BÀI SỐ 1: NGUYÊN TẮC VÀ CÁCH SỬ DỤNG KÍNH HIỂN VI PHƯƠNG PHÁP LÀM TIÊU BẢN HIỂN VI TẠM THỜI QUAN SÁT MỘT SỐ LOẠI TẾ BÀO I Mục đích - Sinh viên nhận biết cấu tạo chức phận kính hiển vi - Biết cách sử dụng bảo quản kính hiển vi - Biết cách làm tiêu hiển vi tạm thời - Biết cách làm tiêu hiển vi tế bào động vật - Quan sát mô tả được: Hình thái, cấu tạo số loại tế bào mơ động vật II Dụng cụ, hóa chất mẫu vật Dụng cụ: - Kính hiển vi - Lam kính, lamen, giấy lau, pipet, dao lam, kim mũi mác, dụng cụ mổ động vật nhỏ, khay mổ, đĩa đồng hồ Hóa chất: Dung dịch sinh lý động vật biến nhiệt (NaCl 0,65%), thuốc nhuộm tím gentia, xanh metylen Mẫu vật: - Củ hành tím - Ếch thả bình thủy tinh (chứa 500ml nước trước thí nghiệm ngày) III Nội dung NGUYÊN TẮC VÀ CÁCH SỬ DỤNG KÍNH HIỂN VI a Kính hiển vi: Cơ thể sinh vật cấu tạo từ nhiều tế bào Tuyệt đại đa số tế bào có kích thước nhỏ quan sát nhờ kính hiển vi Các kính hiển vi khác nhiều chi tiết nguyên tắc cấu tạo từ phận sau: Đế kính (chân kính) : thường nặng, phía to phẳng giữ cho kính đứng vững Trên kính có gắn gương đèn điện để lấy ánh sáng Thân kính : Được cấu tạo chắn, gắn đế kính, có vai trị giá đỡ nhiều phận kính hiển vi Ống kính : gồm đoạn khuỷu đoạn ống thẳng mang thị kính Bên đoạn ống khuỷu có lăng kính làm cho hướng chùm tia sáng lệch 45 so với phương thẳng đứng Nhờ vậy, dễ dàng quan sát kính hiển vi Có kính hiển vi có ống kính thường gọi kính hiển vi mắt, có hai ống kính gọi kính hiển vi hai mắt Mâm kính (bàn đặt tiêu bản) : thường hình vng, có lỗ thủng trịn hình bầu dục để ánh sáng qua lên mẫu vật đặt tiêu (đặt mâm kính) Trên mâm kính có kẹp giữ mẫu bàn xa di mẫu (kẹp + thước) có tác dụng di chuyển giữ mẫu vật đặt bàn phẳng vị trí thích hợp để quan sát Trục quay Thị kính Ốc thứ cấp Vật kính Ốc vi cấp Bàn kính Bộ phận ngưng tụ ánh sáng Bộ phận điều chỉnh ánh sáng Bàn xoay : Dùng để lắp vật kính với độ phóng đại khác Nhờ bàn xoay ta dễ dàng thay đổi vật kính cần thay đổi độ phóng đại hình ảnh cần quan sát Ốc chuyển lớn : gắn hai bên thân kính, dùng để tìm hình ảnh mẫu vật Ốc chuyển nhỏ (ốc vi cấp) : gắn phía ngồi ốc chuyển lớn nằm riêng, dùng để vi chỉnh - tìm hình ảnh vật rõ nét Gương : gắn chân kính, để lấy ánh sáng Gương thường có mặt lõm mặt phẳng, quay hướng để lấy ánh sáng Gương thay đèn hiển vi chuyên dụng Bộ tụ quang : thường gắn phía mâm kính Tụ quang thường cấu tạo từ hệ thống thấu kính ghép lại, có nhiệm vụ tập trung ánh sáng phản chiếu từ gương để chiếu lên tiêu đặt mâm kính Trên tụ quang có cần gạt có tác dụng mở rộng hay đóng bớt tụ quang nhằm điều chỉnh lượng ánh sáng Chúng nâng lên hạ xuống nhờ ốc điều chỉnh Thường tụ quang nâng lên mức cao Khi ánh sáng chói hạ tụ quang xuống Vật kính : gắn bàn xoay Độ phóng đại vật kính thường ghi thân vật kính, ngồi người ta cịn dùng vạch màu để ta dễ dàng nhận biết Độ phóng đại x4 vật kính thường có vạch màu đỏ, x10 có vạch màu vàng, x40 có vạch màu xanh, cịn vạch màu trắng có vật kính x90 x100 Vật kính x90 x100 gọi vật kính dầu, dùng ta phải nhỏ dầu soi kính để tăng độ chiết quang Các vật kính nhỏ dùng khơng cần sử dụng dầu soi kính gọi vật kính thơ Thị kính : lắp ống kính, bên có hai thấu kính đặt cách khoảng khơng đổi Trên thân thị kính có ghi độ phóng đại chúng Độ phóng đại phổ biến thị kính: x10, x15, x16 Độ phóng đại hình ảnh quan sát kính hiển vi tính độ phóng đại thị kính nhân với độ phóng đại vật kính VD: sử dụng vật kính x10, thị kính x10 ta thu hình ảnh vật có độ phóng đại 100 lần b Phương pháp sử dụng kính hiển vi Thực theo bước sau : - Đặt kính hiển vi vào nơi phẳng, chắn, cách mép bàn tối thiểu 5cm, thuận lợi để lấy ánh sáng Để kính lệch bên trái, bên phải nơi đặt để vẽ, trước mặt đặt dụng cụ, bút, mẫu vật,… - Nhẹ nhàng xoay bàn xoay đưa vật kính x10 vào vị trí thẳng đứng nghe có tiếng ‘tách’ dựng lại (vật kính vào vị trí quan sát) Nếu kính hiển vi hai mắt dùng mắt nhìn vào thị kính, điều chỉnh để hai thị kính vừa với khoảng cách mắt Nếu kính hiển vi mắt ta dùng mắt trái nhìn vào thị kính, cần tập thói quen khơng nheo mắt bịt mắt lại, cố gắng mở hai mắt nhìn bình thường Tay đồng thời xoay gương phía nguồn sáng hiển vi trường xuất đĩa sáng đồng điểm Khi ánh sáng đủ ta dùng gương phẳng, ánh sáng yếu dùng gương lõm để lấy ánh sáng Chỉ cầm vào cạnh gương để điều chỉnh Sau chỉnh ánh sáng lưu ý khơng di chuyển vị trí kính - Đặt tiêu lên mâm kính, điều chỉnh cho mẫu quan sát vào vùng trường quan sát - Mắt nhìn nghiêng tay điều chỉnh ốc chuyển lớn, nâng bàn phẳng mang tiêu dần đến mặt tiêu cách mặt vật kính khoảng 3-5cm dừng lại - Nhìn vào thị kính, tay đồng thời điều chỉnh ốc chuyển lớn hạ dần bàn phẳng xuống nhìn rõ hình ảnh - Quan sát đồng thời vi chỉnh ốc vi cấp phạm vi vịng quanh vị trí, chỉnh tụ quang tìm đến thấy hình ảnh vật đẹp Điều chỉnh tiêu mâm kính để quan sát tồn mẫu vật, tìm vị trí đẹp để quan sát vẽ hình c Ngun tắc bảo quản kính hiển vi - Ln đặt kính vị trí chăc chắn, phẳng, tránh vướng đổ - Tuyệt đối không tự ý tháo lắp, lau chùi kính - Khi di chuyển kính: kiểm tra tồn hệ thống ốc xốy trước di chuyển kính, tay phải cầm thân kính, tay trái đỡ phía chân kính, kính ln chuyển tư thẳng - Khi dùng xong phải đưa kính tư bảo quản: lấy tiêu khỏi kính, dùng giấy lau lau