B GIO DC V O TO B Y T TRNG I HC Y H NI *** TRN THANH KHOA ĐáNH GIá PHƯƠNG PHáP ĐịNH LƯợNG BILIRUBIN TRÊN MáY PHÂN TíCH KHí MáU GEM 4000 KHểA LUN TT NGHIP C NHN Y KHOA KHểA 2009-2013 Hng dn khoa hoc: TS Trn Th Chi Mai H Ni-2013 LI CM N Tụi xin chõn thnh gi li cm n ti Ban Giỏm hiu, Phũng Qun lý o to i hc trng i hc Y H Ni ó giỳp , to mi iu kin thun li cho tụi sut thi gian hc Em xin by t lũng bit n sõu sc n TS-Trn Th Chi Mai Trng khoa xột nghim Sinh Húa Bnh vin Nhi Trung ng, ngi cụ ó ht lũng hng dn em trờn ng hc v nghiờn cu khoa hc Em xin gi li cm n n cỏc thy cụ, anh ch khoa xột nghim Sinh Húa Bnh vin Nhi Trung ng ó giỳp em rt nhit tỡnh, to mi thun li cho em quỏ trỡnh thc hin v hon thnh khúa lun ny Cui cựng tụi xin by t lũng bit n ti cha m, nhng ngi ó sinh thnh v nuụi dy tụi, cựng vi nhng ngi thõn gia ỡnh, anh em bố bn ó chia s ng viờn giỳp tụi sut thi gian hc H Ni, ngy 01 thỏng 06 nm 2013 Sinh viờn Trn Thanh Khoa LI CAM OAN Tụi xin cam oan õy l cụng trỡnh nghiờn cu ca riờng tụi, tt c cỏc s liu khúa lun ny l trung thc v cha tng c cụng b bt c cụng trỡnh nghiờn cu no khỏc H Ni, ngy 01 thỏng 06 nm 2013 Sinh viờn Trn Thanh Khoa NHNG T VIT TT Hb HPLC NCCLS POCT PXN SDS Hemoglobin High-performance liquid chromatography (Sc ký lng hiu nng cao) National Committee on Clinical Laboratory Standards Point-of-Care Testing (Xột nghim ti ch chm súc bnh nhõn) Phũng xột nghim Sodium dodecyl sulfate MC LC MC LC HèNH MC LC BNG T VN 1.1 HEMOGLOBIN 1.2 CHUYN HểA HEMOGLOBIN V CHUYN HểA BILIRUBIN .5 1.4 THIT B XẫT NGHIM TI CH (point of care testing) 23 1.5 NH GI PHNG PHP V MT K THUT (ANLYTICAL EVALUATION OF METHODS) 26 CHNG 31 I TNG V PHNG PHP NGHIấN CU 31 2.1 I TNG NGHIấN CU 31 2.2 K THUT NH LNG BILIRUBIN TON PHN 31 Bng 2.1 Cỏch pha cỏc mu dựng cho th nghim ỏnh giỏ tuyn tớnh 33 Bng 2.2 chớnh xỏc ngn hn .34 Bng 2.3 chớnh xỏc di hn 34 Hỡnh 3.2 th ỏnh giỏ tuyn tớnh ca phng phỏp nh lng bilirubin ton phn trờn mỏy AU 2700 37 Bng 3.1: lch v phn trm sai s ỏnh giỏ tuyn tớnh trờn mỏy Gem 4000 38 Bng 3.2 lch v phn trm sai s ỏnh giỏ tuyn tớnh trờn mỏy AU 2700 38 Bng 3.3 Kt qu ỏnh giỏ chớnh xỏc ngn hn ca phng phỏp nh lng bilirubin ton phn trờn mỏy GEM 4000 v AU2700 .39 Bng 3.4 Kt qu ỏnh giỏ chớnh xỏc di hn ca phng phỏp nh lng bilirubin ton phn trờn mỏy GEM 4000 v AU2700 .40 Hỡnh 3.3 th so sỏnh kt qu nh lng bilirubin ton phn trờn mỏy Gem 4000 v mỏy AU 2700 .42 Phng phỏp nh lng bilirubin trờn mỏy GEM 4000 cú chớnh xỏc v xỏc thc tng t nh phng phỏp tham chiu s dng ti phũng xột nghim 48 Cú th s dng phng phỏp nh lng bilirubin trờn mỏy GEM 4000 cho vic chn oỏn, theo dừi iu tr vng da s sinh mt cỏch kp thi c nhng c s y t tuyn di 48 MC LC HèNH Hỡnh 3.2 th ỏnh giỏ tuyn tớnh ca phng phỏp nh lng bilirubin ton phn trờn mỏy AU 2700 37 Hỡnh 3.3 th so sỏnh kt qu nh lng bilirubin ton phn trờn mỏy Gem 4000 v