Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ Sinh học PHầN 1: Mở đầu 1.1 Tính cấp thiết đề tài Trên giới, khoai tây (solanum tuberosum L.) đợc coi nguồn lơng thực quan trọng, có giá trị dinh dỡng giá trị kinh tế cao, chiếm vị trí không nhỏ kinh tế quốc dân nhiều nớc giới Hiện khoai tây đựơc xếp lơng thực đứng hàng thứ t sau lúa mì, lúa nớc ngô Đây lơng thực quan trọng cấu trồng vụ đông có u điểm nh thời gian sinh trởng ngắn (80 - 100 ngày), cho suất cao (15 - 30 tấn/ha), củ giàu dinh dỡng (protein; đờng; lipít; loại vitamin B1; B2; B3; loại khoáng quan trọng (kali, canxi, magie) nhiều vitamin C (20 50mg%) (Tạ Thu Cúc, 2000) [2] Khoai tây loại rau có nhiều lợng, kg khoai tây cho 848 kcal Cây khoai tây vốn a lạnh có nguồn gốc vùng cao nhiệt đới (từ 1000 m trở lên) Trải qua trình chọn lọc hoá, đợc trồng vùng khí hậu khác bao gồm vùng ôn đới, nhiệt đới nhiệt đới với điều kiện sinh thái khác từ vùng đồng đến vùng núi cao Việt Nam, khoai tây đợc coi nhóm lơng thực có tầm quan trọng đứng thứ ba sau lúa ngô Trong trình phát triển kinh tế xã hội, nhu cầu tiêu thụ khoai tây thị trờng nói chung, đặc biệt đô thị, khu công nghiệp, khu du lịch, ngày tăng Việt Nam có khả phát triển mạnh khoai tây, trồng vụ Đông lý tởng cho đồng Bắc Bộ, miền núi phía Bắc, Bắc Trung Bộ Tây Nguyên miền Bắc nớc ta, khoai tây đợc trồng sau hai vụ lúa, góp phần cải tạo nâng cao độ phì nhiêu cho đất, hạn chế lây lan sâu bệnh Đồng thời, việc luân canh nh mang lại hiệu kinh tế cao cho ngời nông dân Tuy nhiên, khoai tây cha đợc phát triển với tiềm Diện tích trồng khoai tây Việt Nam khiêm tốn, dao động quanh 33000 (2003) Năng suất bình quân thấp 12,5 tấn/ha Năng suất khoai tây nớc nh Pháp, Đức, Hà Lan xấp xỉ 40 Nguyên nhân tợng trồng khoai tây củ giống truyền thống qua nhiều năm thoái hoá chất lợng, làm yếu dần tính chống chịu khoai tây qua sinh sản vô tính, làm tăng tỷ lệ nhiễm bệnh đặc biệt virus, làm giảm suất khoai tây Dẫn đến chi phí cai sản xuất không chủ động Chính vậy, việc nghiên cứu tạo củ giống mini bệnh sản xuất giống khoai tây Việt Nam thiết Bởi vậy, vấn đề đặt cần phải cung cấp đủ nguồn nguyên liệu đáp ứng số lợng chất lợng cho việc sản xuất giống khoai tây siêu bi cung Báo cáo thực tập tốt nghiệp Trơng Thị Phơng Chi Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ Sinh học cấp đầy đủ cho bà nông dân Do đó, năm qua nhà khoa học tìm kiếm phơng pháp thích hợp với việc ứng dụng thành tựu khoa học nhân giống khoai tây nhập nội Một phơng pháp nhân giống vô tính kỹ thuật nuôi cấy in vitro Đây phơng pháp thể tính u việt việc nhân nhanh dòng chọn lọc, có phẩm chất tốt, hàm lợng thành phần hoá học có tác dụng dợc lý cao, tạo nguồn giống đồng đều, bệnh, giữ đợc đặc tính quý nguyên liệu ban đầu với hệ số nhân giống cao gấp nhiều lần so với phơng pháp nhân giống truyền thống Xuất phát từ ý nghĩa khoa học trên, tiến hành đề tài : Nghiên cứu ảnh hởng số nồng độ quy trình nhân nhanh giống khoai tây củ siêu bi nhằm tạo giống bệnh 1.2 Mục tiêu, ý nghĩa 1.2.1 Mục tiêu Xác định đợc nồng độ tối u - NAA, HgCl2, BAP tới khả sống mầm không bị nhiễm, khả sinh trởng chồi khả tạo củ bi nuôi cấy invitro hai giống khoai tây: Solara, Diamant 1.2.2 ý nghĩa khoa học thực tiễn - ý nghĩa thực tiễn: kết nghiên cứu thành công ứng dụng việc sản xuất giống khoai tây củ bi phơng pháp invitro tạo đợc bệnh, suất cao, giảm giá thành củ giống cho ngời sản xuất - ý nghĩa khoa học: xác định đợc nồng độ tối u - NAA, HgCl2, BAP bổ sung vào môi trờng nhằm hoàn thiện quy trình nhân giống khoai tây invitro Đồng thời nhằm đáp ứng nhu cầu giống khoai tây củ siêu bi bệnh cho nghiên cứu 1.2.3 Đối tợng phạm vi nghiên cứu 1.2.3.1 Đối tợng nghiên cứu Đề tài đợc nghiên cứu hai giống khoai tây nhập nội: - Giống Solara - Giống Diamant 1.2.3.2 Phạm vi nghiên cứu Nghiên cứu ảnh hởng thời gian khử trùng, nồng độ HgCl2 đến khả sống mầm ảnh hởng - NAA đến khả sinh trởng chồi giống khoai tây, ảnh hởng nồng độ BAP tới khả tạo củ ống nghiệm 1.2.3.2.1 Địa điểm nghiên cứu Báo cáo thực tập tốt nghiệp Trơng Thị Phơng Chi Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ Sinh học Phòng thí nghiệm nuôi cấy mô tế bào thực vật Trung tâm Thông Tin ứng dụng tiến Khoa học công nghệ thuộc sở Khoa học công nghệ Bắc Ninh 1.2.3.2.2 Thời gian nghiên cứu Từ 29 / 03 / 2010 đến 04 / 06 / 2010 Báo cáo thực tập tốt nghiệp Trơng Thị Phơng Chi Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ Sinh học PHầN tổng quan tài liệu 2.1 Khái quát khoai tây 2.1.1 Nguồn gốc phân bố 2.1.1.1 Nguồn gốc Khoai tây có nguồn gốc 8000 năm trớc khu vực nhiệt đới cao Peru nơi mà khoảng 5500 loài khoai tây đợc trồng nhiều hệ ngời dân vùng Theo Bucaxôp khoai tây đợc xác định có nguồn gốc Nam Mỹ thuộc nớc Chile, Peru, Bôlivia (Tạ Thu Cúc ; 2000) [2] Theo tài liệu cổ khoai tây hoang dại đợc ngời dân dãy Andess Nam Peru Bắc Bôlivia từ 3000 - 4000 năm trớc công nguyên Sau hoá