TÀI LIỆU THAM KHẢO Trường Đại học Dược Hà Nội (2011), Báo cáo tự đánh giá trường Đại học Dược Hà Nội Trung tâm Đảm bảo chất lượng đào tạo Nghiên cứu phát triển giáo dục, Đại học Quốc gia Hà Nội (2005), Giáo dục đại học chất lượng đánh giá, NXB Đại học Quốc gia Hà Nội Lẽ Đình (2008) Đánh giá giáng dạy - Một nhân tố quan trọng đảm báo cao chát lượng giáo dục đại học http://ussh.edu.vn/ danh-gia-giang-day-mot-nhan-to-quan-trong-trong-dam-bao-va-nang-cao-chat-luong-giao-duc-dai-hoơ711 Đại học Đà Nằng Lẩy ý kiến phản hói từ người học http://www.udn.vn/ (truy cập ngày 01/10/2010) Nghiên cứu đặc điểm vi học, thành phân hóa học tác dụng giải lo âu hai ioài Mimosa (Mimosa púdica L Mimosa diplotricha c Wright ex SA., Mimosaceaej Nguyễn Quỳnh Chi*, Lê Thanh Bình*, Nguyễn Thu Hằng*, Trần Thu Thủy*, Đỗ Văn Khái**, Nguyễn Hoàng Anh* * Trường Đại học Dược Hà Nội, ** Trường Cao đẵng DượcHải Dương SUMMARY This study was designed to compared two Mimosa species, one has been used traditionally as hypnotic agent (M púdica L.) while the other has been considered as harmful invasive plant (M diplotrica C.Wright ex Sa.j Microscopic characteristics contribute to distinguish two species in one hand and to standardize these plants in the other hand The prensence of some chemical components has been primarily identified by using TLC In mice at doses of 2.4 g/kg and 4.8 g/kg of body weight, both of them exhibited anxiolytic activity in elevated plus maze model, equivalent to that of diazepam (2 mg/kg) Từkhóa: giải lo âu Mimosa púdica Mimosa diplotricha, trinh nữ, xấu hổ Đặt vấn đề Bên cạnh loài Mimosa púdica L (cây xấu hổ, Trinh nữ) biết đến từ lâu y học cổ truyển với tác dụng an thẩn, nước ta có loài Mimosa khác Mimosa diplotricha C.Wright ex Sa (thường gọi Trinh nữ móc, Trinh nữ thân vuông) có đặc điểm thực vật, sinh thái gắn giống loài Mimosa púdica L Đây loài nằm danh mục loài ngoại lai xâm hại, thường mọc lẫn với loài Mimosa púdica L phát triển nhanh, Việt Nam, loài chưa sử dụng làm thuốc, y học cổ truyển số nước Mimosa diplotricha C.Wright ex Sa sử dụng với tác dụng an thẩn [ ] Do mọc xen lẫn nên thu hái loài Mimosa púdica L thường bị lẫn với loài Mimosa diplotricha C.Wright ex Sa Nghiên cứu thực nhằm bước đẩu phân biệt hai loài mặt vi học, hóa học, đồng thời đánh giá tác dụng giải lo âu loài Mimosa diplothcha C.Wright ex Sa., so sánh đồng thời với tác dụng loài Mimosa pudica L nhóm công bố nghiên cứu trước [ ] Nguyên liệu phương pháp nghiên cứu Nguyên liệu - Dược liệu: Phẩn mặt đất hai loài thu hái Quốc Oai - Hà Nội vào tháng 10/2011 TS Trần Thế Bách - Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật giám định tên khoa học là: Mimosa pudica L Mimosa diplotricha c Wright ex Sa., họ Trinh nữ (Mimosaceae) Tiêu hai loài (số hiệu VAT 35, VAT 39) lưu trữ phòng thực vật - Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật