Đang tải... (xem toàn văn)
Tổng quan về hợp chất saponin
TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI VIỆN CNSH VÀ CNTP BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC TIỂU LUẬN MÔN HỌC KỸ THUẬT THU NHẬN CÁC CHẤT CÓ HOẠT TÍNH SINH HỌC TỪ THỰC VẬT Đề tài: TỔNG QUAN VỀ HỢP CHẤT SAPONIN Giảng viên hướng dẫn: PGS.TS ĐỖ THỊ HOA VIÊN Sinh viên thực hiện: Ngô Minh Sâm 20113254 Đinh Văn Quý 20113564 Đoàn Thị Phương Thảo 20113577 Tô Thị Nga 20113176 Lê Thị Hương 20112962 MỤC LỤC I Giới thiệu chung saponin II Phân loại cấu trúc III Saponin triterpenoid 1.1 Saponin triterpenoid pentacyclic 1.2 Saponin triterpenoid tetracyclic Saponin steroid 2.1 Nhóm spirostan: 2.2 Nhóm furostan: 10 2.3 Nhóm aminofurostan: 11 2.4 Nhóm spirosolan: 12 2.5 Nhóm solanidan: 12 2.6 Các saponin steroid khác 13 Các phương pháp định tính 14 1.1 Dựa tính chất tạo bọt: 14 Dựa tính chất phá huyết: 14 Dựa vào tính độc cá: 14 Dựa vào khả tạo phức với Cholesterol: 15 Dựa vào phản ứng tạo màu: 15 Sắc lý lớp mỏng: 15 Xác định quang phổ: 17 IV Các phương pháp định lượng 17 Phương pháp cân: 17 Phương pháp đo quang: 17 Sắc ký lỏng cao áp: 18 V Hoạt tính sinh học saponin 18 VI MỘT SỐ SAPONIN CÓ HOẠT TÍNH ĐƯỢC SỬ DỤNG TRÊN THỰC TẾ 20 Saponin nhân sâm – Saponin triterpenoide 20 1.1 Tổng quan Nhân Sâm 20 1.2 Chiết tách phân tích hàm lượng Ginsenosides từ nhân sâm 22 Sapogenin steroid từ dứa mỹ (agave)- hecogenin: 23 1.1 Đặc điểm phân bố: 23 1.2 Thành phần hóa học: 24 VII 1.3 Ứng dụng: 24 1.4 Chiết xuất Hecogenin từ dứa mỹ: 25 MỘT SỐ SẢN PHẨM SAPONIN ĐƯỢC SỬ DỤNG TRÊN THỊ TRƯỜNG 26 Ứng dụng nuôi trồng thủy sản 26 Ứng dụng y dược 27 TÀI LIỆU THAM KHẢO 28 I Giới thiệu chung saponin Saponin hay saponoid nhóm glycosid lớn, Sapo tiếng la tinh có nghĩa sà phòng Saponin có mặt loài thực vật số họ đậu: đậu tương, đậu Hà Lan số loài động vât : hải sâm, cá sao,… Cấu trúc saponin gồm phần: Gốc đường – Glycon gốc không đường – Aglycon Hình : Cấu trúc saponin Dựa theo cấu trúc hoá học chia ra: saponin triterpenoid saponin steroid Về tính chất vật lý, hóa học: - Saponin đa số có vị đắng trừ số glycyrrhizin có cam thảo bắc, abrusosid cam thảo dây, oslandin Polypodium vulgare có vị - Saponin tan nước, alcol tan aceton, ether hay hexan người ta dùng dung môi để tủa saponin Saponin bị tủa chì acetat, bari hydroxyd, ammoni sulfat - Saponin khó bị thẩm tích, người ta dựa vào tính chất để tinh chế saponin trình chiết xuất - Phần genin tức sapogenin dẫn chất acetyl sapogenin thường dễ kết tinh saponin - Saponin triterpenoid có loại trung tính loại acid, saponin steroid có loại trung tính loại kiềm Nhờ có cấu trúc hóa học đặc biêt, saponin cho thấy tính chất riêng, không giống với nhóm chất có hoạt tính khác, ứng dụng nhiều việc đinh tính định lượng: - Có khả tạo bọt lớn, có tác dụng nhũ hóa tẩy : - Phá vỡ tế bào hồng cầu nồng độ loãng - Làm thay đổi tính thấm biểu mô đường hô hấp, gây độc cho - Làm kích ứng niệm mạc, gây số tượng : hắt hơi, cá đỏ mắt, … ứng dụng với tác dụng long đờm, lợi tiểu,… - Có thể tạo phức với Cholesterol số steroid khác Tuy nhiên, có số Saponin lại lên tính chất mà kể đến số saponin thành phần nấm Linh Chi II Phân loại cấu trúc Các hợp chất saponin phân loại thành hai nhóm khác dựa vào khung cấu trúc hóa học hợp chất : Saponin triterpenoid Saponin triterpenoid có chất hợp chất triterpenoid gồm nhóm hemitrerpen, tạo nên hai loại: 1.1 Saponin triterpenoid pentacyclic Bao gồm nhóm nhỏ: Olean, Ursan, Lupan, Hopan a Nhóm olean: Phần lớn saponin triterpenoid tự nhiên thuộc nhóm Hình 2: khung cấu trúc nhóm olean β-amyrin Cấu trúc hóa học: Phần Aglycon thường có vòng thường dẫn chất 3-hydroxy olean 12 - ene, tức – amyrin: Mạch đường nối vào vị trí C-3 theo dây nối acetal vị trí C-28 dây nối ester Số lượng gốc đường tới 10-11 gốc kể mạch tới gốc riêng mạch b Nhóm ursan: Nhóm Ursan có cấu trúc tương tự olean khác nhóm Methyl C-30 không đính vào vị trí C-20 mà đính vào C-19 Hình 3: Khung cấu trúc nhóm Ursan α – amyrin Các saponin nhóm ursan thường gặp nhóm olean Một số saponin thường gặp như: Cinchona glycosid A, Cinchona glycosid B có canhki-na, asiaticosid có rau má,… c Nhóm lupan: Hình 4: khung cấu trúc nhóm lupan Các chất nhóm Lupan có cấu trúc triterpenoid đặc trưng Tuy nhiên, khác với nhóm chất kể trên, Vòng E nhóm lupan vòng cạnh C-20 vòng thường có nối đôi vị trí C20 – C29 d Nhóm hopan: Hình 5: Khung cấu trúc nhóm hopan Cấu trúc nhóm hopan có vòng A,B,C,D giống nhóm trên, vòng E vòng cạnh giống nhóm Lupan, nhiên nhóm C-22 vòng nhóm methyl gốc đính C-18 thay C-17 Saponin biết chất mollugocin A có cỏ thảm Mollugo hirta L 1.2 Saponin triterpenoid tetracyclic Nhóm chia làm nhóm nhỏ: Dammaran, lanostan, cucurbitan a Nhóm Dammaran Đại diện nhóm kể tới saponin nhân sâm Phần aglycon gồm vòng mạch nhánh Khi tác dụng acid mạch nhánh đóng vòng tạo thành vòng tetrahydropyran Bằng phương pháp đặc biệt để cắt phần đường, người ta thu genin thật Hai genin là: protopanaxadiol protopanaxatriol Phần đường nối vào OH cabon số có thêm mạch nối vào OH mạch nhánh Saponin triterpenoid tetracyclic nhóm damaran gặp hạt táo (Ziziphus jujuba Mill.), rau đắng biển (Bacopa monnieri (L.) Wettst b Nhóm Lanostan Holothurin A, saponin có loài hải sâm Holothuria spp ví dụ nhóm Một nhóm phụ nhóm lanostan nhóm cycloartan có cấu trúc 9,19 cyclo abrusosid A, B, C, D có cam thảo dây Abrus precatorius saponin thuộc nhóm c Nhóm Cucurbitan Phần lớn saponin nhóm cucurbitan gặp họ Cucurbitaceae Ở nhóm CH3 góc thay vị trí C10 lại đính C9 Saponin steroid 2.1 Nhóm spirostan: Xét chất sapogenin làm ví dụ: sarsasapogenin, smilagenin, tigogenin Những chất có 27 carbon cholesterol, mạch nhánh từ C 20-27 tạo thành vòng có oxy (16,22 22,26 diepoxy), vòng hydrofuran (vòng E) vòng hydropyran (vòng F) Hai vòng nối với carbon chung C-22 Mạch nhánh gọi mạch nhánh spiroacetal Ba chất đồng phân Smilagenin tigogenin khác cấu hình C-5 Còn sarsasapogenin smilagenin khác cấu hình C-25 Sarsasapogenin có nhóm methyl C-25 hướng axial có cấu hình tuyệt đối 25S, smilagenin nhóm methyl C-25 hướng equatorial có cấu hình tuyệt đối 25R Các sapogenin nhóm có nối vòng C D trans (khác với glycosid tim) Còn vòng A B cis chất sarsasapogenin smilagenin trans chất tigogenin Công thức lập thể chất sarsasapogenin Smilagenin tigogenin Nhóm OH C3 thường hướng , số hướng ví dụ saponin tỳ giải Nhóm spirostan ý nhiều nguồn nguyên liệu quan trọng để bán tổng hợp thuốc steroid Hai sapogenin quan trọng diosgenin (có chủ yếu loài Dioscorea) hecogenin (có chủ yếu loài Agave) Ở dạng glycosid phần đường nối vào OH C-3, số trường hợp C1 Mạch đường thường phân nhánh phức tạp Ví dụ digitonin saponosid có digital, có mạch đường gồm đơn vị đường phân nhánh 2.2 Nhóm furostan: Nhóm có cấu trúc tương tự nhóm spirostan khác vòng F bị biến đổi Trường hợp thứ nhất: vòng F mở nhóm alcol bậc C-26 nối với đường glucose Nếu glucose C-26 bị cắt (bởi enzym acid) xảy đóng vòng F thành vòng hydropyran chuyển thành dẫn chất