GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH NGUYỄN THỊ MAI HƯƠNG NGHIÊN CỨU, XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI HÀM LƯỢNG VITAMIN A, D2, D3 TRONG MỘT SÔ THỰC PHẨM BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC NGHỆ AN - 2015 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH NGUYỄN THỊ MAI HƯƠNG NGHIÊN CỨU, XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI HÀM LƯỢNG VITAMIN A, D2, D3 TRONG MỘT SÔ THỰC PHẨM BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) Chuyên ngành: Hóa hữu Mã số: 60.44.01.14 LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS MAI THỊ THANH HUYỀN NGHỆ AN - 2015 LỜI CẢM ƠN Luận văn thực phòng thí nghiệm chuyên đề - Khoa Hóa, Trung tâm Kiểm định An toàn Thực Phẩm Môi trường, Trường Đại học Vinh Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc đến: • TS Mai Thị Thanh Huyền - Bộ môn Hóa Phân tích, Trường Đại học Vinh giao đề tài, tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện suốt trình thực luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn: • PGS.TS Nguyễn Khắc Nghĩa, PGS.TS Trần Đình Thắng, TS Đinh Thị Trường Giang - Khoa Hóa, Trường Đại học Vinh tạo điều kiện thuận lợi, động viên trình làm luận văn • ThS Chu Thị Thanh Lâm - Phòng thí nghiệm Khoa Hóa, Trường Đại học Vinh tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ trình làm thí nghiệm Nhân dịp này, xin gửi lời cảm ơn đến Thầy, Cô, Cán bộ môn Hóa Hữu cơ, Hóa Phân tích - Khoa Hóa, Phòng Đào tạo Sau Đại học, bạn đồng nghiệp, học viên cao học, sinh viên, gia đình người thân động viên giúp đỡ hoàn thành luận văn Nghệ An, tháng 10 năm 2015 Tác giả Nguyễn Thị Mai Hương MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC HÌNH DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT MỞ ĐẦU 11 Lý chọn đề tài 11 Mục đích nghiên cứu 12 Nhiệm vụ nghiên cứu 12 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 12 CHƯƠNG TỔNG QUAN 13 1.1 Vitamin D 13 1.1.1 Giới thiệu, cấu tạo, phân loại tên gọi 13 1.1.2 Nguồn cung cấp vitamin D cho thể 17 1.2 Vitamin A 20 1.2.1 Giới thiệu 20 1.2.2 Vai trò vitamin A 22 1.2.3 Nguồn cung cấp vitamin A cho thể 24 1.3 Các phương pháp xác định vitamin A D 24 1.3.1 Phương pháp thử nghiệm sinh học 24 1.3.2 Phương pháp quang phổ 25 1.3.3 Các phương pháp xét nghiệm miễn dịch 26 1.3.4 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 28 CHƯƠNG PHƯƠNG PHÁP THỰC NGHIỆM 37 2.1 Hóa chất, thiết bị dụng cụ 37 2.1.1 Hóa chất 37 2.1.2 Thiết bị dụng cụ 37 2.2 Thu thập bảo quản mẫu 38 2.3 Xử lý mẫu 38 2.4 Chuẩn bị dung dịch vitamin cho phép đo HPLC 38 2.5 Lựa chọn cài đặt, vận hành thiết bị HPLC 39 2.6 Chuẩn bị máy trước tiến hành phân tích 40 2.7 Khảo sát phổ hấp thụ tia UV vitamin A, D2, D3 dung dịch 40 2.8 Nghiên cứu ảnh hưởng thành phần pha động 40 