mỏy AU 2700 .42 MC LC BNG MC LC BNG T VN Bng 2.1 Cỏch pha cỏc mu dựng cho th nghim ỏnh giỏ tuyn tớnh 33 Bng 2.2 chớnh xỏc ngn hn .34 Bng 2.3 chớnh xỏc di hn 34 Bng 3.1: lch v phn trm sai s ỏnh giỏ tuyn tớnh trờn mỏy Gem 4000 38 Bng 3.2 lch v phn trm sai s ỏnh giỏ tuyn tớnh trờn mỏy AU 2700 38 Bng 3.3 Kt qu ỏnh giỏ chớnh xỏc ngn hn ca phng phỏp nh lng bilirubin ton phn trờn mỏy GEM 4000 v AU2700 .39 Bng 3.4 Kt qu ỏnh giỏ chớnh xỏc di hn ca phng phỏp nh lng bilirubin ton phn trờn mỏy GEM 4000 v AU2700 .40 T VN Vng da s sinh l mt cỏc tỡnh trng bnh lý ph bin nht cn s chm súc y t tr s sinh Khong 60% tr s sinh thỏng v 80% tr s sinh non thỏng xut hin vng da - ngy u ca cuc sng [17] Vi phn ln tr s sinh, vng da khụng bt k bnh lý no m s gim bi tit bilirubin (vng da sinh lý) Vng da sinh lý khụng gõy hi v t mt i phn ln tr s sinh Tuy nhiờn nng bilirubin t cao cú th gõy tn thng nóo khụng hi phc nu khụng iu tr Cỏc di chng bao gm chng bi nóo, gim thớnh lc v cỏc chuyn ng ca mt iu quan trng l mc bilirubin tng cao mỏu ca tr s sinh phi c xỏc nh nhanh chúng v iu tr kp thi Vng da s sinh l tỡnh trng ph bin Vit Nam nhng cha c nhn bit v ỏnh giỏ ỳng bi mc gia ỡnh tr, vy lm chm a tr i khỏm v cỏc bỏc s ớt kinh nghim thng chm tr chn oỏn v chm chuyn tr n c s iu tr thớch hp Cú rt ớt cỏc thit b xột nghim v cỏc bin phỏp iu tr vng da cho tr em cỏc c s y t tuyn di ti Vit Nam cỏc nc phỏt trin, tr s sinh vng da c ly mỏu gút chõn nh lng bilirubin, vic ny iu dng hoc nhõn viờn xột nghim c hun thc hin Da vo kt qu nh lng bilirubin chn oỏn xỏc nh v bỏc s s a quyt nh liu phỏp ỏnh sỏng cú cn thit khụng, kt qu bilirubin cng l thụng s theo dừi kt qu iu tr Tuy nhiờn, Vit Nam cỏc thit b phõn tớch bilirubin cn mt lng mỏu nh ch cú mt s bnh vin chuyờn khoa nhi ng trc s nghiờm trng ca bnh vng da s sinh, mt yờu cu t i vi cỏc bỏc s lõm sng v cỏc nh húa sinh l lm chn oỏn sm, chớnh xỏc i vi bnh ny Vic chn oỏn sm 1111 cú ý ngha vụ cựng quan trng iu tr, tiờn lng tỡnh trng bnh i vi bnh nhõn nhi Bilirubin ton phn bao gm bilirubin liờn hp (trc tip) v bilirubin t (giỏn tip) Cỏc phng phỏp truyn thng phõn tớch nh lng bilirubin s dng thuc th diazo ca Ehrlich v hin phng phỏp diazo ci tin thng c dựng nh lng bilirubin ton phn (mui diazo v thuc th caffein) Bilirubin trc tip hay bilirubin liờn hp c nh lng bng thuc th diazo khụng cú caffein Bilirubin t hay bilirubin giỏn tip c tớnh bng hiu ca bilirubin ton phn v bilirubin liờn hp Dng bilirubin t tng cao mỏu cú th qua hng ro mỏu nóo gõy tn thng thn kinh tr s sinh, bilirubin t chim phn ln bilirubin huyt thanh, cú th c tớnh toỏn t bilirubin ton phn v bilirubin liờn hp hoc n gin l nh lng bilirubin ton phn xem nh bilirubin liờn hp l khụng ỏng k Bilirubin ton phn cú th nh lng bng phng phỏp Diazo trờn mỏy húa sinh t ng Beckman Coulter ti Khoa Sinh Húa, Bnh vin Nhi trung ng Phng phỏp