BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI TRẦN THỊ THÙY LINH NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ CÂY TỐC THẰNG CÁNG (ANODENDRON PANICULATUM (ROXB.) A DC – APOCYNACEAE) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC HÀ NỘI 2015 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI TRẦN THỊ THÙY LINH NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ CÂY TỐC THẰNG CÁNG (ANODENDRON PANICULATUM (ROXB.) A DC – APOCYNACEAE) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH DƢỢC HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ 60720406 Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: PGS TS Nguyễn Thị Hoài HÀ NỘI 2015 LỜI CẢM ƠN Trong trình nghiên cứu hoàn thành luận văn này, nhận đƣợc nhiều giúp đỡ quý báu thầy cô giáo, chuyên gia nhiều lĩnh vực đồng nghiệp, bạn bè gia đình Trƣớc hết, xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu, Phòng Sau Đại học, thầy cô giáo, kỹ thuật viên Bộ môn Dƣợc liệu, Dƣợc học cổ truyền Thực vật Dƣợc – Trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi cho trình học tập nghiên cứu Tiếp theo xin cảm ơn Ban giám hiệu trƣờng Đại học Y Dƣợc Huế, cảm ơn giúp đỡ nhiệt tình thầy cô giáo, đồng nghiệp em sinh viên nhóm nghiên cứu Khoa Dƣợc – Trƣờng Đại học Y Dƣợc Huế, nơi tạo điều kiện thuận lợi cho suốt trình thực luận văn Với lòng kính trọng biết ơn sâu sắc, xin gửi lời cảm ơn chân thành tới PGS.TS Nguyễn Thị Hoài, ngƣời tận tình hƣớng dẫn, hết lòng bảo, quan tâm tạo điều kiện thuận lợi cho suốt trình học tập nghiên cứu Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới TS Nguyễn Thế Cƣờng ThS Hồ Việt Đức giúp đỡ hoàn thành luận văn Cuối lời cảm ơn sâu sắc nhất, muốn gửi tới gia đình, bạn bè, ngƣời ủng hộ động viên học tập nhƣ sống Một lần nữa, xin cảm ơn tất giúp đỡ quý báu đó! Huế, tháng năm 2015 Trần Thị Thùy Linh DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu Tiếng Anh C-NMR Carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy H-NMR Proton Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy A-549 Human bronchogenic carcinoma br s Broad singlet COSY Correlation Spectroscopy d Doublets dd Double of doublets DEPT Distortionles Enhancement by Polarization Transfer EC50 Effective Concentration at 50% 13 ED50 Effective Dose at 50% HeLa Hep G2 HIV HL-60 HMBC Human cervical adenocarcinoma Human hepatocellular carcinoma Human Immunodeficiency Virus Human promyelocytic leukemia Heteronuclear Multiple Quantum Correlation Heteronuclear Single Quantum Correlation Human colon carcinoma Inhibitory Concentration at 50% HSQC HT-29 IC50 ID50 J (Hz) KB LU-1 MCF-7 MIC MKN7 NMR s SKC SKLM Inhibitory Dose at 50% Human epidermoid carcinoma Human bronchogenic carcinoma Human breast adenocarcinoma Minimum Inhibitory Concentration Human