TỔNG LIÊN ĐOÀN LAO ĐỘNG VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÔN ĐỨC THẮNG KHOA KHOA HỌC ỨNG DỤNG ***************** KHẢO SÁT KHẢ NĂNG SINH ENZYME MANNANASE CỦA VI KHUẨN Bacillus subtilis Giảng viên hướng dẫn : Th.s NGUYỄN KHÁNH LINH Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 12/2009 i TÓM TẮT Tên đề tài : Khảo sát khả sinh tổng hợp enzyme Mannanase từ Bacillus subtilis Địa điểm tiến hành luận văn : Phòng Nghiên Cứu Dinh Dưỡng Chăn Nuôi thuộc Viện Khoa Học Kỹ Thuật Nông Nghiệp Miền Nam Trong tháng đầu năm 2009, giá thức ăn chăn nuôi tăng 5-8% so với cuối năm 2008 quý I/ 2009, tuỳ loại thức ăn vùng Để giảm giá thức ăn hỗn hợp, người nông dân thường trộn nguyên liệu rẻ tiền khô cọ, khô dừa, vỏ đậu nành Các nguyên liệu lại giàu -Mannan số chất thuộc nhóm polysaccharide tinh bột gây cản trở tiêu hoá thức ăn, ngăn trở chất dinh dưỡng hấp thụ qua niêm mạc ruột Để giải vấn đề này, tiến hành nghiên cứu sản xuất quy mô phòng thí nghiệm chế phẩm enzyme Mannanase Chế phẩm enzyme có tác dụng phân cắt Mannan, làm giảm độ nhớt dịch ruột, tạo điều kiện cho niêm mạc ruột hấp thu chất dinh dưỡng dễ dàng.Bên cạnh đó, -Mannan bị phân cắt thành mannose oligosaccharide, chúng giữ vai trò prebiotic, có tác dụng loại bỏ vi khuẩn bệnh bám dính thượng bì ruột, kích thích hệ miễn dịch ruột hoạt động, từ giúp tăng cường sức khoẻ ruột, hạn chế rối loạn tiêu hoá Kết đạt : - Khảo sát khả sinh enzyme Mannanase từ môi trường lỏng rắn có tỷ lệ thành phần khác nhau, ta kết luận môi trường lỏng L1 môi trường rắn R1 môi trường tối ưu cho sinh tổng hợp enzyme Mannanase từ Bacillus subtilis - Từ môi trường tối ưu lỏng L1, tiến hành khảo sát mốc thời gian xác định, ta kết luận thời điểm 120 thời điểm tốt để thu nhận chế phẩn enzyme Mannanase - Từ môi trường tối ưu rắn R1, tiến hành khảo sát môi trường độ ẩm khác nhau, ta kết luận môi trường R1 với độ ẩm 65% tốt cho khả sinh tổng hợp enzyme Mannanase - Từ môi trường tối ưu rắn R1, tiến hành khảo sát mốc thời gian xác định, ta kết luận thời điểm 120 thời điểm tốt để thu nhận chế phẩn enzyme Mannanase Nghiên cứu phục vụ cho người nông dân, giảm chi phí sản xuất, giảm giá thành thức ăn chăn nuôi, tăng tỷ lệ hấp thụ thức ăn cho gia súc, gia cầm tăng chất lượng vật nuôi Nhờ đó, người nông dân nhanh thu hồi vốn để tái sản suất đầu tư thu lợi nhuận, cải thiện đời sống iii MỤC LỤC Trang tựa i Lời cảm ơn ii Tóm tắt iii Mục lục iv Danh mục sơ đồ vii Danh mục hình vii Danh mục bảng viii Danh mục đồ thị ix GIỚI THIỆU Đặt vấn đề Mục đích phạm vi đề tài Ý nghĩa đề tài CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu vi khuẩn Bacillus subtilis 1.1.1 Vị trí phân loại 1.1.2 Nguồn gốc phân bố 1.1.3 Đặc điểm hình thái 1.1.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến tồn tại, phát triển vi khuẩn Bacillus subtilis 1.1.5 Lợi ích Bacillus subtilis 1.1.6 Tác hại Bacillus subtilis 1.2 Giới thiệu enzyme Mannanase 1.2.1 Cấu tạo enzyme Mannanase 12 iv 1.2.2 Tính chất enzyme Mannanase 14 1.2.3 Nguồn thu nhận enzyme Mannanase 14 1.2.4 Các phương pháp thu nhận enzyme Mannanase 15 1.2.5 Ứng dụng enzyme Mannanase 21 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.1 Thời gian địa điểm tiến hành thí nghiệm 24 2.2 Nội dung nghiên cứu 24 2.3 Vật liệu thí nghiệm 24 2.3.1 Đối tượng thí nghiệm 24 2.3.2 Trang thiết bị thí nghiệm 24 2.3.3 Hoá chất môi trường thí nghiệm 25 2.3.4 Phương pháp 27 2.3.4.1 Nhuộm gram 27 