ny ó c thit lp cho phn ln cỏc mỏy húa sinh t ng v kt qu cú th truy nguyờn vi cỏc phng phỏp tham chiu vy cú th so sỏnh vi kt qu ca cỏc phũng xột nghim khỏc Ngi ta ó phỏt trin k thut phõn tớch bilirubin cho cỏc thit b xột nghim ti ch (point of care testing devices) Cỏc thit b ny c thit k nh lng bilirubin ti ni chm súc bnh nhõn, tc l khụng phi ti phũng xột nghim trung tõm ca bnh vin Thun li ca cỏc thit b xột nghim ti ch l thi gian tr kt qu nhanh, lng mu cn cho phõn tớch ớt (dựng ng mao qun) nờn trỏnh c vic thoỏi húa bilirubin chm phõn tớch v trỏnh thiu mỏu thy thuc vỡ phi ly mỏu nhiu ln vi lng ln lm xột nghim Tuy nhiờn, cỏc thit b xột nghim ti ch trc õy s dng bnh phm l huyt nờn ũi hi nhõn viờn ca khoa lõm sng phi ly tõm mu mỏu trc phõn tớch Mỏy phõn tớch khớ mỏu GEM 4000 tớch hp k thut phõn tớch bilirubin ton phn ó xut hin trờn th trng gn õy Vic nh lng bilirubin trờn mỏy GEM 4000 s dng mu mỏu ton phn vy khụng ũi hi ly tõm trc phõn tớch Loi mỏy ny cú kh nng ỏp dng cho cỏc bnh nhõn s sinh v khc phc c nhc im ca cỏc thit b nh lng bilirubin ti ch trc õy Hin khoa s sinh bnh vin Nhi trung ng ó c trang b mỏy o khớ GEM 4000 Thi gian tr kt qu nhanh v vic ch cn mt lng mỏu nh lm cho thit b ny cú th rt thớch hp cho vic chn oỏn, theo dừi iu tr vng da s sinh mt cỏch kp thi c nhng c s y t tuyn di Vic nh lng bilirubin ti phũng xột nghim trờn mỏy phõn tớch húa sinh t ng ũi hi ly mỏu tnh mch, vic bo qun v chuyn khụng ỳng s lm bilirubin thoỏi húa, gõy kt qu thp gi to v thi gian tr kt qu phi tớnh bng gi Thay vỡ phi gi mu mỏu tnh mch n phũng xột nghim nh lng bilirubin, chỳng ta cú th ch cn mt mu mỏu mao mch v thi gian tr kt qu ch tớnh bng phỳt tin hnh nh lng bilirubin trờn mỏy GEM 4000 Tuy nhiờn, kt qu phõn tớch bilirubin trờn mỏy GEM 4000 cú th c s dng a cỏc quyt nh chn oỏn v iu tr vng da s sinh, cn phi ỏnh giỏ xem phng phỏp ny cú chớnh xỏc v xỏc thc tng t nh phng phỏp tham chiu s dng ti phũng xột nghim hay khụng Vỡ vy chỳng tụi thc hin ti ỏnh giỏ phng phỏp nh lng bilirubin trờn mỏy phõn tớch khớ mỏu GEM 4000 nhm mc tiờu: Thm nh phng phỏp nh lng bilirubin ton phn bng phng phỏp quang ph trc tip trờn mỏy GEM 4000 CHNG TNG QUAN 1.1 HEMOGLOBIN 1.1.1 Chc nng hemoglobin Hemoglobin (Hb) l mt protein phc cú nhúm ngoi l hem Hb m nhn chc nng kt hp vi oxy phi, chuyn v gii phúng oxy t chc, nhn CO2 t t chc a v phi Ngoi Hb cũn l mt cỏc h m quan trng ca c th 1.1.2 Cu to phõn t Hb Hb l i phõn t cú tiu n v Mi tiu n v l mt globin kt hp vi nhõn Hem Hem l mt sc t cha st húa tr II Chớnh nh ion st m Hb cú th gn v gii phúng oxy Globin l mt chui polypeptid Cú nhiu loi globin thuc hai h v h khụng Tựy theo s kt hp cỏc chui m cú cỏc Hb khỏc - Hai chui kt hp hai chui (22) to thnh Hb A - Hai chui kt hp hai chui (22) to thnh Hb F - Hai chui kt hp hai chui (22) to thnh Hb A2 ngi ln bỡnh thng ch yu l Hb