gastrocarcinoma Nuclear Magnetic Resonance Singlet Diễn giải Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân cacbon 13 Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân proton Tế bào ung thƣ phổi Nồng độ gây tác động sinh học cho 50% đối tƣợng thử nghiệm Liều hiệu cho 50% đối tƣợng thử nghiệm Tế bào ung thƣ cổ tử cung Tế bào ung thƣ gan Tế bào ung thƣ máu cấp tính Tế bào ung thƣ ruột kết Nồng độ ức chế 50% đối tƣợng thử nghiệm Liều ức chế tối thiểu 50% Hằng số tƣơng tác tính Hz Tế bào ung thƣ biểu mô Tế bào ung thƣ phổi Tế bào ung thƣ vú Nồng độ ức chế tối thiểu, hay nồng độ kiềm khuẩn tối thiểu Tế bào ung thƣ dày Sắc ký cột Sắc ký lớp mỏng SW-480 TLC TMS STT Human colon adenocarcinoma Thin Layer Chromatography Tetramethyl silan Tế bào ung thƣ ruột kết Số thứ tự DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU Bảng 1.1 Danh mục loài thuộc chi Anodendron Bảng 1.2 Phân bố loài thuộc chi Anodendron có Việt Nam Bảng 1.3 Khóa định loại loài thuộc chi Anodendron Việt Nam Bảng 1.4 Một số hợp chất đƣợc phân lập từ loài Anodendron affine 10 Bảng 1.5 Phân loại glycosid tim phân lập từ Anodendron affine 11 Bảng 3.1 Kết định tính nhóm chất hữu từ phần mặt đất Tốc thằng cáng 35 Bảng 3.2 Số liệu phổ NMR hợp chất AP1 hợp chất tham khảo 42 Bảng 3.3 Số liệu phổ NMR hợp chất AP2 hợp chất tham khảo 43 Bảng 3.4 Số liệu phổ NMR hợp chất AP5 hợp chất tham khảo 46 Bảng 3.5 Số liệu phổ NMR hợp chất AP6 hợp chất tham khảo 50 Bảng 3.6 Số liệu phổ NMR hợp chất AP9 hợp chất tham khảo 53 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Một số hợp chất đƣợc phân lập từ loài Anodendron affine 14 Hình 1.2 Một số hợp chất đƣợc phân lập từ loài Anodendron formicinum 15 Hình 1.3 Một số hợp chất đƣợc phân lập từ loài Anodendron paniculatum 16 Hình 2.1 Phần mặt đất Tốc thằng cáng Anodendron paniculatum (Roxb.) A DC 19 Hình 3.1 Cây Tốc thằng cáng Anodendron paniculatum (Roxb.) A DC 29 Hình 3.2 Vi phẫu cành Tốc thằng cáng 30 Hình 3.3 Vi phẫu gân Tốc thằng cáng 31 Hình 3.4 Vi phẫu phiến Tốc thằng cáng 32 Hình 3.5 Đặc điểm bột thân, cành Tốc thằng cáng 33 Hình 3.6 Đặc điểm bột Tốc thằng cáng 34 Hình 3.7 Sơ đồ chiết xuất phân đoạn từ Tốc thằng cáng 37 Hình 3.8 Sơ đồ phân lập hợp chất AP1 AP2 từ cao chiết chloroform 38 Hình 3.9 Sơ đồ phân lập hợp chất AP5, AP6 AP9 từ cao chiết nƣớc 40 Hình 3.10 Cấu trúc hóa học hợp chất AP1 41 Hình 3.11 Cấu trúc hóa học hợp chất AP2 43 Hình 3.12 Tƣơng tác HMBC, COSY hợp chất AP5 47 Hình 3.13 Cấu trúc hóa học hợp chất AP5 47 Hình 3.14 Tƣơng tác HMBC, COSY hợp chất AP6 51 Hình 3.15 Cấu trúc hóa học hợp chất AP6 51 Hình 3.16 Tƣơng tác HMBC, COSY hợp chất AP9 54 Hình 3.17 Cấu trúc hóa học hợp chất AP9 54 Hình 3.18 Cấu trúc hóa học syringin 54 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng 1: TỔNG QUAN 1.1 VỊ TRÍ PHÂN LOẠI, ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ PHÂN BỐ 1.1.1 Vị trí phân loại chi Anodendron 1.1.2 Vài nét họ Trúc đào (Apocynaceae) .3 1.1.3 Vài nét chi Anodendron 1.1.4 Đặc điểm thực vật phân bố Tốc thằng cáng 1.2 THÀNH PHẦN HÓA HỌC CHI ANODENDRON VÀ CÂY TỐC THẰNG CÁNG 1.2.1 Thành phần hóa học số loài thuộc chi Anodendron 1.2.2 Thành phần hóa học loài Tốc thằng cáng 15 1.3 TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA CHI ANODENDRON VÀ LOÀI TỐC THẰNG CÁNG .16 1.3.1 Tác dụng sinh học chi Anodendron 16 1.3.2 Tác dụng sinh học Tốc thằng cáng .17 Chƣơng 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU .19 2.2 VẬT LIỆU 19 2.2.1 Hóa chất 19 2.2.2 Máy móc - thiết bị 20 2.3 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.3.1 Nghiên cứu thực vật 20 2.3.2 Nghiên cứu thành phần hóa học 21 Chƣơng 3: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU .28 3.1 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VỀ ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT 28 3.1.1 Đặc điểm hình thái 28 3.1.2 Đặc điểm vi phẫu .29 3.1.3 Đặc điểm bột .32 3.2 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC 35 3.2.1 Định tính nhóm chất Tốc thằng cáng 35 3.2.2 Quá trình chiết xuất 36 3.2.3 Quá trình phân lập hợp chất từ Tốc thằng cáng 37 3.2.4 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập 40 Chƣơng 4: BÀN LUẬN .55 4.1 VỀ THỰC VẬT .55 4.2 VỀ NGHIÊN CỨU CÁC THÀNH PHẦN HÓA HỌC 57 KẾT LUẬN .62 KIẾN NGHỊ 62 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Thực vật nguồn tài nguyên giá trị để nghiên cứu phát triển thuốc Các hợp chất có hoạt tính sinh học phân lập từ dƣợc liệu đƣợc sử dụng trực tiếp y học bán tổng hợp thành hợp chất nhằm ứng dụng lâm sàng Trên trái đất có khoảng 250.000 loài thực vật bậc cao, nhƣng có khoảng 10% số loài đƣợc nghiên cứu hóa thực vật sàng lọc hoạt tính sinh học [48] Nhƣ vậy, khối lƣợng cỏ tiềm dành cho nhà khoa học nghiên cứu để tạo thành sản phẩm tự nhiên phục vụ ngƣời Là đất nƣớc đƣợc thiên nhiên ƣu đãi, nằm vùng nhiệt đới gió mùa, Việt Nam có thảm thực vật vô phong phú đa dạng Cho đến ghi nhận đƣợc nƣớc ta có 3948 loài thuốc, thuộc 307 họ ngành thực vật bậc cao nhƣ bậc thấp (kể Nấm) [11] Phần lớn số loài làm thuốc xuất phát từ kinh nghiệm sử dụng cộng đồng dân tộc địa phƣơng nƣớc Theo thời gian, ngƣời ta nhận thấy trình nghiên cứu thuốc từ cỏ, tri thức địa đóng vai trò quan trọng định hƣớng ban đầu, qua tiết kiệm đƣợc nhiều thời gian, công sức tiền Khu vực miền Trung nƣớc ta có nhiều đồng bào dân tộc sinh sống Họ có nhiều kinh nghiệm sử dụng thuốc, kinh nghiệm đƣợc đúc kết, chắt lọc, truyền từ đời sang đời khác, nguồn tài nguyên quý giá Tộc ngƣời Pako, Vân Kiều sống vùng rừng Trƣờng Sơn trải dài từ Quảng Nam đến Quảng Bình, tập trung nhiều địa bàn miền núi