1 B GIO DC V O TO TRNG I HC S PHM H NI TRN HU TUYN NGHIấN CU TC DNG H NG HUYT V M MU CA MT S HP CHT T NHIấN T DCH CHIT DY MT QU (MORINDA UMBELLATA L.) VIT NAM Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 60.42.30 LUN VN THC S SINH HC Hà Nội, 2010 B GIO DC V O TO TRNG I HC S PHM H NI TRN HU TUYN NGHIấN CU TC DNG H NG HUYT V M MU CA MT S HP CHT T NHIấN T DCH CHIT DY MT QU (MORINDA UMBELLATA L.) VIT NAM Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 60.42.30 LUN VN THC S SINH HC Ngi hng dn khoa hc: GS.TS Ngc Liờn Hà Nội, 2010 Lời cảm ơn Bằng lòng biết ơn sâu sắc, xin chân thành cảm ơn GS.TS Đỗ Ngọc Liên Trường Đại học Khoa học tự nhiên Đại học Quốc gia Hà Nội, giao đề tài, tận tình giúp đỡ, bảo suốt trình thực đề tài Tôi xin bày tỏ lòng kính trọng biết ơn tới cán Trung tâm nghiên cứu Khoa học sống, khoa Sinh học, trường Đại học Khoa học tự nhiên Đại học Quốc gia Hà Nội giúp đỡ tạo điều kiện tốt để thực đề tài Tôi xin bày tỏ lòng biết tới Ban giám hiệu, phòng sau đại học Khoa sinh Trường Đại học Sư phạm Hà Nội 2, nơi đào tạo kiến thức bản, phương pháp chuyên môn sinh học thực nghiệm tạo điều kiện để học tập, thực đề tài luận văn Nhân xin bày tỏ lòng biết ơn đến Sở giáo dục Đào tạo tỉnh Bắc Giang Trường THPT Sơn Động 2, Trường THPT Tân Yên tạo điều kiện thuận lợi cho học tập nâng cao trình độ chuyên môn để thực luân văn Cuối xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè người giúp hoàn thành luận văn Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 10 tháng 10 năm 2010 Học viên Trần Hữu Tuyển Li cam oan Tụi xin cam oan nhng kt qu nghiờn cu c trỡnh by lun l tụi thc hin v khụng trựng lp vi bt c tỏc gi no khỏc Tụi xin hon ton chu trỏch nhim i vi nhng ni dung c cp bn lun ny H Ni, ngy 10 thỏng 10 nm 2010 Hc viờn Trn Hu Tuyn MC LC Trang Li cm n Mc lc Danh mc cỏc bng, hỡnh, biu Danh mc ch vit tt M U NI DUNG CHNG TNG QUAN TI LIU 1.1 MT S HP CHT T NHIấN THC VT 1.1.1 Hp cht phenolic 1.1.2 Flavonoid thc vt 1.1.3 Tannin 11 1.1.4 Alkaloid 12 1.2 BNH BẫO PHè V I THO NG 15 1.2.1 Bnh bộo phỡ 15 1.2.2 Bnh ỏi thỏo ng 22 1.3 VI NẫT V LOI MORINDA UMBELLATA L 28 CHNG I TNG V PHNG PHP NGHIấN CU 30 2.1 I TNG NGHIấN CU 30 2.1.1 Mu thc vt .30 2.1.2 Mu ng vt 30 2.2 PHNG PHP NGHIấN CU .31 2.2.1 Quy trỡnh chit xut 31 2.2.2 Kho sỏt thnh phn húa hc cỏc phõn on dch chit 33 2.2.3 Sc ký lp mng 36 2.2.4 nh lng polyphenol tng s theo phng phỏp Folin Ciocalteau .36 2.2.5 To mụ hỡnh chut