ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGUYỄN THỊ HẰNG Tên đề tài: NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA CHẤT KÍCH THÍCH SINH TRƯỞNG VÀ CHẤT HỮU CƠ TỰ NHIÊN ĐẾN KHẢ NĂNG NHÂN NHANH CHỒI LAN KIM TUYẾN (Anoectochilus roxburghii) BẰNG KỸ THUẬT IN VITRO KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành : Công nghệ sinh học Khoa : CNSH - CNTP Khoá học : 2010 – 2014 Thái Nguyên, năm 2014 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGUYỄN THỊ HẰNG Tên đề tài: NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA CHẤT KÍCH THÍCH SINH TRƯỞNG VÀ CHẤT HỮU CƠ TỰ NHIÊN ĐẾN KHẢ NĂNG NHÂN NHANH CHỒI LAN KIM TUYẾN (Anoectochilus roxburghii) BẰNG KỸ THUẬT IN VITRO KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành : Công nghệ sinh học Lớp : K42 - CNSH Khoa : CNSH - CNTP Khoá học : 2010 – 2014 Giảng viên hướng dẫn: PG S.TS Ngô Xuân Bình ThS Lê Thị Hảo Thái Nguyên, năm 2014 LỜI CẢM ƠN Được trí Ban giám hiệu nhà trường, Ban chủ nhịêm khoa Công nghệ sinh học Công nghệ thực phẩm em tiến hành thực đề tài: “Nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng chất hữu tự nhiên đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) kỹ thuật in vitro” Qua thời gian thực tập phòng nuôi cấy mô Bộ môn Công nghệ Tế bào, Viện khoa học sống, Trường Đại học Nông lâm Thái Nguyên đến em hoàn thành đề tài Để đạt kết ngày hôm em xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu, Ban Chủ nhiệm Khoa thầy cô Bộ môn Công nghệ Tế bào, thầy cô giáo môn tạo điều kiện giúp đỡ em suốt thời gian qua Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy giáo PGS.TS Ngô Xuân Bình ThS Lê Thị Hảo tận tình bảo, hướng dẫn em thời gian thực đề tài Cuối cùng, em xin chân thành cảm ơn gia đình, bạn bè động viên, giúp đỡ cho em trình học tập nghiên cứu Em xin chân thành cảm ơn ! Thái Nguyên, ngày tháng năm 2014 Sinh viên thực Nguyễn Thị Hằng DANH MỤC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT B3 : Nicotinic acid B5 : Gamborg B6 : Pyridoxine BA : 6-Benzylaminopurine CV : Coefficient of Variation Đ/C : Đối chứng IAA : Indol axetic acid Kinetin : 6-Furfurylaminopurine LSD : Least Significant Difference MS : Murashige and Skoog NAA : Napthalene axetic Acid TN : Thí nghiệm TDZ : 1,2,3-Thiadiazol-5-yl WPM : Woody Plant Medium DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 4.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (sau 35 ngày nuôi cấy) 24 Bảng 4.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BAP (1,5 mg/l) kết hợp với Kinetin đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (sau 35 ngày nuôi cấy) 26 Bảng 4.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng BAP (1,5 mg/l) Kinetine (0,3 mg/l) kết hợp với NAA đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (sau 35 ngày nuôi cấy) 28 Bảng 4.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng BAP (1,5 mg/l), Kinetine (0,3 mg/l) NAA (0,3 mg/l) kết hợp với nước dừa đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (sau 35 ngày nuôi cấy) 33 Bảng 4.5 Kết nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng BAP (1,5 mg/l), Kinetine (0,3 mg/l) NAA (0,3 mg/l) kết hợp với khoai tây đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (sau 35 ngày nuôi cấy) 35 Bảng 4.6 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BAP (1,5 mg/l), Kinetine (0,3 mg/l), NAA (0,3 mg/l) kết hợp với chuối xanh đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (sau 35 ngày nuôi cấy) 31 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 2.1 Sơ đồ phản phân hóa tế bào .7 Hình 4.1 Biểu đồ thể ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (sau 35 ngày nuôi cấy) 27 Hình 4.2 Biểu đồ thể ảnh hưởng hàm