A, ngoi cũn: - Hb A2 chim t l 2-3.5% Kớ hiu 22 hay / - Hb F (cũn gi l huyt sc t bo thai vỡ chim t l rt cao giai on cui ca thai nhi v s sinh) Kớ hiu 22 hay / - Mt s huyt sc t thi kỡ phụi thai v thi kỡ u ca bo thai Bng 3.1: lch v phn trm sai s ỏnh giỏ tuyn tớnh trờn mỏy Gem 4000 Nng trung Giỏ tr bỡnh o c lý thuyt (X) (Y ) (àmol/L) (àmol/L) Mu 8.47 8.5 -0.03 Khụng ỏp dng Mu 75.03 76.88 -1.85 -2.41 % Mu 146.53 145.26 1.27 0.87 % Mu 213.8 213.64 0.16 0.07 % Mu 283.8 282.02 1.78 0.63 % Mu 350.53 350.4 0.13 0.04 % Mu lch (Y- X) % Sai s Nhn xột: Tt c lch v phn trm sai s mi mt mc u nh hn sai s cho phộp Bng 3.2 lch v phn trm sai s ỏnh giỏ tuyn tớnh trờn mỏy AU 2700 Mu Mu Nng trung Giỏ tr bỡnh o c (Y) lý thuyt (X) (àmol/L) (àmol/L) 5.43 5.4 lch (Y- X) 0.03 % Sai s Khụng ỏp dng 38 Mu 81.03 80.44 0.59 0.73 % Mu 155.3 155.48 -0.18 -0.12% Mu 229.3 230.52 -1.22 -0.53 % Mu 305.8 305.56 0.24 0.08 % Mõu 380.97 380.6 0.37 0.97% Nhn xột: Tt c lch v phn trm sai s mi mt mc u nh hn sai s cho phộp 3.2 THC NGHIM NH GI CHNH XC Bng 3.3 Kt qu ỏnh giỏ chớnh xỏc ngn hn ca phng phỏp nh lng bilirubin ton phn trờn mỏy GEM 4000 v AU2700 GEM 4000 Mc thp n Nng trung bỡnh (àmol/L) AU 2700 Mc cao Mc thp Mc cao 10 10 10 10 27.87 142.27 21.99 122.17 39 SD 1.81 7.11 0.30 1.99 CV% 6.50 5.00 1.38 1.63 Nhn xột: Sai s ton b cho phộp ca xột nghim nh lng bilirubin ton phn l 31.1% [23] bin thiờn CV ca mỏy GEM 4000 hai mc u ln hn 5%, nhng hn nh hn 25% ca sai s ton b cho phộp (0.25x 31.3%= 7.78%) bin thiờn CV ca mỏy AU 2700 hai mc u nh hn 5% Bng 3.4 Kt qu ỏnh giỏ chớnh xỏc di hn ca phng phỏp nh lng bilirubin ton phn trờn mỏy GEM 4000 v AU2700 GEM 4000 AU 2700 Mc thp Mc cao Mc thp Mc cao 22 22 22 22 27.83 131.13 22.18 132.27 SD 1.60 2.26 1.95 9.33 CV% 5.75 1.73 8.78 7.06 N Nng bilirubin trung bỡnh (àmol/L) Nhn xột: 40 Sai s ton b cho phộp ca xột nghim nh lng bilirubin ton phn l 31.1% [23] bin thin CV ca mỏy GEM 4000 mc thp ln hn 5%, cũn mc cao nh hn 5% bin thiờn CV ca mỏy AU 2700 c hai mc u ln hn 5%, nhng u nh hn 33% sai s ton b cho phộp (0.33 x 31.1% = 10.26%) 41 3.3 THC NGHIM SO SNH 400 GEM4000 umol/L 300 200 100 AU2700 umol/L 100 200 Passing-Bablok agreement test N = 41 Slope : 0.932 [ 0.872 to 0.997 ] Intercept : -3.276 [ -7.546 to -0.216 ] 300 400 Hỡnh 3.3 th so sỏnh kt qu nh lng bilirubin ton phn trờn mỏy Gem 4000 v mỏy AU 2700 Nhn xột: Trong vũng thỏng, 41 mu mỏu ton phn ó c tin hnh phõn tớch song song trờn mỏy GEM 4000 v mỏy AU 2700 theo quy trỡnh c xõy dng ti phũng xột nghim th cú dc l 0.932 v giao im l 42 CHNG BN LUN nh lng nng bilirubin ton phn mỏu úng vai trũ vụ cựng quan trng chn oỏn v iu tr vng da s sinh hay cũn gi l tng bilirubin mỏu s sinh Phn ln tr s sinh b vng da vi mc nh, nhng s tng bilirubin cp tớnh v dai dng tr s sinh cú th nh hng n h thn kinh trung ng gõy vng da nhõn (kerniterus) Phn