Bộ môn Dược liệu Trường Đại học Dược Hà Nội - Cao lỏng 1:2 hai loài Mimosa pudica L (ký hiệu X,) Mimosa diplotricha c Wright ex Sa (ký hiệu Xj) thu phương pháp sắc với nước (sắc lẩn, lẩn đẩu giờ, hai lẩn sau lẩn 30 phút), sau dịch sắc gộp lại cô đến dạng cao lỏng : - Thuốc đối chiếu diazepam (Biệt dược Seduxen® mg Gedeon Richter, Hungary) - Động vật thí nghiệm: chuột nhắt tráng giống, chủng Swiss khỏe mạnh, tuẩn tuổi, khối lượng trung bình 20±2 g cung cấp Viện Vệ sinh Dịch tể Trung ương Chuột chia lô ngẫu nhiên 10 -12 con/lô, nuôi điểu kiện nhiệt độ 24°c, ánh sáng tự nhiên, nuôi thức ăn chuẩn, uống nước tự Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu đặc điểm vi học quan sát, mô tả chụp ảnh đặc điểm hiển vi hai loài Mimosa bao gồm đặc điểm vi phẫu thân đặc điểm bột phận mặt đất hai loài [3] Nghiên cứu thành phân hóa học: định tính thành phán hóa học hai loài phản ứng hóa học sắc ký lớp mỏng [ ] Đánh giá tác dụng giải lo âu hai loài Mimosa: - Sử dụng mô hình chữ thập nâng cao theo mô tả Emamghoreishi cộng [4]: Dụng cụ thí nghiệm cấu tạo hình chữ thập gồm tay kín kích thước 30 X X 15cm (dài X rộng X cao), đặt vuông góc với tạo khoảng trung tâm có kích thước X cm Bộ dụng cụ đặt cách nển nhà 60 cm, cường độ chiếu sáng thời gian làm thực nghiệm trì bóng đèn 60W Chuột đặt nhẹ nhàng vào vùng trung tâm, mặt hướng vể cánh tay hở, sau tự di chuyển khám phá phút Chuột coi cánh tay chân đểu nằm cánh tay Sau tiến hành thí nghiệm với chuột, dụng cụ thí nghiệm lau trước tiến hành với chuột để tránh lưu giữ mùi Chỉ tiêu đánh giá: ghi nhận số lẩn vào thời gian lưu lại vùng cánh tay hở chuột - Điểu kiện thí nghiệm: thí nghiệm tiến hành phòng riêng biệt, yên tĩnh Thời gian tiến hành thí nghiệm khoảng từsh - 17h - Tiến hành; chuột chia ngẫu nhiên thành lô cho uống thuốc thử tương ứng (liểu dược liệu tính theo dược liệu khô tuyệt đối), ngày lẩn vào h sáng: + Lô : uống dung dịch natri clorid 0,9% + Lô 2: uống diazepam liều mg/kg + Lô 3: uống XI liều 2400 mg/kg thể trọng chuột + Lô 4: uống XI liểu 4800 mg/kg thể trọng chuột + Lô 5; uống X2 liểu 2400 mg/kg thể trọng chuột + Lô : uống X2 liều 4800 mg/kg thể trọng chuột Chuột uống thuốc ngày liên tục Tiến hành thí nghiệm vào ngày thứ 5, sau cho chuột uống thuốc Xử lý số liệu: Dữ liệu lưu trữ, phân tích phán mém SPSS 16.0 biểu diễn dạng giá trị trung bình ± sai số chuẩn (X ± SE) Mẩu kiểm chuẩn test Kolmogorow- Smirnow sau số liệu không tuân theo phân bố chuẩn kiểm định test phi tham số Kruskal - Wallis Mamn - Whitney u test để so sánh khác biệt lô Sự khác biệt coi có ý nghĩa thống kê p < 0,05 2 tay hở kích thước 30 X X 0,2 cm, tay kín hở 16 Nghiên cúudiiợc Thô n g tin th u õ c Sỗ /2013 Kết bàn luận Đặc điểm vi học hai loài Mimosa pudica L Mimosa diplotrìcha C.Wright ex Sa Đặc điểm vi phẫu - Đặc điểm vi phẫu thân Mimosa