nước thừa hóa chất mâm kính (nếu có), đặt kính vào vị trí quy định phịng, xoay lệch vật kính khỏi vị trí thẳng đứng Hạ thấp vật kính mâm kính xuống, dựng gương thẳng lên, úp chng thủy tinh trùm túi nilon lên kính - Trong q trình sử dụng thấy kính hỏng hóc phải báo cho giáo viên hướng dẫn nhân viên kỹ thuật phịng thí nghiệm, khơng tự ý sửa chữa PHƯƠNG PHÁP LÀM TIÊU BẢN HIỂN VI TẠM THỜI 2.1 Tế bào thực vật (Tế bào vảy hành tím) Dùng dao lam rạch vng khoảng 0,5 cm/cạnh mặt vảy củ hành tươi Dùng kim mũi giáo, lột nhẹ lớp mỏng biểu bì cho vào giọt nước sẵn lam kính Đậy lamen lại cách nghiêng 450, hạ từ từ xuống để tránh bọt khí cịn lại lamen Quan sát vật kính có độ phóng đại nhỏ tế bào dài, vách mỏng Chuyển sang vật kính có độ phóng đại lớn hơn, vẽ – tế bào với đầy đủ thành phần tế bào (màng sinh chất, tế bào chất nhân) 2.2 Tế bào động vật 2.2.2 Quan sát biểu bì da ếch Quan sát nước bình nhốt ếch khoảng ngày, thấy xuất “bợn” nhỏ, mỏng Đó lớp biểu bì da ếch bị bong ếch hoạt động Dùng kim mũi mác vớt vài bợn nhỏ nhuộm xanh metylen đĩa kính đồng hồ khoảng 1-2 phút Sau đó, trải mãnh biểu bì nhuộm lên la kính nhỏ sẵn giọt nước cất đậy lamen để quan sát 2.2.3 Quan sát mô máu Ếch mổ, chích nhẹ vào mõm tim, lấy kính chấm vào mõm tim để giọt máu nằm lam kính Đặt cạnh lamen chạm bờ giọt máu di chuyển theo chiều ngang lam kính, sau đậy lamen dọc lam kính (Lamen nghiêng 45 0) để dàn mỏng giọt máu, đậy lamen để quan sát BÀI NỘP Vẽ hình tế bào biểu bì củ hành quan sát vật kính có độ phóng lớn Vẽ hình tế bào biểu bì, tế bào máu ếch ****************************** BÀI SỐ 2: QUAN SÁT MỘT SỐ DẠNG TẾ - BÀO QUAN – MÔ THỰC VẬT I Mục tiêu - Sinh viên sử dụng thành thạo kính hiển vi phương pháp làm tiêu hiển vi tế bào thực vật - Quan sát mơ tả được: Hình thái, cấu tạo số loại tế bào thực vật - Nhận biết vị trí, hình dạng số bào quan tế bào thực vật - Nhận biết vị trí, hình dạng, thành phần cấu tạo cách xếp loại mô quan thực vật II Dụng cụ, hóa chất , mẫu vật - Kính hiển vi, kim mũi mác, đĩa đồng hồ, lam kính, lamen, giấy thấm, dao lam, dao - Iôt, nước cất, Xanh metylen, glicerin - Cà chua chín, mồng tơi, ớt xanh, ớt chín, cà rốt, thân bí rợ non, rong chó, khoai tây, đậu phộng III Tiến hành thí nghiệm 3.1 Quan sát tế bào thực vật 3.1.1 Quan sát tế bào thịt cà chua chín Tiến hành: - Cắt đơi quả cà chua, dùng kim mũi mác cạo một ít thịt (càng ít càng tốt, nhiều khó quan sát vì các tế bào chồng lấn lên nhau) - Lấy lame có sẵn giọt nước cất, đưa đầu mũi mác vào cho các tế bào cà chua tan đều nước rời đậy lamen lại - Chọn vị trí quan sát tế bào rõ vẽ hình 3.1.2 Quan sát tế