nhóm III Các phương pháp định tính Dựa vào tính chất đặc trưng, Saponin phân tích định tính, định lượng theo nhiều phương pháp khác nhau: 1.1 Dựa tính chất tạo bọt: Tạo bọt tính chất đặc trưng saponin tạo phân tử saponin lớn có lúc đầu ưa nước đầu kỵ nước Sự tạo bọt saponin có khác môi trường pH khác Người ta dựa tượng để phân biệt sơ saponin steroid saponin triterpenoid Trong định tính saponin, người ta thường dựa vào số tạo bọt Chỉ số bọt số ml nước để hoà tan saponin 1g nguyên liệu cho cột bọt cao 1cm sau lắc đọc (tiến hành điều kiện qui định) Dựa tính chất phá huyết: Hầu hết saponin có tính phá huyết, nhiên khả phá huyết khác nhiều tùy loại saponin Người ta cho tính phá huyết có liên quan đến tạo phức với cholesterol ester màng hồng cầu Qua việc theo dõi tính phá huyết saponin người ta thấy cấu trúc phần aglycon có tác dụng trực tiếp đến tính phá huyết phần đường có ảnh hưởng Hồng cầu động vật khác bị tác động khác saponin Hồng cầu cừu dễ bị phá huyết nên dùng tốt, dùng máu súc vật có sừng khác, dùng máu thỏ thường dễ kiếm phòng thí nghiệm Dựa vào tính độc cá: Cá loài nhạy cảm với saponin, saponin gây chết cá chế ức chế hô hấp, ngăn cản trình vận chuyển oxy máu Ðể đánh giá nguyên liệu chứa saponin, người ta dựa vào số cá Chỉ số cá phải tiến hành điều kiện quy định môi trường, loài cá,… Dựa vào khả tạo phức với Cholesterol: Những saponin triterpenoid tạo phức loại saponin steroid Trong loại steroid digitonin kết hợp với cholesterol gần hoàn toàn, digitonin dùng làm thuốc thử để định lượng cholesterol hoá sinh Dựa vào phản ứng tạo màu: Phản ứng Salkowski: Dung dịch H2SO4 đậm đặc hòa tan saponin cho màu thay đổi từ vàng, đỏ, lơ-xanh hay lơ-tím *Phản ứng Rosenthaler: Saponin triterpenoid cho tác dụng với vanillin % HCl hơ nóng, có màu hoa cà Phản ứng Liebermann-Burchardt: Lấy vài miligram sapogenin hoà nóng vào 1ml anhydrid acetic, cho thêm giọt H2SO4 đậm đặc, dẫn chất steroid có màu lơ-xanh lá, dẫn chất triterpenoid có màu hồng đến tía Ngoài ra, saponin tác dụng với antimoin trichlorid dung dịch chloroform soi đèn phân tích tử ngoại saponin triterpenoid có huỳnh quang xanh saponin steroid vàng Sắc lý lớp mỏng: Sau vài hệ dung môi dùng để khai triển mỏng silicagel-G Saponin triterpenoid: a) Chloroform-methanol-nước (65:35:10) b) Ethyl acetat - acid acetic - nước (8:2:1) c) n Butanol - ethanol (10:2) Saponin nhóm spirostan: a) Chloroform - methanol - nước (65:35:10) b) Chloroform - methanol (8:2) c) n-Butanol bão hoà nước Saponin kiềm: a) Chloroform - ethanol -dd.ammoniac 1%/nước (2:2:1) b) Ethanol-pyridin-nước (3:1:3) Cách màu: Dựa vào tính phá huyết cách tráng lớp gelatin-máu (hoà tan g gelatin 100ml dung dịch NaCl ‰ 60°C, nguội đến 40°C thêm máu bò loại fibrin) phun dung treo máu 2% loại fibrin lên mỏng Các thuốc thử dùng cho loại saponin sapogenin nêu sau phun cần phải sấy 10 phút 110°C quan sát màu ánh sánh thường ánh sáng tử ngoại (365nm): thuốc thử Carr-Price (SbCl3 bão hoà chloroform); thuốc thử Liebermann-Burchardt (1ml H2SO4 + 20ml anhydrid acetic + 50ml chloroform); thuốc thử Salkowski (dung dịch acid sulfuric 10%50% nước 5%-10% ethanol); acid phosphomolybdic 10% ethanol, acid phosphotungstic 20% ethanol, dung dịch acid phosphoric 50% nước, vanillin sulfuric (vanillin 1% cồn tuyệt đối 100ml + acid sulfuric 2ml) Saponin nhóm spirostan màu thuốc thử Sannié (dung dịch vanillin 1% cồn (a), anhydrid acetic + H2SO4 12:1 (b), phun dung dịch (a) sấy 120°C phút sau phun dung dịch (b), vết