bộo phỡ v ỏi thỏo ng thc nghim .38 2.2.6 Xỏc nh LD50 39 2.2.7 Nghiờn cu cỏc ch s sinh lý ca chut bộo phỡ v ỏi thỏo ng 39 CHNG KT QU NGHIấN CU V THO LUN 41 3.1 TCH CHIT, NH TNH, NH LNG CC HP CHT T NHIấN T THN L CA MORINDA UMBELLATA L 41 3.1.1 Kt qu tỏch chit cỏc phõn on .41 3.1.2 nh tớnh cỏc hp cht t nhiờn t cỏc phõn on dch chit .43 3.1.3 Phân tích thành phần hợp chất tự nhiên từ dây Mặt quỷ sắc kí lớp mỏng .44 3.1.4 nh lng polyphenol tng s cỏc phõn on dch chit 46 3.1.5 Th c tớnh cp,xỏc nh LD50 47 3.2 TH NGHIM TRấN Mễ HèNH CHUT GY BẫO PHè THC NGHIM 48 3.2.1 To mụ hỡnh chut bộo phỡ thc nghim .48 3.2.2 Tỏc dng ca mt s phõn on dch chit loi Mt qu lờn chut gõy bộo phỡ thc nghim .52 3.3 TH NGHIM TRấN Mễ HèNH CHUT GY T THC NGHIM .63 3.3.1 To mụ hỡnh chut ỏi thỏo ng mụ phng theo type 63 3.3.2 Tỏc dng gim nng ng huyt ca cỏc phõn on dch chit 64 3.3.3 Tỏc dng ca cỏc phõn on dch chit n cỏc ch s húa sinh khỏc 69 KT LUN V KIN NGH 74 KT LUN .74 KIN NGH 75 DANH MC CC BNG Trang Bng 1.1.Tiờu ca t chc y t th gii WHO v chn oỏn T 23 Bng 2.1 Thnh phn thc n v bộo 31 Bng 3.1 Khi lng khụ ca cỏc phõn on dch chit (g) 42 Bảng 3.2 Hiệu suất điều chế phân đoạn từ dây Mặt quỷ .42 Bng 3.3 Kt qu th nh tớnh mt s hp cht t nhiờn cỏc phõn on dch chit t loi Morinda umbellata L .43 Bng 3.4: c im cỏc bng vch ca cỏc phõn on dch chit t dõy Mt qu .46 Bng 3.5 nh lng polyphenol tng s cỏc phõn on dch chit t loi Mt qu .47 Bng 3.6: Kt qu th c tớnh cp theo ng ung cao phõn on EtOH 48 Bng 3.7: Kt qu lng chut trc v sau tun v bộo 49 Bng 3.8: Kt qu xột nghim cỏc ch s gia lụ bộo v lụ gy 51 Bng 3.9: Kt trng lng c th chut trc v sau tun iu tr 53 Bng 3.10: Kt nng glucose cỏc lụ chut trc v sau tun iu tr 55 Bng 3.11: Nng cỏc ch s húa sinh ca cỏc lụ chut trc v sau tun iu tr 57 Bng 3.12: Nng glucose huyt ca cỏc lụ chut thớ nghim sau 10 gi iu tr 65 Bng 3.13: Nng glucose huyt ca cỏc lụ chut thớ nghim sau 21 ngy iu tr 67 Bng 3.14: Nng cỏc ch s húa sinh ca cỏc lụ chut sau tun iu tr 69 DANH MC HèNH, BIU Trang Hỡnh 1.1 Khung cacbon ca flavonoid Hỡnh 1.2 Cu trỳc ca Rutin v Saponin Hỡnh 1.3 Cu trỳc ca flavonoid (A), isoflavonoid (B) v neoflavonoid (C).8 Hỡnh 1.4 Cu trỳc ca cafein v nicotin .13 Hỡnh 2.0 Mu thc vt 30 Hình 2.1 Mô hình chiết rút phân đoạn hợp chất tự nhiên từ dây Mặt quỷ 32 Hỡnh 2.2 Kt qu xõy dng ng chun acid gallic 38 Hình 3.1: Mô hình chiết rút phân đoạn hợp chất tự nhiên từ dây Mặt quỷ 41 Hỡnh 3.2:nh chy sc ký dch chit dõy Mt qu 45 