2.3.4.2 Tiến hành hoạt hoá tăng sinh vi khuẩn Bacillus subtilis 28 2.3.4.3 Phương pháp nuôi cấy Bacillus subtilis môi trường lỏng 28 2.3.4.4 Phương pháp nuôi cấy Bacillus subtilis môi trường rắn 29 2.3.4.5 Tiến hành xác định hoạt tính enzyme Mannanase 30 2.3.4.6 Khảo sát ảnh hưởng môi trường lên men đến khả sinh tổng hợp enzyme Mannanase Bacillus subtilis 32 2.3.4.7 Khảo sát ảnh hưởng thời gian lên men môi trường lỏng đến khả sinh tổng hợp enzyme Mannanase Bacillus subtilis 33 2.3.4.8 Khảo sát ảnh hưởng thời gian lên men độ ẩm môi trường rắn đến khả sinh tổng hợp enzyme Mannanase Bacillus subtilis 34 v 2.3.4.9 Tiến hành lên men thử nghiệm sản xuất chế phẩm enzyme quy mô phòng thí nghiệm 35 2.3.4.10 Kiểm tra an toàn sinh học chế phẩm 36 2.3.4.11 Khảo sát ảnh hưởng thời gian bảo quan nhiệt độ bảo quản đến độ bền chế phẩm enzyme Mannanase 39 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 40 3.1 Kết nhuộm gram 41 3.2 Kết hoạt hoá tăng sinh vi khuẩn Bacillus subtilis 41 3.3 Kết khảo sát ảnh hưởng môi trường lên men đến khả sinh tổng hợp enzyme Mannanase Bacillus subtilis 43 3.4 Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian lên men môi trường lỏng đến khả sinh tổng hợp enzyme Mannanase Bacillus subtilis 46 3.5 Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian lên men độ ẩm môi trường rắn đến khả sinh tổng hợp enzyme Mannanase từ Bacillus subtilis 48 3.6 Tiến hành lên men thử nghiệm sản xuất chế phẩm enzyme quy mô phòng thí nghiệm 51 3.7 Kết kiểm tra an toàn sinh học chế phẩm 54 3.8 Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian bảo quản nhiệt độ bảo quản đến độ bền chế phẩm enzyme Mannanase 54 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 58 4.1 Kết luận 59 4.2 Đề nghị 59 TÀI LIỆU THAM KHẢO 60 PHỤ LỤC 62 vi DANH SÁCH CÁC SƠ ĐỒ Sơ đồ 1.1 Các chất thuộc nhóm NSP Sơ đồ 1.2 β-mannase phá vỡ vách tế bào giúp enzyme nội sinh tiếp cận tiêu hóa chất dinh dưỡng 10 Sơ đồ 1.3 Beta-mannanase Hemicell chia nhỏ polymer Beta-mannan thành phân đoạn MOS ( Mannose Oligossacharide) 12 Sơ đồ 2.1 : Quy trình sản xuất chế phẩm enzyme quy mô phòng thí nghiệm 35 Sơ đồ 2.2 Quy trình định lượng Coliforms, coliform phân E.coli phương pháp đếm khuẩn lạc 37 Sơ đồ 2.3 Quy trình phát Salmonella thực phẩm 39 DANH SÁCH CÁC HÌNH Hình 1.1 Vi khuẩn Bacillus Subtilis Hình 1.2 Cơ chế tác dụng Mannanase 11 Hình 1.3 Cấu trúc không gian (A) tâm hoạt động (B) Mannanase 26A Pseudomonase cellulose 13 Hình 1.4 Nuôi cấy bề mặt môi trường lỏng khay 16 Hình 1.5 Nuôi cấy vi sinh vật môi trường đặc 17 Hình 3.1 Kết nhuộm gram Bacillus subtilis 41 Hình 3.2.1 Khuẩn lạc Bacillus subtillis môi trường NA 41 Hình 3.2.2 Kết trình tăng sinh Bacillus subtillis 42 Hình 3.3 Môi trường lên men rắn lỏng 43 Hình 3.4 Môi trường lỏng sau lên men 48 vii Hình 3.5 Môi trường tối ưu R1 với độ ẩm khác 48 Hình 3.6.1 Môi trường rắn sau sấy 52 Hình 3.6.2 Môi trường lỏng sau lên men 53 Hình 3.6.3 Đóng gói chế phẩm 53 DANH SÁCH CÁC BẢNG Bảng 1.1 Một số chế phẩm enzyme sản xuất từ Bacillus Bảng 1.2 Một số loại kháng sinh sản xuất từ Bacillus Bảng 3.3.1 Kết khảo sát ảnh hưởng môi trường lên men rắn đến khả sinh tổng hợp enzyme Mannanase chủng Bacillus subtilis 43 Bảng 3.3.2 Kết khảo sát ảnh hưởng môi trường lên men lỏng đến khả sinh tổng hợp enzyme Mannanase chủng Bacillus subtilis 45 Bảng 3.4 Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian lên men đến khả sinh tổng