2.9 Phương pháp khảo sát đánh giá 40 2.9.1 Khoảng tuyến tính đường chuẩn định lượng phương pháp 40 2.9.2 Giới hạn phát (LOD) 42 2.9.3 Giới hạn định lượng (LOQ) 42 2.9.4 Xác định độ lặp lại (repeatability) 43 2.9.5 Xác định độ thu hồi 44 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 45 3.1 Các thông số khảo sát 45 3.3 Khảo sát điều kiện phân tích HPLC 45 3.3.1 Khảo sát phổ hấp thụ tia UV vitamin D2, D3, A dung dịch 45 3.3.2 Lựa chọn cột phân tích cho máy HPLC 46 3.3.3 Khảo sát ảnh hưởng thành phần pha động 47 3.3.4 Khảo sát ảnh hưởng tốc độ dòng 51 3.3.5 Kết khảo sát phương pháp đo lập phương pháp chạy chuẩn vitamin A, D2, D3 52 3.4 Xây dựng đường chuẩn vitamin 52 3.5 Khảo sát độ lặp lại máy 56 3.6 Xác định giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng phương pháp 56 3.7 Xác định hiệu suất thu hồi 58 3.8 Kết phân tích số mẫu thực phẩm 60 KẾT LUẬN 64 TÀI LIỆU THAM KHẢO 65 PHỤ LỤC 68 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT 25(OH)D : 25-hydroxyl vitamin D 25(OH)D2 : 25-hydroxyl vitamin D2 25(OH)D3 : 25-hydroxyl vitamin D3 BHT : butylate hydroxytoluen BSTFA : N,O-bis(trimethylsilyl)trifluoroacetamide DM : Chất khô(dry matter) EtOH : Etanol FTIR : Phép phân tích Fourier hồng ngoại (Fourier transform infrared) HPLC : Sắc ký lỏng hiệu cao IT : Bẫy ion ( Ion trap) IS : Chất nội chuẩn(internal standard) LC : Sắc kí lỏng (Liquid chromatography) MeOH : Metanol MS : Phổ khối (Mass spectrometry) MTBE : Methyl-tert-butyl ether SPE : chiết pha rắn (Solid Phase Extraction) UPLC : Sắc ký lỏng hiệu cao UV : Tia tử ngoại DAD : Đầu dò mảng diot RMSE : Độ lệch khởi động (root mean square error) THF : Tetra hydro furan ACN : Aceton nitril LOD : Giới hạn phát (Limit of detection) LOQ : Giới hạn định lượng (Limit of quantitation) DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 1.1 Khái quát cấu trúc chuyển hóa dạng vitamin D 14 Bảng 1.1 Nhu cầu vitamin D mỗi ngày lứa tuổi [12] 20 Hình 2.1 Quy trình xử lý mẫu 39 Hình 3.1 Phổ hấp thụ UV-VIS vitamin D2 46 Hình 3.2 Sắc ký đồ vitamin A, D2, D3 tốc độ dòng 0,3 ml/phút cột C8 46 Hình 3.3 Sắc ký đồ vitamin A, D2, D3 tốc độ dòng 0,5ml/phút cột C18 47 Bảng 3.1 Thời gian lưu - diện tích peak vitamin thay đổi tỷ lệ MeOH:THF 47 Hình 3.4 Sắc ký đồ vitamin thay đổi tỷ lệ MeOH:THF 48 Hình 3.5 Sắc ký đồ vitamin thay đổi tỷ lệ MeOH:MTBE 49 Bảng 3.2 Thời gian lưu - diện tích peak vitamin thay đổi tỷ lệ MeOH:MTBE 49 Hình 3.6 Sắc ký đồ vitamin thay đổi tỷ lệ MeOH:ACN 50 Bảng 3.3 Thời gian lưu - diện tích peak vitamin thay đổi tỷ lệ MeOH:ACN 50 Hình 3.7 Sắc ký đồ vitamin tốc độ dòng khác 51 Bảng 3.4 Sắc ký đồ vitamin D2 dòng ml/phút (a) 0,5 ml/phút (b) 52 Bảng 3.5 Tương quan diện tích peak nồng độ chuẩn vitA 53 Bảng 3.6 Tương quan diện tích peak nồng độ chuẩn vit D2 53 Bảng 3.7 Tương quan diện tích peak nồng độ chuẩn vit D3 53 Hình 3.8 Peak nồng độ vitamin D2, D3, A đường chuẩn xếp chồng lên 54 Hình 3.9 Đường chuẩn vitamin A 54 Hình 3.10 Đường chuẩn vitamin D2 55 Hình 3.11 Đường chuẩn vitamin D3 55 10 Bảng 3.8 Độ lặp lại máy HPLC 56 Bảng 3.9 LOD, LOQ vitamin A 57 Bảng 3.10 LOD, LOQ vitamin D2 57 Bảng 3.11 LOD, LOQ vitamin D3 58 Bảng 3.12 Kết xác định hiệu xuất thu hồi vitamin 59 Bảng 3.13 Tổng hợp điều kiện phân tích vitamin A, D2, D3 60 Bảng 3.14 Kết phân tích số mẫu thực phẩm 60 Hình 3.12 Sắc đồ mẫu cà rốt 61 Hình 3.13 Sắc đồ mẫu gan bò 61 Hình 3.14 Sắc đồ mẫu gan cá Tra 61 Hình 3.15 Sắc đồ mẫu gan gà 62 Hình 3.16 Sắc đồ mẫu nấm sò 62 Hình 3.17 Sắc đồ mẫu nấm đông cô 62 Hình 3.18 Sắc đồ mẫu nấm đùi gà 63 Hình 3.19 Sắc đồ mẫu nấm Linh chi 63 Hình 3.20 Sắc đồ mẫu gan lợn 63 58 Độ lệch chuẩn: SD Độ lệch chuẩn tương đối: RSD (%) Hệ số a LOD (ppm) LOQ (ppm) 0,3133 1,377 46,02095 0,0224 0,0680 Bảng 3.11 LOD, LOQ vitamin D3 23,1342 22,9958 23,2277 23,0313 22,6936 23,1457 22,8326 22,4109 22,3616 Speak 22,8746 22,9127 Độ lệch chuẩn: SD Độ lệch chuẩn tương đối: RSD (%) Hệ số a LOD (ppm) LOQ (ppm) 0,3016 1,3185 46,97754 0,0212 0,0642 3.7 Xác định hiệu suất thu hồi Hiệu suất thu hồi quy trình phân tích biểu diễn sai lệch giá trị tìm thấy với giá trị thực giá trị đối chiếu chấp nhận Hiệu suất thu hồi xác định cách tiến hành phân tích mẫu gan gà mẫu thêm chuẩn thực thời điều kiện sử dụng phương pháp chiết siêu âm Kết thu mẫu gan có độ thu hồi trung bình vitamin A 90,5%, vitamin D 88,3% vitamin D3 90% So sánh với phương pháp đun hồi lưu mà nhóm nghiên cứu tiến hành [6] (hiệu suất 84.5%) nhận thấy sử dụng hai phương pháp chiết siêu âm phương pháp đun hồi lưu để xử lý mẫu, sử dụng chiết siêu âm giúp tiết kiệm thời gian xử lý mẫu 59 Bảng 3.12 Kết xác định hiệu xuất thu hồi vitamin Khối Vitamin D3 Kết mẫu Hiệu suất thu lượng thêm chuẩn không thêm thêm chuẩn mẫu (g) (ppm) chuẩn (ppm) (ppm) 20 0,4 18,5 90,5 0,4 5,7 88,3 7,8 13,2 90 A D2 Nồng độ chất Kết mẫu 10 hồi(%) Từ kết nghiên cứu trên, điều kiện phù hợp để đo vitamin phương pháp HPLC bảng 3.13 60 Bảng 3.13 Tổng hợp điều kiện phân tích vitamin A, D2, D3 Chất phân tích Các yếu tố Tỉ lệ pha động (%) Cột sắc ký Điều kiện Dedector UV(nm) sắc ký Thể tích tiêm mẫu (μl) Tốc độ dòng (ml/phút) Giới hạn phát LOD (ppm) Giới hạn định lượng LOQ (ppm) Khoảng nồng độ khảo sát (ppm) Vit A Vit D2 Vit D3 Methanol: ACN = 97:3 LiChrospher 100 RP-18 (5μm) Agilent 265 265 325 10 0,5 0,0133 0,0224 0,0212 0,0404 0,0680 0,0642 0.2-200 0,5 - 50 0,5-50 3.8 Kết phân tích số mẫu thực phẩm Tiến hành phân tích số mẫu thực phẩm thị trường thành phố Vinh cho kết phân tích hàm lượng vitamin A, D2, D3 bảng 3.14 Bảng 3.14 Kết phân tích số mẫu thực phẩm Hàm lượng Stt Hàm lượng vitamin A vitamin