LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành đề tài tơi nhận giúp đỡ nhiệt tình thầy cơ,bè bạn gia đình Trước hết cho gửi lời cảm ưn sâu sắc đến Th.s Nguyễn Thị Thuý Liên bảo giúp đỡ tơi tận tình suốt thời gian tơi thực tập Tôi xin chân thành cảm ơn T.S Nguyễn Ngọc Hùng – Trưởng môn CNSH –Viện nghiên cứu rau -Hà Nội ,cùng TH.S Đồn Thị Thuỳ Vân anh Minh Phú tất người viện nghiên cứu rau tạo điều kiện giúp tơi hồn thành đề tài Cuối cho tơi bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến gia đình ,bè bạn người ln động viên ,giúp đỡ tơi suốt q trình học tập thực đề tài Trường Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học Phần 1: Mở đầu 1.Đặt vấn đề Hoa đồng tiền (Gerrbera sp.) 10 lồi hoa có nhu cầu sử dụng nhiều giới, có đặc điểm lưu niên hoa quanh năm, suất cao, hoa bền, đẹp, màu sắc phong phú, người tiêu dùng ưa chuộng Hoa đồng tiền có mặt nhiều nước giới, lượng hoa thưong mại lớn tập trung chủ yếu số nước như: Hà Lan, Đan Mạch, Bungari, Đức, Pháp…Ở Châu Á, nước có sản lượng hoa đồng tiền cao Trung Quốc, Ấn Độ, Nhật Bản…Hiện hoa đồng tiền chiếm vị trí quan trọng phát triển nơng nghiệp nhiều quốc gia giới Cây hoa đồng tiền di nhập vào Việt Nam từ đầu kỷ 20, có vùng trồng thương mại Hà Nội, Đà Lạt thành phố Hồ Chí Minh Tuy nhiên, hoa đồng tiền trồng ban đầu loại hoa cánh đơn, nhỏ, màu sắc đơn điệu, suất thấp, chất lượng hoa kém, phát triển nhỏ lẻ hộ gia đình, người tiêu dùng để ý tới, bên cạnh đó, nghiên cứu hoa đồng tiền hạn chế Trong thập kỷ trở lại đây, nhờ tiến khoa học kỹ thuật, nhà chọn tạo giống Hà Lan, Nhật Bản tạo nhiều giống hoa đồng tiền với màu sắc hoa, hình dạng hoa phong phú, đa dạng Đặc biệt, việc tạo giống hoa đồng tiền kép có cánh dày, độ bền lâu thay đổi hẳn thị hiếu người chơi hoa hoa đồng tiền trở nên gần gũi, thân thiết với người tiêu dùng Cùng với phát triển kinh tế nước ta, nhu cầu chơi hoa nói chung hoa đồng tiền nói riêng trở nên phổ biến nhà, người Trước nhu cầu đó, năm qua nhiều nhà sản xuất nhập số giống đồng tiền từ Hà Lan, Trung Quốc trồng kết số giống phát huy ưu điểm trội Báo cáo tốt nghiệp Phan Thị Thảo - 8K Trường Cao đẳng Nơng Lâm Khoa Cơng nghệ sinh học có giống khơng phù hợp với điều kiện khí hậu Việt Nam Do việc nghiên cứu chọn tạo giống hoa đồng tiền hoa chậu hoa cắt thích nghi với điều kiện khí hậu nước ta vô cấp thiết nhằm nâng cao hiệu sản xuất, tăng thu nhập cho người dân cho Quốc gia Xuất phát từ thực tế đó, chúng tơi tiến hành đề tài : Nghiên cứu áp dụng phương pháp nhân giống hoa đồng tiền kỹ thuật invitro vào sản xuất quy mơ lớn 2.Mục đích u cầu đề tài Nghiên cứu hồn thiện quy trình nhân nhanh hoa đồng tiền kĩ thuật nuôi cấy mô tế bào,trong điều kiện nuôi cấy invitro Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn 3.1 Ý nghĩa khoa học Sử dụng công nghệ nuôi cấy mô tế bào làm tăng hệ số nhân chồi 3.2 Ý nghĩa thực tiễn Đưa quy trình nhân nhanh giống hoa đồng tiền đạt hiệu Báo cáo tốt nghiệp Phan Thị Thảo - 8K Trường Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học Phần Tổng quan tài liệu 1.Nguồn gốc hoa đồng tiền: Cây hoa đồng tiền có tên khoa học Gerbera sp., thuộc họ Compositae, có nguồn gốc Nam Phi Nó phát Robert Jamerson, người Scotsland vào năm 1880 làm bãi khai thác vàng gần Bardedton vùng Trausvạl Nam Phi Ông tặng cho vườn thực vật Durdan người phụ trách khu vườn ông John Med