khoai tây đợc lan rộng khắp miền núi dãy Adess (Nguyễn Quang Thạch, 1993) Khoai tây đợc du nhập vào Việt Nam từ 1890 chủ yếu trồng Đồng Sông Hồng (Trơng Văn Hộ, Lê Thị Tuyết, Phạm Xuân Tùng, Vander Zaag, 1988) Trớc năm 1970, diện tích khoai tây nớc ta thấp, khoảng 3000ha đợc xem nh loại rau (Trơng Văn Hộ, 1990) [8] Nhờ cách mạng xanh miền Bắc, lúa xuân thay lúa chiêm, với đời vụ đông mà khoai tây Việt Nam đợc chuyển vị trí từ rau sang lơng thực quan trọng Diện tích trồng khoai tây nớc ta đợc tăng lên nhanh chóng Thậm chí, có giai đoạn (1987) Bộ Nông nghiệp đánh giá khoai tây lơng thực quan trọng thứ hai sau lúa, có vai trò vừa lơng thực vừa thực phẩm, đồng thời xuất có giá trị kinh tế cao Sau giai đoạn dài biến động thăng trầm, gần tình hình sản xuất khoai tây Việt Nam có chiều hớng giảm sút nghiêm trọng diện tích sản lợng Nguyên nhân chủ yếu dẫn đến giảm sút thiếu giống có suất, chất lợng cao, sử dụng giống cũ thoái hoá nên suất thấp (khoảng 10 tấn/ha) suất khoai tây Pháp 35 tấn/ha, Hà Lan 45 tấn/ha, Mỹ 65 tấn/ha (Leviel, 1986) Để khắc phục trạng này, giải pháp phù hợp phải làm thay giống khoai tây thoái hoá Cần phải thiết lập hoàn thiện hệ thống sản xuất khoai tây giống gốc Việt Nam có chất lợng cao, đáp ứng nhu cầu cho sản xuất khoai tây 2.1.1.2 Phân bố Khoai tây a khí hậu mát mẻ, đợc trồng khắp nớc giới Vào kỷ 11 (khoảng năm 1570) ngời Tây Ban Nha chinh Báo cáo thực tập tốt nghiệp Trơng Thị Phơng Chi Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ Sinh học phục Châu Mỹ từ đợc đa đến vùng khác giới Khoai tây đợc trồng Tây Ban Nha năm 1561, đợc nhập vào Ailen (1580 - 1658), vào Anh (1590), vào Đức (1651), vào Pháp (1596), vào Nga (1700) Việt Nam, nhiều tài liệu cho khoai tây đợc trồng từ năm 1890 ngời Pháp mang đến Năm 1901, khoai tây đợc trồng Tú Sơn - Hải Phòng, năm 1907 đợc trồng Trà Lĩnh - Cao Bằng, năm 1917 đợc trồng Thờng Tín - Hà Tây Hiện khoai tây đợc trồng khắp nớc, đặc biệt tỉnh đồng châu thổ sông Hồng, Đà Lạt Lâm Đồng Diện tích trồng khoai tây ngày phát triển phục vụ đủ nhu cầu nớc 2.1.2 Đặc điểm sinh học 2.1.2.1 Vị trí phân loại Cây khoai tây thuộc chi gennus solanum sectio lenlota gồm 180 loại, có khả cho củ Cây khoai tây thuộc nhóm thân thảo, họ cà, thuộc loài solanum tuberosum L Theo tổng kết có khoảng 20 loài khoai tây thơng phẩm thể tứ bội (2n = 4x = 48), có khả sinh trởng phát triển cho suất cao [4] Và đợc phân loại theo bảng dới đây: Khoai tây (Solanum tuberosum L) thuộc loài S Tuberosum, chi Solanum, họ cà Solanaceae, Solanales, phân lớp Asteridae, lớp Magnoliopsida, ngành Magnoliophyta 2.1.2.2 Đặc điểm sinh thái Cây khoai tây yêu cầu khí hậu mát mẻ, ôn hoà Nhiệt độ yếu tố quan trọng ảnh hởng trực tiếp đến sinh trởng phát triển khoai tây Mỗi thời kỳ sinh trởng phát triển chúng yêu cầu nhiệt độ khác Nhiệt độ thích hợp cho hạt nảy mầm từ 18 - 20C, nhiệt độ thích hợp cho thân phát triển 20 - 22 C thời kỳ sinh trởng dinh dỡng thích ứng với biên độ nhiệt độ từ 10 - 25 C, rộng so với giai đoạn sinh trởng sinh thực Lor (1960) chứng minh nhiệt độ cao khối lợng thân, lá, củ giảm Khoai tây a sáng, cờng độ ánh sáng thích hợp cho khoai tây sinh trởng cho suất cao từ 40.000 - 60.000 lux Thời kỳ từ non đến giai đoạn hình thành củ khoai tây đòi hỏi ánh sáng ngày dài (trên 14h ánh sáng/ngày đêm) để quang hợp tích luỹ chất dinh dỡng, đồng thời hoa, đậu Thời kỳ sinh trởng sinh thực củ bắt đầu hình thành, khoai tây cần có thời gian chiếu sáng ngắn 2.1.2.3.Đặc điểm hình thái Rễ Báo cáo thực tập tốt nghiệp Trơng Thị Phơng Chi Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ Sinh học Khoai tây thuộc loại rễ chùm (nếu trồng từ củ), có rễ cọc (nếu trồng từ hạt), từ rễ cọc phát triển thành nhiều rễ phụ khác Phần lớn rễ tập trung độ sâu 30 - 40 cm, rễ phát triển củ nhng ngắn phân nhánh Rễ khoai tây phát triển mạnh thời kì hoa (ở dới mặt đất lúc hình thành củ củ bắt đầu lớn) Thân Thân khoai tây mọc thẳng, có cấu tạo zich zắc, có - cạnh, cao trung bình từ 40 - 70 cm đến - 1,2 m, tuỳ thuộc vào giống, thời vụ, điều kiện chăm sóc mà chiều cao khác Thân khoai tây thờng có màu xanh xanh nhạt hay xanh đậm, có màu phớt hồng tím tuỳ thuộc vào giống Trên thân có lớp lông tơ mềm (khi non), cứng dần rụng theo thời gian sinh trởng Lá Lá khoai tây tơng tự nh cà chua, nhng khác số điểm là: thuộc phức tạp, to, mọc cách xẻ lông chim, có - đôi mọc đối xứng qua trục lẻ (lá chét đỉnh) Lá khoai tây dài khoảng 10 - 15 cm, mặt phẳng gợn sóng, thờng to cà chua Màu sắc phụ thuộc vào giống, thời vụ, điều kiện chăm sóc mà có màu xanh, xanh đậm xanh nhạt Hoa Hoa khoai tây thờng mọc tập trung chùm hoa Nó thuộc hoa lỡng tính, có cấu tạo 5:5:5, cuống ngắn Màu sắc hoa thờng trắng bạc phớt hồng phụ thuộc vào giống, mùi vị dễ chịu Quả Khoai tây thuộc loại mọng Hình dạng tròn trái xoan Khi chín có màu trắng bạc phớt hồng, mùi vị dễ chịu Quả có từ - ngăn, bên có chứa nhiều hạt (30 - 