Hỡnh 3.3: Biu trng lng trung bỡnh ca cỏc lụ chut 49 Hỡnh 3.4: Chut nuụi ch n bỡnh thng (A) v v bộo (B) 50 Hỡnh 3.5: Biu ch s húa sinh mỏu chut i chng v v bộo .51 Hỡnh 3.6: Biu ch s lipase mỏu chut i chng v v bộo 52 Hỡnh 3.7 Biu trng lng c th chut trc v sau tun iu tr 54 Hỡnh 3.8 Biu so sỏnh ch s glucose gia cỏc lụ chut thớ nghim .56 Hỡnh 3.9: Biu so sỏnh ch s cholesterol gia cỏc lụ chut thớ nghim 58 Hỡnh 3.10: Biu so sỏnh ch s tryglycerid gia cỏc lụ chut thớ nghim 59 Hỡnh 3.11: Biu so sỏnh ch s HDL gia cỏc lụ chut thớ nghim 60 Hỡnh 3.12: Biu so sỏnh ch s LDL gia cỏc lụ chut thớ nghim 61 Hỡnh 3.13: Biu so sỏnh ch s lipase gia cỏc lụ chut thớ nghim 62 Hỡnh 3.14: Biu so sỏnh s thay i nng glucose huyt ca cỏc lụ chut thớ nghim sau 10 gi iu tr 66 Hỡnh 3.15: Biu so sỏnh s thay i nng glucose huyt ca cỏc lụ chut thớ nghim sau 21 ngy iu tr 68 Hỡnh 3.16: Biu so sỏnh nng triglycerid ca cỏc lụ chut T sau 21 ngy iu tr 70 Hỡnh 3.17: Biu so sỏnh nng cholesterol ca cỏc lụ chut T sau 21 ngy iu tr 71 Hỡnh 3.18: Biu so sỏnh nng HDLC ca cỏc lụ chut T sau 21 ngy iu tr .72 Hỡnh 3.19: Biu so sỏnh nng LDLC ca cỏc lụ chut T sau 21 ngy iu tr 72 10 DANH MC CH VIT TT BP Chl Cho T EtOAc EtOH Glu HDL LDL LD50 Metf n-hex P STZ Tri Bộo phỡ Chloroform Cholesterol ỏi thỏo ng Ethylacetat Ethanol Glucose Lipoprotein t trng cao (High-density lipoprotein) Lipoprotein t trng thp (Low-density lipoprotein) Medium letalisdosis Metformin n - hexan Phõn on Streptozotocin Triglycerid 79 cỏc lụ chut T type sau 21 ngy iu bng cao phõn on EtOH, nhexan, EtOAc v Metformin tng ng l: 61,1%; 61,5%; 50,7%; 74,03% õy l kt qu kh quan m nhng hng nghiờn cu tip theo v phõn on ny tỏc dng h ng huyt v cha bnh T Tuy nhiờn, theo chỳng tụi cn phi tng liu iu tr cú hiu qu cao hn, bi vỡ liu LD50 rt cao ti 20000 mg m khụng thy giỏ tr LD50 3.3.3 Tỏc dng ti nng mt s ch s hoỏ sinh chut T sau 21 ngy iu tr Sau nghiờn cu v tỏc dng h ng huyt ca cỏc lụ iu tr, chỳng tụi tip tc nghiờn cu v tỏc ca cỏc phõn on dch chit n cỏc ch s hoỏ sinh mỏu chut ca cỏc lụ Kt qu c th hin bng 3.14 v biu hỡnh 3.16, 3.17, 3.18, 3.19 Bng 3.14 Nng cỏc ch s húa sinh ca cỏc lụ chut T sau tun iu tr Lụ Lụ (i chng) Lụ (EtOH) Lụ (n- hexan) Lụ (EtOAc) Lụ (Metf) 1,120,61 1,050,55 (6,3%*) 0,950,3 (15,2%**) 0,960,1 (14,3%**) 1,110,22 (0,9%*) 3,60,77 3,160,51 (12,2%**) 3,490,42 (3,1%**) 2,510,12 (30,3%**) 2,30,31 (36,1%**) HDLC 1,90,21 2,660,25 (40%**) 2,820,14 (48,4%**) 2,140,35 (12,6%*) 1,650,41 (13,2%*) LDLC 1,30,42 0,770,53 (40,8%**) 0,460,15 (64,6%***) 0,370,02 (71,5%***) 0,330,04 (74,6%***) Ch s Triglycerid Cholesterol Ghi chỳ: p>0,05; * p[...]