ln cỏc trng hp tng bilirubin tr s sinh c iu tr bng liu phỏp ỏnh sỏng, cỏc ca bnh tng bilirubin nng c iu tr bng thay mỏu (exchange transfusion) Hip hi cỏc nh nhi khoa M a hng dn ỏnh giỏ nguy c ca tng bilirubin mỏu v cỏc la chn iu tr cn thit da trờn vic nh lng nng bilirubin ton phn mỏu ngi ln, nng bilirubin ton phn c dựng theo dừi ỏnh giỏ chc nng gan v cỏc liờn quan n vng da Thụng thng bilirubin ton phn mỏu c nh lng trờn cỏc mỏy phõn tớch húa sinh s dng huyt tng/huyt Gn õy, vic nh lng bilirubin mỏu ton phn c tin hnh trờn mỏy o khớ mỏu giỳp loi b bc phõn tỏch huyt tng/huyt Phng phỏp ny cú chớnh xỏc tng t nh phng phỏp tin hnh trờn cỏc mỏy phõn tớch húa sinh GEM 4000 l mỏy phõn tớch khớ mỏu cú th o lng cỏc thụng s khớ mỏu, cỏc cht in gii, mt s cht chuyn húa (glucose, lactat) bng h thng cartridge Vic nh lng bilirubin ton phn ó c tớch hp vo h thng GEM 4000 Vic s dng thit b chm súc ti ch ny cú th s rt thớch hp cho nhng c s iu tr s sinh vỡ li ớch ca vic ch cn s dng mt lng mỏu nh trỏnh gõy thiu mỏu iu tr, kt qu xột nghim cú sau 43 vi phỳt k t ly mỏu giỳp vic a quyt nh chn oỏn v iu tr nhanh chúng, kp thi Tuy nhiờn, vic ỏnh giỏ xem liu phng phỏp nh lng bilirubin ton phn trờn GEM 4000 cú kt qu tng t nh phng phỏp tham chiu ti phũng xột nghim hay khụng l vic lm cn thit trc quyt nh s dng phng phỏp ny cho mc ớch chn oỏn v theo dừi iu tr vng da s sinh Nghiờn cu ny c tin hnh nhm ỏnh giỏ phng phỏp nh lng bilirubin trờn GEM 4000, vy vic xỏc nh gii hn tuyn tớnh l mt yờu cu bt buc so sỏnh, chỳng tụi tin hnh thc nghim song song trờn c mỏy phõn tớch húa sinh t ng Beckman Coulter AU 2700 th 3.1 cho thy, khong tuyn tớnh ca phng phỏp nh lng bilirubin ton phn trờn mỏy GEM 4000 l 8.5 n 350.4 àmol/L Phng trỡnh tuyn tớnh l y= 1.004x 0.5503 Gii hn tuyn tớnh thu c thc nghim ny thp hn so vi tuyờn b ca nh sn xut (11- 617 àmol/L) [20], iu ny iu kin thc nghim chỳng tụi cha thu thp cỏc mu bnh phm cú nng bilirubin cao Do vy, t kt qu thu c ch cú th khng nh l phng phỏp nh lng bilirubin ton phn trờn GEM 4000 ớt nht tuyn tớnh n 350 àmol/L th 3.2 cho thy mỏy phõn tớch húa sinh AU 2700 l cú gii hn tuyn tớnh cho phộp nh lng bilirubin l 5.4 n 380.6 àmol/L Phng trỡnh tuyn tớnh l y= 0.9998x + 0.01518 Gii hn tuyn tớnh ny cng hp hn so vi tuyờn b ca nh sn xut (0-513 àmol/L) dc ca c hai th u xp x v giao im xp x Bng 3.1 v bng 3.2 cho thy lch v phn trm sai s ca tt c cỏc hn hp th nghim u nh hn sai s cho phộp Mc dự khong tuyn tớnh ny nh hn tuyờn b ca nh sn xut nhng bao ph c vựng gii hn cú ý ngha chn oỏn bnh v a quyt nh iu tr Tuy nhiờn, vic tip tc thu thp cỏc mu bnh phm cú nng bilirubin cao hn na v tin hnh li th nghim ỏnh giỏ khong 44 tuyn tớnh ca GEM 4000 l cn thit Sau ó xỏc nh c khong tuyn tớnh, vic tip theo l xỏc nh chớnh xỏc ca phng phỏp ti cỏc nng m kt qu xột nghim ca bnh nhõn cú ý ngha quyt nh v mt lõm