pudica L (hình 1): Mặt cắt ngang thân có tiết diện tròn Quan sát từ vào thấy: Ngoài lớp biểu bì (1) gồm hàng tế bào hình chữ nhật xếp xít mang lông che chở đơn bào (9) Mô mềm vỏ gồm hàng tế bào hình bầu dục (2), thuôn dài Bên mô mềm vỏ lớp mô cứng (3) gồm hàng tế bào xếp liên tục thành vòng Sát mô cứng libe cấp xếp thành vòng (4) bao quanh gỗ cấp ( ) Giữa libe cấp gỗ cấp tắng phát sinh libe - gỗ (5) Bên gỗ có nhiều chỗ lồi Mạch gỗ lớn tập trung nhiều chỗ lồi Sát mạch gỗ libe cấp xếp thành vòng liên tục s Hình2 ViphòuthânloàiM.diplotrichoCWrightexSa uốn lượn sát với mô mểm ruột (7) Trong mô Đặc điểm bột mềm ruột ( 8) gồm nhCmg tế bào tròn, thành mỏng, - Đặc điểm bột phần mặt đất loài Mimosa kích thước lớn so với tế bào mô mềm vỏ Đặc điểm vi phẫu thân Mimosa diplotricha púdica L (hình 3): Bột màu vàng nâu, mùi thơm, vị nhạt Soi kính hiển vi thấy: Mảnh mô mểm (1) gổm C.Wright ex Sa (hình 2): Mật cắt ngang thân có tiết tế bào thành mỏng, thân tế bào dài có chứa hạt tinh diện vuông, lồi nhiều bốn góc lồi bốn cạnh bột Rải rác có mảnh bẩn (2) Lông che chở đơn bào Quan sát từ vào thấy: Ngoài lớp (3) Sợi thành dày, khoang tế bào hẹp thường kết thành biểu bì ( ) gồm hàng tế bào hình chữ nhật xếp bó (4), đứng riêng lẻ Nhiều mảnh mạch xoắn, xít mang lông che chở đơn bào (2) Tiếp đến mạch điểm (5) Mảnh biểu bì mang lỗ khí ( ) Mảnh mô dày (3) gổm - hàng tế bào hình bẩu dục, có vỏ gồm tế bào dài (7) Mảnh nội nhũ ( ) thành dày phát triển chỗ lồi Sát lớp mô chứa nhiểu tinh thể calci oxalat hình cầu gai Nhiểu tinh dày mô mềm vỏ (4) gổm - hàng tế bào thành thể calci oxalat hình cẩu gai đứng riêng lẻ, kích thước mỏng hình báu dục, thuôn dài chỗ lồi lớp 0,013 - 0,015 mm (9) Tinh thể calci oxalat hình khối mô mềm bị ép bẹp không nhìn thấy Bên nằm rải rác, kích thước 0,007 - 0,008 mm (10) Các hạt mô mểm vỏ mô cứng (5) xếp thành vòng phấn tròn, đứng riêng lẻ hay tập trung thành đám, kích liên tục, dày chỗ lổi mỏng thước 0,007 - 0,008 mm (11) Hạt tinh bột tròn, đứng phần lại Sát mô cứng vòng libe cấp xếp liên riêng lẻ, có rốn rõ, kích thước 0,005 - 0,006 mm (12) tục ( ) Tầng phát sinh libe - gỗ (7) Gỗ cấp ( ) - Đặc điểm bột phẩn mặt đất loài Mimosa libe cấp (9) xếp thành bó, nằm chỗ lồi Mô mểm ruột ( ) chiếm phẩn lớn vi phẫu gồm diplotricha C.Wright ex Sa (hình 4): Bột màu vàng xanh, mùi hắc, vị đắng Quan sát kính hiển vi tế bào hình bẩu dục, thành mỏng xếp xít nhau, kích thấy: Mảnh mô mềm thành mỏng có chứa hạt tinh thước lớn tế bào mô mềm vỏ bột (1) Rải rác có mảnh bẩn (2) Lông che chở đơn bào (3) Bó sợi (4) mang tinh thể calci oxalat hình khối Mảnh mạch (5) Mảnh biểu bì mang lỗ khí ( ) Mảnh vỏ có tế bào dài (7) Mảnh nội nhũ ( ) bên chứa tinh thể calci oxalat hình cẩu gai kích thước 0,011 - 0,013 mm Các tinh thể calci oxalat hình khối (9) có kích thước 0,005 - 0,006 mm, tách riêng, thường nằm bó sợi