300 hạt) Củ khoai tây Củ khoai tây phận thực phẩm cho ngời Củ khoai tây có tên gọi thân củ hay thân ngầm củ đợc hình thành thân phát triển dới đất, điều kiện bóng tối Hình dạng củ khoai tây tròn, elip, tròn dài, hình vuông Màu sắc củ tuỳ thuộc vào giống, màu trắng, trắng nhạt, vàng, vàng nhạt Trên củ có nhiều mắt ngủ nhng phân bố không đều, số lợng mắt Báo cáo thực tập tốt nghiệp Trơng Thị Phơng Chi Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ Sinh học ngủ nhiều hay tuỳ thuộc vào giống Trên mắt ngủ có mi mắt mắt: mi mắt dài hay ngắn, mắt nông hay sâu đặc tính di truyền giống mắt thờng có - mầm ngủ thờng tập trung nhiều đỉnh củ tuỳ thuộc giống, thời vụ, đất trồng điều kiện chăm sóc mà có trọng lợng củ khác [7] 2.1.3 Giá trị kinh tế dinh dỡng 2.1.3.1 Giá trị dinh dỡng Khoai tây vừa lơng thực, vừa thực phẩm có giá trị dinh dỡng cao Thành phần dinh dỡng chủ yếu củ khoai tây tinh bột (16%) đờng (1.5%), có chất xơ ( 0.5 - 1.5%), protein (1.5 - 2.1%), vitamin (20mg%), carotene (0.09%) Hàm lợng protein khoai tây cao (khoảng 2.1% tổng số hàm lợng tơi) loại lấy rễ củ Protein khoai tây thờng có chất lợng cao, hợp chất amino acid loại thực phẩm phù hợp với nhu cầu ngời Chúng giàu vitamin C - củ khoai tây cỡ vừa có khoảng nửa lợng vitamin mà ngời cần ngày Theo Burton (1974) sử dụng 100g khoai tây đảm bảo 8% nhu cầu protein, 3% nhu cầu lợng, 10% nhu cầu Fe, 10% nhu cầu vita B1, 20 - 50% nhu cầu vitamin C ngời ngày Chính khoai tây vừa lơng thực, vừa thực phẩm có giá trị dinh dỡng cao Ngoài vai trò làm lơng thực, thực phẩm thức ăn gia súc, khoai tây nguồn cung cấp nguyên liệu cho ngành công nghiệp chế biến 2.1.3.2 Giá trị kinh tế Theo FAO, sản lợng khoai tây giới hàng năm đạt khoảng 300 triệu chiếm 60 - 70% tổng sản lợng, lúa chiếm 50% tổng sản lợng củ (FAO, 1995) Về diện tích trồng khoai tây, đứng đầu Cộng hoà Liên bang Nga (3,5 triệu ha), Ba Lan (1,5 triệu ha), ấn Độ (1 triệu ha) Các quốc gia lại có diện tích trồng khoai tây dới triệu (FAO, 1996) Về sản lợng, đứng đầu Trung Quốc (trên 40 triệu tấn/năm), tiếp đến Ba Lan (24 triệu tấn/năm), Hoa Kỳ (20 triệu tấn/năm) ấn Độ (17 triệu tấn/năm) (FAO, 1996) [21] Hiện nhiều nớc nhiệt đới, khoai tây cha đợc coi lơng thực có nhiều khó khăn sản xuất bảo quản Vì mà sản lợng khoai tây Châu chiếm 7,5%, Châu Phi 0,7%, Châu Mỹ La tinh 2,6% tổng sản lợng khoai tây giới Sản lợng khoai tây nớc công nghiệp hóa chiếm 70% tổng sản lợng khoai tây giới (Tạ Thu Cúc, 2000) Báo cáo thực tập tốt nghiệp Trơng Thị Phơng Chi Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ Sinh học Theo Beukema, Varder Zaag (1979) 1kg khoai tây cho 480 kalo Nếu sử dụng 100g khoai tây đảm bảo 8% nhu cầu protein, 10% nhu cầu vitamin C ngày Tinh bột khoai tây đợc dùng công nghiệp dệt, sợi, gỗ ép giấy số nớc phát triển, ngời ta dùng khoai tây làm thức ăn gia súc, đặc biệt công nghệ tạo acid hữu (lactic, citric), dung môi hữu (ethanol, butanol, axeton) (Grion, 1986, dẫn theo Nguyễn Quang Thạch, 1993) [10] Gần ngời ta phát chất PPO (Poly phenol oxydase) vỏ khoai tây có tác dụng chống bám dính làm cho vi khuẩn không xâm nhập vào tế bào gây bệnh PPO đợc coi thứ vũ khí chống lại vi khuẩn có HIV (theo Thừa Thiên Huế năm 2000) Khoai tây cải tạo đất tốt hệ thống luân canh đợc dùng làm thuốc Thân khoai tây bào chế thuốc giảm đau, an thần, chữa bệnh thần kinh So sánh suất chất khô đơn vị diện tích trồng trọt khoai tây cho suất cao lúa mỳ 3,04 lần; lúa nớc 1,33 lần ngô 2,2 lần Ngoài tiêu thụ nớc, khoai tây mặt hàng có giá trị xuất 2.1.4 Tình hình nghiên cứu khoai tây giới Việt Nam 2.1.4.1 Tình hình nghiên cứu khoai tây giới Thấy đợc tầm quan trọng khoai tây với sản xuất lơng thực đời sống ngời, nhà khoa học giới coi chúng đối tợng nghiên cứu Từ năm 90 kỷ 20, khoai tây đối tợng ứng dụng công nghệ sinh học đứng thứ sau thuốc Với nỗ lực không ngừng để tạo giống mang đặc tính chống chịu, thích nghi cao với điều kiện ngoại cảnh, giống kháng bệnh (do nấm, virus gây ra), giống kháng côn trùng đồng thời không ngừng phục tráng, cải lơng giống khoai tây truyền thống, ngành sản xuất khoai tây thực phát triển bùng nổ khắp giới Các nhà khoa học nghiên cứu, ứng dụng hàng loạt phơng pháp, kỹ thuật công nghệ đại nhiều đối tợng khoai tây nh : kỹ thuật chọn lọc thị phân tử, nuôi cấy đỉnh sinh trởng, chuyển gen kháng virus, kháng bệnh vi khuẩn nấm gây ra, dung hợp tế bào trần, nuôi cấy bao phấn Trên giới, xu hớng đợc quan tâm tạo đợc khoai tây chuyển gen mang tính trạng mong muốn Diện tích khoai tây chuyển gen không ngừng tăng lên, đứng đầu Mỹ Cây khoai tây đợc chuyển gen kháng virus X, Y , gen kháng bệnh nấm gây ra, chuyển gen kháng sâu, côn trùng gen làm tăng sản lợng protein, tinh bột , đem lại hiệu kinh tế, tiềm xuất lớn Báo cáo thực tập tốt nghiệp Trơng Thị Phơng Chi Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ Sinh học giới Sự tổ hợp nghiên cứu, kỹ thuật tiên tiến không