Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Luận văn tốt nghiệp Bác Sỹ Nội Trú ÁP DỤNG KỸ THUẬT QF – PCR ĐỂ CHẨN ĐOÁN TRƯỚC SINH HỘI CHỨNG DOWN Người hướng dẫn: Ts Bs Hoàng Thị Ngọc Lan Học viên: Vũ Thị Huyền Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn ĐẶT VẤN ĐỀ  Dị tật bẩm sinh vấn đề quan tâm lớn toàn xã hội  HC Down: 120 – 150/100000 (Who 1972) – gánh nặng kinh tế tâm lý cho gia đình xã hội  Sàng lọc chẩn đoán phát sớm DTBS: Siêu âm, Sàng lọc huyết mẹ, nuôi cấy NST, FISH  QF – PCR: khuếch đại STR – xác định số lượng alen điện di – xác định bất thường số lượng NST Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn MỤC TIÊU Ứng dụng kỹ thuật QF – PCR để chẩn đoán trước sinh hội chứng Down Đánh giá giá trị kỹ thuật QF – PCR chẩn đoán trước sinh hội chứng Down Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn TỔNG QUAN Kỹ thuật di truyền tế bào Kỹ thuật FISH Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Kỹ thuật QF – PCR - STR: - Nguyên tắc kỹ thuật QF - PCR Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn CÁCH ĐỌC KẾT QUẢ TỶ LỆ ĐỈNH Tỷ lệ đỉnh (peak) STR Kết 0,8 – 1,4 : Bình thường ≤ 0,6 : ≥ 1,8 : Lệch bội NST 1,6 : alen ≥ 20bp Bình thường Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn NST củủa mẹẹ NST củủa cha Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn A 1:1:1 :TRISOMI 2:1:TRISOMI Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU Chọc hút ối thai phụ có tuổi thai ≥ 16 tuần có tiêu chuẩn:  Kết sàng lọc Triple test Double test nguy cao DS  Và (hoặc) có hình ảnh siêu âm bất thường  Và (hoặc) có tiền sử sinh DS, sinh dị tật  Và đồng ý thai phụ Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Kết QF-PCR thai có NST 21 Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Phù hợp với kết di truyền tế bào Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Kết QF-PCR thai có NST 21 Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Phù hợp với kết di truyền tế bào Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn MỨC ĐỘ PHÁT HIỆN CÁC ALEN CỦA NST 21 Marker D21S1442 D21S1414 D21S1446 D21S1411 D21S1435 Không lên đỉnh 1 đỉnh 13 13 1:1 47 52 48 56 51 2:1 1 1:1:1 0 0 Không lên đỉnh 1 0 đỉnh 2 1:1 3 2:1 10 14 12 10 1:1:1 12 10 Tỷ lệ phát DS (%) 17/26 (65,4%) 21/26 (80,8%) 20/26 (76,9 %) 20/26 (76,9 %) 20/26 (76,9 %) Tỷ lệ phát chung (%) 64/90 (71,1%) 73/90 (81,1%) 68/90 (75,6 %) 76/90 (84,4 %) 71/90 (78,9%) Mẫu không mắc DS (64) Mẫu mắc DS (26) Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia tại:QF wWw.SinhHoc.edu.vn Độ xác kỹsẻ thuật - PCR với kỹ thuật DT TB Kết QF – PCR (90 mẫu) Số mẫu (n) Kiểu NST Số mẫu (n) Tỷ lệ thai (%) 26 28,9 NST 18 4,44 NST 13 X XYY NST 21 Bất thường khác Đặc biệt Bình thường Kết di truyền tế bào (90 mẫu) 47, XY, +21 47, XX, +21 46,XX,t (21q;21q) Nghi ngờ DS chuyển đoạn 14 10 1 Tỷ lệ thai (%) Độ xác (%) 28,9 100 4,44 100 2,22 2,22 100 1,11 1,11 100 1,11 1,11 100 XXY 2,22 1,11 XX/XY 0 1,11 46,XX 30 60 30 60 24 Tài46,XY liệu chia24sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn 50 100 Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Kết QF-PCR thai có karyotype nghi DS chuyển đoạn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Kết Karyotype thai phụ có thai nghi DS chuyển đoạn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn KẾT LUẬN Áp dụng thành công kỹ thuật QF – PCR chẩn đoán trước sinh DS nơi: BVPSTW Học viện quân Y trung tâm nghiên cứu Gen – Protein Giá trị kỹ thuật QF – PCR  Phát 100% thai DS (trong QF-PCR xác định thai DS mà di truyền TB nghi ngờ)  Phối hợp với di truyền TB chẩn đoán xác trường Tài hợp liệu DS chiachuyển sẻ tại:đoạn wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn KIẾN NGHỊ Kỹ thuật QF-PCR nên áp dụng rộng rãi cho chẩn đoán trường hợp bất thường số lượng NST Tiếp tục nghiên cứu để khắc phục hạn chế tồn kỹ thuật QF-PCR Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Em xin trân trọng cảm ơn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Kết QF-PCR Khảm 46, XX/46, XY Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn 70% (46,XY) Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn 30% (46,XX) Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn [...]... wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn KẾT LUẬN 1 Áp dụng thành công kỹ thuật QF – PCR trong chẩn đoán trước sinh DS ở các nơi: BVPSTW và Học viện quân Y và trung tâm nghiên cứu Gen – Protein 2 Giá trị của kỹ thuật QF – PCR  Phát hiện đúng 100% thai DS (trong đó QF- PCR xác định một thai DS mà di truyền TB còn nghi ngờ)  Phối hợp với di truyền TB chẩn đoán chính xác những trường Tài hợp... tại:đoạn wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn KIẾN NGHỊ 1 Kỹ thuật QF- PCR nên được áp dụng rộng rãi cho chẩn đoán các trường hợp bất thường số lượng NST 2 Tiếp tục nghiên cứu để khắc phục những hạn chế còn tồn tại của kỹ thuật QF- PCR Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Em xin trân trọng cảm ơn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn... Kết luận về di truyền cho thai Đánh giá giá trị của QF - PCR Tư vấn di truyền Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: QUY TRÌNH KỸwWw.SinhHoc.edu.vn THUẬT QF - PCR Bệnh viện Phụ sản Trung Ương Học viện Quân Y và trung tâm Gen-Protein Mẫu nghiên cứu Quy trình 1.Tách chiết và đo độ tinh sạch ADN 2 .Kỹ thuật QF- PCR Sử dụng phương pháp tách bằng Chelex Thành phần phản ứng theo bảng... wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Kết quả QF- PCR của thai có 2 NST 21 Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Phù hợp với kết quả di truyền tế bào Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Kết quả QF- PCR của thai có 3 NST 21 Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn... (%) 64/90 (71,1%) 73/90 (81,1%) 68/90 (75,6 %) 76/90 (84,4 %) 71/90 (78,9%) Mẫu không mắc DS (64) Mẫu mắc DS (26) Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia tại :QF wWw.SinhHoc.edu.vn Độ chính xác của kỹsẻ thuật - PCR với kỹ thuật DT TB Kết quả QF – PCR (90 mẫu) Số mẫu (n) Kiểu NST Số mẫu (n) Tỷ lệ thai (%) 26 28,9 3 NST 18 4 4,44 3 NST 13 2 X XYY 3 NST 21 Bất thường khác Đặc biệt Bình thường... 1,98 Thời gian Nhanh ( 30 phút) Chậm (1 – 2 giờ) Giá thành Thấp Cao Kỹ thuật Đơn giản, nhanh Phức tạp Không độc Độc 100% 100% Mức độ ảnh hưởng Thành công Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Cao Tài liệuQUẢ chia sẻKỸ tại:THUẬT wWw.SinhHoc.edu.vn KẾT QF - PCR Bệnh viện Học viện Quân Phụ sản Y và trung tâm Trung Ương Gen-Protein Đặc điểm Tỷ lệ (%) Số mẫu Số mẫu HC Down 24 2 3 NST 18 3 1 3 NST 13 1 1... chia24sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn 50 100 Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Kết quả QF- PCR của thai có karyotype nghi DS chuyển đoạn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Kết quả Karyotype của thai phụ có thai nghi DS chuyển đoạn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài...Tài liệuPHƯƠNG chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn PHÁP NGHIÊN CỨU Mẫu dịch ối 1ml để tách ADN 9 - 10ml nuôi cấy tế bào bằng phương pháp cấy hở Tách chiết ADN Thu hoạch sau 9 - 12 ngày nuôi cấy Đo độ tinh sạch của ADN Nhuộm băng G Kỹ thuật QF - PCR Điện di mao quản trên máy đọc trình tự tự động ABI 3130 (3100) XL Đối chiếu kết quả Phân tích... ơn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Kết quả QF- PCR Khảm 46, XX/46, XY Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn 70% (46,XY) Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn 30% (46,XX) Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn ... đọc trình tự tự động là ABI 3130 XL ứng dụng Fragment POP7, mao quản 36 4.Phân tích kết quả Bằng phần mềm chuyên dụng Genmapper ID 3.2 84 Mẫu nghiên cứu Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Bộ kit Aneufast Primer gắn huỳnh quang dNTP Buffer Taq DNA Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn S1 S2 AMXY 11 SRY 10 MXY ... wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn MỤC TIÊU Ứng dụng kỹ thuật QF – PCR để chẩn đoán trước sinh hội chứng Down Đánh giá giá trị kỹ thuật QF – PCR chẩn đoán trước sinh. .. wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn TàiQUẢ liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn KẾT SÀNG LỌC THAI H/C DOWN. .. liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Kết QF-PCR thai có NST 21 Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Phù hợp