Quảng Trị - Thừa Thiên Huế Theo kinh nghiệm đồng bào Pako, Vân Kiều, Tốc thằng cáng (Anodendron paniculatum (Roxb.) A DC - Apocynaceae) đƣợc sử dụng để chữa bệnh, có bệnh liên quan đến khối u [7] Theo kết sàng lọc hoạt tính diệt tế bào ung thƣ số thuốc đồng bào Pako, Vân Kiều Quảng Trị mà khảo sát, thuốc cho tác dụng ức chế 5/6 dòng tế bào ung thƣ thử nghiệm [8] Cho đến Việt Nam chƣa có nghiên cứu loài Nghiên cứu đặc điểm thực vật thành phần hóa học thƣờng bƣớc ban đầu công tác nghiên cứu Phổ UV hợp chất AP6 Phổ IR hợp chất AP6 Phổ LC-MS hợp chất AP6 AP9: Sargentol UV IR H-NMR Phổ 1H-NMR giãn 13 C-NMR DEPT COSY HMBC HSQC Cấu trúc hóa học hợp chất AP9 Phổ UV hợp chất AP9 Phổ IR hợp chất AP9 [...]... Chonemorpha, Cleghornia, Cosmostigma, Costantina (Pilostigma), Cryptolepis, Cryptostegia, Ervatamia (Tabernaemontana), Gomphocarpus, Harmandiella, Cynanchum, Gongronema, Hemidesmus, Dischidia, Finlaysonia, Gymnanthera, Heterostemma Dregea, Ecdysanthera, Genianthus, Gymnema, Holarrhena, Giadotrum, Gymnemopsis, Hoya, Hunteria, Ichnocarpus, Ixodonerium, Kixia (Kibatalia, Paravallaris), Kopsia, Landolphia, Leptadenia,... Periplocoideae, Secamonoideae v Asclepiadoideae vi gn 200 chi, hn 2.000 loi, phõn b rng vựng nhit i [5], [10] Vit Nam cú khong 100 chi: Adenium, Aganonerion, Aganosma, Allamanda, Alstonia, Alyxia, Amalocalyx, Anodendron, Argyrpnerium, Asclepias, Atherandra, Atherolepis, Beaumontia, Blaberopus, Bousigonia, Brachystelma, Calotropis, Campestigma, Carissa, Catharanthus (Vinca), Cerbera, Ceropegia, Chilocarpus,... ca Takhtajan cụng b nm 2009 v mt s tỏc gi [73], [76] chi Anodendron cú v trớ phõn loi nh sau: Ngnh Ngc Lan (Magnoliophyta) Lp Ngc Lan (Magnoliopsida) Phõn Lp Hoa Mụi (Lamiidae) B Long m (Gentianales) H Trỳc o (Apocynaceae) Chi Ng voi (Anodendron) Anodendron paniculatum (Roxb. ) A DC 1.1.2 Vi nột v h Trỳc o (Apocynaceae) H Trỳc o (Apocynaceae) l h ln, c chia thnh 5 phõn h: Plumerioideae, Apocynoideae,... Leptadenia, Marsdenia, Melodinus, Micrechites, Myriopteron, Nerium, Nouettea, Ochrosia, Odontcidenia, Oxystelma, Parabarium, Parameria, Parsonsia, Pentatropsis, Periploca, Pseudopentatropis, Pseudosarcolobus, Plumeria, Pottsia, 3 Raphistemma, Rauvolfia (Rauwolfia), Rhynchodia, Sarcolobus, Sarcostemma, Secamone, Spirella, Spirolobium, Stapelia, Streptocaulon, Strophantus, Telectadium, Telosma (Pergularia),... polyanthus Wall Ichnocarpus paniculatus Moon Aganosma laevis Champ ex Benth Anodendron affine var effusum Tsiang Anodendron affine var pingienense Tsiang & P.T.Li Anodendron fangschengense Tsiang & P.T.Li Anodendron affine (Hook & Anodendron laeve (Champ ex Benth .) Arn .) Druce Maxim ex Franch & Sav Anodendron loheri Merr Anodendron salicifolium Tsiang & P.T.Li Anodendron suishaense Hayata Epigynum