bào biểu bì mồng tơi Tiến hành: Dùng kim mũi giáo, lột nhẹ lớp mỏng biểu bì bề mặt ngâm vào dung dịch Iốt khoảng phút, vớt ra, rửa nước cất, sau đặt lên giọt nước cho sẵn lame kính Đậy lamen lại cách nghiêng 450, hạ từ từ xuống để tránh có bọt khí tiêu dùng giấy thấm thấm bớt nước Quan sát vật kính có độ phóng đại nhỏ nhất, sau chuyển sang vật kính có độ phóng đại lớn hơn, vẽ – tế bào với đầy đủ thành phần tế bào (màng sinh chất, tế bào chất nhân) 3.2 Quan sát số bào quan tế bào Lạp thể loại bào quan có thực vật bậc cao, gồm có loại: Lạp khơng màu (vơ sắc lạp), sắc lạp lục lạp Thí nghiệm 1: Quan sát lục lạp Dùng dao lam cắt ngang, vng góc qua có màu xanh bàng, dâm but, rong chó… tạo lát cắt mỏng Đặt chúng lên giọt nước cất nhỏ sẵn lam kính sạch, đậy lamen đưa lên kính hiển vi quan sát vật kính 10 (có thể đưa lên x40 hình ảnh cần tìm nhỏ) Yêu cầu: Quan sát, vẽ hình, mơ tả nhận xét đặc điểm lục lạp mẫu vật có So sánh số lượng lục lạp mẫu già trưởng thành Nhận xét nhu cầu ánh sáng thơng qua mật độ kích thước lục lạp tế bào Thí nghiệm 2: Quan sát vơ sắc lạp - Lạp bột: chứa tinh bột: VD khoai tây , khoai lang, củ đậu, hạt ngô, hạt gạo, hạt dẻ, … - Lạp dầu: chứa dầu: VD hạt lạc, hạt hướng dương, cùi dừa,… Dùng dao lam cạo nhẹ lên miếng khoai tây, hạt… lạc Cho phần bột vừa cạo vào giọt nước sẵn lame kính đậy lamelle Quan sát vật kính nhỏ thấy hạt tinh bột bọt nước chuyển động Chuyển sang vật kính lớn để thấy rõ vân tăng trưởng tâm Yêu cầu: Quan sát, vẽ hình, mơ tả nhận xét đặc điểm loại lạp mẫu vật có Thí nghiệm 3: Quan sát sắc lạp Sắc lạp: chứa sắc tố thuộc nhóm carotenoit (caroten xanthophyl) Quan sát sắc lạp mẫu củ cà rốt số loại chín Cách tiến hành: Dùng dao lam cắt ngang, vng góc qua chín củ cà rốt,… tạo lát cắt mỏng Đặt chúng lên giọt nước cất nhỏ sẵn lam kính sạch, đậy lamen đưa lên kính hiển vi quan sát vật kính 10 (có thể đưa lên x40 hình ảnh cần tìm nhỏ) Yêu cầu: Quan sát, vẽ hình, mơ tả nhận xét đặc điểm sắc lạp mẫu vật có - Cắt ngang thân bí rợ non huệ ta thành lát mỏng Nhuộm son phèn – lục iod Lên mẫu giọt glicerin 3.3 Quan sát mơ thực vật Cắt lát mỏng ngang thân bí rợ non, đem nhuộm Xanhmetylen khoảng phút sau rửa nước cất, lên kính với giọt glicerin quan sát kính hiển vi 3.3.1 Mơ che chở: - Mơ che chở sơ cấp biểu bì, bảo vệ mặt ngồi quan cịn non, gồm lớp tế bào nhu mơ xếp khít Bên ngồi biểu bì có lớp cutin bao phủ, biểu bì có nhiều khí khổng lơng che chở - Mỗi khí khổng gồm tế bào khổng có chứa lục lạp, xếp chừa lỗ nhỏ gọi tiểu khổng, hai bên tế bào khổng tế bào kèm, bên tiểu khổng phòng khổng Khí khổng quan giúp trao đổi khí với