mảnh vỏ Hạt phấn tròn, có hai bốn ngăn, thường đứng riêng lẻ, kích thước 0,023 - 0,027 mm (10) Hạt tinh bột tròn, đứng riêng lẻ tập trung thành đám, kích thước 0,001 - 0,003 mm (11) 6 8 8 lỉinh ViphỗuthònloòiM puđcal M Một sổ đọc điếm bột phân mặt đát loài M pudicũi Thành phân hóa học hai loài Mimosa púdica L Mimosa diplotricha C.Wright ex Sa Kết định tính sơ phản ứng hóa học cho thấy hai loài chứa nhóm chất hữu cơ: alcaloid, flavonoid, sterol, đường khử, acid amin Tuy nhiên, số nhóm hợp chất hữu có mặt loài M púdica L mặt loài M diplotricha c Wright (tanin, saponin, acid hữu cơ, polysaccharid) ngược lại (coumarin) Kết định tính sắc ký lớp mỏng: - Chuẩn bị dịch chấm sắc ký: cân 5g dược liệu khô mẫu vào bình nón dung tích 100 ml Thêm vào bình ml methanol, ngâm nhiệt độ phòng 24 Lọc dịch chiết, bay bớt dung môi đến khoảng ml để chấm sắc ký - Bản mỏng : sử dụng mỏng tráng sẵn Silicagel GF254 (Merk) Bản mỏng hoạt hóa °c - Hệ dung môi khai triển sác ký : ethyl acetat toluen - methanol (8:4:1) Sắc ký sau khai triển quan sát ánh sáng tử ngoại hai bước sóng Ằ = 366 nm X = 254 nm sau màu amoniac Trên hình ảnh sắc ký đổ nhận thấy có khác biệt thành phẩn dịch chiết hai loài M púdica L M diplotricha c Wright ex Sa Sự khác biệt thể rõ quan sát sắc ký đồ ánh sáng tử ngoại bước sóng Ầ = 366 nm bước sóng này, sắc ký đổ dịch chiết loài M púdica L xuất nhiểu vết chất có huỳnh quang màu sắc khác Tuy Hình Một sỗ đặc điếm bộtphổn ưèn mữđđtloàiM diplotrichũ C.Wright ex Sa 1 Hình Sác kỷ đỗ mõu dược liệu ì loòi ánh sáng tử ngoại bước sóng Ầ = 6 nm (ũ ),Ằ = 254 nm (b) m sau màu bòng amoniac {c} 1- Dịch chẾmethonolcủũ loàiM púdico L - Dịch chiê methanol loài M diplotrichaC Wright ex Sa nhiên, đậm độ vết chất khác nhiều Trong đó, sắc ký đổ dịch chiết loài M diplotricha c Wright ex Sa xuất vết chất có huỳnh quang màu xanh có giá trị R, lẩn lượt 0,267; 0,465; 0,569 Tác dụng giải lo âu dịch chiết toàn phần hai loài Mimosa púdica L Mimosa diplotricha C.Wright ex Sa ú Trên mô hình chữ thập nâng cao, diazepam (liều mg/kg) thể tác dụng giải lo âu rõ rệt Diazepam làm tăng có ý nghĩa số lẩn di chuyển vào tay hở (p < 0,05) thời gian lưu lại tay (p < 0,05) chuột so với lô đối chứng (lô uống dung dịch natri clorid 0,9%) Dịch chiết nước toàn phẩn hai loài M púdica L M diplotricha c Wright ex Sa hai mức liều (2,4 g/kg 4,8 g/kg) đểu làm tăng có ý nghĩa số lẩn vào tay hở (p < 0,05) thời gian lưu lại tay hở (p < 0,05) so với lô đối chứng Như vậy, hai loài hai mức liều (2,4 g/kg 4,8 g/kg) đểu thể tác dụng giải lo âu tác dụng tương đương với tác dụng diazepam (liểu mg/kg) (p > 0,05) Biểu đồ Tác dụng giải lo âu diazepam (DZP) dịch chiết nước toàn phẩn loài Mimosa púdica L (XI) M diplotricha c Wright ex Sa (X2) mô hình chữ thập nâng cao 2 NaCl DZP 2400 4800 2400 XI 2400 4800 n^g X2 4800 2400 4800 Biễu đổ Tác dụng giải lo áu