Leywood gửi mẫu tới Harry Bolies thị trấn Cape Nam Phi Sau đó, ơng Bolies gửi tới vườn thực vật hoàng Gia Anh để phân loại nhân biết ông dề nghị đặt tên khoa học cho loài Gerbera Jamesonii Năm 1890, Richard Irwin Lynch ( người Anh) bắt đầu thực chương trình tạo giống tạo nhiều giống cải tiến ([Kessler, Jr Greenhouse production of Gerbera daisier ) Đầu năm 20 kỷ XX, hoa đồng tiền chưa sản xuất Bắc Mỹ, sau việc nhân giống tiến hành rộng rãi California suốt năm 70 ([Kessler, Jr Greenhouse production of Gerbera daisier ) Ở Việt Nam, hoa đồng tiền người Pháp đưa vào từ đầu kỷ 20 phát triển ngày Tuy nhiên chủ yếu giống đồng tiền đơn, hoa nhỏ Hoa đồng tiền kép du nhập vào Việt Nam vài năm gần (Đặng Văn Đông, Đinh Lộc,2004) hệ thống phân loại thực vật, hoa đồng tiền thuộc: Lớp hai mầm, phân lớp cúc (Asteridae), cúc (Asterales), họ cúc (Asteraceae), chi Gerbera ( Trần Hợp, 1999) [ ] Báo cáo tốt nghiệp Phan Thị Thảo - 8K Trường Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học Giá trị sử dụng 2.1 Giá trị thương mại giống hoa đồng tiền Với đặc điểm màu sắc tươi sáng, phong phú, đa dạng với đủ loại màu, hoa có màu đơn nhiều màu xen kẽ, hoa to, cứng, nên hoa đồng tiền loại lý tưởng để làm hoa bó, lẵng hoa cắm hoa nghệ thuật…Ngồi đồng tiền trồng chậu để chơi chậu suốt thời gian dài, đặt phòng làm việc, phòng khách phù hợp Hoa đồng tiền loại hoa có sản lượng giá trị cao Ở điều kiện thích hợp hoa quanh năm Tỷ lệ cành cắt tỷ lệ hoa thương phẩm cao Kỹ thuật trồng trọt chăm sóc đơn giản, tốn cơng, đầu tư lần cho thu hoạch liên tục từ – năm [Đặng Văn Đông Đinh Thế Lộc (2004) [ Công nghệ trồng hoa cho thu nhập cao ] Hiện nay, Việt Nam loài hoa ý phát triển, hoa đồng tiền kép nhập nội cịn gọi đồng tiền Nam Phi lên cho hiệu kinh tế cao Từ sào đồng tiền giống mới, chăm sóc kỹ thuật cho thu nhập gần 50 triệu đồng/sào (Nguyễn Quang Thạch,2004) Theo Đặng Văn Đông Đinh Thế Lộc (2004) , trồng hoa đồng tiền mang lại giá trị thu nhập cao lồi hoa thơng dụng Trồng sào đồng tiền, chăm sóc theo yêu cầu kỹ thuật năm thu 60.000 bông/sào (mật độ 2000 cây/sào) Với giá bán buôn vườn 700 - 1500 đồng/ bơng, trung bình 900 đồng/bông, tổng thu 54 triệu đồng/ sào /năm Như vậy, thực canh tác kỹ thuật với mức giá bán khiêm tốn năm đầu trồng hoa đồng tiền thu hồi toàn vốn bỏ 29.700.000đồng/sào, đồng thời lãi sấp xỉ 24 triệu đồng/sào Năm 1993, hoa đồng tiền đứng thứ số 10 loại hoa cắt có giá trị kinh tế giới, đến năm 1994, vươn lên vị trí thứ Sức Báo cáo tốt nghiệp Phan Thị Thảo - 8K Trường Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học tiêu thụ hoa thương mại Hà Lan tăng 12,1% qua năm (từ 1993 1994) Trong tương lai nhu cầu hoa đồng tiền giới tăng mạnh mẽ ((RAO A.N ed, 1982 Tissue culture of economically important plant.Gerbera, pp 227) Chính vậy, diện tích trồng hoa đồng tiền Việt Nam ngày mở rộng, lượng tiêu thụ giá ngày tăng, dễ tiêu thụ thị trường nước giới 2.2 Giá trị thẩm mỹ giống hoa đồng tiền Với nhiều loại chủng loại khác đa dạng màu sắc từ màu trắng , đỏ,da cam ,vàng ,hồng đến tím Hoa đồng tiền nhanh chóng chiếm vị trí cao thị trường hoa Cụm hoa dạng đầu có bề ngồi dường bônghoa thực tế tập hợp hàng trăm hoa nhỏ riêng biệt Từ hoa có màu đơn nhiều màu xen kẽ ,ở phần trung tâm hoa có màu đên.hoa to cứng nên lí tưởng để làm bó hoa ,lẵng hoa bó hoa nghệ thuật ưa chuộng Ngồi trồng đồng tiền chậu đặt