hợp enzyme Mannanase môi trường L1 chủng Bacillus subtilis 46 Bảng 3.5 Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian lên men độ ẩm môi trường rắn đến khả sinh tổng hợp enzyme Mannanase từ Bacillus subtilis 49 Bảng 3.7 Kết kiểm tra an toàn sinh học chế phẩm 54 Bảng 3.8 Kết khảo sát nhiệt độ bảo quản thời gian bảo quản ảnh hưởng đến độ bền enzyme Mannanase 55 viii DANH SÁCH CÁC ĐỒ THỊ Đồ thị 3.3.1 Kết khảo sát ảnh hưởng môi trường lên men rắn đến khả sinh enzyme Mannanase từ Bacillus subtilis 44 Đồ thị 3.3.2 Kết khảo sát ảnh hưởng môi trường lên men lỏng đến khả sinh enzyme Mannanase từ Bacillus subtilis 45 Đồ thị 3.4 Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian lên men đến khả sinh enzyme Mannanase môi trường L1 từ Bacillus subtilis 47 Đồ thị 3.5 Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian lên men độ ẩm môi trường rắn đến khả sinh enzyme Mannanase từ Bacillus subtilis 50 Đồ thị 3.8.1 Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian nhiệt độ bảo quản chế phẩm rắn 56 Đồ thị 3.8.2 Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian nhiệt độ bảo quản chế phẩm lỏng 56 ix GIỚI THIỆU LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GIỚI THIỆU  Đặt vấn đề Theo dự ước quan chuyên môn, tháng đầu năm 2009, sản lượng thức ăn chăn nuôi đạt 4.55 triệu so với kỳ năm trước tăng 12% (4.2 triệu tấn) Giá thức ăn chăn nuôi tăng 5-8% so với cuối năm 2008 quý I/ 2009, tuỳ loại thức ăn vùng Để giảm giá thức ăn hỗn hợp, người ta thường trộn nguyên liệu rẻ tiền khô cọ, khô dừa, vỏ đậu nành Các nguyên liệu lại giàu -Mannan số chất thuộc nhóm polysaccharide tinh bột gây cản trở tiêu hoá thức ăn, ngăn trở chất dinh dưỡng hấp thụ qua niêm mạc ruột Vấn đề đặt để loại bỏ yếu tố kháng dinh dưỡng này? Chế phẩm -Mannanase enzyme phân giải -Mannan Khi đưa vào hỗn hợp thức ăn chứa nguyên liệu giàu -Mannan, enzyme có tác dụng phân cắt -Mannan, làm giảm độ nhớt dịch ruột, tạo điều kiện cho niêm mạc ruột hấp thu chất dinh dưỡng dễ dàng Bên cạnh đó, -Mannan bị phân cắt thành đoạn ngắn mannose oligosaccharide, chúng giữ vai trò prebiotic, có tác dụng loại bỏ vi khuẩn bệnh bám dính thượng bì ruột, kích thích hệ miễn dịch ruột hoạt động, từ giúp tăng cường sức khoẻ ruột, hạn chế rối loạn tiêu hoá Từ nhận định trên, thực đề tài “KHẢO SÁT KHẢ NĂNG SINH ENZYME MANNANASE CỦA VI KHUẨN Bacillus subtilis” Đề tài luận văn phần đề tài nghiên cứu chế phẩm đa enzyme Phòng Nghiên Cứu Dinh Dưỡng Chăn Nuôi thuộc Viện Khoa học Kỹ Thuật Nông Nghiệp Miền Nam  Mục tiêu phạm vi đề tài - Khảo sát môi trường, độ ẩm thời gian thích hợp cho sinh tổng hợp enzyme Mannanase Bacillus subtilis GIỚI THIỆU LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP - Xác định môi trường, độ ẩm, thời gian tối ưu cho sinh tổng hợp enzyme Mannanase vi khuẩn Bacillus subtilis - Đưa vào lên men thử nghiệm sản xuất chế phẩm enzyme Mannanase quy mô phòng thí nghiệm  Ý nghĩa đề tài - Xác định môi trường, độ ẩm, thời gian tối ưu cho sinh tổng hợp enzyme Mannanase chủng Bacillus subtilis - Sản xuất chế phẩm enzyme Mannanase quy mô phòng thí nghiệm - Nghiên cứu phục vụ cho ngành chăn nuôi, chế phẩm enzyme giúp tăng tỷ lệ hấp thụ thức ăn, giảm giá thành thức ăn chăn nuôi TÀI LIỆU THAM KHẢO LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP 10 Trần Linh Thước, Phương pháp phân tích vi sinh vật nước, thực phẩm mỹ phẩm, NXB Giáo Dục 11 Lê Ngọc Tú (Chủ biên) La Văn