Đang tải... (xem toàn văn)
PHÂN TÍCH TỔNG SỐ VI KHUẨN HIẾU KHÍ - ĐỊNH LƯỢNG TỔNG SỐ NẤM MEN-NẤM MÔC PHÂN TÍCH TỔNG SỐ VI KHUẨN HIẾU KHÍ - ĐỊNH LƯỢNG TỔNG SỐ NẤM MEN-NẤM MÔC PHÂN TÍCH TỔNG SỐ VI KHUẨN HIẾU KHÍ - ĐỊNH LƯỢNG TỔNG SỐ NẤM MEN-NẤM MÔC
TIỂU LUẬN PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM PHÂN TÍCH TỔNG SỐ VI KHUẨN HIẾU KHÍ & ĐỊNH LƯỢNG TỔNG SỐ NẤM MEN - NẤM MỐC NỘI DUNG PHÂN TÍCH TỔNG SỐ VI KHUẨN HIẾU KHÍ ĐỊNH ĐỊNH LƯỢNG LƯỢNG TỔNG TỔNG SỐ SỐ VI VI KHUẨN KHUẨN HIẾU HIẾU KHÍ KHÍ TRONG TRONG THỊT THỊT ĐỊNH LƯỢNG TỔNG SỐ NẤM MEN – NẤM MỐC ĐỊNH ĐỊNH LƯỢNG LƯỢNG TỔNG TỔNG SỐ SỐ NẤM NẤM MEN MEN – – NẤM NẤM MỐC MỐC TRONG TRONG THỊT THỊT ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM PHÂN TÍCH TỔNG SỐ VI KHUẨN HIẾU KHÍ Khái quát Vi khuẩn hiếu khí vi khuẩn tăng trưởng hình thành khuẩn lạc điều kiện có diện oxy (O2) phân tử Tổng số vi khuẩn hiếu khí diện mẫu thị mức độ vệ sinh thực phẩm ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM PHÂN TÍCH TỔNG SỐ VI KHUẨN HIẾU KHÍ Nguyên tắc Tổng số vi sinh vật hiếu khí đếm cách đổ đĩa ủ điều kiện hiếu khí 0 30 C/72 ± 37 C/48 ± Chỉ số xác định phương pháp đếm khuẩn lạc mọc môi trường thạch dinh dưỡng từ lượng mẫu xác định sở xem khuẩn lạc sinh khối phát triển từ tế bào diện mẫu biểu diễn dạng số đơn vị hình thành khuẩn lạc (colony forming unit, CFU) đơn vị khối lượng thực phẩm ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM PHÂN TÍCH TỔNG SỐ VI KHUẨN HIẾU KHÍ Quy trình phân tích bao gồm bước: - Cân mẫu - Đồng mẫu - Pha loãng thành dãy nồng độ thập phân - Chuyển phân phối thể tích xác định mẫu lên mặt môi trường rắn đĩa petri phương pháp hộp trải, hộp đổ - Ủ nhiệt độ thời gian quy định ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM PHÂN TÍCH TỔNG SỐ VI KHUẨN HIẾU KHÍ Môi trường sử dụng - Môi trường pha loãng mẫu: Saline Pepton Water ( SPW) Buffer Pepton Water (BPW) - Môi trường nuôi cấy : Plate Count Agar (PCA) ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM PHÂN TÍCH TỔNG SỐ VI KHUẨN HIẾU KHÍ Định lượng mẫu Bước 1: Cân xác hay 25 g mẫu cho vào bao PE vô trùng Đồng pha loãng mẫu Bước 2: Thêm vào 225ml môi trường BPW hấp khử trùng để nguội Bước 3: Tiến hành đồng mẫu máy dập mẫu (stomacher) Thời gian dập mẫu tùy thuộc vào loại mẫu không 150 giây -1 Bước 4: Tất thao tác phải thực điều kiện vô trùng Khi đó, ta dung dịch pha loãng 10 Bước 5: Dịch pha loãng pha loãng theo dãy thập phân cách dùng pipetman hút 1ml từ độ pha loãng 10 -1 -2 -2 cho vào 9ml nước muối sinh lý hấp khử trùng, đồng ta đươc 10 Hút 1ml từ độ pha loãng 10 cho tiếp vào -3 9ml nước muối sinh lý, đồng ta 10 Tiếp tục thực tương tự để có độ pha loãng cần thiết ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM Ủ mẫu o 30±1 C 72 PHÂN TÍCH TỔNG SỐ VI KHUẨN HIẾU KHÍ Định lượng mẫu 10g 10 ml Đồng pha loãng mẫu Cấy mẫu rót môi trường vào đĩa Petri Ủ mẫu o 30±1 C 72 Đếm khuẩn lạc