diữiepm (DZP) áịch chlét nước toòn phán ứ a loùi Mimosũ puđcũ L (XI) M diploữichũ c Wright ex Sa (X2) mô hình chữ thập nâng CŨO A: sổ lán lưu lại toỵ hở, B:thờiglũnlưulọitoỵhỡ, *p < 0,05, **p < 0,01 sovới nhóm chứng uỗng nước muối sinh lý Dịch chiết nước toàn phẩn hai loài Mimosa mức liều 2,4 g/kg làm tăng số lẩn vào tay hở thời gian lưu lại tay hở tương đương với dịch chiết nước toàn phẩn hai loài mức liểu 4,8 g/kg (p > 0,05) Như tác dụng giải lo âu hai loài không phụ thuộc vàoliểu Dịch chiết nước toàn phẩn M púdica L (liều 2,4 g/kg), có tác dụng làm tăng số lần vào tay hở thời gian lưu lại tay hở tương đương với dịch chiết nước toàn phần M diplotricha c Wright ex Sa (liều 2,4 g/kg) (p > 0,05) Kết tương tự quan sát mức liểu 4,8 g/kg Như vậy, tác dụng giải lo âu hai loài mức liểu tương đương Bàn luận Hai loài Mimosa L, đưa vào nghiên cứu có đặc điểm sinh thái gần giống nên thường mọc xen lẫn vào Nếu quan sát kỹ vể mặt hình thái thấy rõ khác biệt hai loài (loài Mimosa púdica L có thân tròn, màu tím, gai mọc thành đôi đối nhau, cuống phụ xếp hình chân v ịt; loài Mimosa diplotricha c Wright ex Sa thân vuông, màu xanh, gai mọc rải rác theo chiểu dài thân, cuống phụ xếp hình lông chim) Tuy nhiên, điểm giống vể hình thái lớn dễ gây nhắm lẫn thu hái hai loài Mimosa L nghiên cứu nhạy cảm chạm phải Các kết nghiên cứu mặt vi học cho thấy phân biệt hai loài, đặc biệt dược liệu sau sơ chế, dựa đặc điểm vi phẫu thân Đặc điểm bột hai loài khác biệt rõ ràng góp phẩn tiêu chuẩn hóa dược liệu Về tác dụng giải lo âu, kết nghiên cứu cho thấy dịch chiết nước toàn phần hai loài M púdica L M diplotricha c Wright ex Sa hai mức liểu 2,4 g/kg 4,8 g/kg đểu có tác dụng giải lo âu tương đương với diazepam (2 mg/kg) Kết khẳng định lẩn hoạt tính giải lo âu dịch chiết nước toàn phẩn loài M púdica L chứng dùng qua đường tiêm phúc mạc mô hình chữ thập nâng cao biểu né tránh ức chế mô hình chữ thập nâng cao công bố gần Ngo Bum cộng [7], [ ] Cơ chế tác dụng giải lo âu loài M púdica L chưa làm sáng tỏ hoàn toàn kết đẩu tiên cho thấy có mối liên quan với khả tăng cường hoạt tính receptor GABAA điểu biến hoạt động trình truỵển thông tin thông qua serotonin tương tự diazepam [7], Còn loài M diplotricha c Wright ex Sa sử dụng y học cổ truyền số nước với tác dụng an thần [ ] Tuy nhiên, chưa có nghiên cứu đánh giá tác dụng giải lo âu loài Liên quan đến tác dụng giải lo âu, có mặt số nhóm hợp chất hữu đặc biệt flavonoid hai loài Mimosa đểu đáng lưu tâm Một số flavonoid vitexin, isovitexin, orientin, isoorientin, apigenin chiết xuất từ dược liệu công bố có tác dụng giải lo âu [5], Các kết định tính sơ ban đẩu giúp định hướng cho nghiên cứu hóa học theo định hướng tác dụng sinh học Các kết thu cho thấy bên cạnh loài Mimosa púdica L sử dụng từ lâu với tác dụng an thẩn, loài Mimosa diplotricha c Wright ex Sa khai thác sử dụng