saponin có màu vàng Ðối với nhóm spirostan nhóm steroid alcaloid dùng thuốc thử Carr-Price để phân biệt dẫn chất có nối đôi nối đôi vị trí C-5 Các dẫn chất D5 có màu đỏ 20°C tím đỏ sau sấy 105°C Cũng phân biệt loại dẫn chất thuốc thử Marquis (0,2ml dung dịch formaldehyd 37% nước + 10ml H2SO4), có loại D5 cho phản ứng Các saponin nhóm spirosolan solanidan phát thuốc thử Dragendorff Xác định quang phổ: Các sapogenin triterpenoid H2SO4 đậm đặc có đỉnh hấp thu cực đại vùng tử ngoại 310nm Cực đại với saponin steroid Phổ hồng ngoại sapogenin steroid đặc biệt có pic đặc trưng mạch nhánh spiroacetal: pic thứ 850 - 857 cm-1 chất 25 S 860 - 866 cm-1 chất 25 R Pic thứ hai gần 900 (894-905), pic thứ ba gần 915 (915-923), pic thứ tư gần 980 (980-987) Ðể phân biệt sapogenin thuộc 25 R 25 S vào cường độ hấp thu pic thứ hai pic thứ ba: chất 25 R pic thứ hai có cường độ hấp thụ mạnh pic thứ ba; 25 S ngược lại IV Các phương pháp định lượng Phương pháp cân: Saponin chiết xuất, tinh cân xác định khối lượng Cách tiến hành chiết trình bày phần sắc ký lớp mỏng Có người ta thủy phân saponin, phần sapogenin tan nước lọc hoà tan dung môi hữu đem bốc dung môi hữu sấy trước đem cân Phương pháp đo quang: Phương pháp đo quang thường dùng định lượng riêng biệt sapogenin sau tách sắc ký giấy sắc ký lớp mỏng Đối với nhóm triterpenoid dùng thuốc thử vanillin-sulfuric để tạo phản ứng màu Ví dụ acid glycyrrhetic cam thảo cho phản ứng cho màu tím Đối với nhóm spirostan, A Akahori dùng aldehyd có nhân thơm + acid phosphoric đo quang 55nm để định lượng (50 g sapogenin + 500 g anis aldehyd ethanol 99%, đun 10 phút 100°C để yên đo mật độ quang 550nm) Các dẫn chất 5-sapogenin (ví dụ diosgenin) dùng thuốc thử FeCl3H3PO4 đo quang 485nm (800mg FeCl3 10ml nước (a), lấy 1ml (a) thêm đủ 50ml với H3PO4 (b) 50 g diosgenin + 50ml (b) làm lạnh phút nước đá, thêm 0,5ml H2SO4, làm lạnh 10 phút đặt tủ sấy nhiệt độ 70°C phút Sau làm lạnh 10 phút để yên 60 phút đem đo 485nm) Sắc ký lỏng cao áp: Sắc ký lỏng cao áp phương pháp sử dụng nhiều định tính, định lượng chất nói chung saponin nói riêng Người ta thực định tính thành phần hay đồng thời nhiều thành phần hỗn hợp Pha tĩnh saponin thường pha đảo PR-18 Pha tĩnh dùng theo chế rây phân tử Hệ dung môi sử dụng sắc ký hỗn hợp nước – methanol – acetonitril với tỉ lệ khác nhau, thêm dung dịch đệm Detector dùng để phát gồm xác định sổ khúc xạ (RI-Refractive Index), hay tán xạ bay (ELSD- Evaporative Light Scattering Detector), detector có nhiều ưu điểm detector khối phổ (MS hay MS/MS với kỹ thuật ion hóa ESI hay APCI) Do saponin có nối đôi, nối đôi liên hợp nên thường có hấp thu tử ngoại vùng sóng ngắn 210 -195nm nên việc sử dụng detector UV (PDA-Photo Diode Array) tương đối hạn chế phân tích saponin Hoạt tính sinh học saponin V Saponin có nhiều lợi ích sức khỏe người Các nghiên cứu chứng minh tác dụng có lợi mức cholesterol máu, ung thư, sức khỏe xương kích thích hệ miễn dịch Mỗi saponin nghiên cứu từ loài thực vật cho thấy tác dụng riêng Giảm Cholesterol Saponin ràng buộc với muối mật cholesterol đường ruột Muối mật hình thành mixen nhỏ với cholesterol tạo thuận lợi cho hấp thụ Saponin gây giảm cholesterol máu cách ngăn chặn tái hấp thu Giảm nguy ung thư Các nghiên cứu saponin có tính chống ung thư chống gây đột biến hoạt động,có thể giảm nguy ung thư người , cách ngăn chặn tế bào ung thư phát triển Saponin gây phản ứng với cholesterol tế bào ung thư, hạn chế tăng trưởng khả tồn tế bào Ngoài ra, nhà