... lecitin v bilirubin ớt gp hn Cholesterol khụng th ho tan trong mỏu c Nú phi c vn chuyn bng mt cht vn chuyn gi l lipoprotein LDLC cholesterol (Lowdensity lipoprotein) hay cũn gi l mt loi cholesterol xu (cholesterol bad) HDLC cholesterol (High-density lipoprotein) hay cũn gi l mt cholesterol tt (cholesterol good) C hai loi cholesterol ny cựng vi triglycerid v Lp(a) cholesterol to nờn cholesterol ton phn... - LDL cholesterol (LDLC) : LDLC l mt cholesterol xu Khi cú quỏ nhiu loi ny lu thụng trong mỏu, nú cú th gõy tc ng mch, lm tng nguy c bnh mch vnh v t qy LDLC c sn xut t nhiờn bi c th S sn xut quỏ nhiu cholesterol ny cú th do di truyn t cha m n ch n nhiu m, cholesterol cng lm cho nng LDLC tng cao Nu gia trong ỡnh cú ngi cú LDLC mỏu cao thỡ nhng thnh viờn cũn li s cú nhiu nguy c tng nng LDLC - HDL... cỏc alkaloid l dn xut ca pyrolindine v pyperdine, i din l cacpain - Nhúm 2: Gm cỏc alkaloid l dn xut ca pyridine v pyperdine, i din l nicotine cú trong cõy thuc l , thuc lo - Nhúm 3: Gm cỏc alkaloid l dn xut ca quinolin - Nhúm 4: Gm cỏc alkaloid l dn xut ca acridin, cỏc ankaloid thuc nhúm ny ớt gp - Nhúm 5: Gm cỏc alkaloid l dn xut ca isoquilolin - Nhúm 6: Gm cỏc alkaloid l dn xut ca indol, i din l renzymecpin... cholesterol (HDLC): Khong 1/4 n 1/3 cholesterol mỏu c vn chuyn bi mt lipoprotein t trng cao (high-density lipoprotein - HDL) HDL cholesterol l mt cholesterol tt bi vỡ nng cao ca HDLC c xem nh tỏc nhõn bo v chng li cn au tim cp Nng thp ca HDLC (thp hn 40 mg/dl) s lm tng nguy c bnh tim Cỏc chuyờn gia y khoa ngh rng HDLC s vn chuyn cholesterol ra khi mch mỏu v tr v gan Mt vi chuyờn gia tin rng HDLC... cỏc alkaloid l dn xut ca imodazol, i din l febrifugin v pegannin - Nhúm 8: Gm cỏc alkaloid l dn xut ca quinazolin, i din l febrifugin v pegannin - Nhúm 9: Gm cỏc alkaloid l dn xut ca purin, i din l cafein, theobromin cú trong cõy chố, c phờ, ca cao - Nhúm 10: Gm cỏc alkaloid l dn xut ca steroid, i din l solacodin - Nhúm 11: Gm cỏc alkaloid l dn xut ca ditecpen, ớt gp thc vt - Nhúm 12: Gm cỏc alkaloid... 