Chứ, Đặng Thị Thu, Nguyễn Thị Thịnh, Bùi Đức Hợi, Lê Doãn Diên, Hoá sinh công nghiệp, NXB khoa học kỹ thuật,2001 12 Dương Thị Hải Yến, “Phân lập chủng Bacillus subtilis có khả phân huỷ hợp chất hữu nước bùn ao nuôi tôm”, Thực tập tốt nghiệp, Đại Học Khoa Học Tự Nhiên, Tp Hồ Chí Minh, 07-2003 13 Tập san Khoa học kỹ thuật thức ăn chăn nuôi, năm thứ VII-số 4/2006 * Tài liệu tiếng nước : 14 Ashlee M Earl, Richard Losisk and Roberto Koiter Ecology and genomics of Bacillus subtilis 15 Dr.humg-Yu Hsiao and Dr Frank L.Jin chemgen Corp - Mannanase more than just a digestive enzme for corn/soy diets * Tài liệu internet : 16 http://www.anova.com.vn/contents/article.asp?id=303&detail=16&ucat=43 17 http://en.wikipedia.org/wiki/Bacillus_subtilis 18 http://www.khuyennongvn.gov.vn/f-tttr/gia-thuc-an-gia-suc-nhap-khau-tang/view 19 http://www.vietrade.gov.vn/index.php?option=com_content&view=article&id=644:ho at-dong-thuong-mai-6-thang-dau-nam-2009&catid=20:su-kien-xuc-tien-thuongmai&Itemid=64 20 http://tintuc.xalo.vn/th%E1%BB%A9c_%C4%83n_ch%C4%83n_nu%C3%B4i_gia_s %C3%BAc SVTH : BÙI THỊ THU HIỀN 61 PHỤ LỤC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP PHỤ LỤC ĐƯỜNG CHUẨN MANNOSE y = 0.0004x + 0.0027 0.25 R2 = 0.9982 0.2 0.15 0.1 0.05 0 100 200 300 400 500 600 Tủ cấy SVTH : BÙI THỊ THU HIỀN 62 PHỤ LỤC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP Tủ sấy Nồi hấp khử trùng SVTH : BÙI THỊ THU HIỀN 63 PHỤ LỤC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP Máy lắc Máy đo độ ẩm SVTH : BÙI THỊ THU HIỀN 64 PHỤ LỤC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP XỬ LÝ SỐ LIỆU Khảo sát Môi trường rắn tối ưu : One-way ANOVA: UI versus MT Analysis of Variance for UI Source DF SS MS MT 432.52 216.26 Error 46.29 7.72 Total 478.81 Level N 3 Mean 80.046 67.546 63.843 Pooled StDev = StDev 4.243 2.122 0.802 2.778 F 28.03 P 0.001 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+( * -) ( * -) ( * -) -+ -+ -+ -+63.0 70.0 77.0 84.0 Tukey's pairwise comparisons Family error rate = 0.0500 Individual error rate = 0.0220 Critical value = 4.34 Intervals for (column level mean) - (row level mean) 2 5.540 19.460 9.243 23.163 -3.257 10.663 General Linear Model: UI versus MT Factor MT Type Levels Values fixed 3 Analysis of Variance for UI, using Adjusted SS for Tests Source MT Error Total DF Seq SS 451.38 46.29 497.68 Adj SS 451.38 46.29 Adj MS 225.69 7.72 F 29.25 P 0.001 Unusual Observations for UI Obs UI 75.4170 Fit 80.0463 SE Fit 1.6037 Residual -4.6293 St Resid -2.04R R denotes an observation with a large standardized residual SVTH : BÙI THỊ THU HIỀN 65 PHỤ LỤC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP Analysis of Means Summary Table Contents: number of nonmissing data cell mean cell standard deviation Rows: MT All UI N UI Mean UI StDev 3 80.046 67.546 63.380 70.324 4.243 2.122 0.802 7.887 One-way ANOVA: 1, Analysis of Variance Source DF SS Factor 234.4 Error 45.0 Total 279.4 MS 234.4 11.3 Level Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev StDev + -+ -+ -+ -4.243 ( * -) 2.122 ( * -) + -+ -+ -+ -63.0 70.0 77.0 84.0 N 3 Mean 80.046 67.546 Pooled StDev = 3.354 F 20.83 P 0.010 One-way ANOVA: 1, Analysis of Variance Source DF SS Factor 393.82 Error 37.29 Total 431.11 Level N 3 Mean 80.046 63.843 Pooled StDev = MS 393.82 9.32 StDev 4.243 0.802 3.053 F 42.24 P 0.003 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ ( -* -) ( -* -) -+ -+ -+ 64.0 72.0 80.0 One-way ANOVA: 2, Analysis of Variance Source DF SS Factor 20.57 Error 10.29 Total 30.86 MS 20.57 2.57 F 8.00 P 0.047 Individual 95% CIs For Mean SVTH : BÙI THỊ THU HIỀN 66 PHỤ LỤC Level LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP N 3 Mean 67.546 63.843 Pooled StDev = StDev 2.122 0.802 1.604 Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+( -* -) ( -* ) -+ -+ -+ -+62.5 65.0 67.5 70.0 Khảo sát môi trường lỏng tối ưu : One-way ANOVA: UI versus MT Analysis of Variance for UI Source DF SS MS MT 423.5 211.8 Error 102.9 17.1 Total 526.4 Level N 3 Mean 99.49 89.31 82.82 Pooled StDev = StDev 5.61 2.78 3.50 4.14 F 12.35 P 0.007 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+-( * -) ( -* ) ( -* ) + -+ -+ -+-80.0 88.0 96.0 104.0 Tukey's pairwise comparisons Family error rate = 0.0500 Individual error rate = 0.0220 Critical value = 4.34 Intervals for (column level mean) - (row level mean) 2 -0.191 20.561 6.291 27.042 -3.894 16.857 General Linear Model: UI versus MT Factor Type Levels Values MT fixed 3 Analysis of Variance for UI, using Adjusted SS for Tests Source MT Error Total DF Seq SS 423.52 102.88 526.41 SVTH : BÙI THỊ THU HIỀN Adj SS 423.52 102.88 Adj MS 211.76 17.15 F 12.35 P 0.007 67 PHỤ LỤC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP Analysis of Means Summary Table Contents: number of nonmissing data cell mean cell standard deviation Rows: MT All UI N UI Mean UI StDev 3 99.491 89.306 82.824 90.540 5.613 2.778 3.496 8.112 One-way ANOVA: 1, Analysis of Variance Source DF SS Factor 155.6 Error 78.4 Total 234.0 Level N 3 Pooled StDev = Mean 99.49 89.31 MS 155.6 19.6 StDev 5.61 2.78 4.43 F 7.93 P 0.048 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ ( -* -) ( * -) -+ -+ -+ -+ 84.0 91.0 98.0 105.0 One-way ANOVA: 1, Analysis of Variance Source DF SS Factor 416.7 Error 87.5 Total 504.1 Level N 3 Pooled StDev = Mean 99.49 82.82 MS 416.7 21.9 StDev 5.61 3.50 4.68 F 19.06 P 0.012 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+( * -) ( -* ) -+ -+ -+ -+80 90 100 110 One-way ANOVA: 2, Analysis of Variance Source DF SS Factor 63.02 Error 39.87 Total 102.89 SVTH : BÙI THỊ THU HIỀN MS 63.02 9.97 F 6.32 P 0.066 68 PHỤ LỤC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev -+ -+ -+ -+2 89.306 2.778 ( * -) 3 82.824 3.496 ( -* -) -+ -+ -+ -+Pooled StDev = 3.157 80.0 85.0 90.0 95.0 Khảo sát thời gian tối ưu cho MT lỏng One-way ANOVA: UI versus TG Analysis of Variance for UI Source DF SS MS TG 4964.8 1241.2 Error 10 109.3 10.9 Total 14 5074.1 Level N 3 3 Mean 49.03 80.51 99.49 77.27 55.51 Pooled StDev = StDev 3.67 2.89 5.61 0.80 0.80 3.31 F 113.55 P 0.000 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ ( *-) (-* ) (-* ) (-* ) ( *-) -+ -+ -+ -+ 48 64 80 96 Tukey's pairwise comparisons Family error rate = 0.0500 Individual error rate = 0.00818 Critical value = 4.65 Intervals for (column level mean) - (row level mean) -40.358 -22.605 -59.339 -41.587 -27.858 -10.105 -37.117 -19.365 -5.635 12.117 13.346 31.098 -15.358 2.395 16.124 33.876 35.105 52.858 SVTH : BÙI THỊ THU HIỀN 12.883 30.635 69 PHỤ LỤC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP General Linear Model: UI versus TG Factor TG Type Levels Values fixed 5 Analysis of Variance for UI, using Adjusted SS for Tests Source TG Error Total DF 11 15 Seq SS 2095.7 3889.9 5985.6 Adj SS 2095.7 3889.9 Adj MS 523.9 353.6 F 