sng Thc nghim xỏc nh chớnh xỏc cho phộp ỏnh giỏ sai s ngu nhiờn ca phộp phõn tớch Thc nghim xỏc nh chớnh xỏc ca phng phỏp nh lng bilirubin trờn mỏy GEM 4000 c tin hnh trờn hai mc nng bilirubin thp v cao so sỏnh, chỳng tụi tin hnh c trờn mỏy AU 2700 Kt qu bng 3.3 cho thy bin thiờn (CV) ca thc nghim ỏnh giỏ chớnh xỏc ngn hn v chớnh xỏc di hn ca hai mc u t tiờu chun Trong chớnh xỏc ngn hn: Hai loi huyt tng c tin hnh xột nghim mt ngy (n = 10) trờn GEM 4000 v AU 2700 Hai mc huyt kim tra ca Bio-Rad luụn c phõn tớch cựng m bo cỏc kt qu thu c l chp nhn c Tớnh giỏ tr trung bỡnh, SD v CV ca kt qu thu c vi hai loi mu huyt tng trờn hai mỏy ỏnh giỏ chớnh xỏc ngn hn Tiờu chun chp nhn ca chớnh xỏc ngn hn l nh hn 25% sai s ton b cho phộp Kt qu bng 3.1 cho thy bin thiờn (CV) mt m chy v gia cỏc ln chy ca hai mc u t tiờu chun Cn c vo tiờu chun mong mun cho xột nghim nh lng bilirubin thỡ CV [...]... cần lưu ý là các phương pháp định lượng bilirubin qua da và trong máu không đo lường cùng một loại thông số Phương pháp định lượng bilirubin qua da định lượng bilirubin di chuyển từ máu vào mô Do vậy, phép đo bilirubin qua da có phải là chỉ điểm cho lượng bilirubin từ máu vào não hay không vẫn còn là một câu hỏi Một vấn đề có thể có ý nghĩa hơn việc chọn các phương pháp định lượng bilirubin hiện có... hai phương pháp Mục đích của việc đánh giá này là kiểm tra xem phương pháp mới có tốt hơn hay tương tự phương pháp đang sử dụng Thử nghiệm so sánh mẫu bệnh phẩm có thể dùng đánh giá độ xác thực của phương pháp mới, nhưng việc này đòi hỏi sự hợp tác của các PXN khác có phương pháp phân tích chấp nhận được đối với chất phân tích đó Lý tưởng, việc so sánh được làm giữa phương pháp quy chiếu (phương pháp. .. đặc hiệu của phương pháp định lượng bilirubin trực tiếp và toàn phần không cao, nồng độ đúng của bilirubin trực tiếp và gián tiếp của trong huyết thanh không được khẳng định chắc chắn Phương pháp HPLC có thể phân tách và định lượng các loại bilirubin, giúp chúng ta hiểu biết rõ hơn về thành phần bilirubin trong máu Kết quả của phương pháp HPLC cho thấy trong máu người khỏe mạnh dưới 5% bilirubin là... cho máy phân tích tự động Phương pháp này không bị ảnh hưởng bởi tán huyết, thuốc thử ổn định Gần 25% các phòng xét nghiệm ở Anh sử dụng phương pháp này Một số phương pháp khác để đo bilirubin toàn phần đã được mô tả Phương pháp huỳnh quang dựa trên sự phát huỳnh quang của bilirubin khi gắn với protein hoặc chất tẩy, phương pháp điện hóa và phương pháp hóa phát quang dựa trên phản ứng của bilirubin và... làm giảm phản ứng của bilirubin tự do Tuy nhiên điều này cũng làm giảm phản ứng của các loại bilirubin liên hợp và δ -bilirubin Bằng cách cẩn thận lựa chọn các điều kiện phản ứng, có thể đo bilirubin trực tiếp và phương pháp tương quan tốt với phương pháp HPLC [7]  Phương pháp khác