laevigatum... Anodendron phõn b ch yu vựng nhit i chõu : n , Mianma, Nam Trung Quc, Nht Bn, Lo, Campuchia, Thỏi Lan, Malaysia, Indonesia, Philippin, Vit Nam [6], [10], [54], [58] 1.1.4 c im thc vt v phõn b ca cõy Tc thng cỏng Anodendron paniculatum (Roxb. ) A DC Tc thng cỏng hay cũn gi l Tc thng (Anodendron paniculatum (Roxb. ) A DC .) thuc chi Anodendron, h Apocynaceae, b Long m (Gentianales), phõn lp Hoa mụi (Lamiidae),... (Anodendron paniculatum (Roxb. ) A DC - Apocynaceae) vi hai mc tiờu: 1 Mụ t c im thc vt ca cõy Tc thng cỏng (Anodendron paniculatum (Roxb. ) A DC .) 2 Chit xut, phõn lp 4-5 cht tinh khit t cõy Tc thng cỏng (Anodendron paniculatum (Roxb. ) A DC .) v xỏc nh cu trỳc h a hc cỏc cht ó phõn lp c 2 Chng 1 TNG QUAN 1.1 V TR PHN LOI, C IM THC VT V PHN B 1.1.1 V trớ phõn loi chi Anodendron Theo h thng phõn loi ca... manubriatum Merr Anodendron moluccanum Miq Anodendron rhinosporum Thwaites Anodendron sutepense Kerr Anodendron tenuiflorum (Miq .) Miq Echites parviflorus Roxb Anodendron paniculatum Echites trichotomus Desf (Roxb. ) A DC Epigynum parviflorum (Roxb. ) Hook.f Gymnema nepaulense J.Graham Strophanthus balansae Franch Tabernaemontana tenuiflora Miq Echites manubriatus Wall Echites paniculatus Roxb Echites polyanthus... Ecdysanthera rubescens (Teijsm & Binn .) Boerl Ecdysanthera scandens Hassk Tờn khoa hc 5 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 Anodendron coriaceum var salaccense Hochr Anodendron coriaceum Anodendron gracilentum Markgr (Blume) Miq Chonemorpha coriacea (Blume) G.Don Echites coriaceus Blume Cleghornia gracilis King & Gamble Anodendron gracile (King & Micrechites gracilis (King & Gamble) Gamble) Mabb P.T.Li Anodendron... Quc) 1 Anodendron paniculatum (Roxb. ) A DC 2 Anodendron affine Ng voi, Dõy (Hook & Arn .) duy Druce 3 Anodendron howii Tsiang Ng voi sang, Dõy duy sang 4 Anodendron nervosum Kerr Ng voi thỏi, Dõy duy thỏi H Giang (Yờn Minh), Bc Giang, H a Bỡnh (Lc Thy), Hi Dng (Chớ Linh), H Nam (Ninh Thỏi), Ninh Bỡnh (Cỳc Phng) H Tõy (Ba V ) ng Nai (Biờn H a) Theo ti liu Thc vt chớ (200 7) chi Anodendron Vit Nam cú 4 ... 2,3,5,11,14-Pentahydroxy-12-oxo5,14-card-20(22)-enolide (60) 12-Hydroxyprena-4,6,16-triene-3,20-dione (61) 12-Hydroxyprena-4,16-diene-3,20-dione (62) Pregna-4,6,16-triene-3,12,20-trione (63) Pregna-4,16-triene-3,12,20-trione (64)... (2,3,11,14tetrahydroxy-12oxo-14-card4,16,20(22)trienolide-7,8epoxide) 13 D-glucose 6-Deoxy-3-Omethyl-Dgulosulose 6-Deoxy-Dgulosulose 4,6-Dideoxy-3-Omethyl-Dgulosulose 4,6-Dideoxy-Dgulose 4,6-Dideoxy-3-Omethyl-D-allose Cu trỳc ca... 4,6-Dideoxy-3-O2,3,11,14methyl-D-glycero-2Tetrahydroxy-12hexosulopyranose oxo-14-card4,20(22)-dienolide7,8-epoxide 2,3,11,14Tetrahydroxy-12oxo-5,14-card9,20(22)-dienolide 2,3,14Trihydroxy-11oxo-5,14-card20(22)-enolide