phòng làm việc ,phòng khách đẹp 3.Tình hình sản xuất hoa đồng tiền 3.1 Sản xuất hoa đồng tiền giới Hiện nay, giới hoa đồng tiền 10 loài hoa cắt quan trọng sau hồng, cúc, lan, cẩm chướng, lay ơn Các nước có sản lượng hoa lớn Hà Lan, Colômbia, Pháp, Trung Quốc… Ở nước này, đồng tiền trồng nhà lưới có mái che, có trang bị hệ thống điều chỉnh nhệt độ, ẩm độ, ánh sáng, tưới nước, bón phân chế độ tự động bán tự động Do đó, suất chất lượng hoa đồng tiền nước cao, đạt 4,8 triệu bông/ha/năm (Đặng Văn Đông, 2004) Hà Lan nước sản xuất nghiên cứu hoa đồng tiền lớn giới Theo Hà Tiểu Đệ, Triệu Thống Lợi, Lỗ Kim Vũ (2000) , Hà Lan có diện tích trồng hoa đồng tiền 8.017 ha, giá trị sản lượng tỷ Báo cáo tốt nghiệp Phan Thị Thảo - 8K Trường Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học 590 triệu USD Nghề trồng hoa đồng tiền Hà Lan áp dụng rộng rãi cơng nghiệp hố, tự động hố 80% hoa trồng mơi trường khơng cần đất Trình độ tạo giống Hà Lan cao, phần lớn giống đồng tiền mới, hoa to trồng rộng rãi sản xuất nhà chọn tạo giống Hà Lan lai tạo ra.Công ty Forist Hà Lan sở dẫn đầu giới tạo giống, nghiên cứu, sản xuất buôn bán hoa đồng tiền Cơng ty có lực lượng mạnh nghiên cứu khoa học, thiết bị sản xuất, tạo nhiều giống, sản lượng ngày nhiều, việc sử lý sau thu hoạch, bảo quản, đánh giá trình độ cao Ở Ba Lan, hoa đồng tiền loại hoa cắt quan trọng trồng sản phẩm ni cấy mơ Nó chiếm khoảng 90% tổng sản phẩm nuôi cấy mô năm 1984 Thời vụ hoa đồng tiền kéo dài tháng tháng 7, việc bảo quản invitro rễ khai thác tốt (Teresa Hempel cộng sự, 2004 ) Ở Trung Quốc, từ năm 1920 sản xuất hoa đồng tiền cắt cành Mai Long - Thượng Hải, giống bị thối hố nghiêm trọng nên khơng phát triển Đến năm 1987, vận dụng kỹ thuật nuôi cấy mô nên khắc phục tình trạng thối hố giống, hoa đồng tiền khơi phục, phát triển Hiện nay, Thượng Hải nơi có diện tích trồng hoa đồng tiền lớn nhất, đạt 35 Sau Thượng Hải, Giang tô nơi phát triển mạnh hoa đồng tiền Năm 1995 có ha, đến năm1999 có tới 600 Ngồi ra, Viện nghiên cứu Rau hoa, Viện nghiên cứu khoa học nông nghiệp Nông trường Liên Vân đơn vị có diện tích trồng hoa đồng tiền lớn, kỹ thuật tương đối cao ( Hà Tiểu Đệ, 2000 ) 32.Sản xuất hoa đồng tiền ViệtNam Ở Việt Nam, giống hoa đồng tiền đơn dược nhập trồng khoảng từ năm 1940 Đặc điểm giống hoa đơn sinh trưởng khoẻ, thích nghi tốt với điều kiện tự nhiên Nhưng nhược điểm Báo cáo tốt nghiệp Phan Thị Thảo - 8K Trường Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học hoa nhỏ, cánh đơn, màu sắc đơn điệu chúng trồng Từ năm 1990, vài công ty nhà trồng hoa Việt Nam bắt đầu nhập giống đồng tiền lai (hoa kép) từ Đài loan, Hà Lan, Trung Quốc trồng Một số giống tỏ có ưu điểm hoa to, cánh dày, gồm nhiều tầng hoa xép lại với nhau, màu sắc phong phú, hình dáng hoa cân đối, đẹp, cho suất cao Vì vậy, giống tiếp nhận phát triển mạnh mẽ, khắp tỉnh thành nước Bên cạnh có khơng giống hao đồng tiền khơng thích hợp vơí điều kiện khí hậu Việt Nam, sinh trưởng, phát triển kém, sâu bệnh phá hại năng, gây thiệt hại cho người trồng hoa [Đặng Văn Đông, 2004 ] Hoa đồng tiền trồng phổ biến Đà Lạt trước 1975 với mục đích cắt cành Có nhiều màu khác (vàng, cam, đỏ, hồng …), năm 1980 có nhập thêm số giống cánh kép từ Hà nội Từ 1997 nhập nội 20 giống Hà Lan, Hàn Quốc, Đài Loan Trong giống Hà Lan cho chất lượng cao với nhiều màu khác Diện tích hoa đồng tiền