập 52 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO - Th.S Trịnh Thị Lan Anh hướng dẫn, giúp đỡ cho em tận tình, giải thích thắc mắc thực khóa luận, cung cấp đầy đủ tài liệu để em hoàn thành khóa luận tốt - Nhà trường tạo điều kiện cho em thực khóa luận - Tất người thân, bạn bè, người bên canh động viên, giúp đỡ em trình học tập thực tập .Xin chân thành cảm ơn!!! Lê Ngọc Mỹ 53 [...]... sát ảnh hưởng của các chất điều hòa sinh trưởng thực vật lên tới quá trình phát sinh hình thái của mẫu cấy Trong nuôi cấy mô tế bào thực vật, để điều khiển sự phát sinh hình thái thực vật việc bổ sung chất điều hòa sinh trưởng thực vật có vai trò đặc biệt quan trọng Trong các chất điều tiết sinh trưởng, có hai nhóm chất được sử dụng nhiều trong các phòng thí nghiệm nuôi cấy mô là cytokynin và auxin... hình thái của mẫu cấy Thí nghiệm 2.1 Khảo sát ảnh hưởng của kinetin lên khả năng phát sinh hình thái của mẫu cấy Bảng 2.3 Khảo sát ảnh hưởng của kinetin lên khả năng phát sinh hình thái của mẫu cấy Nghiệm thức A0 A1 A2 A3 A4 A5 Nồng độ kinetin (mg/l) 0 1 2 3 4 5 Thí nghiệm 2.2 Khảo sát ảnh hưởng của BA đến khả năng phát sinh hình thái của mẫu cấy Bảng 2.4 Khảo sát ảnh hưởng của BA đến khả năng phát sinh. .. đó, các chất cytokinin: BA, kinetin và các auxin: α-NAA, 2,4D, IAA có hiệu quả kích thích sự phát sinh chồi từ phân sinh mô chồi cây hoa Huệ Hương Trong thí nghiệm này chúng tôi tập trung nghiên cứu ảnh hưởng riêng lẻ BA và kinetin, đồng thời nghiên cứu ảnh hưởng kết hợp của BA và các auxin đến sự phát sinh hình thái của mô nuôi cấy Thí nghiệm 2.1 Khảo sát ảnh hưởng của kinetin lên khả năng phát sinh. .. thứ cấp, củ huệ thực chất chính là thân ngầm của cây huệ 1.8.4 Yêu cầu ngoại cảnh của cây hoa Huệ Hương 1.8.4.1 Nhiệt độ Nhiệt độ là yếu tố vật lý có ảnh hưởng lớn đến thời gian sinh trưởng, phát triển cũng như khả năng phân hóa hoa của cây hoa Huệ Hương Cây hoa Huệ Hương là cây ưa nhiệt độ mát mẻ (20 - 25 oC), nhưng chịu nóng tốt, phân bố chủ yếu ở vùng nhiệt đới và á nhiệt đới, cho hoa tốt vào mùa... TẠO Hình 3.1 Mẫu phát sinh hình thái trên môi trường MS + 30g/l saccaroza + 9g/l agar + 2mg/l kinetin Thí nghiệm 2.2 Khảo sát ảnh hưởng của BA lên khả năng phát sinh hình thái của mẫu nuôi cấy Sau khi tiến hành thí nghiệm 2.1, chúng tôi nhận thấy kinetin có khả năng kích thích mẫu phát sinh hình thái Vì vậy, chúng tôi tiếp tục tiến hành nghiên cứu ảnh hưởng của một cytokinin khác đến khả năng phát sinh. .. tượng này là: - Đỉnh sinh trưởng không có hệ mô dẫn, làm cho virus và vi sinh vật không có khả năng thâm nhập - Đỉnh sinh trưởng là nơi sinh tổng hợp của auxin nên hàm lượng auxin khá cao, auxin có tác dụng ức chế sinh sản của virus - Quá trình phân chia của tế bào phôi sinh (ở đỉnh sinh trưởng) không kéo theo sự phân chia của virus Về phương diện hệ số nhân, nhân giống in vitro là phương pháp không gì... đều không phát sinh hình thái, sau 8 tuần theo dõi, các mẫu đều chết Khi bổ sung kinetin vào môi trường nuôi cấy, có tác dụng kích thích mẫu phát sinh hình thái Tất cả các nghiệm thức bổ sung kinetin vào môi trường nuôi cấy đều có tỷ lệ mẫu phát sinh hình thái Khi bổ sung vào môi trường từ 1 - 5 mg/l kinetin, kết quả cho thấy tỷ lệ mẫu phát sinh hình thái khi cho 1 - 2 mg/l kinetin tăng lên từ 30,83... TẠO bằng cách nuôi cấy trong môi trường nhân tạo vô trùng và tái sinh chúng thành cây với hệ số nhân giống vô cùng lớn (Murashige, 1980) Quá trình phát sinh hình thái trong nuôi cấy in vitro thực vật thực chất là kết quả của các quá trình phân hóa và phản phân hóa Tất cả các tế bào trong các cơ quan khác nhau của cơ thể thực vật đều bắt nguồn từ tế bào phôi sinh Sự chuyển tế bào phôi sinh thành các tế... về nước lớn, nếu thiếu nước cây sẽ sinh trưởng chậm ảnh hưởng đến khả năng phân hóa của hoa 1.8.4.4 Đất Cây hoa Huệ Hương có thể trồng trên bất cứ loại đất nào, tuy vậy cây chỉ sinh trưởng tốt, cho hoa đẹp trên loại đất hơi kiềm (pH = 6 - 7), có cấu trúc mịn, giữ ẩm tốt Tuy vậy, cây hoa Huệ Hương không thích hợp ở nơi quá trũng, chua Cây hoa Huệ Hương có thể trồng trên các loại đất có thành phần cơ... cytokynin và auxin Tỷ lệ và hàm lượng hai nhóm chất điều hòa sinh trưởng này có vai trò quan trọng đến sự phát sinh hình thái của mẫu nuôi cấy theo hướng phát sinh cơ quan, phát sinh phôi soma hay tạo callus Các chất thuộc nhóm auxin thì tác dụng kích thích tạo rễ và callus mạnh, còn các chất thuộc nhóm cytokynin thì có tác dụng kích thích tạo chồi Cây hoa Huệ Hương là đối tượng mới trong nghiên cứu nuôi