D2 Mẫu nấm (µg/100g thựcphẩm) (µg/100g thực 12,85 908,5 202,5 250,6 _ 53,5 44 _ _ phẩm) _ _ 199,75 _ 17,65 432 0,24 72,62 58,5 Cà rốt Gan gà Gan lợn Gan bò Nấm đùi gà Gan cá Tra Nấm Sò Nấm Linh Chi Nấm đông cô Hàm lượng vitamin D3 (µg/100g thực phẩm) _ _ 393,9 558 _ 837 _ _ _ - Không phát 61 Hình 3.12 Sắc đồ mẫu cà rốt Hình 3.13 Sắc đồ mẫu gan bò Hình 3.14 Sắc đồ mẫu gan cá Tra 62 Hình 3.15 Sắc đồ mẫu gan gà Hình 3.16 Sắc đồ mẫu nấm sò Hình 3.17 Sắc đồ mẫu nấm đông cô 63 Hình 3.18 Sắc đồ mẫu nấm đùi gà Hình 3.19 Sắc đồ mẫu nấm Linh chi Hình 3.20 Sắc đồ mẫu gan lợn 64 KẾT LUẬN Trong luận văn hoàn thành nhiệm vụ sau đây: Đã tiến hành tổng quan vitamin A, vitamin D, phương pháp HPLC, phương pháp định lượng để xác định vitamin A D Đã đưa quy trình lấy mẫu, bảo quản, xử lý mẫu xác định vitamin A, D2, D3 Đã tiến hành kháo sát điều kiện sắc ký vitamin như: nhiệt độ, tốc độ dòng, pha động, bước sóng Đã tiến hành xây dựng đường chuẩn vitamin A, D 2, D3 cho phép đo xác định hàm lượng chúng mẫu thực phẩm Khoảng nồng độ làm việc vitamin A 0,2 - 200ppm; vitamin D2 D3 0,5 - 50 ppm Đã tiến hành định lượng đối tượng mẫu thực phẩm phương pháp ngoại chuẩn Đã tiến hành đánh giá độ xác phương pháp qua xác định độ lặp lại độ tính toán giới hạn pháp LOD giới hạn định lượng LOQ Độ lặp lại tính thông qua độ biến thiên RSD%, kết cho thấy phép đo có độ biến thiên thấp (RSD% < 5%) Độ xác định qua tính toán hiệu suất thu hồi, kết tính cho thấy phép phân tích mẫu có độ thu hồi tương đối cao, chấp nhận ( H% > 80% ) Độ nhạy phương pháp phản ánh qua giá trị giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) tính toán theo quy tắc Giá trị LOD từ 0,01ppm - 0,03 ppm; giá trị LOQ từ 0,04 - 0,07 ppm 65 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Ban kĩ thuật tiêu chuẩn quốc gia (2011), TCVN 8973-2011 Hà Nội : Việt Nam Dược điển Việt Nam 3-4 (2002), Nhà xuất Y học Xí nghiệp in Á Phi Phạm Luận (1999), Cơ sở lý thuyết phân tích sắc ký lỏng hiệu cao, Đại học Quốc gia Hà Nội Nguyễn Khắc Nghĩa (1997), Áp dụng toán học thống kê để xử lý số liệu thực nghiệm, Đại học Vinh Viện kiểm nghiệm An toàn Vệ sinh Thực phẩm Quốc Gia (2010), Thẩm định phương pháp phân tích hóa học vi sinh vật, NXB Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội Võ Quốc Oai, Nghiên cứu, xác định hàm lượng vitamin D nấm phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Luận văn thạc sỹ hóa phân tích - Đại Học Vinh 2014 Tài liệu tiếng Anh AOAC 982.29 (1983), Vitamin D in Mixed Feeds,Premixes and Pet Foods - Liquid Chromatographic Method AOAC 992.26, (1995),Vitamin D3 (cholecalciferol) in ready-to-feed milk-based infant formula - Liquid chromatographic method AOAC 995.05, (1995) Vitamin D in Infant Formulas and Enteral Products Liquid Chromatographic Method 10 AOAC 