đặc biệt với tác dụng giải lo âu Tuy nhiên, để đưa loài Mimosa diplotricha c Wright ex Sa., vào sử dụng làm thuốc, cẩn có nghiên cứu sâu vể thành phẩn hóa học độc tính loài Kết luận Để tài mô tả chi tiết đặc điểm vi phẫu thân đặc điểm bột phấn mặt đất hai loài Mimosa púdica L Mimosa diplotricha C Wright ex Sa , qua góp phẩn phân biệt hai loài tiêu chuẩn hóa dược liệu Kết định tính sơ phản ứng hóa học cho thấy hai loài đểu chứa nhóm chất hữu cơ: alcaloid, flavonoid, sterol, đường khử acid amin Tuy nhiên, số nhóm hợp chất hữu có mặt loài M púdica L mặt loài M diplotricha c Wright (tanin, saponin, acid hữu cơ, polysaccharid) ngược lại (coumarin) Có khác biệt rõ rệt sắc ký lớp mỏng dịch chiết methanol hai loài nghiên cứu Cả hai loài Mimosa púdica L Mimosa diplotricha C Wright ex Sa đểu có tác dụng giải lo âu mô hình chữthập nâng cao hai mức liều 2,4 g/kg 4,8 g/kg Tác dụng tương đương với tác dụng diazepam (liều mg/kg) TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Hoàng Anh, Lê Thị Giang, Nguyễn Thu Hằng, Nguyễn Quỳnh Chi (2012), "Đánh giá tác dụng giải lo âu dịch chiết toàn phẩn phân đoạn dịch chiết Xấu hổ", Tạp chí Dược Hệu, 17(3), tr 173 - 178 Bộ môn dược liệu (2006), Thực tập dược liệu phân hóa học, Trung tâm thông tin - Thư viện trường đại học Dược Hà Nội Bộ môn dược liệu (2006), Thực tập dược liệu phân vi học, Trung tâm thông tin - Thư viện trường đại học Dược Hà Nội Emamghoreishi M, Khasaki M„ Aazam M (2005), "Coríandrum sativum: evaluation of its anxiolytic effect in elavate p\ưs-maze", Journal ofEthnopharmacology, 96, pp 365 - 370 Jager A.K., Saaby L (2011), "Flavonoids and the CNS", Molecules, 16,1471 - 1485 Lin LC, Chiou C.T., Cheng J.L (2011), "5-Deoxyflavones with Cytotoxic Activity from Mimosa diplotricha", J Nat, Prod 74, pp 2001 2004 Mbomo A.Y., Gartside s., Ngo Bum E., Njikam N., Okello E., Quade M c (2012), "Effect of Mimosa pudica (Linn.) extract on anxiety behaviour and GABAergic regulation of 5-HT neuronal activity in the mouse", Journal of Psychopharmacology, 25,575-583 Ngo Bum E, Soudi s, Ayissi ER et al (2011) "Anxiolytic activity evaluation of four medicinal plants from Cameroon", Afr J Tradit Complement Altern Med, 8,130-139 20 Nghiên Cứu dược Thông tin thuốc Sỗ 1/2013 ... dụng an thẩn, lo i Mimosa diplotricha c Wright ex Sa khai th c sử dụng đ c biệt với t c dụng giải lo âu Tuy nhiên, để đưa lo i Mimosa diplotricha c Wright ex Sa. , vào sử dụng l m thu c, c n c ... C n lo i M diplotricha c Wright ex Sa sử dụng y h c c truyền số nư c với t c dụng an thần [ ] Tuy nhiên, chưa c nghiên c u đánh giá t c dụng giải lo âu lo i Liên quan đến t c dụng giải lo âu, ... mặt đát lo i M pudicũi Thành phân hóa h c hai lo i Mimosa púdica L Mimosa diplotricha C. Wright ex Sa Kết định tính sơ phản ứng hóa h c cho thấy hai lo i chứa nhóm chất hữu c : alcaloid, flavonoid,