ngừng tạo giống khoai tây bệnh, chất lợng cao, đồng thời tăng suất, sản lợng khoai tây toàn giới Việc sử dụng củ nhỏ đợc quan tâm từ lâu cho hệ số nhân giống cao Gregory (1956) ngời nghiên cứu chất kích thích tạo củ khoai tây kích thớc nhỏ kỹ thuật in vitro Tuy nhiên, việc sản xuất theo phơng pháp gặp số khó khăn thờng sản xuất đợc vụ năm phụ thuộc vào nguồn in vitro Gần đây, hãng American Ag - Tec áp dụng công nghệ Quantum tuber cho phép sản xuất hàng triệu củ nhỏ cho năm, rút ngắn đợc thời gian tạo củ nhỏ cho năm, đặc biệt rút ngắn đợc thời gian tạo củ 40 - 50 ngày Theo ông Robert Britt, giám đốc công ty American Ag - Tec công ty sản xuất đợc khoảng 10 - 20 triệu củ/năm Điều có nghĩa cần năm nhân giống phổ biến cho diện tích khoai tây rộng lớn 2.1.4.2 Tình hình nghiên cứu khoai tây Việt Nam Bên cạnh thành tựu giá trị kinh tế to lớn mà khoai tây mang lại, có nhiều vấn đề phát sinh qua trình trồng chăm sóc, vấn đề dịch bệnh, củ giống bị thoái hóa, suất thấp, kỹ thuật chăm sóc cha hoàn thiện Đây thách thức lớn ngành nông nghiệp ảnh hởng lớn tới chất lợng sản lợng trồng Do nhiều công trình nghiên cứu thực nhằm mục đích tạo giống khoai tây bệnh, ổn định cho sản lợng cao, chất lợng tốt đáp ứng nhu cầu giống cho bà nông dân Ngày nay, công trình nghiên cứu khoai tây tập trung vào hoàn thiện kỹ thuật canh tác, vấn đề làm giảm suất khoai tây: dịch bệnh, chất lợng củ giống Việc nghiên cứu nhằm nâng cao chất lợng sản lợng tạo củ giống mini bệnh khoai tây kỹ thuật nuôi cấy mô bớc đầu nghiên cứu Có số công trình nghiên cứu đối tợng khoai tây đợc công bố Tác giả Nguyễn Quang Thạch cộng tiến hành nghiên cứu cải lơng giống khoai tây Arkersegen - giống thích ứng với điều kiện nớc ta nhng mẫn cảm với virus Y nấm Phitoprola Kết chọn lọc đợc giống chống chịu PVY mang đặc tính mong muốn [9] Tác giả Nguyễn Thị Kim Thanh (2004) tiến hành nghiên cứu ảnh hởng số nhân tố sử dụng nuôi cấy đến khả làm chậm sinh trởng khoai tây invitro cách sử dụng tác nhân: nhiệt độ thấp (6 oC) + đBáo cáo thực tập tốt nghiệp Trơng Thị Phơng Chi Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ Sinh học ờng Saccaroza (5%) + đờng Glucoza (5%) Kết làm chậm khả sinh trởng khoai tây invitro giống nghiên cứu so với giống đối chứng Các tác giả Dơng Tấn Nhựt, Phan Hoàng Anh, Trần Thị Ngọc Hơng, Phan Xuân Hơng (2005) tập trung nghiên cứu hình thành củ khoai tây bi (solanum tuberosum L) invitro trực tiếp từ đốt thân dới ảnh hởng muối nitrat nồng độ đờng sucroze môi trờng Kết nghiên cứu cho thấy: hàm lợng nitrat nồng độ đờng hai yếu tố kích thích tác động lên hình thành củ khoai tây mini in vitro Tác giả Nguyễn Quang Thạch nghiên cứu ứng dụng công nghệ khí canh nhân giống khoai tây điều kiện trái vụ Nghiên cứu nhằm giải vấn đề thiếu thoái hóa giống khoai tây Việt Nam, đồng thời giảm giá thành cho tỉ lệ sống cao củ giống ảnh hởng bình nuôi, hệ thiosulphat bạc đến sinh tr ởng, hệ số nhân chất lợng khoai tây in vitro nghiên cứu đợc tiến hành tác giả Nguyễn Thị Hơng, Nguyễn Thị Sơn, Trần Thị Thanh Minh (2005) [5] Nghiên cứu tác giả Nguyễn Văn Đính (2006) ảnh hởng việc phun bổ sung kali lên vào giai đoạn sinh trởng khác đến số tiêu sinh lý sinh hoá giống khoai tây KT3 góp phần nâng cao suất, phẩm chất củ khoai tây Các hớng nghiên cứu khác đợc tiến hành khoai tây đặt sở khoa học cho phép thực đợc nghiên cứu nâng cao chất lợng khoai tây giống, nhằm tạo giống khoai tây cho sản l ợng cao, bệnh 2.2 Nuôi cấy mô tế bào thực vật Nuôi cấy mô tế bào (NCMTB) thực vật phơng pháp sử dụng điều kiện nhân tạo để trì sống tế bào thực vật điều kiện in vitro Mục đích chung NCMTB thực vật sử dụng điều kiện nh ánh sáng, nhiệt độ, thành phần dinh dỡng, chất điều hoà sinh trởng để điều khiển trình sinh trởng phát triển tế bào, mô nuôi cấy theo mục tiêu đặt [14] 2.2.1 Vài nét lịch sử nuôi cấy mô tế bào thực vật Báo cáo thực tập tốt nghiệp 10 Trơng Thị Phơng Chi Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ Sinh học Thí nghiệm gồm công thức: + Công thức đối chứng: môi trờng MS + 1% agar + 2% saccarose + Công thức 1: môi trờng MS + 1% agar + 2% saccarose + 0,05 mg/l - NAA + Công thức 2: môi trờng MS + 1% agar + 2% saccarose + 0,10 mg/l - NAA + Công thức 3: môi trờng MS + 1% agar + 2% saccarose + 0,20 mg/l - NAA + Công thức 4: môi trờng MS + 1% agar + 2% saccarose + 0,30 mg/l - NAA + Công thức 5: môi trờng MS + 1% agar + 2% saccarose + 0,40 mg/l - NAA *) Thí nghiệm 4: ảnh hởng nồng độ BAP đến khả tạo củ khoai tây siêu bi nuôi cấy ống nghiệm Thí nghiệm gồm công thức: + Công thức đối chứng: môi trờng MS + 2% saccarose + Công thức 1: môi trờng MS + 2% saccarose + 7,5 mg/l BAP + Công thức 2: môi trờng MS + 2% saccarose + 8,0 mg/l BAP + Công thức 3: môi trờng MS + 2% saccarose + 8,5 mg/l BAP + Công thức 4: môi trờng MS + 2% saccarose + 9,0 mg/l BAP + Công thức 5: môi trờng MS + 2% saccarose + 10,0 mg/l BAP + Công thức 6: môi trờng