2002.05, (2002), Determination of Cholecalciferol (Vitamin D3) in Selected Foods - Liquid Chromatography 11 Anders Staffas et al.,(2003), “Determination of Cholecalciferol (Vitamin D3) in Selected Foods by Liquid Chromatography”, Journal Of AOAC International,Vol 86 66 12 Christine L Taylor et al, (2010), Dietary Reference Intakes for Calcium and Vitamin D, National Academy of Sciences Washington DC 13 C.Genestar et al, (1995) “Determination of Vitamin A in Pharmaceutical Preparations by High-Performance Liquid Chromatography with DiodeArray Detection”, Department of Chemistry, University of Balearic Islands, vol 40 14 Dennis Eriksen (2008) “Vitamin A determination by HPLC” 15 Gabriela Klaczkow et al, (2000) “Simultaneous determination of vitamin A, D3 and E in multiple pharmaceutical preparations by HPLC method”, Department of Vitamins Drugs, Drugs Institute, 30/34 Chelmska Str., Warsaw, Poland, Vol.57 16 Jette Jakobsen et al,( 2003) “A new method for the determination of vitamin D3 and 25-hydroxyvitamin D3 in meat”, Journal of Food Composition and Analysis, Soborg, Denmark : Elsevier 17 LiuYang, Norman, A W., & Henry, H L (2007) Viamin D In J Zempleni, R.B Rucker, D.B McCormick, & J W Suttie (Eds.), Handbook of vitamins (pp 42-88) Boca Raton, FL: CRC Press 18 Lone Hymoller et al, (2011), “Vitamin D analysis in plasma by high performance liquid chromatography (HPLC) with C30 reversed phase column and UV detection - Easy and acetonitrile-free”, Elsevier B.V 19 Markus Herrmann et al, (2010), “A new quantitative LC tandem mass spectrometry assay for serum 25-hydroxy vitamin D”, Elsevier Inc, Vol 75 20 Michael D Kalaras et al, (2007), “Vitamin D2 Enrichment In Fresh Mushrooms Using Pulsed UV Light”, Penn State University : Department of Food Science 21 Sundar Rao Koyyalamudi et al, (2011), “Concentration of vitamin D2 in white button mushrooms (Agaricus bisporus) exposed to pulsed UV light”, Journal of Food Composition and Analysis, Elsevier Inc 67 22 Takeuchi A et al, (1984), “Performance liquid chromatographic determination of vitamin D in foods, feeds and pharmaceuticals by successive use of reversed-phase and straight-phase columns”, Journal of Nutritional Science and Vitaminology, Tokyo, Vol 30 23 Tim Plozza et al, (2012) “The simultaneous determination of vitamins A, E and β-carotene in bovine milk by high performance liquid chromatography-ion trap mass spectrometry (HPLC-MS n)”, Food Chemistry Vol.134 P 559-563 24 Wendy L Arneson et al,( 2013) “Current Methods for Routine Clinical Laboratory Testing of Vitamin D Level”, Lab Medicine, Vol 44 Issue 1, p.38 25 Wiraj J Jasinghe et al, (2005), “Ultraviolet irradiation: The generator of Vitamin D2 in edible mushrooms”, Elsevier, sigapore, Food Chemistry 26 Xiuping Xue et