1.48 P 0.273 Unusual Observations for UI Obs UI 104.583 Fit 69.028 SE Fit 8.410 Residual 35.555 St Resid 2.11R R denotes an observation with a large standardized residual Analysis of Means Summary Table Contents: number of nonmissing data cell mean cell standard deviation Rows: TG All UI N UI Mean UI StDev 3 16 69.028 80.509 99.028 84.676 62.916 76.719 27.788 2.891 7.857 13.632 13.249 19.976 One-way ANOVA: 1, Analysis of Variance Source DF SS Factor 63.01 Error 28.29 Total 91.31 MS 63.01 7.07 Level Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev StDev -+ -+ -+ -+ 3.675 ( -* ) 0.802 ( * ) -+ -+ -+ -+ 45.0 50.0 55.0 60.0 N 3 Pooled StDev = Mean 49.028 55.509 2.660 SVTH : BÙI THỊ THU HIỀN F 8.91 P 0.041 70 PHỤ LỤC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP One-way ANOVA: 2, Analysis of Variance Source DF SS Factor 15.75 Error 18.00 Total 33.76 Level N 3 Pooled StDev = Mean 80.509 77.269 MS 15.75 4.50 StDev 2.891 0.802 2.122 F 3.50 P 0.135 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+-( * -) ( -* ) + -+ -+ -+-75.0 78.0 81.0 84.0 Khảo sát thời gian độ ẩm MT rắn : Two-way ANOVA: UI versus TG, DA Analysis of Variance for UI Source DF SS TG 12800.70 DA 4263.15 Interaction 12 800.86 Error 40 363.93 Total 59 18228.64 TG Mean 35.14 54.24 66.16 35.14 26.23 DA Mean 34.40 43.01 39.12 56.99 MS 3200.17 1421.05 66.74 9.10 F 351.73 156.19 7.34 P 0.000 0.000 0.000 Individual 95% CI + -+ -+ -+(*-) (*-) (*-) (*-) (-*) + -+ -+ -+36.00 48.00 60.00 72.00 Individual 95% CI + -+ -+ -+ (-*-) (-* ) (-*-) (-* ) + -+ -+ -+ 35.00 42.00 49.00 56.00 SVTH : BÙI THỊ THU HIỀN 71 PHỤ LỤC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP General Linear Model: UI versus TG, DA Factor TG DA Type Levels Values fixed 5 fixed 4 Analysis of Variance for UI, using Adjusted SS for Tests Source TG DA Error Total DF 52 59 Seq SS 12800.7 4263.1 1164.8 18228.6 Adj SS 12800.7 4263.1 1164.8 Adj MS 3200.2 1421.0 22.4 F 142.87 63.44 P 0.000 0.000 Unusual Observations for UI Obs 33 40 UI 72.6390 47.6390 Fit 61.8982 34.7687 SE Fit 1.7282 1.7282 Residual 10.7408 12.8703 St Resid 2.44R 2.92R R denotes an observation with a large standardized residual Tukey 95.0% Simultaneous Confidence Intervals Response Variable UI All Pairwise Comparisons among Levels of TG TG = subtracted from: TG Lower 13.63 25.55 -5.46 -14.38 Center 19.097 31.018 0.000 -8.912 Upper 24.562 36.484 5.465 -3.447 -+ -+ -+ ( *-) (-* ) (-*-) (-* ) -+ -+ -+ -25 25 Upper 17.39 -13.63 -22.54 -+ -+ -+ (-*-) (-* ) (-*-) -+ -+ -+ -25 25 Upper -25.55 -34.47 -+ -+ -+ ( *-) (-*-) -+ -+ -+ -25 25 TG = subtracted from: TG Lower 6.46 -24.56 -33.47 Center 11.92 -19.10 -28.01 TG = subtracted from: TG Lower -36.48 -45.40 Center -31.02 -39.93 TG = subtracted from: SVTH : BÙI THỊ THU HIỀN 72 PHỤ LỤC TG Lower -14.38 LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP Center -8.912 Upper -3.447 -+ -+ -+ (-* ) -+ -+ -+ -25 25 Tukey Simultaneous Tests Response Variable UI All Pairwise Comparisons among Levels of TG TG = subtracted from: Level TG Difference of Means 19.097 31.018 0.000 -8.912 SE of Difference 1.932 1.932 1.932 1.932 T-Value 9.884 16.054 0.000 -4.612 Adjusted P-Value 0.0000 0.0000 1.0000 0.0003 T-Value 6.17 -9.88 -14.50 Adjusted P-Value 0.0000 0.0000 0.0000 T-Value -16.05 -20.67 Adjusted P-Value 0.0000 0.0000 T-Value -4.612 Adjusted P-Value 0.0003 TG = subtracted from: Level TG Difference of Means 