Phương pháp sắc kí lớp mỏng và phương pháp điện di mao quản dùng phân tách và định lượng các loại bilirubin cũng đã được... nhiễu bởi Hb Phương pháp này hiện nay là phương pháp duy nhất được sử dụng thường quy trong phòng xét nghiệm để định lượng các loại bilirubin liên hợp, tự do và δ -bilirubin thay vì 20 phân loại bilirubin là trực tiếp hoặc gián tiếp [6] Phương pháp đo bilirubin qua da đã được phát triển không còn bị ảnh hưởng bởi màu sắc của da và có độ tương đồng tốt với kỹ thuật định lượng bilirubin trong máu Tuy nhiên,... không phương nào trong số này tiện lợi trong thực hành thường quy tại phòng xét nghiệm [10] 1.3.2 Định lượng các thành phần của bilirubin  Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) [13, 14] Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao đã được phát triển để phân tách và định lượng bốn thành phần bilirubin, bao gồm α -bilirubin (bilirubin tự do), β -bilirubin (bilirubin liên hợp một gốc glucuronat), γ -bilirubin. .. hóa sinh lâm sàng cho các phương pháp thay thế Phương pháp thay thế có thể là mới hoặc máy mới thay cho máy cũ Phương pháp mới thường ưu việt hơn về giá, tốc độ, dễ sử dụng Việc đánh giá độ xác thực được tiến hành bằng thực nghiệm so sánh các mẫu bệnh phẩm Một số mẫu bệnh phẩm được chia ra làm hai, một dùng để xét nghiệm bằng phương pháp mới, phần còn lại phân tích bằng phương pháp đang sử dụng So sánh... hiện đã được đưa vào máy phân tích khí máu để đo bilirubin trong máu toàn phần Trong máy phân tích khí máu Radiometer ABL735, nhiều phép đo hấp thụ được thực hiện trên máu toàn phần trong khoảng trên 128 bước sóng (từ 478 nm đến 672 nm) Các tế bào hồng cầu bị phá vỡ nhờ rung động siêu âm và độ hấp thụ của dịch huyết tán được đo một cách chính xác Bởi vì hồng cầu không có bilirubin, bilirubin huyết tương... phần bilirubin gắn albumin được 18 bảo vệ khỏi phản ứng này Hai loại máy phân tích “free unconjugated bilirubin đã có trên thị trường, đây là máy UB và FloPro Với máy UB, mẫu phải pha loãng 42 lần, máy FloPro mẫu chỉ cần pha loãng 2 lần [10] 1.3.3 Phương pháp tham chiếu [6, 8] Phương pháp Jendrassick-Grof sử dụng cafein benzoate để hòa tan các loại bilirubin có độ lặp tốt được khuyến cáo như phương pháp ... ly tâm mẫu máu trước phân tích Máy phân tích khí máu GEM 4000 tích hợp kỹ thuật phân tích bilirubin toàn phần xuất thị trường gần Việc định lượng bilirubin máy GEM 4000 sử dụng mẫu máu toàn phần... thị đánh giá độ tuyến tính phương pháp định lượng bilirubin toàn phần máy GEM 4000 Nhận xét: Phương pháp định lượng bilirubin toàn phần máy GEM 4000 có giới hạn tuyến tính 8.5 đến 350.4 µmol/L Phương. .. phải đánh giá xem phương pháp có độ xác xác thực tương tự phương pháp tham chiếu sử dụng phòng xét nghiệm hay không Vì thực đề tài Đánh giá phương pháp định lượng bilirubin máy phân tích khí máu