lượng BAP (1,5 mg/l) kết hợp với Kinetin đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (sau 35 ngày nuôi cấy) 29 Hình 4.3 Biểu đồ thể ảnh hưởng hàm lượng BAP (1,5 mg/l) Kinetine (0,3 mg/l) kết hợp với NAA đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (sau 35 ngày nuôi cấy) 31 Hình 4.4 Biểu đồ thể ảnh hưởng hàm lượng BAP (1,5 mg/l), Kinetine (0,3 mg/l) NAA (0,3 mg/l) kết hợp với nước dừa đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (sau 35 ngày nuôi cấy) 33 Hình 4.5 Biểu đồ thể ảnh hưởng hàm lượng BAP (1,5 mg/l), Kinetine (0,3 mg/l) NAA (0,3 mg/l) kết hợp với khoai tây đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (sau 35 ngày nuôi cấy) 35 Hình 4.6 Biểu đồ thể ảnh hưởng hàm lượng BAP (1,5 mg/l), Kinetine (0,3 mg/l) NAA (0,3 mg/l) kết hợp với chuối xanh đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (sau 35 ngày nuôi cấy) 37 MỤC LỤC Trang PHẦN 1: MỞ ĐẦU 1.2 Mục đích đề tài 1.3 Yêu cầu đề tài 1.4 Ý nghĩa đề tài PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu chung lan Kim Tuyến 2.1.1 Phân loại thực vật 2.1.2 Đặc điểm thực vật học lan Kim Tuyến 2.1.3 Đặc điểm phân bố Lan Kim Tuyến 2.1.4 Giá trị lan Kim Tuyến 2.2 Khái quát nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.2.1 Khái niệm nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.2.2 Cơ sở khoa học nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.2.3 Điều kiện môi trường nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.3 Tình hình nghiên cứu nhân giống Lan Kim Tuyến giới nước 14 2.3.1.Tình hình nghiên cứu nhân giống Lan Kim Tuyến giới 14 2.3.2 Tình hình nghiên cứu nhân giống Lan Kim Tuyến Việt Nam 15 PHẦN 3: VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 3.1 Vật liệu phạm vi nghiên cứu 17 3.1.1 Vật liệu nghiên cứu 17 3.1.2 Phạm vi nghiên cứu 17 3.2 Địa điểm, thời gian nghiên cứu 17 3.2.1 Địa điểm nghiên cứu 17 3.2.2 Thời gian tiến hành 17 3.3 Hóa chất thiết bị 17 3.3.1 Dụng cụ 17 3.3.2 Hóa chất 17 3.3.3 Thiết bị 17 3.4 Nội dung phương pháp nghiên cứu 18 3.4.1 Nội dung nghiên cứu 18 3.4.2 Phương pháp nghiên cứu 19 3.4.3 Phương pháp xử lý số liệu 23 PHẦN 4: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 24 4.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến 24 4.1.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến Anoectochilus roxburghii (sau 35 ngày nuôi cấy) 24 4.1.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BAP (1,5 mg/l) kết hợp với Kinetin đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến Anoectochilus roxburghii (sau 35 ngày nuôi cấy) 26 4.1.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng BAP 1,5 mg/l Kinetine (0,3 mg/l) kết hợp với NAA đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến Anoectochilus roxburghii (sau 35 ngày nuôi cấy) 28 4.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng khoai tây, nước dừa, chuối xanh đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến 30 4.2.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng BAP 1,5 mg/l, Kinetinen(0,3mg/l), NAA (0,3 mg/l) kết hợp với nước dừa đến khả nhân nha nh chồi Lan Kim Tuyến Anoectochilus roxburghii (sau 35 ngày nuôi cấy) 32 4.2.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng lượng BAP 1,5 mg/l, Kinetine (0,3 mg/l), NAA (0,3 mg/l) kết hợp với khoai tây đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến Anoectochilus roxburghii (sau 35 ngày nuôi cấy) 34 4.2.