- s TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ Y tế (1999), Dược thưQuốcgia Việt Nam, NXB Y học, tr 717-718 Aoki I et al (1991), High-performance liquid chromatographic determination of lansoprazole and its metabolites in human serum and urineJournal of Chromatography, Biomedical Applications, 571, pp 283-290 Borner K et al (1997), Quantitative determination of lansoprazole in human serum by HPLC, Chromatographia, 45, pp 450- 452 Dugger H.A et al (2001), Bioequivalence evaluation of lansoprazole 30-mg capsules (Lanfast ®and Lanzor ®) in healthy volunteers, European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics, 51, pp 153-157 FDA (2001), Guidance for Industry Bioanalytical method validation Karol M.D et al (1995), Determination of lansoprazole and five metabolites in plasma by high-performance liquid chromatography, Journal of Chromatography B, 668, pp 182-186 Tác dụng chống oxy hóa thuốc Hoàng liên giải độc thang điều trị bỏng thực nghiệm lâm sàng Lương Quang Anh', Chu Anh Tuấn', Nguyễn Lĩnh Toàn', Nguyễn Ngọc Chiến^ ’Họcviện Quânị ^TrườngĐạihọcDượcHàNội SUMMARY Hoang lien giai doc thang is a liquid extract which contains rhizoma coptidis, radix Scutellariae, cortex phellodendri, fructus gardeniae Hoang lien giai doc thang was used in burn treatment with initial positive results In this study, we have evaluated the antioxidant effect o f Hoang lien giai doc thang on experimental burn and severely burned patients The results revealed that Hoang lien giai doc thang showed antioxidant effect by reducing superoxidedismutase enzyme activity and increasing manonyldialdehyde level in serum samples which were obtained from research subjects Từ khóa Hoàng liên giải độc thang; tác dụng chống oxy hóa Đặt vấn đề Nghiên cứu bệnh lý diễn biến vùng tổn thương bỏng, Arturson G khẳng định vùng cận hoại tử bỏng vùng hoại tử bỏng có giải phóng gốc oxy tự chất trung gian gây viêm [3] Khi tổn thương bỏng sâu rộng trình đáp ứng viêm mang tính hệ thống, chất trung gian viêm với gốc oxy tự không ảnh hưởng cục mà tác động đến tạng xa gây hội chứng rối loạn chức đa tạng (multiple organ dysfunction syndrome MODS) V\ vậy, hạn chê' tác hại gốc tự bệnh nhân bỏng rộng làm giảm tình trạng nghiêm trọng bệnh lý bỏng, góp phẩn nâng cao hiệu điểu trị Các nghiên cứu cho thấy, điểu trị bệnh nhân bỏng nặng cẩn phối hợp trị liệu dùng với chất chống oxy hoá ngoại sinh [1,5, 6, 10] Hoàng liên giải độc thang (HLGDT) thuốc cổ phương, gồm thành phẩn hoàng liên chân gà, hoàng bá, hoàng cắm chi tử, dùng dạng sắc uống, có tác dụng nhiệt thải độc Từ xa xưa, thuốc ứng dụng điều trị bỏng có hiệu tốt, kế thừa bào chế thuốc dạng cao lỏng 1:1 phương pháp chiết nóng với dung môi nước Trong nghiên cứu này, đánh giá tác dụng chống oxy hóa cao lỏng HLGDT thông qua xác định hoạt độ enzym superoxidedismutase (SOD), hàm lượng manonyldialdehyde (MDA) huyết động vật thực nghiệm bệnh nhân tình nguyện bị bỏng nặng Đối tượng phương pháp nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu Thuốc nghiên cứu cao lỏng Hoàng liên giải độc thang Học viện Quân y sản xuất đạt tiêu chuẩn sở Thỏ nghiên cứu có khối lượng thể từ 2,5 ± 0,2 kg/con, gây bỏng diện tích 30% diện tích thể (DTCT) với vết bỏng độ IV (60 thỏ lựa chọn vào nghiên cứu thỏ sống sau ngày đẩu gây bỏng) 62 bệnh nhân bỏng nặng từ 16 - 69 tuổi điều trị khoa Hổi sức cấp cứu - Viện Bỏng Lê Hữu Trác với tiêu chuẩn lựa chọn sau: diện tích bỏng chung 30 % DTCT diện bỏng sâu 20% DTCT; vào viện ngày đẩu sau bỏng, không mắc bệnh mạn tính nặng kèm theo tự nguyện tham gia nghiên cứu Hóa chất nghiên cứu Hoá chất: Kit xác định hoạt tính SOD hãng Biovision (SOD Elisa kit - code: K335-100), kit định lượng MDA hãng Cusabio Biotech (MDA ELISA kit, catalog