al, (2008) “Simultameous Determinition of Five FatSoluble Vitamin in Feed by High-Performance Liquid Chromatography Following Solid-Phase extration”, College of Animal Science and Technology, China Agricultural University, vol.46, 345-350 68 PHỤ LỤC Sắc đồ chuẩn vitamin A nồng độ 0,2 ppm Sắc đồ chuẩn vitamin A nồng độ 0,5 ppm 69 Sắc đồ chuẩn vitamin A nồng độ1 ppm, vitamin D2, D3 0,5 ppm Sắc đồ chuẩn vitamin Anồng độ ppm, vitamin D2, D3 ppm 70 Sắc đồ hỗn hợp chuẩn vitamin A nồng độ10 ppm, vitamin D2, D3 ppm Sắc đồ hỗn hợp chuẩn vitamin A 20 ppm, vitamin D2, D310 ppm 71 Sắc đồ hỗn hợp chuẩn vitamin A nồng độ 50 ppm, vitamin D2, D3 20 ppm Sắc đồ hỗn hợp chuẩn vitamin A 100 ppm, vitamin D2, D3 30 ppm 72 Sắc đồ hỗn hợp chuẩn vitamin A 200 ppm, vitamin D2, D3 50 ppm [...]... lỏng hiệu năng cao cho phép phân tích với độ nhạy và độ chọn lọc cao Vì vậy chúng tôi đã chọn đề tài “NGHIÊN CỨU, XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI HÀM LƯỢNG VITAMIN A, D 2, D3 TRONG MỘT SÔ THỰC PHẨM BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) 2 Mục đích nghiên cứu Xây dựng được phương pháp xác định đồng thời hàm lượng vitamin A, D2, D3 trên máy HPLC 3 Nhiệm vụ nghiên cứu - Thiết lập được phương pháp phân tích... loại thực phẩm chế biến sẵn có bổ sung vitamin A và D Vì vậy việc phân tích hàm lượng vitamin A, D trong thực phẩm là cần thiết, vừa để xây dựng một quy trình định lượng đồng thờivitamin trong thực phẩm, vừa để góp phần xây dựng bảng thành phần dinh dưỡng thực phẩm địa phương. Có nhiều phương pháp, kĩ thuật đánh giá hàm lượng vitamin A, D2, D3 trong thực phẩm, trong đó phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng. .. tích đảm bảo độ chính xác, độ hội tụ, độ nhạy cao, xác định được LOD và LOQ của phương pháp - Áp dụng phương pháp để khảo sát, xác định hàm lượng vitamin A, D2, D 3trong một số thực phẩm 4 Đối tượng và phạm vi nghiên cứu - Hàm lượng vitamin A, D2, D3 trong một số thực phẩm gan, cà rốt và nấm 13 CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN 1.1 Vitamin D 1.1.1 Giới thiệu, cấu tạo, phân loại và tên gọi Vitamin D là tinh thể không... 25(OH)D 1.3.4 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) đã được sử dụng rộng rãi để xác định các vitamin tan trong chất béo từ giữa những năm 1970 và đã được thông qua như là phương pháp chính thức nhờ khả năng phát hiện, tính chọn lọc cao Thiết bị sử dụng để phân tích vitamin D trong thực phẩm là máy sắc ký lỏng hiệu năng cao sử dụng hệ thống tách sắc ký... đã xác nhận các phương pháp hóa học sau để phân tích vitamin D trong thực phẩm Phương pháp AOAC 980.26: vitamin D trong các chế phẩm vitamin tổng hợp Phương pháp AOAC 981.17: vitamin D trong sữa tăng cường và sữa bột Phương pháp AOAC 982.29: vitamin D trong thực phẩm, các loại bột hỗn hợp