nước ta ngày tăng, vài năm trở lại Theo Đặng Văn Đông , năm 2005, tổng số diện tích trồng hoa nước, đồng tiền chiếm 9%, tăng 1,8 lầnso với năm 1995, tăng xấp xỉ 1,3 lần so với năm 2000 Tại vùng Trung du miền núi phía Bắc diện tích hoa tồn vùng có 135,7 ha, Trong đó, đồng tiền có 9,7 chiếm khoảng 0,07% cấu tổng diện tích Sản lượng hoa vùng đạt 44,08 triệu bơng, sản lượng hoa đồng tiền đạt 3,1 triệu Tại Lào Cai, tồn tỉnh có 97,5 hoa loại, sản lượng khoảng 25 - 30 triệu bơng, đó, hoa đồng tiền có diện tích ha, sản lượng đạt 1,6 triệu bông, trồng tập trung thị xã Lào Cai huyện Bảo Thắng Tại Hà Giang, tồn tỉnh có 28 trồng hoa, sản lượng đạt 6,1 triệu Báo cáo tốt nghiệp Phan Thị Thảo - 8K Trường Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học bơng Trong đó, diện tích trồng hoa dồng tiền 1,2 ha, sản lượng đạt 0,38 triệu bông, tập trung chủ yếu huyện Quản Bạ huyện Đồng Văn Tại Sơn La, diện tích trồng hoa tồn tỉnh 22 ha, sản lượng đạt 6,86 triệu Riêng đồng tiền có diện tích 3,5 chiếm khoảng 0,16% tồng diện tích trồng hoa, sản lượng đạt 1,12 triệu Do trồng hoa đồng tiền mang lại thu nhập cao nên nhièu năm qua nhiêu năm qua, nhiều địa phương, hộ gia đình tự tìm hiểu để phát triển, trồng loại hoa Điển hình vùng trồng hoa đồng tiền tập trung có quy mô lớn từ vài chục Đà Lạt ( Lâm Đồng), Vĩnh ( Hà Nội), thị xã Bắc Ninh, thị xã Bắc Giang Tại Bắc Ninh, nhiều hộ nông dân chuyển từ trồng lúa sang trồng loại hoa, cảnh, đạt hiệu kinh tế cao, riêng trồng đồng tiền cho thu lãi 10 triệu đồng/sào/năm Năm 2005, Trung tâm kỹ thuật Rau Vĩnh Phúc thực đề tài : “ Xây dựng mơ hình sản xuất bảo quản số giống hoa cơng nghệ cao có triển vọng xuất Vĩnh Phúc”, cho thấy hiệu kinh tế từ việc trồng đồng tiền cao Với mức đầu tư 16,2 triệu đồng/sào/năm, cho thu từ 50,4 – 55,6 triệu đồng/sào/năm 4Các nghiên cứu nhân giống hoa đồng tiền 4.1Tình hình nghiên cứu sản xuất hoa đồng tiền giới 4.1.1 Nghiên cứu chọn tạo nhân giống Việc chọn tạo giống hoa đồng tiền Châu Mỹ năm 70 kỷ trước trường Đại học Califorlia với chương trình tạo nhiều giống hoa để trồng nhà kính Cịn Châu Âu, Châu Á Nhật Bản lại tạo giống có xu hướng cho trồng hoa cắt Từ năm 1975 Florist De Kwakel B.V tiến hành chọn lọc, tạo giống nhân giống hoa đồng tiền cho sản xuất hao cắt Hà Lan Tiếp theo giai đoạn này, bà chọn lọc tạo giống hoa đồng tiền trồng chậu Báo cáo tốt nghiệp Phan Thị Thảo - 8K Trường Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học Qua nhiều năm chọn tạo giống cho trồng chậu tạo nhiều giống hoa trồng chậu ưu lai F1 đáp ứng nhu cầu thị hiếu thị trường Những đặc điểm giống hoa đồng tiền ưu lại tập trung vào nhóm chủ yếu: + Đồng màu hoa + Tập tính nở hoa + Số hoa + Chất lượng hoa + Thời gian sinh trưởng ngắn Kết giống hoa trồng thử nghiệm cho kết hứa hẹn bà có chia sẻ đóng góp cho cho người trồng hoa giới Đồng tiền khó kết hạt, hạt lại nhỏ sức sống nên trước đồng tiền chủ yếu nhân giống phương pháp tách chồi Hiện công nghệ nuôi cấy mô tế bào áp dụng rộng rãi việc nhân giống hoa đồng tiền giúp cải thiện đáng kể vấn đề giống Giống đồng tiền cứng, hoa ngắn inch trồng chậu giới thiệu nhật Bản vào năm 1980, sau người ta sử dụng công nghệ nuôi cấy mô để nhân giống Hiện chúng trồng nhiều nước giới - Năm 2000, Viện nghiên cứu rau quốc tế lai tạo thành công giống đồng tiền có tên Raon, kết việc lai giống Kippros có màu vàng, hoa