MS + 2% saccarose + 10,5 mg/l BAP Mỗi công thức thí nghiệm tiến hành với 15 bình, bình mẫu, lặp lại lần Tiến hành theo dõi định kỳ ngày lần * Sơ đồ bố trí thí nghiệm Thí nghiệm đợc bố trí giàn nuôi, thí nghiệm đợc xếp ngẫu nhiên theo khoảng cách định Mỗi thí nghiệm đợc nhắc lại lần, lần nhắc gồm 15 bình 3.4 Các tiêu theo dõi Tỷ lệ mẫu nhiễm (%) = (Tổng số mẫu nhiễm/Tổng số mẫu cấy) x 100 Tỷ lệ mẫu chết (%) = (Tổng số mẫu chết/Tổng số mẫu cấy) x 100 Tỷ lệ mẫu sống (%) = (Tổng số mẫu sống/Tổng số mẫu cấy) x 100 Tỷ lệ tạo chồi (%) = (Số lõi củ tạo chồi/Tổng số lõi củ đa vào) x 100 - Lá/thân Báo cáo thực tập tốt nghiệp 21 Trơng Thị Phơng Chi Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ Sinh học - Số chồi/cây - Chiều cao thân - Thời gian xuất củ - Số củ/cây 3.5 Phơng pháp xử lý số liệu Sử dụng phơng pháp thống kê sinh học để xử lý số liệu thí nghiệm (IRRISTAT 4.0) Sử dụng phần mềm Exel để xử lý kết Báo cáo thực tập tốt nghiệp 22 Trơng Thị Phơng Chi Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ Sinh học PHầN 4: KếT QUả Và THảO LUậN 4.1 Kết nghiên cứu thời gian nồng độ chất khử trùng Trong kỹ thuật nuôi cấy mô, phơng pháp khử trùng quan trọng, định đến thành công trình nuôi cấy in vitro Tuỳ theo tiếp xúc mẫu với môi trờng mà chứa nhiều hay mầm bệnh vi sinh vật nh nấm, vi khuẩn Vì cần phải có chế độ khử trùng hợp lý cho kết tốt Phơng pháp khử trùng mẫu cấy thông dụng dùng hoá chất có khả tiêu diệt vi sinh vật nh: Canxi hypoclorit, Natri hypoclorit, Clorua thuỷ ngân, nớc Javen, chất kháng sinh Hoá chất đợc sử dụng làm chất khử trùng mẫu cần đảm bảo hai đặc tính: có khả diệt vi sinh vật tốt không độc độc mức độ thấp với thực vật Chế độ khử trùng tốt cần đảm bảo vô trùng, tỉ lệ mẫu nhiễm thấp, tỉ lệ mẫu sống cao, mẫu có khả phân hoá sinh trởng phát triển tốt Hiệu lực diệt nấm khuẩn chất phụ thuộc vào thời gian xử lý, nồng độ khả xâm nhập chúng vào kẽ ngách lồi lõm bề mặt mô cấy Thông thờng ngời ta xử lý mô cấy cồn 70% vòng 30 giây sau xử lý diệt khuẩn Trong nghiên cứu này, tiến hành khử trùng mẫu mầm khoai tây khoẻ có kích thớc từ 1,5cm - 2,0cm cồn 70% thời gian phút, sau xử lý dung dịch HgCl 1%, khoảng thời gian phút đến phút, tráng lại mầm nớc cất vô trùng Mầm khử trùng đợc cấy vào môi trờng MS bản, bổ sung agar 1% saccarose 2% Sau tuần nuôi cấy, thu đợc bảng kết sau: Bảng 4.1 ảnh hởng thời gian khử trùng đến khả sống mầm không bị nhiễm Thời gian khử trùng Tỷ lệ sống mầm không bị bệnh (%) HgCl2 (sau tuần) (phút) Solara Diamant Báo cáo thực tập tốt nghiệp 23 Trơng Thị Phơng Chi Trờng Cao đẳng Nông Lâm 45,3 51,6 69,1 81,6 72,5 47,7 Khoa Công nghệ Sinh học 42,4 54,5 71,6 82,3 75,3 42,5 Kết đợc thể hình 4.1 Hình 4.1 Biểu đồ thể ảnh hởng thời gian khử trùng đến khả sống mầm không bị nhiễm Kết cho thấy, thời gian khử trùng cho giống khoai tây nuôi cấy in vitro HgCl2 1% khác cho tỷ lệ sống mầm không bị bệnh khác biệt rõ rệt Khi khử trùng mẫu công thức (cồn 70 o phút HgCl2 1% phút ) cho tỷ lệ sống mầm không bị bệnh thấp nhất: giống Solara 45,3% Diamant 42,4% Giữ nguyên thời gian khử trùng với cồn 70o phút tăng thời gian khử trùng với HgCl2 1% lên phút (công thức 4) nuôi cấy môi trờng MS có bổ sung thêm agar 1% saccarose 2% thấy tỷ lệ sống mầm không bị bệnh giống đạt hiệu cao nhất:giống Diamant 82,3% giống Solara 81,6% Nh vậy, để thu đợc mầm sống cao đáp ứng điều kiện vô trùng nuôi cấy in vitro nên chọn khử trùng mẫu công thức thời gian khử trùng với cồn 70 o phút Báo cáo thực tập tốt nghiệp 24 Trơng Thị Phơng Chi Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ Sinh học HgCl2 1% nuôi cấy môi trờng MS có bổ sung agar 1% saccarose 2% Vỡ vy, cỏc ging khoai tõy c la chn kh trựng bng cồn 70o phút HgCl2 1% thi gian phỳt cỏc thớ nghim tip theo Sau xỏc nh thi gian kh trựng mm cỏc ging khoai tõy thớch hp khong thi gian phỳt vi nng HgCl 1% cồn 70o phút, tụi tin hnh nghiờn cu s nh hng ca nng HgCl cỏc nng : 0,25%, 0,50%, 0,75%, 1,00%, 1,25%, 1,50% n hiu qu kh trựng thi gian phỳt Kt qu c thng kờ bng thí nghiệm sau: Bảng 4.2 ảnh hởng nồng độ HgCl2 tới khả sống mầm không bị nhiễm Nồng độ HgCl2 (%) 0,25 0,50 0,75 Tỷ lệ sống mầm không bị nhiễm(%) sau tuần Solara Diamant 5,00 4,25 10,83 11,25 34,81 33,62 1,00 1,50 81,33 40,09 83,18 36,27 Kết đợc thể hình 4.2 Báo cáo thực tập tốt nghiệp 25 Trơng Thị Phơng Chi Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ Sinh học Hình 4.2 Biểu đồ thể ảnh hởng nồng độ HgCl2 tới khả sống mầm không bị nhiễm Kết hình 4.2 cho thấy, nồng độ HgCl2 khác cho tỷ lệ sống mầm không bị nhiễm khác nồng độ HgCl2 0,25% (công thức 1) cho tỷ lệ sống mầm không bị nhiễm hai giống thấp: giống Solara 5,00% giống Diamant 4,25% Trong ú, tăng nng HgCl2 lên 1% (công thức 4) so với công thức cho t l mm sng khụng b nhim ca c ging l cao nht: giống Solara 81,33 giống Diamant 83,18% Vỡ vy, mu nghiờn cu cú kh nng sng v khụng b nhim vi hiu sut cao ng thi m bo cho