11.92 -19.10 -28.01 SE of Difference 1.932 1.932 1.932 TG = subtracted from: Level TG Difference of Means -31.02 -39.93 SE of Difference 1.932 1.932 TG = subtracted from: Level TG Difference of Means -8.912 SE of Difference 1.932 Tukey 95.0% Simultaneous Confidence Intervals Response Variable UI All Pairwise Comparisons among Levels of DA DA = subtracted from: DA Lower 4.0288 0.1398 18.0102 Center 8.611 4.722 22.593 Upper 13.194 9.305 27.175 -+ -+ -+ ( * -) ( * -) ( * -) -+ -+ -+ 10 20 Upper -+ -+ -+ - DA = subtracted from: DA Lower Center SVTH : BÙI THỊ THU HIỀN 73 PHỤ LỤC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP -8.471 9.399 -3.889 13.981 0.6936 18.5640 ( -* ) ( * ) -+ -+ -+ 10 20 DA = subtracted from: DA Lower 13.29 Center 17.87 Upper 22.45 -+ -+ -+ ( * -) -+ -+ -+ 10 20 Tukey Simultaneous Tests Response Variable UI All Pairwise Comparisons among Levels of DA DA = subtracted from: Level DA Difference of Means 8.611 4.722 22.593 SE of Difference 1.728 1.728 1.728 T-Value 4.983 2.733 13.073 Adjusted P-Value 0.0001 0.0413 0.0000 T-Value -2.250 8.090 Adjusted P-Value 0.1234 0.0000 T-Value 10.34 Adjusted P-Value 0.0000 DA = subtracted from: Level DA Difference of Means -3.889 13.981 SE of Difference 1.728 1.728 DA = subtracted from: Level DA Difference of Means 17.87 SE of Difference 1.728 Interaction Plot for UI Interaction Plot - Data Means for UI DA 80 70 60 Mean 50 40 30 20 10 TG SVTH : BÙI THỊ THU HIỀN 74 PHỤ LỤC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP Analysis of Means Summary Table Contents: number of nonmissing data cell mean cell standard deviation Rows: TG Columns: DA All 26.343 2.121 35.139 2.778 27.268 4.243 51.806 2.778 12 35.139 10.984 43.935 2.891 49.028 2.406 53.195 5.008 70.787 2.122 12 54.236 10.922 3 55.509 2.891 61.065 2.122 68.009 4.243 80.046 4.243 12 66.157 10.021 27.732 2.891 43.472 4.167 24.954 0.802 44.398 0.802 12 35.139 9.512 18.472 2.778 26.343 3.495 22.176 1.604 37.917 1.389 12 26.227 7.912 All 15 34.398 14.075 15 43.009 12.540 15 39.120 19.108 15 56.991 16.646 60 43.380 17.577 Cell Contents -UI:N Mean StDev SVTH : BÙI THỊ THU HIỀN 75 [...]... Làm khô và quan sát dưới vật kính nhúng dầu 2.3.4.2 Tiến hành hoạt hoá và tăng sinh vi khuẩn Bacillus subtilis + Hoạt hoá vi khuẩn Bacillus subtilis - Môi trường thạch NA được hấp ở 121oC trong 15 phút - Giống Bacillus subtilis được cung cấp bởi Vi n Công Nghệ Sinh Học - Lấy 1 ít sinh khối từ ống giống cấy ria lên thạch đĩa NA Sau đó ủ ở 37oC trong 24 giờ + Tăng sinh vi khuẩn Bacillus subtilis - Môi... - Hiện nay, nguồn thu Mannanase dồi dào và đang được quan tâm nghiên cứu là từ các vi sinh vật Nhiều công trình nghiên cứu cho kết luận rằng cả vi khuẩn, nấm men, nấm mốc đều có khả năng sinh tổng hợp Mannanase - Các chủng vi khuẩn có khả năng tổng hợp Mannanase là : Aeromonas, Bacillus, Cellulomannan, Enterococcus, Casseliflavus, Pseudomonas, Streptomyces EndoMannanase của vi khuẩn thường được tiết... của chủng Bacillus subtilis Hầu hết là vi khuẩn hoại sinh Mỗi loại vi khuẩn chỉ tạo ra một bào tử nhằm chống lại nhiệt độ nóng, lạnh, tia phóng xạ, môi trường khô và chất tẩy uế Bacillus còn có khả năng sinh lý cho phép chúng sống trong những điều kiện pH, nhiệt độ và nồng độ muối mà một vài tổ chức sống khác không thể tồn tại 1.1.5 Lợi ích của Bacillus subtilis 1.1.5.1 Tạo kháng sinh Từ Bacillus subtilis. .. loại vi sinh vật này có khả năng