3 lp: Flavonoid (2-phenylbanzopyral) (A), isoflavonoid (3banzopyran) (B) v neoflavonoid (4-benzopyran) (C) [45] O 3' 2' 9 7 4' 1 8 O 1' 3 2 5' 6' 6 3 10 5 4 O 4 A B C Hỡnh 1.3 Cu trỳc ca flavonoid (A), isoflavonoid (B) v neoflavonoid (C) Ngoi ra, tựy theo mc oxy húa ca vũng pyran, s cú mt hay khụng cú mt ca ni ụi gia C2 v C3 v nhúm cacbonyl C4 m cú th 19 phõn bit flavonoid thnh cỏc nhúm ph: flavan,... gii WHO v nng glucose trong mỏu chn oỏn T [5] Nng ng huyt l c úi Nng ng huyt 2 gi sau khi lm nghim phỏp tng ng huyt Kt lun CM < 5,6 mmol /l CM < 7,8 mmol /l Bỡnh thng 5,6mmol /l CM < 7mmol /l 7,8mmol /l CM < 11,1mmol /l CM > 7mmol /l CM > 11,1mmol /l Ri lon dung np ng ỏi thỏo ng * CM : Nng ng huyt Trong nhng nm gn õy, T ang ngy cng tr nờn l vn ln i vi gii y khoa cng nh i vi cng ng iu ú hon ton cú cn nguyờn... nhúm hydroxyl Tựy thuc v s lng nhúm hydroxyl m chỳng c gi l monophenol (phenol), diphenol (pyrocatechin, hydroquinol), triphenol (pyrogalol, oxyhidroquinol) - Nhúm hp cht phenolic phc tp: Trong thnh phn cu trỳc phõn t ca chỳng ngoi vũng benzen chỳng cũn cú d vũng, mch nhỏnh i din nhúm ny l axid cinamic, acid cumaric - Nhúm hp cht phenolic a vũng: L nhúm a dng nht trong cỏc hp cht phenol, cú cu trỳc... flavonoid Cỏc flavonoid cú trong tt c cỏc b phn ca cõy Mt s cú hot tớnh sinh hc th hin kh nng chng oxy húa Trong thc vt, flavonoid tn ti dng t do (aglycol) v dng liờn kt (glycoside) Glycoside b thy phõn trong mụi trng acid hoc enzyme s gii phúng ng v aglycon tng ng Trong t nhiờn, phn ln flavonoid u tn ti di dng glycoside Cú hai dng glycoside l O-glycoside v Cglycoside i vi O-glycoside phõn t ng liờn... cholesterol d tha khi thnh ng mch mt cỏch t t [25] - Triglycerid: Triglycerid l mt dng cht bộo gúp phn to hỡnh c th Tng triglycerid cú th do tha cõn, bộo phỡ, ớt vn ng, hỳt thuc l , s dng ru bia quỏ mc, hoc cú mt ch n giu tinh bt (bng hoc hn 32 60% calo ca khu phn n) Ngi cú nng triglycerid trong mỏu cao thỡ thng cú nng cholesterol ton phn cao, trong ú cú nng LDL cholesterol cao v HDL cholesterol ... (Lowdensity lipoprotein) hay cũn gi l mt loi cholesterol xu (cholesterol bad) HDLC cholesterol (High-density lipoprotein) hay cũn gi l mt cholesterol tt (cholesterol good) C hai loi cholesterol ny cựng... cựng vi triglycerid v Lp(a) cholesterol to nờn cholesterol ton phn Tt c c xỏc nh bng cỏch xột nghim mỏu - LDL cholesterol (LDLC) : LDLC l mt cholesterol xu Khi cú quỏ nhiu loi ny lu thụng mỏu,... nng glucose mỏu chn oỏn T [5] Nng ng huyt l c Nng ng huyt gi sau lm nghim phỏp tng ng huyt Kt lun CM < 5,6 mmol /l CM < 7,8 mmol /l Bỡnh thng 5,6mmol /l CM < 7mmol /l 7,8mmol /l CM < 11,1mmol /l CM