cỏc thớ nghim tip theo thỡ nng HgCl2 1% vi thi gian x lý l phỳt kh trựng mm khoai tõy l thớch hp nht 4.2 ảnh hởng NAA đến khả sinh trởng chồi giống khoai tây nuôi cấy in vitro - NAA hormon sinh trởng thuộc nhóm auxin, - NAA đợc đa vào môi trờng nuôi cấy nhằm thúc đẩy sinh trởng giãn nở tế bào, tăng cờng trình sinh tổng hợp trao đổi chất, kích thích hình thành Báo cáo thực tập tốt nghiệp 26 Trơng Thị Phơng Chi Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ Sinh học rễ tham gia vào cảm ứng phát sinh chồi vô tính Nói chung, auxin th ờng đợc sử dụng từ 0,1mg/l 2mg/l Chúng có hiệu sinh lý nồng độ thấp Các mầm sau khử trùng đợc cấy chuyển lên môi trờng nhân chồi dựa MS bổ sung agar 1%, saccarose 2%, - NAA với nồng độ từ 0,05mg/l đến 0,40mg/l Đối chứng môi trờng MS bổ sung agar 1%, saccarose 2%, kích thích sinh tr ởng Kết đợc trình bày bảng 3: Bảng 4.3 ảnh hởng - NAA đến khả sinh trởng chồi giống khoai tây nuôi cấy in vitro Các tiêu sau khoảng thời gian theo dõi (ngày) Nồng độ NAA (mg/l) ĐC 0,05 0,10 0,20 0,30 0,40 Sau ngày Sau 14 ngày Chiều Lá/ Chồi/ cao Lá/ thân thân Thân Chồi/ chính (cm) 1,81 1,04 2,11 3,49 1,56 2,04 1,15 2,65 5,12 2,78 2,15 1,34 2,85 5,18 2,52 2,17 1,36 2,94 5,21 2,18 2,24 1,38 3,11 5,17 2,49 2,32 1,45 3,21 5,24 2,56 Sau 21 ngày Chiều Lá/ cao thân Chồi/ thân chính (cm) 4,16 5,34 2,92 4,58 7,26 3,45 4,36 7,35 3,15 4,39 7,37 3,50 4,62 7,31 3,55 4,51 7,27 3,42 Chiều cao thân (cm) 6,07 6,54 6,63 6,47 6,40 6,62 Kết cho thấy, - NAA có ảnh hởng rõ đến khả sinh trởng chồi khoai tây nuôi cấy in vitro Hầu hết lô thí nghiệm có bổ sung NAA cho tiêu số lá/ thân chính, số chồi/ chiều cao thân cao so với đối chứng (ĐC) không bổ sung - NAA Tuy nhiên, thang nồng độ - NAA khác ảnh hởng - NAA đến tiêu sinh trởng chồi sai khác rõ rệt Vì vậy, để giảm chi phí Báo cáo thực tập tốt nghiệp 27 Trơng Thị Phơng Chi Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ Sinh học cho trình nuôi cấy nên sử dụng - NAA 0,05mg/l bổ sung vào môi trờng nhân chồi 4.3 ảnh hởng nồng độ BAP tới khả tạo củ bi ống nghiệm Khi chồi môi trờng nhân chồi có chiều cao từ 4cm đến 7cm với - (sau khoảng - tuần) đợc sử dụng để tạo củ Các đợc cắt thành đoạn có kích thớc khoảng 2cm để nuôi cấy môi trờng lỏng (các mẫu thí nghiệm đợc cấy vào bình 250ml với số lợng 5mẫu/ bình sau lựa chọn để lại mẫu phát triển tốt bình thí nghiệm) Khi mẫu sinh trởng kín bình (khoảng 15 ngày sau nuôi cấy) tác giả tiến hành bổ sung môi trờng tạo củ dựa môi trờng MS bản, bổ sung saccarose 2% BAP với nồng độ khác từ 7,5mg/l đến 10,5mg/l Đối chứng môi trờng MS bản, bổ sung saccarose 2%, BAP Kết thí nghiệm đợc thể bảng 4.4 sau: Bảng 4.4 ảnh hởng nồng độ BAP đến khả tạo củ khoai tây siêu bi nuôi cấy ống nghiệm Thời gian xuất Số củ /cây củ Nồng độ Sau 42 ngày Sau 56 ngày (ngày) BAP (mg/l) Solara Diamant Solara Diamant Solara Diamant ĐC 7,5 42 16 11 37 13 3,1 5,2 6,8 3,3 5,7 7,2 4,6 7,2 7,6 5,1 7,3 7,8 10,0 6 5 8,2 9,8 9,7 7,9 8,4 8,2 8,5 10,6 9,8 8,1 8,7 8,6 10,5 5 9,2 7,9 9,0 8,1 8,0 8,5 9,0 Báo cáo thực tập tốt nghiệp 28 Trơng Thị Phơng Chi Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ Sinh học Hình 4.3 Biểu đồ thể ảnh hởng nồng độ BAP đến thời gian xuất củ Hình 4.4 Biểu đồ ảnh hởng nồng độ BAP đến số củ sau 42 ngày Báo cáo thực tập tốt nghiệp 29 Trơng Thị Phơng Chi Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ Sinh học Hình 4.5 Biểu đồ ảnh hởng nồng độ BAP đến số củ sau 56 ngày Kết cho thấy, BAP có ảnh hởng rõ rệt đến thời gian xuất củ số lợng trung bình củ/ Khi nồng độ BAP tăng từ 7,5mg/l đến 10,5mg/l thời gian xuất củ tất giống sớm so với đối chứng từ 22 ngày đến 37 ngày số lợng trung bình củ/ tăng Với nồng độ BAP trung bình 9,0mg/l 9,5mg/l giống Solara Diamant có thời gian xuất củ sau đến ngày Sau 56 ngày theo dõi, công thức đối chứng cho trung bình củ/ cây, công thức thí nghiệm đạt đến 10 củ/ Bổ sung BAP với nồng độ cao 9,5 mg/l làm giảm số lợng củ Trong giống nghiên cứu giống Diamant có khả tạo củ giống Solara Khi nồng độ BAP cao 9,5mg/l số lợng trung bình củ/ có dấu hiệu giảm xuống so với môi trờng có BAP từ 9,0mg/l đến 9,5mg/l Qua kết nghiên cứu thấy môi trờng MS có bổ sung BAP 9,5mg/l tốt cho tạo củ khoai tây siêu bi ống nghiệm Báo cáo thực tập tốt nghiệp 30 Trơng Thị Phơng Chi Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ Sinh học Phần 5: kết luận đề nghị 5.1 kết luận - Xác định đợc nồng độ HgCl2 % phút cho tỷ lệ mầm sống vô trùng hai giống Diamant Solara cao đạt 72% - 83% - Sử dụng môi trờng MS bản, bổ sung agar 1%, saccarose 2%, -NAA nồng độ từ 0,05mg/l đến 0,40mg/l sai khác rõ rệt tiêu liên quan đến sinh trởng chồi Vì vậy, để giảm chi phí cho trình nuôi cấy, cần bổ sung - NAA 0,05mg/l vào môi trờng nhân chồi - Bổ sung BAP từ 7,5 mg/l đến 10,5 mg/l làm rút ngắn thời gian xuất củ đồng thời làm tăng số củ/cây Môi trờng thích hợp cho củ siêu bi khoai tây ống nghiệm: MS + agar 