oxy hóa hydrocarbon rất cao Trong dầu mỏ, parafin chiếm 20%, đây là nguyên liệu vạn năng để nuôi cấy vi sinh vật, và nguồn nguyên liệu này rất phong phú và lại rẻ tiền - Sản xuất các chế phẩm enzyme từ vi sinh vật 4 CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP Bảng 1.1 Một số chế phẩm enzyme sản xuất từ Bacillus Vi sinh vật Bacillus amylolique facieus Loại enzyme. .. dưỡng, sinh sản và phát triển của vi sinh vật 18 CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP + Tác dụng của hệ thống khuấy trộn Làm xáo trộn môi trường, tế bào vi sinh vật sẽ phân phối đều khắp môi trường, tăng khả năng tiếp xúc giữa cơ chất và tế bào vi sinh vật Tăng khả năng hoà tan oxy Tăng nhanh quá trình sinh sản vô tính do tác động cơ học 1.2.4.3 Phương pháp thu nhận các chế phẩm enzyme sạch... là sự tiết enzyme vào môi trường trong suốt quá trình phát triển Đa số các enzyme thuỷ phân của nấm mốc, vi khuẩn và xạ khuẩn là những enzyme ngoại bào và được tiết ra môi trường bên ngoài Do đó các chế phẩm enzyme có thể thu được từ nước lọc sau khi tách bỏ sinh khối + Tác dụng của hệ thống thổi khí Làm xáo trộn môi trường, tế bào vi sinh vật sẽ phân phối đều khắp môi trường, tăng khả năng tiếp xúc... dụng của Mannanase được minh hoạ trên hình 1.1 Hình 1.2 Cơ chế tác dụng của Mannanase 11 CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP Nguồn: Hemicell, Behn Meyer Sơ đồ 1.3 Beta-manannase của Hemicell chia nhỏ polymer beta-mannan thành những phân đoạn MOS ( Mannose Oligossacharide) 1.2.1 Cấu tạo của enzyme Mannanase Mannanase của vi khuẩn ưu nhiệt Thermotoga neapolitana 5068 là enzyme một cấu tử Mannanase. .. phần môi trường nuôi cấy, nhiệt độ, pH và chủng vi sinh vật mà hoạt độ Mannanase thu được là khác nhau Nhìn chung, vận tốc sinh tổng hợp Mannanase từ vi khuẩn cao hơn từ nấm mốc Song đa phần các công trình nghiên cứu đều cho kết quả là hoạt độ của Mannanase thu được từ nấm mốc cao hơn rất nhiều so với hoạt độ của Mannanase thu được từ vi khuẩn. Với nồng độ Mannanase cao trong canh trường nấm mốc sẽ tạo... izolenin, tryptophan, lizin - Sinh ra kháng sinh 5 CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP Bảng 1.2 Một số loại kháng sinh sản xuất từ Bacillus Vi sinh vật - Loại enzyme Bacillus subtilis Bacilizin, micobaxilin, subtilin Bacillus pumilis Bacilizin, micobaxilin, subtilin Bacillus licheniformis Bacilizin, protixin Bacillus megatenium Bacilizin Làm chế phẩm diệt côn trùng Ví dụ : Bacillus thuringiensis... Không khí Sinh khối vi sinh vật Hạt môi trường Môi trường đặc vi sinh vật phát triển bề mặt hạt môi trường Hạt môi trường Hình 1.5 Nuôi cấy vi sinh vật trên môi trường đặc Ưu điểm của phương pháp nuôi cấy bề mặt là dễ thực hiện và khi bị nhiễm vi sinh vật lạ ta rất dễ dàng xử lý (c) Các yếu tố ảnh hưởng đến vi c tạo ra enzyme ... lỏng đến khả sinh tổng hợp enzyme Mannanase Bacillus subtilis 33 2.3.4.8 Khảo sát ảnh hưởng thời gian lên men độ ẩm môi trường rắn đến khả sinh tổng hợp enzyme Mannanase Bacillus subtilis. .. men đến khả sinh tổng hợp enzyme Mannanase Bacillus subtilis 43 3.4 Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian lên men môi trường lỏng đến khả sinh tổng hợp enzyme Mannanase Bacillus subtilis. .. men lỏng đến khả sinh enzyme Mannanase từ Bacillus subtilis 45 Đồ thị 3.4 Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian lên men đến khả sinh enzyme Mannanase môi trường L1 từ Bacillus subtilis