bán kép với giống Rora có màu vàng hoa đơn Raon giống sản xuất hoa cắt có đường kính hoa cắt lớn, màu cam sẫm, dạng hoa kép, độ bền hoa cắm khoảng 11 ngày, chúng trồng phổ biến Hàn Quốc Phương pháp nuôi cấy mô tế bào phương pháp chủ yếu nhân giống hoa đồng tiền, thế, từ lâu giới có nhiều nhà khoa học nghiên cứu vấn đề Báo cáo tốt nghiệp 10 Phan Thị Thảo - 8K Trường Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học Từ bảng cho thấy : Khi bổ sung chất αNAA, vào môi trường nuôi cấy tỷ lệ tạo rễ sau tuần nuôi cấy đạt 100% công thức công thức 2cồn công thức đạt 86.7% ,CT4 đạt 73.32% Số rễ trung bình đạt cao công thức 4.07 rễ /cây ,sau giảm dần 2.43 rễ /cây(CT3) 2.5rễ/cây (CT4) Kích thước dễ dài CT4 2.13cm sau CT3 1.50cm CT1 1.43cm cuối CT2 1.10cm.,tuy nhiên CT2 rễ lại to khoẻ rễ phụ so với cơng thức Như kích thước rễ tăng dần đến CT4 Trong thí nghiệm rễ ngồi tăng nhanh số lượng chiều dài rễ đồng tiền cịn có tăng trưởng nhanh chiều cao số so với thí nghiệm nhân Chỉ có tuần ,ở CT1 chiều cao đạt 4.10 cm số đạt 5.50lá/cây (thấp ) Ở CT2 chiều cao đạt 4.22cm số đạt 6.00 lá/cây Ở CT3 chiều cao đạt 4.47cm số đạt 6.20 /cây.Ở CT4 chiều cao đạt 4.53 cm số đạt 6.30lá/cây(cao nhất) Như chiều cao số tăng dần ,thấp CT đối chứng cao CT4 Báo cáo tốt nghiệp 32 Phan Thị Thảo - 8K Trường Cao đẳng Nông Lâm Khoa Cơng nghệ sinh học Khi đưa ngồi điều kiện vườn ươm địng tiền có khả thích ứng tốt với tỷ lệ sống cao từ 80-90% Ảnh hưởng αNAA đến khả rễ chồi hoa đồng tiền Kết luận: Bổ sung αNAAvới nồng độ 1.00mg/l thích hợp cho phát triển đồng tiền Trong trình rễ đồng tiền tiếp tục sinh trưởng phát triển mạnh tăng nhanh chiều cao số Báo cáo tốt nghiệp 33 Phan Thị Thảo - 8K Trường Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học Phần Kết luận đề nghị 5.1 Kết luận Qua kết thí nghiệm chúng tơi rút số kết luận sau: 1.Môi trường nhân nhanh chồi tốt là: MS+ 1mg/l IAA+ 1.5mg/l Kinetin+ 2% Saccarose + 5g/l agar pH mơi trường:5,6-6,0 2Mơi trường hình thành rễ tốt cho chồi hoa đồng invitro là: MS+1mg/l αNAA Có bổ xung chế phẩm sinh học để tăng chất lượng giống 5.2 Kiến nghị Từ kết luận trên, xin đề nghị áp dụng quy trình sau cho quy trình nhân giống hoa đồng tiền theo quy mô công nghiệp Báo cáo tốt nghiệp 34 Phan Thị Thảo - 8K Trường Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học Phần VI Tài kiệu tham khảo 6.1 Tài liệu nước Nguyễn Thị Lý Anh (2005), Sự tạo củ Lily in vitro sinh trưởng Lily trồng từ củ in vitro, Tạp chí khoa học kỹ thuật nơng nghiệp Tập III số Ngơ Xn Bình, Nguyễn Thị Th Hà, 2000 Giáo trình cơng nghệ sinh học Th.S Đặng Văn Đông PGS.TS Đinh Thế Lộc, 2003- Hoa đồng tiền NXB Lao Động – Xã Hội Đặng Thị Thanh Hương, 2002 Nghiên cứu nhân giống hoa đồng tiền phương pháp nuôi cấy in vitro, Báo cáo thực tập tốt nghiệp, Trường đại hoc Nông Nghiệp Hà Nội Đỗ Tuấn Khiêm (2007), Báo cáo tổng kết đề tài Nghiên cứu khả thích ứng xây dựng mơ hình sản xuất số lồi hoa giá trị cao Bắc Kạn, Sở Công nghiệp-Khoa học Công nghệ Bắc Kạn, tr 4-45 Nguyễn Xuân Linh (1998), Hoa kỹ thuật trồng hoa, Nxb Nông nghiệp Hà Nội Đoàn Thị Luyến, 2007- Nghiên cứu tuyển chọn giống hoa đồng tiền Thái Nguyên Báo cáo thực tập tốt nghiệp, Trường Đại học Nông lâm Thái Nguyên Nguyễn Hồng Minh, 2002- Giáo trình di truyền học Đại học nông nghiệp I-Hà Nội Hoàng Thị Nga, Nguyễn Thị Phương Hoa, Nguyễn Thị