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng BAP 1,5 mg/l, Kinetine (0,3 mg/l), NAA (0,3 mg/l), kết hợp với chuối xanh đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến Anoectochilus roxburghii (sau 35 ngày nuôi cấy) 30 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 37 5.1 Kết luận 37 5.2 Kiến nghị 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO 38 PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Lan Kim Tuyến - Anoectochilus roxburghii (Wall.) thuộc họ Lan Orchidaceae, phân bố rộng hầu hết tỉnh Việt Nam [4] Chi Lan Kim Tuyến Anoectochilus Việt Nam thống kê 12 loài, có loài Lan Kim Tuyến Anoectochilus roxburghii (Wall) Là loại thảo dược có giá trị dược liệu, Lan Kim Tuyến có khả chữa trị bệnh ung thư, chống tăng huyết áp, lưu thông khí huyết, kháng khuẩn, làm thuốc trị lao phổi, ho phế nhiệt, phong thấp, đau nhức xương khớp, viêm dày mãn tính, viêm khí quản, suy nhược thần kinh, giúp tăng cường sức khoẻ, v.v [4] Ngoài tác dụng chữa bệnh Lan Kim Tuyến dùng làm cảnh [1] Hiện với nhu cầu sử dụng dược liệu ngày tăng Lan Kim Tuyến bị thu hái nhiều đến mức cạn kiệt tự nhiên [1] Lan Kim Tuyến xếp nhóm IA Nghị định 32/2006/NĐ-CP, nghiêm cấm khai thác sử dụng mục đích thương mại nhóm thực vật nguy cấp EN A1a,c,d Sách đỏ Việt Nam (2007), phần thực vật [5], [4] Xuất phát từ tình hình thực tiễn nhằm bảo tồn loài Lan Kim Tuyến Anoectochilus roxburghii việc ứng dụng nuôi cấy mô tế bào thực vật phương pháp hữu hiệu cho hệ số nhân chồi cao, chất lượng tốt, độ đồng cao giữ đặc tính di truyền mẹ Xuất phát từ tính cấp thiết trên, tiến hành nghiên cứu đề tài: “Nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng chất hữu tự nhiên đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) kỹ thuật in vitro” 1.2 Mục đích đề tài Nghiên cứu phương pháp nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) kỹ thuật in vitro 1.3 Yêu cầu đề tài Xác định ảnh hưởng số chất kích thích sinh trưởng BAP, Kinetin NAA đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến Xác định ảnh hưởng số chất hữu tự nhiên khoai tây, nước dừa, chuối xanh đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến 1.4 Ý nghĩa đề tài - Ý nghĩa khoa học Kết nghiên cứu đề tài đưa kĩ thuật nhân nhanh chồi lan Kim Tuyến phương pháp in vitro phục vụ cho nghiên cứu Giúp sinh viên tiếp cận với công tác nghiên cứu khoa học, qua nâng cao trình độ chuyên môn tạo cho sinh viên có tác phong làm việc nghiêm túc, sáng tạo - Ý nghĩa thực tiễn Kết đề tài góp phần bổ sung quy trình kỹ thuật nhân giống lan Kim Tuyến nhằm cung cấp giống với số lượng lớn, có chất lượng đồng đồng thời giữ đặc tính di truyền chọn lọc Bảo tồn loại dược liệu quý có nguy tuyệt chủng 36 Hình 4.6 Biểu đồ thể ảnh hưởng hàm lượng BAP (1,5 mg/l), Kinetine (0,3 mg/l), NAA (0,3 mg/l) kết hợp với chuối xanh đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến Từ bảng 4.6 hình 4.6 cho thấy: Giá trị LSD.05 đạt 0,39 CT3, CT4 so với công thức đối chứng có sai khác có ý nghĩa mức độ tin cậy 95% Hệ số nhân chồi cao CT4 đạt 5,9 lần với nồng độ chuối xanh 40 g/l, chất lượng chồi trung bình Các CT2, CT5, CT6 so với công thức đối chứng có sai khác ý nghĩa mức độ tin cậy 95%, CT6 cho hệ số nhân chồi thấp đạt 3,6 lần, chất lượng chồi Nhận xét chung: So sánh kết nghiên cứu thí nghiệm cho thấy công thức bảng 4.4 có hàm lượng BAP 1,5 mg/l, Kinetine 0,3 mg/l, NAA 0,3 mg/l, nước dừa 100 ml/l cho hệ số nhân chồi cao đạt 6,4 lần, chất lượng chồi trung bình Do vậy, sử dụng môi trường có bổ sung BAP 1,5 mg/l, Kinetine 0,3 mg/l, NAA 0,3 mg/l, nước dừa 100 ml/l để nhân nhanh giống Lan Kim Tuyến Anoectochilus roxburghii 37 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Môi trường nhân nhanh chồi sử dụng môi trường MS + BAP 1,5 mg/l + Kinetine 0,3 mg/l + NAA 0,3 mg/l + saccharose 20 g /l + agar g /l + Inositol 0,1 g/l, pH = 5,7 cho hệ số nhân chồi cao đạt 5,4 lần, chất lượng chồi tốt Môi trường nhân nhanh chồi sử dụng môi trường MS + BAP 1,5mg/l + Kinetine 