Chọn đĩa có 25→250 khuẩn lạc Sơ đồ quy trình định lượng tổng số vi khuẩn hiếu khí ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM PHÂN TÍCH TỔNG SỐ VI KHUẨN HIẾU KHÍ Bước 6: Trộn mẫu ống nghiệm cho máy vortex mixer hay lắc mạnh tay Cấy mẫu rót môi trường vào đĩa Petri Bước 7: Chọn độ pha loãng từ 10-2 đến 10-4 ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM Ủ mẫu o 30±1 C 72 PHÂN TÍCH TỔNG SỐ VI KHUẨN HIẾU KHÍ o Bước Đếm Bước 9:khuẩn 8: Tiếp dùng tục lạcpipetman đỗ khoảng hút 15ml 1mlmôi mỗitrường độ phaPCA loãng đãcho hấpvào khử2 trùng đĩa petri để nguội khửkhoảng trùng 45 C Ủ mẫu Bước 10: lắc cách xoay tròn đĩa petri xuôi ngược chiều kim đồng hồ từ 3-5 lần Đặt đĩa lên mặt phẳng ngang chờ Bước 12: Chọn o tất đĩa có số khuẩn o lạc từ 25-250 khuẩn lạc để đếm môi trường Bước 11: ủ 30 đặcClại, sau lật72 ngược hoặc37 đĩa C 48 Phương pháp thực đổ đĩa phân tích tổng vi sinh hiếu ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM Ủ mẫu o 30±1 C 72 XÁC ĐỊNH TỔNG NẤM MEN, NẤM MỐC Đếm số lượng khuẩn lạc nấm mốc nấm men tất đĩa cấy Khi cần thiết quan sát kính hiển vi soi hay kính lúp để phân biệt khuẩn lạc nấm men hay mốc Kết ghi đơn vị CPU/g ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM Ủ mẫu o 30±1 C 72 XÁC ĐỊNH TỔNG NẤM MEN, NẤM MỐC Công thức tính: N A= n1 × V1 × f1 + + ni × Vi × f i (cfu/g) Nếu độ pha loãng cao nhất, số khuẩn lạc đếm đĩa >250, ví dụ nồng độ 10 -5 số đếm lớn 250, kết ghi: >2.5 x 10 CFU/g Nếu độ pha loãng thấp nhất, số khuẩn lạc đếm đĩa [...]... 30±1 C trong 72 giờ PHÂN TÍCH TỔNG SỐ VI KHUẨN HIẾU KHÍ Công thức tính kết quả Đếm tất cả các số khuẩn lạc xuất hiê n ê trên các khi ủ Chọn các đĩa có số đếm từ 2 5- 250 để tính kết quả Mâ tê đôê tổng số vi khuẩn hiếu khí trong 1g hay 1ml mẫu được tính theo công thức sau Trong đó: A: số tế bào vi khuẩn (khuẩn lạc ) trong 1g mẫu N: Tổng số khuẩn lạc đếm được trên các đĩa đã chọn ni: Số lượng đĩa cấy tại... đáy đĩa theo đường kính thành các phần đều nhau có bội số là 2 để đếm một phần sau đó nhân kết quả với tổng số phần đã chia ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM Ủ mẫu o 30±1 C trong 72 giờ Định lượng tổng vi sinh vật hiếu khí trên thịt và một số sản phẩm từ thịt 2 Tổng số vi khuẩn hiếu khí trên 1cm mẫu thử ( X1) được quy ra tổng số vi khuẩn hiếu khí có trong 1ml dung dịch huyền phù ban đầu của mẫu thử... tổng số vi khuẩn hiếu khí trên 1cm2, bề mặt sản phẩm được áp dụng để đánh giá độ nhiễm khuẩn trên bề mặt các sản phẩm thịt bằng phương pháp đếm số khuẩn lạc vi khuẩn hiếu khí có trên 1cm mẫu thử đã được chuyển tương đương với 1ml dung dịch huyền phù ban đầu dưới các điều kiện thử được xác định trong TCVN ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM Ủ mẫu o 30±1 C trong 72 giờ Định lượng tổng vi sinh vật hiếu khí. .. gặp tổng nấm men, nấm mốc Tuy nhiên tổng nấm men, nấm mốc chỉ có giá trị chỉ thị về hiện trạng của sản