1% + saccarose 2% + BAP 9,5 mg/l 5.2 Đề nghị Trên kết mà thu đợc nghiên cứu ảnh hởng số nồng độ trình nhân nhanh khoai tây siêu bi phơng pháp in vitro Do thời gian làm thí nghiệm phòng tác nghiệp nuôi cấy mô Trung tâm thông tin ứng dụng chuyển giao tiến khoa học công nghệ thuộc sở Khoa học công nghệ Bắc Ninh có hạn nên kết nhiều hạn chế Do kết luận mang tính tơng đối Tuy nhiên nhu cầu sản xuất củ khoai tây siêu bi bệnh giới Việt Nam đợc quan tâm, mong có nghiên cứu để xây dựng quy trình hoàn thiện nhân nhanh giống khoai tây siêu bi bệnh góp phần tạo giống trồng cho suất cao, bệnh để bớc đầu thử ngiệm đồng ruộng định hớng thay cho giống trồng chất lợng tơng lai Tài liệu tham khảo Tài liệu tiếng việt Hoàng Thị Bé, Atlas Khuẩn Lam - Nấm - Thực Vật, NXB Đại học S phạm, 2004 Báo cáo thực tập tốt nghiệp 31 Trơng Thị Phơng Chi Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ Sinh học Tạ Thu Cúc, Hồ Hữu An, Nghiêm Thị Bích Hà, Giáo trình rau, NXB Nông nghiệp, 2000 Tạ Thu Cúc, Giáo trình rau, NXB Nông nghiệp, 2000 Võ Văn Chi, Vũ Văn Chuyên CS (1969), Cây khoai tây, trích Cây cỏ thờng thấy Việt Nam, tập IV, NXB Nông nghiệp, 1969 Nguyễn Thị Thanh Huyền, ảnh hởng yếu tố môi trờng nuôi cấy đến tỷ lệ tạo mô sẹo tái sinh số nguồn gen lúa khác nhau, Luận văn Thạc sĩ Khoa học Nông nghiệp (KHNN), 2002 Hoàng Thị Hiền, Lê Thị Thuỷ, Phan Xuân Tùng, Kết nghiên cứu sử dụng củ nhỏ siêu nhỏ sản xuất khoai tây Trơng Văn Hộ, Cây khoai tây NXB Nông nghiệp Hà Nội, 2005 Trơng Văn Hộ, Những kết nghiên cứu tiến khoa học kỹ thuật khoai tây, NXB Nông nghiệp, 1990 Nguyễn Văn Nghi, Chuyên đề sinh lý công nghệ tế bào thực vật, ĐHQG Hà Nội - Đại học Khoa học Tự nhiên, 1998 10 Nguyễn Quang Thạch, số biện pháp khắc phục thoái hoá giống khoai tây Solanum tuberosum L đồng Bắc Bộ, Luận án PTS KHNN Trờng Đại học Nông nghiệp Hà Nội, 1993 11 Nguyễn Đức Thành, nuôi cấy mô tế bào thực vật nghiên cứu ứng dụng, NXB Nông nghiệp - Hà Nội, 2000 12 Lê Văn Trí, Giáo trình thực vật rừng, Đại học Nông lâm Thành phố Hồ Chí Minh, 1993 13 Nguyễn Văn Uyển tác giả, Nuôi cấy mô thực vật phục vụ công tác giống trồng, NXB Nông nghiệp, 1993 14 Vũ Văn Vụ, Vũ Thanh Tâm, Hoàng Minh Tâm, Sinh lý học thực vật, NXB Giáo dục Hà Nội, 2007 15 Vũ Văn Vụ - Nguyễn Mộng Hùng - Lê Hồng Điệp, Công nghệ sinh học, NXB Giáo dục, tập II, 2006 16 Vũ Văn Vụ, Sinh lý thực vật ứng dụng, NXB Giáo dục Hà Nội, 1999 17 Đỗ Năng Vịnh, Công nghệ tế bào thực vật ứng dụng, NXB Nông nghiệp Hà Nội, 2005 Tài liệu tiếng anh 18 Collin H.A., Plant Cell Culture, Bios scientific publishers, 1998 Báo cáo thực tập tốt nghiệp 32 Trơng Thị Phơng Chi Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ Sinh học 19 Narayanaswamy S., Plant Cell and Tissue Culture, Tataca Mc Graw Hill Publishing company limited, New Delhi, 1994 20 Smith R.H., Plant Tissue Culture, Departmen of soil and crop science, 1992 21 FAO Quaterly bulletin of statisties Vol No 3/4 - 1996 Tài liệu mạng 22.http://vietbao.vn/suc-khoe/crila-duoc-chi-dinh-dieu-tri-u-xo-tucung/45264057/248/ 23.http://www.Cuctrongtrot.gov.vn/?index = h&id = 815 Báo cáo thực tập tốt nghiệp 33 Trơng Thị Phơng Chi Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ Sinh học Mục lục PHầN 1: Mở đầu 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục tiêu, ý nghĩa 1.2.1 Mục tiêu 1.2.2 ý nghĩa khoa học thực tiễn 1.2.3 Đối tợng phạm vi nghiên cứu 1.2.3.1 Đối tợng nghiên cứu 1.2.3.2 Phạm vi nghiên cứu .2 1.2.3.2.1 Địa điểm nghiên cứu 1.2.3.2.2 Thời gian nghiên cứu PHầN tổng quan tài liệu 2.1 Khái quát khoai tây 2.1.1 Nguồn gốc phân bố .4 2.1.1.1 Nguồn gốc .4 2.1.1.2 Phân bố 2.1.2 Đặc điểm sinh học 2.1.2.1 Vị trí phân loại 2.1.2.2 Đặc điểm sinh thái 2.1.2.3.Đặc điểm hình thái 2.1.3 Giá trị kinh tế dinh dỡng .7 2.1.3.1 Giá trị dinh dỡng 2.1.3.2 Giá trị kinh tế 2.1.4 Tình hình nghiên cứu khoai tây giới Việt Nam 2.1.4.1 Tình hình nghiên cứu khoai tây giới .8 2.1.4.2 Tình hình nghiên cứu khoai tây Việt Nam 2.2 Nuôi cấy mô tế bào thực vật .10 2.2.1 Vài nét lịch sử nuôi cấy mô tế bào thực vật .10 2.2.2 Các kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật .12 2.2.3 Các yếu tố ảnh hởng tới nuôi cấy mô tế bào thực vật 13 2.2.3.1 ảnh hởng yếu tố môi trờng nuôi cấy 13 2.2.3.3 ảnh hởng chất điều hoà sinh trởng vitamin 15 2.2.4 ứng dụng nuôi cấy mô tế bào thực vật nhân giống in vitro 17 Phần 3: vật liệu - nội dung - phơng pháp nghiên cứu .19 3.1 Vật liệu nghiên cứu 19 3.2 Nội dung nghiên cứu 19 3.3 Phơng pháp nghiên cứu .19 3.4 Các tiêu theo dõi 21 3.5 Phơng pháp xử lý số liệu 22 PHầN 4: KếT QUả Và THảO LUậN .23 Báo cáo thực tập tốt nghiệp 34 Trơng Thị Phơng Chi Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ Sinh học 4.1 Kết nghiên cứu thời gian nồng độ chất khử trùng 23 4.2 ảnh hởng NAA đến khả sinh trởng chồi giống khoai tây nuôi cấy in vitro 26 Phần 5: kết luận đề nghị 31 5.1 kết luận 31 5.2 Đề nghị 31 Tài liệu tham khảo 31 Tài liệu tiếng việt 31 Tài liệu tiếng anh 32 Tài liệu mạng 33 Báo cáo thực tập tốt nghiệp 35 Trơng Thị Phơng Chi [...]