0,3 mg/l + NAA 0,3 mg/l + nước dừa 100 ml/l + saccharose 20 g /l + agar g/l + Inositol 0,1 g/l, pH = 5,7 cho hệ số nhân chồi cao đạt 6,4 lần, chất lượng chồi trung bình 5.2 Kiến nghị Cần nghiên cứu loại môi trường khác để nhân giống Lan Kim Tuyến để đạt hiệu cao Nghiên cứu hoàn thiện quy trình nhân nhanh giống Lan Kim Tuyến để áp dụng vào sản xuất phương pháp nuôi cấy mô tế bào 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu tiếng việt Nguyễn Tiến Bân (2005), Danh lục loài thực vật Việt Nam, Tập 3, Nxb, Nông nghiệp, Hà Nội, 2005 Lê Trần Bình (1997), Công nghệ thực vật cải tiến giống trồng, Nxb nông nghiệp, Hà Nội Ngô Xuân Bình, Bùi Bảo Hoàn, Nguyễn Thị Thuý Hà (2003), Giáo trình công nghệ sinh học, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội Bộ Khoa Học Công Nghệ (2007), Sách đỏ Việt Nam (phần thực vật), Nxb Khoa học tự nhiên & công nghệ, Hà Nội Chính Phủ Nước Cộng hòa xã hội chủ nghĩa Việt Nam (2006), Nghị định số 32/ 2006/NĐ-CP Trịnh Đình Đạt (2009), Công nghệ sinh học (công nghệ di truyền), tập 4, Nxb giáo dục Trần Hợp (1990), Phong lan Việt Nam, tập 2, Nxb Nông nghiệp, Tp HCM Nguyễn Đức Lượng (2006), Công nghệ tế bào, Nxb Đại học quốc gia TP Hồ Chí Minh Phùng Văn Phê, Nguyễn Thị Hồng Gấm, Nguyễn Trung Thành (2010),“Nghiên cứu kỹ thuật nhân nhanh chồi invitro loài Lan Kim Tuyến Anoectochilusroxburghii (Wall.) Lindl”, Tạp chí Khoa học ĐHQGHN, Khoa học Tự nhiên Công nghệ, 26(2010), 248-253 10 Phùng Văn Phê, Nguyễn Trung Thành, Vương Duy Hưng (2009), “Đặc điểm hình thái, phân bố sinh thái loài Lan Kim Tuyến Anoectochilus setaceus Blume Vườn Quốc gia Tam Đảo, tỉnh Vĩnh Phúc”, Tạp chí Khoa học ĐHQGHN, Khoa học Tự nhiên Công nghệ, 26(2010), 104-109 11 Nguyễn Quang Thạch, Phí Thị Cẩm Miện (2012), “Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống loài Lan Kim Tuyến (Anoectochilus setaceusBlume) invtro bảo tồn nguồn dược liệu quý”, Tạp chí Khoa học Phát triển, 10(4), 597-603 12 Đỗ Năng Vịnh (2005) Công nghệ tế bào thực vật ứng dụng Nxb Nông Nghiệp 13 Vũ Văn Vụ, Nguyễn Mộng Hùng, Lê Hồng Điệp (2006), Công nghệ sinh học Nxb Giáo dục 14 Vũ Văn Vụ, Vũ Thanh Tâm, Hoàng Minh Tân (2009), Sinh lý học thực vật, Nxb Giáo dục 39 II Tài liệu tiếng anh 15 Chun-Nian He, Chun-Lan Wang, Shun-Xing Guo, Jun-Shan Yang and PeiGen Xiao (2006), “A Novel Flavonoid Glucoside from Anoectochilus roxburghii (Wall.) Lindl”, Integrat Plant Biol, 48(3), 359−363 16 Doris C N Chang, L C Chou, G.C Lee (2007), “New Cultivation Methods for Anoectochilus formosanus Hayata”, Orchid Science and Biotechnology, 1(2), 56-60 17 George, E.F.(1993) “Plant Propagation by Tissue Culture”, 2nd Ed Exegetics Limited, 441 18 Hao-Yuan Cheng, Wen-Chuan Lin, Fu-Mei Kiang, Long-Yuan Wu and Wen-Huang Peng (2003), “Anoectochilus formosanus attenuates amnesia induced by scopolamine in rats”, J Chin Med, 14(4), 235-245 19 Jean WH Yong, Liya Ge, Yan Fei Ngand Swee Ngin Tan (2009), “The Chemical Composition and Biological Properties of Coconut ( Cocos nucifera L.) Water”, Natural Sciences and Science Education Academic Group, Nanyang Technological University Nanyang Walk, 637-616 20 Lazarus Agus Sukamto, Endah Dwi Rahayu and Edhi Sandra (2011), “Characteristics between Anoectochilus setaceus and Anoectochilus formosanus by application of TDZ in vitro”, International Conference of Science and Technology 21 N Ahamed Sherif, J H Franklin Benjamin, S Muthukrishnan, T Senthil Kumar and M V Rao (2012), “Regeneration of plantlets from nodal and shoot tip explants of Anoectochilus elatus Lindley, an endangered terrestrial orchid”, African Journal of Biotechnology,11(29), 7549-7553 22 Overbeek J van et al (1944), “Coconut Milk used for growth