phẩm hơn là dự báo về thời hạn sử dụng của sản phẩm bởi khó xác định tỷ lệ vi khuẩn gây hư hỏng ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM Ủ mẫu o 30±1 C trong 72 giờ Định lượng nấm men nấm mốc trong thịt và các sản phẩm từ thịt Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn này quy định phương pháp định lượng nấm men và nấm. .. trong 72 giờ XÁC ĐỊNH TỔNG NẤM MEN, NẤM MỐC Đếm và số lượng khuẩn lạc nấm mốc và nấm men trên tất cả các đĩa cấy Khi cần thiết quan sát bằng kính hiển vi soi nổi hay kính lúp để phân biệt khuẩn lạc nấm men hay mốc Kết quả được ghi bằng đơn vị CPU/g ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM Ủ mẫu o 30±1 C trong 72 giờ XÁC ĐỊNH TỔNG NẤM MEN, NẤM MỐC Công thức tính: N A= n1 × V1 × f1 + + ni × Vi × f i (cfu/g)... PHẨM TP.HCM Ủ mẫu o 30±1 C trong 72 giờ Định lượng tổng vi sinh vật hiếu khí trên thịt và một số sản phẩm từ thịt Tính kết quả Dùng mắt thường hoặc kính lúp để đếm số khuẩn lạc mọc trên mỗi đĩa petri, chỉ đếm những đĩa có số khuẩn lạc mọc riêng biệt và từ 25 đến 250 khuẩn lạc Đếm tất cả số khuẩn lạc mọc trong mỗi đĩa, trong trường hợp số lượng khuẩn lạc lớn và phân bố đều, có thể phần đáy đĩa theo đường... pha loãng ( nước pepton 1%) - Môi trường thạch DBRC - Môi trường thạch MEA - Môi trường thạch PDA - Môi trường thạch SDA - Môi trường thạch SDB ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM Định lượng mẫu Đồng nhất và pha loãng mẫu trong dung dịch SPW Trải 0,1 ml dung dịch mẫu lên môi trường DBRC Ủ Mẫu Đếm khuẩn lạc Quy trình định lượng tổng nấm men, nấm mốc XÁC ĐỊNH TỔNG NẤM MEN, NẤM MỐC Bước 1: Cân 25g mẫu... môi trường Mầm có thể là một bào tử, một tế bào hay một đoạn của khuẩn ty ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM Ủ mẫu o 30±1 C trong 72 giờ XÁC ĐỊNH TỔNG NẤM MEN, NẤM MỐC XÁC ĐỊNH TỔNG NẤM MEN, NẤM MỐC: Nguyên tắc Mật độ nấm men và nấm mốc trong mẫu được xác định chung dưới dạng tổng nấm men nấm mốc bằng kỹ thuật pha loãng, trải và để khuẩn lạc trên môi trường Dichloran Glycerol Agar hay Dichloran... các đĩa đã chọn ni: Số lượng đĩa cấy tại độ pha loãng thứ i V: Thể tích dịch mẫu (ml) cấy vào môi trường fi: Độ pha loãng tương ứng ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM PHÂN TÍCH TỔNG SỐ VI KHUẨN HIẾU KHÍ Ý nghĩa Tổng vi sinh vật hiếu khí hiện diện trong mẫu thực phẩm chỉ thị mức độ vệ sinh của thực phẩm, đánh giá chất lượng của mẫu về vi sinh vật, nguy cơ hư hỏng, thời hạn bảo quản của sản phẩm, mức... o 30±1 C trong 72 giờ XÁC ĐỊNH TỔNG NẤM MEN, NẤM MỐC Nấm men là những tế bào đơn tính phát triển theo kiểu nảy chồi, thỉnh thoảng có thể tồn tại ở dạng khuẩn ty giả trong đó các tế bào kết nhau thành chuổi ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM Ủ mẫu o 30±1 C trong 72 giờ XÁC ĐỊNH TỔNG NẤM MEN, NẤM MỐC Đơn vị hình thành khuẩn lạc của nấm mốc và nấm men là mầm để tạo nên một khuẩn lạc khi nuôi cấy trong