... đợc trung tâm nghiên cứu cây có củ cung cấp, đảm bảo có chất lợng tốt, không bị sâu bệnh 3.2 Nội dung nghiên cứu - Nhân giống khoai tây củ siêu bi bằng phơng pháp in vitro + Nghiên cứu ảnh hởng và thời gian của chất khử trùng HgCl 2 đến khả năng sống của mầm + ảnh hởng của nồng độ -NAA đến khả năng sinh trởng chồi của các giống khoai tây + ảnh hởng của nồng độ BAP tới khả năng tạo củ trong ống nghiệm... cầu sản xuất củ khoai tây siêu bi sạch bệnh trên thế giới và ở Việt Nam đang đợc quan tâm, vì vậy chúng tôi mong rằng có những nghiên cứu tiếp theo để xây dựng quy trình hoàn thiện về nhân nhanh giống khoai tây siêu bi sạch bệnh góp phần tạo ra giống cây trồng cho năng suất cao, sạch bệnh để bớc đầu thử ngiệm ngoài đồng ruộng định hớng thay thế cho những giống cây trồng kém chất lợng trong tơng lai... Khoa Công nghệ Sinh học Hình 4.2 Bi u đồ thể hiện ảnh hởng của nồng độ HgCl2 tới khả năng sống của mầm không bị nhiễm Kết quả ở hình 4.2 cho thấy, nồng độ HgCl2 khác nhau thì cho tỷ lệ sống của mầm không bị nhiễm khác nhau ở nồng độ HgCl2 0,25% (công thức 1) cho tỷ lệ sống của mầm không bị nhiễm ở cả hai giống là rất thấp: giống Solara 5,00% và giống Diamant 4,25% Trong ú, tăng nng HgCl2 lên 1% (công... nội dung - phơng pháp nghiên cứu 3.1 Vật liệu nghiên cứu Củ các giống khoai tây nhập nội: - Giống Diamant: là giống khoai tây nhập nội, chọn lọc từ tập đoàn khoai tây Hà Lan, giống có thời gian sinh trởng 85 - 90 ngày Chống chịu sâu bệnh khá, kháng bệnh mốc sơng và virus Ruột củ màu vàng, chất lợng khá, đạt tiêu chuẩn chế bi n Năng suất từ 18 - 22 tấn/ha - Giống Solara: là giống của Đức,đợc công nhận... Phơng pháp này để nghiên cứu điều kiện sinh trởng đối với một bộ phận hoặc một mô của cây in vitro, tạo thành mô sẹo phục vụ cho các nghiên cứu cơ bản nh chọn dòng tế bào; đột bi n xoma và ứng dụng phân hoá tế bào, cơ quan Nuôi cấy mô phân sinh: Đợc dùng trong các trờng hợp tạo những giống cây sạch bệnh và nhân giống in vitro; tạo cây đa bội thông qua xử lý colchicin và nghiên cứu quá trình hình thành... thể hiện ảnh hởng của thời gian khử trùng đến khả năng sống của mầm không bị nhiễm Kết quả cho thấy, thời gian khử trùng cho các giống khoai tây trong nuôi cấy in vitro bằng HgCl2 1% khác nhau thì cho ra tỷ lệ sống của mầm không bị bệnh khác bi t nhau rõ rệt Khi khử trùng mẫu ở công thức 1 (cồn 70 o trong 1 phút và HgCl2 1% trong 3 phút ) cho tỷ lệ sống của mầm không bị bệnh là thấp nhất: giống Solara... Đề nghị Trên đây là những kết quả mà chúng tôi thu đợc khi nghiên cứu ảnh hởng của một số nồng độ trong quá trình nhân nhanh khoai tây siêu bi bằng phơng pháp in vitro Do thời gian làm thí nghiệm tại phòng tác nghiệp nuôi cấy mô của Trung tâm thông tin và ứng dụng chuyển giao tiến bộ khoa học công nghệ thuộc sở Khoa học công nghệ Bắc Ninh của chúng tôi có hạn nên kết quả còn nhiều hạn chế Do đó kết... 10 củ/ cây Bổ sung BAP với nồng độ cao hơn 9,5 mg/l đã làm giảm số lợng củ trên cây Trong 2 giống nghiên cứu thì giống Diamant có khả năng tạo củ kém hơn giống Solara Khi nồng độ BAP cao hơn 9,5mg/l thì số lợng trung bình củ/ cây có dấu hiệu giảm xuống so với môi trờng có BAP từ 9,0mg/l đến 9,5mg/l Qua kết quả nghiên cứu chúng ta thấy rằng môi trờng MS có bổ sung BAP 9,5mg/l là tốt nhất cho sự tạo củ. .. Hình 4.3 Bi u đồ thể hiện ảnh hởng nồng độ BAP đến thời gian xuất hiện củ đầu tiên Hình 4.4 Bi u đồ ảnh hởng nồng độ BAP đến số củ trên cây sau 42 ngày Báo cáo thực tập tốt nghiệp 29 Trơng Thị Phơng Chi Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ Sinh học Hình 4.5 Bi u đồ ảnh hởng nồng độ BAP đến số củ trên cây sau 56 ngày Kết quả cho thấy, BAP có ảnh hởng rõ rệt đến thời gian xuất hiện củ và số lợng trung... dụng kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật để nhân giống cây trồng trong ống nghiệm Với phơng pháp này hoàn toàn có thể tạo ra một quần thể cây trồng đồng đều giữ nguyên đặc tính của cây mẹ, có hệ số nhân giống và hiệu quả kinh tế cao, không tốn diện tích nhân giống Hiện nay, đã có nhiều quy trình nhân giống in vitro của nhiều loài thực vật Nhìn chung, các quy trình gồm 5 giai đoạn [11], [18]: Giai đoạn ... 1992 21 FAO Quaterly bulletin of statisties Vol No 3/4 - 1996 Tài liệu mạng 22.http://vietbao.vn/suc-khoe/crila-duoc-chi-dinh-dieu-tri-u-xo-tucung/45264057/248/ 23.http://www.Cuctrongtrot.gov.vn/?index... củ đa vào) x 100 - Lá/thân Báo cáo thực tập tốt nghiệp 21 Trơng Thị Phơng Chi Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ Sinh học - Số chồi/cây - Chiều cao thân - Thời gian xuất củ - Số củ/cây 3.5... 5.1 kết luận - Xác định đợc nồng độ HgCl2 % phút cho tỷ lệ mầm sống vô trùng hai giống Diamant Solara cao đạt 72% - 83% - Sử dụng môi trờng MS bản, bổ sung agar 1%, saccarose 2%, -NAA nồng độ