nghiên cứu phát saponin giúp ngăn ngừa ung thư ruột kết (“Saponin chống chất gây ung thư” xuất Tạp chí Dinh dưỡng (1995, 125, 717s-724S) Mỹ) gây apoptosis bệnh bạch cầu tế bào cách gây phân bào tế bào gây ung thư Tăng cường khả miễn dịch Các saponin chống lại nhiễm trùng ký sinh trùng Khi ăn vào bụng người, saponin giúp hệ thống miễn dịch chống lại bảo vệ vi khuẩn, virus xâm nhập thể Chất chống oxy hóa Phần không đường saponin hoạt động trực tiếp chất chống oxy hóa, có tác động giảm nguy mắc bệnh ung thư tim mạch Một số loài dược liệu chế phẩm có chứa saponin với ứng dụng cụ thể kể đến như: - Saponin viễn chí, cát cánh, cam thảo thuộc nhóm Olean với tác dụng kích thích tiết niêm dịch khí quản giúp chữa ho,long đờm,kích thích tiết nước bọt,bài tiết tuyến da thông tiểu Ngoài có tác dụng an thần,nâng cao trí lực - Rau má,tì giải có chứa hoạt chất saponin triterpenoid thuốc nhóm ursan có tác dụng lợi tiểu,thông tiểu,… - Thuốc bổ nhân sâm,tam thất số thuốc học nhân sâm chứa hàm lượng lớn saponin, có tác dụng đại bổ nguyên khí, tăng sức lực, giữ tinh lực khỏi hao tổn, ích huyết, an thần, tăng tiết, - Tăng thẩm thấu tế bào, có mặt saponin giúp hoạt chất có tính phân cực khác dễ hòa tan vs hấp thụ… ví dụ digitonin Digital - Một số saponin … có tác dụng chống viêm,một số có tác dụng kháng khuẩn,kháng nấm kháng virus - Saponin Steroid tật lê,cây Dioscorea làm thuốc trị suy tuyến sinh dục nam nữ - Nhiều saponin có tác dụng ức chế hô hấp tiêu diệt loài nhuyễn thể, thân mềm nên Saponin ứng dụng sản xuất số chế phẩm sử dụng dụng nuôi trồng thủy sản (tôm) VI MỘT SỐ SAPONIN CÓ HOẠT TÍNH ĐƯỢC SỬ DỤNG TRÊN THỰC TẾ Saponin nhân sâm – Saponin triterpenoide 1.1 Tổng quan Nhân Sâm Nhân Sâm loài sống lâu năm, cao khoảng 60cm, rễ phát triển thành củ giống hình người.Nhân Sâm mọc hoang, nhiên chủ động trồng nước: Hàn Quốc, Triều Tiên, Việt Nam, Nga, Mỹ, Trung Quốc,…[1] Trong đông y, Nhân sâm vị thuốc quý, đứng đầu vị thuốc bổ Nó có tác dụng đại bổ nguyên khí, giảm mệt mỏi, tác động tới hệ thần kinh giúp an thần, tăng cường trí nhớ Nhiều nghiên cứu khác cho thấy tác động nhân sâm lên huyết áp tim, hệ hô hấp việc bồi bổ thể, tăng cường trình chuyển hóa thể, tăng cường sức chống đỡ bệnh tật.[1] Tác dụng nhân sâm khẳng định nghiên cứu y học đai Chính vậy, nhiều nước khác nhau, Nhân Sâm sử dụng nhiều để làm thuốc bổ sung vào số loại thực phẩm chức khác Thành phần chất Nhân Sâm ý nghiên cứu từ lâu Kết sơ cho thấy, Nhân Sâm có chưa từ 25 đến 50 hợp chất Saponin khác nhau, gọi chung Ginsenosides Hiện nay, phát định tên 150 Ginsenosides khác Nhiều nghiên cứu hàm lượng saponin nhân sâm cho thấy: Có 6% saponin nhân sâm Mỹ, tâm thất khoảng 12%, sâm P.ginseng khoảng 1,5-2%.[2] Cấu tạo hóa học chung Ginsenosides nhân sâm Về Cấu tạo hóa học, hầu hết ginsenosides có khung Hydrocacbon tương đối giống nhau, mang đặc trung hợp chất triterpenoid Các chất có sai khác vị trí nhóm R1 R2, nguyên tử Hydro hay số gốc đường Ngoài có số khác khác mạch nhánh bên vòng Một số Ginsenosides khác gốc R1, R2 [3] 1.2 Chiết tách phân tích hàm lượng Ginsenosides từ nhân sâm Kỹ thuật tách Ginsenosides từ nhân sâm: - Dung môi chiết xuất sửa dụng MeOH với nồng độ khác - Quy trình chiết xuất: Nhân sâm nghiền thành nhỏ lấy lượng xác 5,00g Mẫu chiết xuất chiết hồi lưu ba lần 60,00 ml MeOH 70% (v/v) 30 phút Saponin chiết từ nhân sâm vào dung môi Bốc bớt khoảng 50ml dung môi pha loãng thành 100,00 ml nước cất Chuyển 5,00 ml dịch pha loãng vào cột C18ec SPE tiến hành