mơi trường bên ngồi 3.3.2 Nhu mơ (mơ mềm) - Nhu mô mô bản, gặp tất quan thực vật, gồm tế bào sống có vách cellulo mỏng, có màu hồng sau nhuộm son phèn Tế bào nhu mơ có hình đa giác, hình bản, hình nhiều cạnh gần trịn Sắp xếp khít chừa đạo hat khuyết - Khi nhu mô chứa lục lạp gọi lục mơ hay nhu mơ đồng hóa, chủ yếu gặp 3.3.3 Mô nâng đỡ: - Thường gặp tất quan thực vật, nằm biểu bì Gồm có hai loại mơ giao mơ cương mơ có nhiệm vụ chống đỡ cho 3.3.4 Mơ dẫn truyền (Quan sát thân bí rợ non) Gồm hai loại mô: - Mô gỗ: gồm mạch gỗ nhu mô gỗ - Mô libe: gồm ống sàng mơ libe BÀI NỘP Trình bày cách làm tiêu vẽ hình có thích đầy đủ thành phần tế bào biểu bì mồng tơi, tế bào thịt cà chua, hạt tinh bột khoai tây, hạt lục lạp, hạt sắc lạp, mô có tiêu thân bí rợ non ***************************** Bài 3: HIỆN TƯỢNG THẨM THẤU, SỰ TRAO ĐỔI NƯỚC GIỮA TẾ BÀO THỰC VẬT VỚI MÔI TRƯỜNG I Mục tiêu: - Sinh viên củng cố kiến thức lý thuyết chế vận chuyển chất qua màng tế bào - Thiết lập đồ thị thể mối quan hệ tăng, giảm khối lượng khoai tây với nồng độ dung dịch II Dụng cụ - Hóa chất – Mẫu vật - Dụng cụ: Kính hiển vi, lam kính, lamen, pipet, kim mũi giáo, ống hút 10 ml, bóp cao su, ống nghiệm, cân phân tích, đĩa petri - Hóa chất: Nước cất, KNO3 1M, dung dịch Saccharose 1M - Nguyên liệu: Củ hành tím, khoai tây III Tiến hành thí nghiệm Thí nghiệm 1: Hiện tượng thẩm thấu màng tế bào - Dùng dao lam tách lớp mỏng biểu bì củ hành tím đặt mảnh biểu bì vảy hành lên lame nhỏ sẵn giọt nước, đậy lamelle lại quan sát vật kính 4X, 10X Vẽ hình - Sau đó, dùng giấy thấm thấm khơ nước mẫu vật vừa quan sát nhỏ vào giọt KNO3 1M, đậy lamelle lại quan sát vật kính 4X, 10X Vẽ hình, nhận xét giải thích tế bào vẩy hành quan sát giọt nước giọt KNO3 1M Thí nghiệm 2: Sự trao đổi nước tế bào thực vật với môi trường - Pha dung dịch Saccharose 1M Từ dung dịch pha thành dung dịch có nồng độ sau: STT ống nghiệm 10 11 Số ml dd đường 10 Số ml nước 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 10 Nồng độ dd (M) - Cắt mô khoai tây thành 11 có kích thước tương đối đặt lọt vào ống nghiệm Cân ghi lại trọng lượng (Pđầu) theo thứ tự cho vào 11 ống nghiệm chuẩn bị - Sau 60 phút, dùng kẹp gắp mơ ra, lau sơ nước dính mặt ngồi cân lại (Psau) - Tính sai biệt trọng lượng ∆P = Psau – Pđầu Sai biệt (+) Psau > Pđầu Sai biệt (-) Psau < Pđầu - Ghi kết vào bảng sau: Nồng độ dd ngâm (M) 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 P trước (g) P sau (g) ∆P (g) - Vẽ biểu đồ thể sai biệt trọng lượng thay đổi theo nồng độ dung dịch ngâm Đường biểu diễn cắt trục hoành điểm Cs ứng với nồng độ dung dịch đường