Giang, Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Lý Anh - Xây dựng quy trình nhân giống hoa đồng tiền kỹ thuật cấy mơ Tạp trí nơng nghiệp phát triển nơng thôn, Số 8/2003 Báo cáo tốt nghiệp 35 Phan Thị Thảo - 8K Trường Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học 10 Nguyễn Quang Thạch CS,2003 – Bài giảng công nghệ sinh học thực vật Đại học NN I - Hà Nội Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 96 11 Nguyễn Văn Tới (2007), Ứng dụng Khoa học công nghệ sản xuất hoa Đà Lạt, Thông tin khoa học công nghệ số 3/2007, Sở khoa học công nghệ Lâm Đồng 12 PGS.TS Đào Thanh Vân(CB), Th.s Đặng Thị Tố Nga, 2006- GT hoa Đại Học Nông Lâm Thái Nguyên 13 Ngô Đăng Vịnh, Hà Thị Thúy, Dương Minh Nga - Nghiên cứu hồn thiện quy trình nhânh nhanh giống hoa đồng tiền nhập nội công nghệ in vitro- Tạp trí nơng nghiệp phát triển nông thôn, Số 8/2003, 10121014 14 Đỗ Năng Vịnh, 2005 Công nghệ tế bào thực vật ứng dụng NXB Nông Nghiệp 15 Đỗ Năng Vịnh, 2002 CNSH trồng NXB Nông Nghiệp 16 Vũ Văn Vụ- Nguyễn Mộng Hùng- Lê Hồng Điệp, 2006- Công nghệ sinh học NXB Giáo dục 6.2 Tài liệu nước 17 AIPH (2004), International statistics flower and plants Institut fỹr Gartenbauửkonomie der Universitọt Hannover.Volume 52 18 Buschman.J.C.M., Okubo.H., Miller.W.B., Chastagner.G.A (2005), Globalisation-flower-flower bulds-buld flowers Acta Horticulture, 673, pp 27-33 Báo cáo tốt nghiệp 36 Phan Thị Thảo - 8K Trường Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học Bảng xử lý số liệu IRRISTAT Anh huong cua nong kinetin toi tai sinh choi VARIATE V003 %BATCHOI LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ==================================================== ========================= T 29.5704 7.39260 ****** 0.000 * RESIDUAL 15 631061E-05 420708E-06 * TOTAL (CORRECTED) 19 29.5704 1.55634 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSBAT FILE KINETIN 11/ 4/** 2: PAGE Anh huong cua nong kinetin toi tai sinh choi VARIATE V004 HSBAT LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ==================================================== ========================= T 4.80000 1.20000 ****** 0.000 * RESIDUAL 15 861786E-07 574524E-08 * TOTAL (CORRECTED) 19 4.80000 252632 - Báo cáo tốt nghiệp 37 Phan Thị Thảo - 8K Trường Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE KINETIN 11/ 4/** 2: PAGE Anh huong cua nong kinetin toi tai sinh choi MEANS FOR EFFECT T T NOS %BATCHOI HSBAT 0.000000 0.000000 0.000000 0.000000 1.11000 1.00000 4 3.33000 1.00000 1.11000 1.00000 SE(N= 4) 0.324310E-03 0.378987E-04 5%LSD 15DF 0.977584E-03 0.114240E-03 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE KINETIN 11/ 4/** 2: PAGE Anh huong cua nong kinetin toi tai sinh choi F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T | (N= 20) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | %BATCHOI 20 1.1100 1.2475 0.64862E-03 0.1 0.0000 HSBAT 20 0.60000 0.50262 0.75797E-04 0.0 0.0000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE %BATCHOI FILE BAP 11/ 4/** 1:29 Báo cáo tốt nghiệp 38 Phan Thị Thảo - 8K Trường Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học PAGE Anh huong cua BAP den tai sinh choi VARIATE V003 %BATCHOI LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ==================================================== ========================= T 114.607 28.6517 232.54 0.000 * RESIDUAL 15 1.84815 