làm hỗn 10ml MeOH 30% 10 ml H2O Tiếp tục rửa lại 20ml MeOH pha loãng thành 25,0 ml MeOH Sau trình chiết, dịch thu đưa phân tích phương pháp khác Phương pháp phân tích kết Phương pháp sử dụng: Sắc ký lớp mỏng (TLC) Sử dụng pha động: chloroform-ethyl acetate-methanol-nước với tỷ lệ 15: 40: 22: (v/v/v/v) Phát nhúng vào axit sulfuric 5% ethanol, đun nóng 105°C sau nhúng vào dung dịch paraffin/hexane (1: 2) phát UV 366 nm Kết quả: Kết phân tích mẫu đưa Detector Kết phân tích cho đầy đủ thành phần Ginsenosides khác hàm lượng cụ thể Phương pháp phân tích sử dụng cho thấy nhiều lợi ích Nó tiến hành nhanh, đơn giản xác số phương pháp GC hay HPLC [4] Sapogenin steroid từ dứa mỹ (agave)- hecogenin: 1.1 Đặc điểm phân bố: - Chi Agave thuộc họ Dứa Mỹ-Agavaceae, có nhiều loài phân bố nhiều nơi Thế giới: Mexico, Đông Phi, Ấn Độ,… Loài quan trọng Agave sisalana Perr A.foucroydes Lem - Ở nước ta có loài Agave Americana L gọi thùa, dứa mỹ Cây nhập nội, trồng để làm cảnh trở thành mọc dại, trồng làm hàng rào, trồng nhiều nơi nước ta, nhiều tỉnh Bắc Ninh, Bắc Giang, Hà Tây… - Mỗi mang hàng chục mọc từ gốc lên dứa (thơm) Mép có gai cứng bóng cong, tận gai nhọn Cây hoa lần sau 5-15 năm tuổi sau lụi Khi hoa trục hoa mọc thẳng lên từ vòng Trục hoa cao 4-6 m, đường kính khoảng 10cm, mang hàng nghìn hoa đẹp giống giá đèn cắm nhiều nến Đặc biệt mọc nơi đất khô cằn, trồng để xanh hoá đồi trọc 1.2 Thành phần hóa học: - Lá loài Agave chứa đường khử, saccharose, chất nhầy, acid ascorbic saponin steroid (hecogenin tigogenin) Theo Wall 60% loài có chứa saponin Đặc biệt từ số loài Agave Americana L., Agave sisalana Perrine, A foucroydes Lem người ta chiết xuất nhiều chất saponin thủy phân cho sapogenin hecogenin thuộc nhóm spirostan có nhóm chức carbonyl C-12 - Trong trưởng thành, theo Dawidar Fayez (1961) có 0,17% hecogenin , trổ hoa, hàm lượng lên tới 0,23% non củ cán hoa có 0,07% hecogenin, hàm lượng tigogenin lại nhiều Hecogenin Marker chiết lần từ Hectia texensis S Wats thuộc họ Dứa (Bromeliaceae) vào năm 1943 Chỉ gần hecogenin khai thác từ dứa mỹ 1.3 Ứng dụng: - Lá có vị ngọt, cay, tính bình Ta thường dùng sắc uống chữa sốt, lợi tiểu Rễ phơi khô, thái nhỏ ngâm rượu uống giúp tiêu hoá, chữa đau nhức, thấp khớp Cách dùng, liều lượng: Ngày 2-5g khô dạng thuốc sắc để uống, rễ thái mỏng, vàng ngâm rượu hay rượu thuốc Dùng giã nát đắp lên vết thương, vết loét - Trên Thế giới người ta sản xuất sợi từ loài dứa mỹ chủ yếu Agave sisalana Perrine Tại số nước miền đông châu Phi , hàng năm thu hoạch để chế biến khoảng 10 vạn sợi dứa bà dùng làm thảm chùi chân, bện dây thừng chạc, dệt vải thô, bao tải Nước ép từ có chất ngọt, trước số nước nhân dân dùng cho lên men thành thứ rượu Tại Mêhicô rượu nhân dân gọi rượu puncơ (punlque) đem cất rượu gọi rượu mescal - Ở nhiều nước, dứa Mỹ khai thác làm nguồn nguyên liệu chiết hecogenin, để từ bán tổng hợp thuốc steroid 1.4 Chiết xuất Hecogenin từ dứa mỹ: a Chiết xuất lớn: Có thể cho dịch (là dư phẩm chế biến sợi ) vào bể chứa để lên men thu lấy chất lắng đọng bùn giàu sapogenin (5-10%) Thủy phân thêm acid chiết sapogenin dung môi hữu (heptan nóng butanol bão hòa nước) đem tinh - Năm 1974 Ngô Văn Thu cộng (Dược học, 1974, 6, 4-7) chiết từ 50kg dứa mỹ thu hái vùng Thị Cầu (Bắc Ninh), chiết 48g sapogenin toàn phần từ 48g sapogenin toàn phần chiết 14,6g hecogenin (tính 0,03% nguyên liệu tươi) Chiết xuất lỏng-lỏng cách thủy phân acid: Theo NGUGI SAMUEL GITAU, “OPTIMIZATION OF THE PROCESS OF