và thức ăn chăn nuôi Phương pháp AOAC 992.26: vitamin D 3 trong sữa công thức pha sẵn dành cho trẻ em Phương pháp. .. nm.) Phương pháp HPLC đầu tiên được giới thiệu để xác định vitamin D là phương pháp ngoại chuẩn [22], sau đó được giới thiệu phương pháp nội chuẩn Tuy nhiên những nghiên cứu này chỉ xác định được vitamin D 3 và vitamin D2 mà không bao gồm dạng chuyển hóa 25(OH)D Tác giả Anders S và cộng sự [11] đã nghiên cứu xác định vitamin D 3trong sữa bột, sữa công thức, dầu ăn, margarine và dầu cá bằng phương pháp. .. các xung cực tím cung cấp một phương pháp có hiệu quả cao để tăng nồng độ vitamin D2 trong nấm mỡ A Bisporus Xiuping Xue và các cộng sự [26] đã đưa ra phương pháp xác định đồng thời 5 vitamin tan trong dầu menadione, retinyl acetate, cholecalciferol, αtocopherol và α-tocopherol acetate trong thức ăn chăn nuôi bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao sau khi chiết pha rắn Mẫu nghiên cứu sau khi cho... 325 và 334nm theo như SOP QAM - 10101 Thời gian chạy mẫu là 12 phút, phát hiện vitamin A ở phút thứ 7 36 Gabriela Klaczkow và cộng sự [15] sử dụng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC với detecter tại 265nm, để xác định đồng thời vitamin A, E, D3 trong nhiều chế dược phẩm và cho kết quả chính xác Phân tích định lượng đa vitamin trong chế dược phẩm vẫn còn một thách thức lớn cho các nhà hóa học... người Trong bài báo này tác giả có đánh giá về các phương pháp thường dùng phổ biến nhất để định lượng vitamin D đó là phương pháp miễn dịch phóng xạ (RIA), phương pháp LC-MS/MS và phương pháp HPLC Tác giả đã mô tả khá đầy đủ về quy trình thực hiện phương pháp xét nghiệm miễn dịch và nêu ra một số phương pháp xét nghiệm miễn dịch để định lượng vitamin D được FDA chấp thuận hiện có gồm phương pháp xét... (pro -vitamin A, các nguồn thực vật): cải xoăn, cà rốt thường xuyên, rau mùi tây, rau bina, khoai lang, mơ khô, cải xoong, cải xanh, xoài, cà chua, bắp cải, đậu Hà Lan đông lạnh 1.3 Các phương pháp xác định vitamin A và D 1.3.1 Phương pháp thử nghiệm sinh học Phương pháp chính thức đầu tiên để xác định vitamin D là phương pháp thử nghiệm sinh học, trong đó hoạt tính sinh học của vitamin D được xác định ... vitamin A, D2, D 3trong mt s thc phm i tng v phm vi nghiờn cu - Hm lng vitamin A, D2, D3 mt s thc phm gan, c rt v nm 13 CHNG TNG QUAN 1.1 Vitamin D 1.1.1 Gii thiu, cu to, phõn loi v tờn goi Vitamin. .. hm lng vitamin A, D2, D3 thc phm, ú phng phỏp sc ky lng hiu nng cao cho phộp phõn tớch vi nhy v chn lc cao Vỡ vy chỳng tụi ó chn ti NGHIấN CU, XC NH NG THI HM LNG VITAMIN A, D 2, D3 TRONG MễT... 90/10 khụng nhn thy pic ca vitamin D2, D3, A vũng thi gian 40 phỳt tc dũng 0,3ml/phỳt cú xut hin peak ca D2, D3 nhng hu nh khụng tỏch c Hỡnh 3.2 Sc ký ca vitamin A, D2, D3 tc dũng 0,3 ml/phỳt