and development of very young Datura embryos”, Science, 94, 350-351 23 Pavallekoodi Gnasekaran, Ranjetta Poobathy, Maziah Mahmood (2012), “Effects of complex organic additives on improving the growth of PLBs of Vanda Kasem’s Delight”, School of Biological Sciences, Universiti Sains Malaysia (USM), Minden Heights, 11800, Penang, Malaysia, (8), 1245-1248 24 Shu-Fen Cheng and Doris Chi-Ning Chang (2009), “Growth responses and changes of active components as influenced by elevations and orchid 40 mycorrhizae on Anoectochilus formosanus Hayata”, Botanical Studies, 50(2009), 459-466 25 Wen-Chuan Lin and Chang-Chi Hsieh (2005), “Commercial Application of Anoectochilus formosanus: Immunomodulating Activities”, International Journal of Applied Science and Engineering, 3(2005), 175-178 26 Yang Bai-Yun (2008), “Induction and Rapid Propagation of Anoectochilus roxburghii Protocorm”, Journal of Anhui Agricultrural Sciences 27 Yih-Juh Shiau, Abhay P Sagare, Uei-Chin Chen, Shu-Ru Yang, and HsinSheng Tsay (2001), “Conservation of Anoectochilus formosanus Hayata by artificial cross-pollination and in vitro culture of seeds”, Bot Bull Acad Sin., 43(2002), 123-130 28 Zoltan Molnar, Emese virag, Vince Ordog (2011), “Natural substances in tissue culture media of higher plants”, Institute of Plant Biology, Faculty of Agricultural and Food Sciences, University of West Hungary, Mosonmagyarovar hungary, 1(2011), 123-127 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Một số kết ảnh thí nghiệm CT1 (BAP 0,0mg/l) CT3 (BAP 1,5mg/l) Hệ số nhân chồi đạt 1,8 lần Hệ số nhân chồi đạt 4,1 lần Hình 1: Ảnh hưởng hàm lượng BAP đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (sau 35 ngày nuôi cấy) CT1 (Kinetine 0,0mg/l) CT4 (Kinetine 0,3 mg/l) Hệ số nhân đạt chồi 4,0 lần Hệ số nhân chồi đạt 4,7 lần Hình 2: Ảnh hưởng hàm lượng BAP (1,5mg/l) kết hợp với Kinetine đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (sau 35 ngày nuôi cấy) CT1 (NAA 0,0mg/l) CT4 (NAA 0,3mg/l) Hệ số nhân chồi đạt 4,7 lần Hệ số nhân chồi đạt 5,4 lần Hình 3: Ảnh hưởng hàm lượng BAP 1,5mg/l, Kinetine 0,3mg/l kết hợp với NAA đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (sau 35 ngày nuôi cấy) CT1 (khoai tây 0,0g/l) Hệ số nhân chồi đạt 5,2 lần CT3 (khoai tây 30g/l) Hệ số nhân chồi đạt 6,1 lần Hình 4: Ảnh hưởng hàm lượng BAP 1,5mg/l, Kinetine 0,3mg/l, NAA 0,3mg/l kết hợp với khoai tây đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (sau 35 ngày nuôi cấy) CT1 (nước dừa 0,0ml/l) Hệ số nhân chồi đ ạt 5,6 lần CT2 (nước dừa 50ml/l) Hệ số nhân chồi đạt 5,8 lần CT3 (nước dừa 100ml/l) CT5 (nước dừa 200ml/l) Hệ số nhân chồi 6,4 lần Hệ số nhân chồi 4,0 lần Hình 5: Ảnh hưởng hàm lượng BAP 1,5mg/l, Kinetine 0,3mg/l, NAA 0,3mg/l kết hợp với nước dừa đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (sau 35 ngày nuôi cấy) CT1 (chuối xanh 0,0ml/l) Hệ số nhân chồi đạt 5,1 lần CT2 ( chuối xanh 20g/l) Hệ số nhân chồi đạt 5,2 lần CT4 (chuối xanh 40g/l) CT6 (chuối xanh 100g/l) Hệ số nhân chồi 5,9lần Hệ số nhân chồi 3,6 lần Hình 6: Ảnh hưởng hàm lượng BAP 1,5mg/l, Kinetine 0,3mg/l, NAA 0,3mg/l kết hợp với chuối xanh đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (sau 35 ngày nuôi cấy Phụ lục Kết xử lý số liệu Bảng 4.1 Kết ảnh hưởng hàm lượng BAP đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (sau 35 ngày nuôi cấy)) BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE S1 4/ 6/14 7:19 :PAGE anh huong cua ham luong BAP den kha nang nhan nhanh choi Lan Kim Tuyen VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 9.87111 1.97422 84.61 0.000 * RESIDUAL 12 280000 233334E-01 * TOTAL (CORRECTED) 17 10.1511 597124 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE S1 4/ 6/14 7:19 :PAGE anh huong cua ham luong BAP den kha nang nhan nhanh choi Lan Kim Tuyen MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 3 HSN 1.76667 3.20000 4.06667 3.80000 3.60000 3.23333 SE(N= 3) 0.881918E-01 5%LSD 12DF 0.271749 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE S1 4/ 6/14 7:19 :PAGE anh huong cua ham luong BAP den kha nang nhan nhanh choi Lan Kim Tuyen F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSN GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 3.2778 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.77274 0.15275 4.7 0.0000 | | | | Bảng 4.2 Kết ảnh hưởng hàm lượng BAP 1,5mg/l kết hợp với Kinetin đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (sau 35 ngày nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE S2 4/ 6/14 8: :PAGE anh huong cua ham luong BAP (1,5mg/l) ket hop voi kinetine den kha nang nhan nhanh VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 3.39611 679222 17.47 0.000 * RESIDUAL 12 466667 388889E-01 * TOTAL (CORRECTED) 17 3.86278 227222 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE S2 4/ 6/14 8: :PAGE anh huong cua ham luong BAP (1,5mg/l) ket hop voi kinetine den kha nang nhan nhanh MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 3 HSN 3.96667 4.06667 4.30000 4.73333 3.86667 3.30000 SE(N= 3) 0.113855 5%LSD 12DF 0.350826 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE S2 4/ 6/14 8: :PAGE anh huong cua ham luong BAP (1,5mg/l) ket hop voi Kinetine den kha nang nhan nhanh F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSN GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 4.0389 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.47668 0.19720 4.9 0.0001 | | | | Bảng 4.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng BAP (1,5mg/l) kinetine (0,3mg/l) kết hợp với NAA đến khả nhân chồi Lan Kim Tuyến (sau 35 ngày nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE S11 4/ 6/14 13: :PAGE anh huong cua ham luong BAP (1,5mg/l), Kinetine (0,3mg/l) ket hop VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 7.30278 1.46056 36.01 0.000 * RESIDUAL 12 486667 405556E-01 * TOTAL (CORRECTED) 17 7.78944 458203 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE S11 4/ 6/14 13: :PAGE anh huong cua ham luong BAP (1,5mg/l), Kinetine (0,3mg/l) ket hop MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 HSN 4.70000 4.80000 5.00000 5.43333 3 4.30000 3.40000 SE(N= 3) 0.116269 5%LSD 12DF 0.358265 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE S11 4/ 6/14 13: :PAGE anh huong cua ham luong BAP (1,5mg/l), Kinetine (0,3mg/l) ket hop F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSN GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 4.6056 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.67691 0.20138 4.4 0.000 | | | | Bảng 4.4 Kết ảnh hưởng hàm lượng BAP 1,5mg/l, Kinetine 0,3mg/l, NAA 0,3mg/l kết hợp với nước dừa đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (sau 35 ngày nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE S9 4/ 6/14 12:13 :PAGE anh huong cua ham luong BAP (1,5mg/l), Kinetine (0,3mg/l) NAA (0,3mg/l) va kho VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 10.6961 2.13922 32.36 0.000 * RESIDUAL 12 793334 661112E-01 * TOTAL (CORRECTED) 17 11.4894 675850 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE S9 4/ 6/14 12:13 :PAGE anh huong cua ham luong BAP (1,5mg/l), Kinetine (0,3mg/l) NAA (0,3mg/l) va kho MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 3 HSN 5.60000 5.80000 6.40000 5.23333 4.00000 4.73333 SE(N= 3) 0.148449 5%LSD 12DF 0.457421 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE S9 4/ 