no: CSB-E08557h) Phương pháp nghiên cứu Thỏ nghiên cứu gây bỏng chia đểu ngẫu nhiên thành nhóm: nhóm nghiên cứu điểu trị chỗ vết bỏng kem Silvirin 1% chứa hoạt chất Silver sulfadizin (số lô TI 2034, hạn sử dụng 15/06/2015) uống ml thuốc cao lỏng HLGDT X3 lẩn/ngày; nhóm chứng điểu trị chỗ vết bỏng kem Silvirin 1% uống 5ml thuốc nước muối sinh lý (NMSL) X3 lẩn/ ngày Thời gian theo dõi động vật từ trước gây bỏng ngày kết thúc thí nghiệm tuẩn kể từ ngày gây bỏng 62 bệnh nhân bỏng nặng chia thành nhóm (tương đương vể lứa tuổi, diện tích bỏng chung độ bỏng sâu): nhóm điều trị gổm 32 bệnh nhân điểu trị theo phác đồ chuẩn áp dụng Viện Bỏng Lê Hữu Trác từ ngày thứ sau bỏng cho uống HLGDT với liểu - 2,5 ml/kg cân nặng X lẩn/ngày; nhóm chứng gồm 30 bệnh nhân điểu trị theo phác đồ chuẩn không sử dụng thêm cao lỏng HLGDT Phương pháp gây bỏng thực nghiệm: Gây mê thỏ cách tiêm bắp đùi ketamin với liều mg/kg khối lượng thể Khi thỏ mê, đổ nước sôi vào bình đến vạch ấn định, nhanh chóng đặt lên vùng da chuẩn bị, đồng thời đặt bao cát lên miệng bình, thời gian đặt 30 giây Sau - phút gây bỏng, thỏ thường tỉnh lại tác dụng ngắn thuốc mê Mỗi đáy bình tương đương - % DTCT thỏ, thỏ gây bỏng với diện tích đáy bình inox Phương pháp xét nghiệm SOD MDA: Nghiên cứu thỏ thực nghiệm: Xét nghiệm xác định hoạt tính SOD, hàm lượng MDA tiến hành thời điểm: NO (ngay trước gây bỏng), N3 (ngày thứ sau bỏng), N10 (ngày thứ 10 sau bỏng), N17 (ngày thứ 17 sau bỏng) Nghiên cứu bệnh nhân tình nguyện: xét nghiệm xác định hoạt tính SOD, hàm lượng MDA tiến hành thời điểm: N3 (ngày thứ sau bỏng), N10 (ngày thứ 10 sau bỏng), N17 (ngày thứ 17 sau bỏng) Các bệnh nhân tử vong xin viện không tiến hành lấy mẫu thời điểm nghiên cứu Xác định hoạt tính SOD theo phương pháp Sun Y [8], Nguyên tắc: Dưới tác dụng enzym xanthinoxidase (XO) xúc tác phân huỷ xanthin thành acid uric gốc tư superoxid ( o ! ) theo phản xb ứng: Xanthin y /\a i ILI III I r Acid UI IV^ uric+ Oĩ2 Gốc superoxid {O ) vừa hình thành phản ứng với INT (2-(4-iodophenyl)-3-(4-nitrophenol)-5-phenyl tetrazolium chlorid) tạo hợp chất Oj Formazan có màu đỏ: INT + O j ®2 + Formazan Cường độ màu Formazan đo bước sóng 450 nm, SOD ức chế tạo thành Formazan SOD xúc tác phản ứng: O + H +®02 + Hj0 j Hoạt độ SOD đo % ức chế tạo thành Formazan Nếu mẫu đo có enzym SOD phân huỷ gốc superoxid thành oxy lượng gốc superoxid phản ứng với INT bị giảm Kết đậm độ màu Formazan bị giảm xuống Định lượng MDA theo phương pháp Tanaka M [4] Nguyên tắc: MDA phản ứng với acid thiobarbituric tạo thành phức trimethin có màu hổng có đỉnh hấp thụ cực đại bước sóng 530 - 532 nm Đo kết máy xét nghiệm sinh hóa Autolab (Đức), tiến hành Bộ môn Sinh lý bệnh - Học viện Quân y ầ Xử lý số liệu Tính toán giá trị trung bình {X ), độ lệch chuẩn (SD), so sánh giá trị trung bình nhóm độc lập dùng thuật toán t-test với phẩn mềm SPSS 15 STAVIEVV 5.1 Kết nghiên cứu Kết xét nghiêm thỏ thực nghiệm Tiến hành nghiên cứu thỏ thực nghiệm, kết trình bày bảng bảng Bòng l Bién đổi hoạt độ SODữong máu ứa cócnhóm thỏ cácthời ữếm nghiên cứu Nghiên cứu (n=30) Chứng (n=30) N10(3) N3(2) N0(1) SOD(%) Nhóm NI (4) p p^.^ ... chống oxy hoá mạnh thực nghiệm bỏng nặng, phụ thuộc vào liểu lượng thời gian sử dụng [6] Trong nghiên cứu này, kết cho thấy thỏ thực nghiệm gây bỏng, hoạt độ SOD máu tăng cao rõ rệt sau bỏng ngày... có tác dụng làm giảm trình hình thành gốc oxy tự do, giảm trình oxy hoá chất béo (sản phẩm cuối MDA), có tác dụng bảo vệ thể chống oxỵ hoá Kết luận Cao lỏng HLGDT dùng đường uống có tác dụng chống. .. peroxy hóa lipid màng tế bào Sự giải phóng gốc oxy tự thể trạng thái stress oxy hoá bệnh nhân bỏng nặng có diện tích bỏng từ 30% DTCT trở lên [ 1] Nghiên cứu Nguyen T.T cho thấy bệnh nhân bỏng