không gây thay đổi trọng lượng mô BÀI NỘP Vẽ hình tế bào vảy hành tím quan sát giọt nước dung dịch KNO3 1M Giải thích hình dáng tế bào quan sát giọt nước dung dịch KNO3 1M? Vẽ biểu đồ theo dõi tăng giảm khối lượng khoai tây nồng độ đường xác định nồng độ đường mà khối lượng khoai tây không đổi ********************************** BÀI 4: MỘT SỐ NHÂN TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN HOẠT TÍNH CỦA ENZIM Mục tiêu - Sinh viên thấy ảnh hưởng nhiệt độ, độ pH số hóa chất đến hoạt tính enzim - Quan sát, mơ tả giải thích tượng xẩy ống nghiệm II Dụng cụ, hóa chất, mẫu vật - Dụng cụ: Ống nghiệm, đèn cồn, tủ ấm - Hóa chất: + Dung dịch hồ tinh bột 1% + Dung dịch Lugol + Na2HPO4 0,2M + Axit citric 0,1M + NaCl 1% + CuSO41% + Nước bọt pha loãng, Nước cất, Nước đá III Tiến hành thí nghiệm Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng nhiệt độ đến hoạt lực enzim amylaza Lấy ống nghiệm , đánh số thứ tự từ – 4, cho vào ống 1,2 ống 2ml tinh bột 1% - Ống 1: đặt vào nước đá - Ống 2: đặt nhiệt độ phòng - Ống 3: đặt vào tủ ấm (450C) Sau 15 phút lấy ra, cho vào ống ml nước bọt pha lỗng lần Sau đặt lại nhiệt độ ban đầu 15 phút, lấy cho vào ống giọt thuốc thử Lugol Riêng ống cho vào ml nước bọt pha lỗng đun sơi đền cồn, thêm vào ml tinh bột 1% đun sôi, để nguội thêm vào giọt thuốc thử Lugol 10 Quan sát kết ống, giải thích kết luận Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng pH lên hoạt tính amylaza Lấy ống nghiệm, đánh số từ – 7, cho vào ống chất theo bảng sau: TT Na2HPO4 0,2M 0,58ml 0,63ml 0,69ml 0,77ml 0,87ml 0,94ml 0,97ml Axit citric 0,1M 0,42ml 0,37ml 0,31ml 0,23ml 0,13ml 0.06ml 0,03ml Độ PH 5,6 6,0 6,1 6,8 7,2 7,6 8,0 Tinh bột 1% 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml Nước bọt pha loãng 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml Lắc tất ống, để yên phút, lấy giọt ống cho vào ống nghiệm khác cho vào giọt thuốc thử Lugol, thấy màu xanh sau phút thử lại lần thu màu vàng cho vào tất ống ống giọt thuốc thử Lugol, lắc Quan sát kết giải thích, xác định độ PH thích hợp cho hoạt động amylaza Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng số chất hóa học lên hoạt tính amylaza Lấy ống nghiệm: Ống 1: 10 giọt nước cất Ống 2: giọt nước cất + giọt NaCl 1% Ống 3: giọt nước cất + giọt CuSO4 Sau cho vào ống 10 giọt nước bọt pha loãng, lắc cho vào ống giọt tinh bột 1%, để yên phút, sau cho vào ống giọt thuốc thử Lugol Quan sát kết giải thích BÀI NỘP Kết ống nghiệm giải thích tượng xẩy Hiện tượng xẩy ống nghiệm, giải thích, Xác định độ PH thích hợp cho hoạt Ảnh hưởng số chất hóa học lên hoạt tính amylaza 11