LABORATORY EXTRACTION OF HECOGENIN FROM SISAL (Agave sisalana)”, 2012-10-15 - Sử dụng acid sulfuric loãng 10% pH=1 để chiết Lấy 100ml dịch dứa mỹ cho vào bình tam giác Acid sulfuric loãng 10% bổ sung đạt pH1.0 Mẫu đun nóng 150 ° C-250 ° C khoảng tám ngày, sưởi ấm vào buổi tối Thời gian tối đa cho thủy phân axit 24 35 phút Thêm nước cất khoảng thời gian để bổ sung lượng nước bị bay b Dịch sau thủy phân chiết ethyl acetate Chiết xuất thực ba lần, lần mười phút Loại dung môi sau chiết cách đặt dịch chiết thiết bị bay quay đặt 100 ° C 150 r p m có lắc Thực sắc ký mỏng(TLC) sử dụng chloroform-acetat ethyl(9:1) làm pha động silica gel làm pha tĩnh Hiện màu thuốc thử Sannié (dung dịch vanillin 1% cồn (a), anhydrid acetic + H2SO4 12:1 (b), phun dung dịch (a) sấy 120°C phút sau phun dung dịch (b), vết saponin có màu vàng MỘT SỐ SẢN PHẨM SAPONIN ĐƯỢC SỬ DỤNG TRÊN THỊ TRƯỜNG VII Ứng dụng nuôi trồng thủy sản Với đặc tính gây độc với cá, Saponin sử dụng làm chế phẩm thiết thực nuôi trồng tôm Tại Việt Nam, chế phẩm Saponin sử dụng phổ biến Chế phẩm: SAPONIN BÒ CẠP Công dụng o Diệt tạp trước nuôi, diệt loại ký sinh trùng, giảm độ pH ao nuôi o Kích thích tôm lột vỏ, sinh trưởng nhanh o Cải tạo màu nước o Làm giảm lớp váng mặt nước Thành phần: Bột bã trà 100%, có chứa 14% Saponin Quy cách đóng gói: Bao 10kg - - Ứng dụng y dược Sản phẩm saponin sử dụng bật nói Nhân sâm Ngoài sản phẩm sử dụng trực tiếp, nhân sâm sản xuất tạo thành dạng sản phẩm khác - Sản phẩm: Nhân Sâm Triều Tiên o Hộp củ, khối lượng 75g o Đóng gói dạng hộp sắt, có hộp gỗ - Sản phẩm: Trà Nhân Sâm Hàn Quốc Wongin-T o Thành phần: Tinh chất nhân sâm nguyên chất o Đóng gói: hộp 100 gói nhỏ x gram TÀI LIỆU THAM KHẢO Lợi, Đ.T., Những thuốc vị thuốc Việt Nam 2004 Kinh, P.Q., Giáo trình hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học 2011 Christensen, L.P., Chapter Ginsenosides: Chemistry, Biosynthesis, Analysis, and Potential Health Effects, in Advances in Food and Nutrition Research, L.T Steve, Editor 2008, Academic Press p 1-99 Corthout, J., et al., Quantitative determination of ginsenosides from Panax ginseng roots and ginseng preparations by thin layer chromatography–densitometry Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 1999 21(1): p 187-192 [...]... tính chất đặc trưng, Saponin có thể được phân tích định tính, định lượng theo nhiều phương pháp khác nhau: 1.1 Dựa trên tính chất tạo bọt: Tạo bọt là tính chất đặc trưng nhất của saponin được tạo ra do phân tử saponin lớn và có cùng một lúc một đầu ưa nước và một đầu kỵ nước Sự tạo bọt của saponin có sự khác nhau trong các môi trường pH khác nhau Người ta cũng dựa trên hiện tượng để phân biệt sơ bộ saponin. .. thuốc trị suy các tuyến sinh dục nam nữ - Nhiều saponin có tác dụng ức chế hô hấp và tiêu diệt các loài nhuyễn thể, thân mềm vì thế nên Saponin cũng được ứng dụng trong sản xuất một số chế phẩm sử dụng dụng trong nuôi trồng thủy sản (tôm) VI MỘT SỐ SAPONIN CÓ HOẠT TÍNH ĐƯỢC SỬ DỤNG TRÊN THỰC TẾ 1 Saponin trong cây nhân sâm – Saponin triterpenoide 1.1 Tổng quan về Nhân Sâm Nhân Sâm là loài cây sống lâu năm,... đặc, nếu là dẫn chất steroid thì có màu lơ-xanh lá, còn dẫn chất triterpenoid thì có màu hồng đến tía Ngoài ra, saponin tác dụng với antimoin trichlorid trong dung dịch chloroform rồi soi dưới đèn phân tích tử ngoại thì saponin triterpenoid có huỳnh quang xanh còn saponin steroid thì vàng 6 Sắc lý lớp mỏng: Sau đây là một vài hệ dung môi dùng để khai triển trên các bản