123210 * TOTAL (CORRECTED) 19 116.455 6.12921 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSBAT FILE BAP 11/ 4/** 1:29 PAGE Anh huong cua BAP den tai sinh choi VARIATE V004 HSBAT LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ==================================================== ========================= T 4.13822 1.03456 87.38 0.000 * RESIDUAL 15 177600 118400E-01 * TOTAL (CORRECTED) 19 4.31582 227148 - Báo cáo tốt nghiệp 39 Phan Thị Thảo - 8K Trường Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BAP 11/ 4/** 1:29 PAGE Anh huong cua BAP den tai sinh choi MEANS FOR EFFECT T T NOS %BATCHOI HSBAT 6.67000 1.87250 10.2775 2.89250 4.44000 1.81250 4 6.94750 2.20250 3.33000 1.58500 SE(N= 4) 0.175506 0.544059E-01 5%LSD 15DF 0.529038 0.163999 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BAP 11/ 4/** 1:29 PAGE Anh huong cua BAP den tai sinh choi F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T | (N= 20) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | %BATCHOI 20 6.3330 2.4757 0.35101 5.5 0.0000 HSBAT 20 2.0730 0.47660 0.10881 5.2 0.0000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE %BATCHOI FILE BAP&KI PAGE Báo cáo tốt nghiệp 40 Phan Thị Thảo - 8K Trường Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học Tai sinh choi bang phoi hop BAP va Kinetin VARIATE V003 %BATCHOI LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ==================================================== ========================= T 345.564 43.1955 631.04 0.000 * RESIDUAL 27 1.84817 684509E-01 * TOTAL (CORRECTED) 35 347.412 9.92607 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSBAT FILE BAP&KI PAGE Tai sinh choi bang phoi hop BAP va Kinetin VARIATE V004 HSBAT LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ==================================================== ========================= T 21.1606 2.64507 195.61 0.000 * RESIDUAL 27 365099 135222E-01 * TOTAL (CORRECTED) 35 21.5257 615020 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BAP PAGE Tai sinh choi bang phoi hop BAP va Kinetin Báo cáo tốt nghiệp 41 Phan Thị Thảo - 8K Trường Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học MEANS FOR EFFECT T T NOS %BATCHOI HSBAT 6.67000 1.87250 10.2775 2.89250 4.44000 1.81250 4 6.94750 2.20250 1.11000 1.00000 0.000000 0.000000 SE(N= 4) 0.130816 0.581425E-01 5%LSD 27DF 0.379578 0.168708 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BAP&KI PAGE Tai sinh choi bang phoi hop BAP va Kinetin F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T | (N= 36) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | %BATCHOI 36 4.1350 3.1506 0.26163 6.3 0.0000 HSBAT 36 1.5544 0.78423 0.11628 7.5 0.0000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE %BATCHOI FILE TD Ra re bang NAA(so luong re TB, chieu dai re TB) VARIATE V003 SL RE TB RE TB RE TB Báo cáo tốt nghiệp 42 Phan Thị Thảo - 8K Trường Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ==================================================== ========================= T 28.4812 4.74687 272.83 0.000 * RESIDUAL 21 365373 173987E-01 * TOTAL (CORRECTED) 27 28.8466 1.06839 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CHIEUDAI FILE NAA 30/ 3/** 0:25 PAGE Ra re bang NAA(so luong re TB, chieu dai re TB) VARIATE V004 CHIEUDAI LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ==================================================== ========================= T 