6/14 12:13 :PAGE anh huong cua ham luong BAP (1,5mg/l), Kinetine (0,3mg/l) NAA (0,3mg/l) va kho F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN (N= 18) NO STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | | | | HSN OBS 18 5.2944 TOTAL SS 0.82210 RESID SS 0.25712 | 4.9 0.0000 | Bảng 4.5 Kết ảnh hưởng hàm lượng BAP 1,5mg/l, Kinetine 0,3mg/lvà NAA 0,3mg/l kết hợp với khoai tây đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (sau 35 ngày nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE S23 4/ 6/14 23:22 :PAGE anh huong cua ham luong BAP (1,5mg/l), Kinetine (0,3mg/l) NAA (0,3mg/l) ket hop VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 8.64945 1.72989 37.07 0.000 * RESIDUAL 12 560000 466667E-01 * TOTAL (CORRECTED) 17 9.20945 541732 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE S23 4/ 6/14 23:22 :PAGE anh huong cua ham luong BAP (1,5mg/l), Kinetine (0,3mg/l) NAA (0,3mg/l) ket hop MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 3 HSN 5.23333 5.46667 6.06667 5.76667 4.73333 3.96667 SE(N= 3) 0.124722 5%LSD 12DF 0.384311 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE S23 4/ 6/14 23:22 :PAGE anh huong cua ham luong BAP (1,5mg/l), Kinetine (0,3mg/l) NAA (0,3mg/l) ket hop F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSN GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 5.2056 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.73602 0.21602 4.1 0.000 | | | | Bảng 4.6 Kết ảnh hưởng hàm lượng BAP 1,5mg/l, Kinetine 0,3mg/l NAA 0,3mg/l kết hợp với chuối xanh đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (sau 35 ngày nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE S26 4/ 6/14 23:34 :PAGE anh huong cua ham luong BAP (1,5mg/l), Kinetine (0,3mg/l) NAA (0,3mg/l) ket ho VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 9.96944 1.99389 42.22 0.000 * RESIDUAL 12 566666 472222E-01 * TOTAL (CORRECTED) 17 10.5361 619771 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE S26 4/ 6/14 23:34 1,5 - :PAGE anh huong cua ham luong BAP (2mg/l), Kinetine (0,3mg/l) NAA (0,3mg/l) ket ho MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 3 HSN 5.13333 5.16667 5.56667 5.86667 4.50000 3.60000 SE(N= 3) 0.125462 5%LSD 12DF 0.386591 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE S26 4/ 6/14 23:34 :PAGE anh huong cua ham luong BAP (1,5mg/l), Kinetine (0,3mg/l) NAA (0,3mg/l) ket ho F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSN GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 4.9722 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.78726 0.21731 4.4 0.0000 | | | | Phụ lục Môi trường MS (1 lít) Nhóm Thành phần NH4NO3 Đa lượng Vi lượng Sắt Vitamins KNO3 MgSO4 7H2O KH2PO4 CaCl2 2H2O CuSO4 5H2O KI CoCl2 6H2O MgSO4 4H2O ZnSO4.4H20 Na2M0O4 2H2O H3BO3 Khối lượng (g) Nồng độ (ml/l) 33 38 7,4 3,4 8,8 0,0025 0,0083 0,0025 2,23 0,86 0,0025 0,62 FeSO4 7H2O 1,79 Na2EDTA Nicotinic acid Glycine Thiamine HCl Pyridoxine HCl 1,865 0,05 0,2 0,05 0,05 50 10 [...]... dung và phương pháp nghiên cứu 3.4.1 Nội dung nghiên cứu Nội dung 1: Nghiên cứu ảnh hưởng của một số chất kích thích sinh trưởng (BAP, Kinetin, NAA) đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) - Nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng BAP đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến - Nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng BAP tốt nhất kết hợp với Kinetin đến khả năng nhân nhanh chồi Lan. .. Kim Tuyến - Nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng BAP và Kinetin tốt nhất kết hợp với NAA đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến Nội dung 2: Nghiên cứu ảnh hưởng của một số chất hữu cơ tự nhiên (khoai tây, nước dừa, chuối xanh) đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) - Nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng BAP, Kinetin và NAA tốt nhất kết hợp với khoai tây đến khả năng nhân. .. nhanh chồi Lan Kim Tuyến - Nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng BAP, Kinetin và NAA tốt nhất kết hợp với chuối xanh đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến - Nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng BAP, Kinetin và NAA tốt nhất kết hợp với nước dừa đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến 19 3.4.2 Phương pháp nghiên cứu 3.4.2.1 Phương pháp nghiên cứu nội dung 1: Nghiên cứu ảnh hưởng của một số chất kích. .. QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Ảnh hưởng của các chất kích thích sinh trưởng đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến Nhân nhanh là giai đoạn kích thích sự phân hóa các mầm chồi từ một hay vài chồi ban đầu Đây là giai đoạn không thể thiếu với một quy trình sản xuất giống có tính chất công nghiệp bằng phương pháp nhân giống in vitro Trong giai đoạn này sự sinh trưởng và phát triển của mô nuôi cấy phụ thuộc vào... phần dinh dưỡng, chất điều tiết sinh trưởng và tỷ lệ giữa chúng) Tùy theo từng loại cây mà người ta có thể bổ sung vào môi trường nuôi cấy các chất điều tiết sinh trưởng với nồng độ và tỷ lệ khác nhau để thu được hệ số nhân chồi và chất lượng chồi cao nhất 4.1.1 Ảnh hưởng của hàm lượng BAP đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (sau 35 ngày nuôi cấy) Bảng 4.1 Ảnh hưởng của hàm lượng BAP đến khả năng. .. giống Lan Kim Tuyến có thể tạo từ nhân in vitro các mắt đốt thân, hạt giống và các bộ phận sinh dưỡng của cây Tuy nhiên sự sinh trưởng các của cây Lan Kim Tuyến in vitro chậm, 6 kéo dài thời gian nhân giống Hiện nay nhiều nước chủ yếu sản xuất cây Lan Kim Tuyến từ nuôi cấy hạt in vitro Trung Quốc, Đài Loan, Nhật bản đã trồng và xuất khẩu Lan Kim Tuyến mang lại nguồn thu lớn - Giá trị dược liệu Lan Kim Tuyến. .. bào và kích thích sự hình thành chồi Trong thí nghiệm này đề tài đã nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng BAP (1,5 mg/l) kết hợp với Kinetine nồng độ từ 0,1 đến 0,5 mg/l Kết quả nghiên cứu được thể hiện ở bảng 4.2 và hình 4.2: Bảng 4.2 Ảnh hưởng của nồng độ BAP (1,5 mg/l) kết hợp với Kinetin đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (sau 35 ngày nuôi cấy) Nồng độ Số mẫu Hệ số nhân Chất lượng Kinetin nuôi... saccharose 20 g/l + agar 6 g/l + Inositol 0,1 g /l, pH = 5,7 Nồng độ BAP, kinetine và NAA thích hợp cho nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến ở thí nghiệm 3 (kí hiệu C) được sử dụng cho các thí nghiệm tiếp theo 3.4.2.2 Phương pháp nghiên cứu nội dung 2: Nghiên cứu ảnh hưởng của một số chất hữu cơ tự nhiên (khoai tây, nước dừa, chuối xanh) đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii)... trưởng ngoại sinh tác dụng độc lập với hoocmon sinh trưởng nội sinh Phân chia tế bào, phân hoá và biệt hoá được điều kiển bằng sự tác động tương hỗ giữa các hoocmon ngoại sinh và nội sinh Tác động phối hợp của auxin và cytokinin có tác động quyết định đến sự phát triển và phát sinh hình thái của tế bào và mô Những nghiên cứu của tác giả Skoog cho thấy tỷ lệ 14 auxin/cytokinin cao thì thích hợp cho... nhau nhưng pH của môi trường thường từ 5,6-6,0 [2] Nếu pH của môi trường thấp hơn 5,0 thì agar sẽ khó đông và cao hơn 6,0 sẽ làm môi trường bị cứng - Các chất điều tiết sinh trưởng: Các chất kích thích sinh trưởng gồm 2 nhóm chính auxin và cytokinin, ngoài ra còn có gibberlin và etylen cũng là nhóm chất tham gia điều tiết sự sinh trưởng phát triển và phân hóa cơ quan + Auxin Chất auxin tự nhiên được tìm