mỏng silicagel-G Saponin triterpenoid:... thực phẩm chức năng khác nhau Thành phần các chất trong Nhân Sâm đã được chú ý nghiên cứu từ lâu Kết quả sơ bộ cho thấy, trong Nhân Sâm có chưa từ 25 đến 50 hợp chất Saponin khác nhau, được gọi chung là Ginsenosides Hiện nay, đã phát hiện và định tên được hơn 150 Ginsenosides khác nhau Nhiều nghiên cứu về hàm lượng saponin trong nhân sâm cũng cho thấy: Có 6% saponin trong nhân sâm Mỹ, trong tâm thất khoảng... đây 2 vòng E và F cùng chung 1C và 1N Những chất thuộc 3 nhóm aminofurostan, spirosolan và solanidan đều có chứa N vừa mang tính alcaloid vừa mang tính glycosid nên được gọi là những chất glycoalcaloid 2.6 Các saponin steroid khác Ngoài những nhóm saponin steroid kể trên người ta còn gặp một số saponin steroid có cấu trúc mạch nhánh khác ví dụ polypodosaponin và oslandin được Jizba phân lập 1971 từ... dịch Các saponin có thể chống lại nhiễm trùng bởi ký sinh trùng Khi ăn vào bụng của con người, saponin cũng giúp hệ thống miễn dịch chống lại và bảo vệ vi khuẩn, virus xâm nhập cơ thể Chất chống oxy hóa Phần không đường của saponin cũng hoạt động trực tiếp như một chất chống oxy hóa, có thể có tác động giảm nguy cơ mắc bệnh ung thư và tim mạch Một số loài dược liệu và chế phẩm có chứa saponin với... bộ saponin steroid và saponin triterpenoid Trong định tính saponin, người ta thường dựa vào chỉ số tạo bọt Chỉ số bọt là số ml nước để hoà tan saponin trong 1g nguyên liệu cho một cột bọt cao 1cm sau khi lắc và đọc (tiến hành trong điều kiện qui định) 2 Dựa trên tính chất phá huyết: Hầu hết saponin đều có tính phá huyết, tuy nhiên khả năng phá huyết cũng khác nhau nhiều tùy loại saponin Người ta cho... rất nhạy cảm với saponin, vì saponin có thể gây chết cá bằng cơ chế ức chế hô hấp, ngăn cản quá trình vận chuyển oxy trong máu Ðể đánh giá nguyên liệu chứa saponin, người ta có thể dựa vào chỉ số cá Chỉ số cá cũng phải được tiến hành trong những điều kiện quy định về môi trường, loài cá,… 4 Dựa vào khả năng tạo phức với Cholesterol: Những saponin triterpenoid tạo phức kém hơn loại saponin steroid Trong... hàm lượng lớn saponin, có tác dụng đại bổ nguyên khí, tăng sức lực, giữ tinh lực khỏi hao tổn, ích huyết, an thần, tăng bài tiết, - Tăng sự thẩm thấu của tế bào, sự có mặt của saponin giúp các hoạt chất có tính phân cực khác dễ hòa tan vs hấp thụ… ví dụ như digitonin trong lá Digital - Một số saponin trong … có tác dụng chống viêm,một số có tác dụng kháng khuẩn,kháng nấm và kháng virus - Saponin Steroid... nay là detector khối phổ (MS hay MS/MS với kỹ thuật ion hóa ESI hay APCI) Do các saponin ít có các nối đôi, nhất là nối đôi liên hợp nên thường chỉ có hấp thu tử ngoại ở vùng sóng ngắn 210 -195nm nên việc sử dụng detector UV (PDA-Photo Diode Array) tương đối hạn chế trong phân tích saponin Hoạt tính sinh học của saponin V Saponin có nhiều lợi ích sức khỏe con người Các nghiên cứu đã chứng minh các tác ... số Saponin lại lên tính chất mà kể đến số saponin thành phần nấm Linh Chi II Phân loại cấu trúc Các hợp chất saponin phân loại thành hai nhóm khác dựa vào khung cấu trúc hóa học hợp chất : Saponin. .. vào tính chất để tinh chế saponin trình chiết xuất - Phần genin tức sapogenin dẫn chất acetyl sapogenin thường dễ kết tinh saponin - Saponin triterpenoid có loại trung tính loại acid, saponin. .. 18 V Hoạt tính sinh học saponin 18 VI MỘT SỐ SAPONIN CÓ HOẠT TÍNH ĐƯỢC SỬ DỤNG TRÊN THỰC TẾ 20 Saponin nhân sâm – Saponin triterpenoide 20 1.1 Tổng quan Nhân Sâm