5.36249 893748 991.73 0.000 * RESIDUAL 21 189252E-01 901200E-03 * TOTAL (CORRECTED) 27 5.38141 199312 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE NAA 30/ 3/** 0:25 PAGE Ra re bang NAA(so luong re TB, chieu dai re TB) Báo cáo tốt nghiệp 43 Phan Thị Thảo - 8K Trường Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học MEANS FOR EFFECT T T NOS SL RE TB CHIEUDAI 2.40750 0.877500 2.86750 1.13250 4.26250 1.39250 4 3.10000 0.660000 2.31250 0.375000 1.21250 0.240000 1.15000 0.130000 SE(N= 4) 0.659521E-01 0.150100E-01 5%LSD 21DF 0.193964 0.441441E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE NAA 30/ 3/** 0:25 PAGE Ra re bang NAA(so luong re TB, chieu dai re TB) F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T | (N= 28) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | SL RE TB 28 2.4732 1.0336 0.13190 5.3 0.0000 CHIEUDAI 28 0.68679 0.44644 0.30020E-01 4.4 0.0000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SLA FILE BD CC 13/ 4/** 13:39 PAGE - PAGE Báo cáo tốt nghiệp 44 Phan Thị Thảo - 8K Trường Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN 1.Đặt vấn đề 2.Mục đích yêu cầu đề tài 3 Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn 3.1 Ý nghĩa khoa học 3.2 Ý nghĩa thực tiễn Phần Tổng quan tài liệu .4 1.Nguồn gốc hoa đồng tiền: .4 Giá trị sử dụng 2.1 Giá trị thương mại giống hoa đồng tiền .5 2.2 Giá trị thẩm mỹ giống hoa đồng tiền 3.Tình hình sản xuất hoa đồng tiền 3.1 Sản xuất hoa đồng tiền giới 32.Sản xuất hoa đồng tiền ViệtNam 4Các nghiên cứu nhân giống hoa đồng tiền 4.1Tình hình nghiên cứu sản xuất hoa đồng tiền giới .9 4.1.1 Nghiên cứu chọn tạo nhân giống 4.1.2Các nghiên cứu khác 12 4.2Tình hình nghiên cứu sản xuât Việt Nam 12 2.1 Tình hình nghiên cứu .12 4.2.1.1 nghiên cứu nhân giống 12 4.2.2 Các nghiên cứu khác 14 4.3 Khái quát nuôi cấy mô tế bào thực vật 15 4.3.1 Khái niệm nuôi cấy mô tế bào thực vật 15 3.2 Ứng dụng nuôi cấy mô nhân giống hoa 16 Phần 19 Vật liệu, nội dung phương pháp nghiên cứu .19 Báo cáo tốt nghiệp 45 Phan Thị Thảo - 8K Trường Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học 3.1.Vật liệu nghiên cứu 19 3.2.Nội dung nghiên cứu 19 Phần IV 23 Kết thí nghiệm 23 4.1 Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BA đến sinh trưởng hệ số nhân chồi đồng tiền.(Sau tuần ) .23 4.2 Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ Kinêtin đến sinh trưởng hệ số nhân đồng tiền 24 4.3 Nghiên cứu ảnh hưởng tổ hợp nồng độ BA Kinetin đến sinh trưởng hệ số nhân đồng tiền 28 4.4Ảnh hưởng αNAA đến khả tạo rễ chồi hoa đồng tiền 31 Phần Kết luận đề nghị 34 5.1 Kết luận 34 5.2 Kiến nghị 34 Phần VI Tài kiệu tham khảo 35 Báo cáo tốt nghiệp 46 Phan Thị Thảo - 8K ... nhân nhanh hoa đồng tiền kĩ thuật nuôi cấy mô tế bào,trong điều kiện nuôi cấy invitro Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn 3.1 Ý nghĩa khoa học Sử dụng công nghệ nuôi cấy mô tế bào làm tăng hệ số nhân. .. xuất hoa đồng tiền giới 32.Sản xuất hoa đồng tiền ViệtNam 4Các nghiên cứu nhân giống hoa đồng tiền 4.1Tình hình nghiên cứu sản xuất hoa đồng tiền giới .9 4.1.1 Nghiên cứu chọn... tế đó, chúng tơi tiến hành đề tài : Nghiên cứu áp dụng phương pháp nhân giống hoa đồng tiền kỹ thuật invitro vào sản xuất quy mô lớn 2.Mục đích yêu cầu đề tài Nghiên cứu hồn thiện quy trình nhân